Name: 과일 비행을 양육 노랑 초파리 무균 및 무균 조건에서 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster를 무균 및 특정 미생물 조건에서 양육하는 방법을. 이 기술은 미생물군과 숙주 특성 간의 관계를 연구하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

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이 프로토콜의 일부 세부 사항은도 원고에 도움이되는 의견을 제공 박사 아담 돕슨의 도움으로 최적화되었다. 이 작품은 국립 보건원에 대한 재단에 의해 지원되었다 (FNIH) 허가 번호 R01GM095372 (JMC, A (CN) W, AJD 및 AED). FNIH 허가 번호 1F32GM099374-01 (PDN), 브리검 영 대학교 시동 기금 (JMC, MLK, MV). 출판 비용은 브리검 영 대학교 생명 과학 대학 식물과 야생 동물 과학 부서에 의해 지원되었다.

1. 문화 박테리아 (시작 ~ 1 주 달걀을 따기 전) <ol><li> 수정 MRS (20) (과 MMR) 접시와 국물 튜브 (표 1)을 준비합니다. 각 100mm 페트리 접시에 한천 20 ㎖의 MMRS을 붓고 / 건조 하룻밤을 냉각 할 수 있도록, 또는 5 ML의 MMRS는 18mm 테스트 튜브로 국물. </li><li> 킬 아세토 pomorum, A. tropicalis, 락토 바실러스 브레비스 및 L. 판 한천과 MMR에 plantarum을. 하룻밤 30 ° C에서 아세토을 품어. 밀봉하기 전에 이산화탄소 밀폐 용기와 홍수에 접시를 배치하여 혐기성 유산균을 품어. 하룻밤 30 ° C에서 품어. 참고 : L.를 브레비스 식민지는 24 ~ 48 시간까지 표시되지 않을 수 있습니다. 플레이트를 4 ℃에서 저장 될 수 콜로니 최대 3 주 동안 사용될 수있다. </li><li> 2 ~ 3 일 무균 다이어트 (섹션 5)에 dechorionated 달걀을 전송하기 전에, 테스트 튜브 콘에 MMRS 플레이트에서 하나의 식민지를 선택이닝의 MMRS은 국물. 모두 30 ° C에서, 진탕 아세토 성장과 24 시간 또는 혼탁 할 때까지 정적으로 유산균 성장. </li></ol> 2. 멸균 다이어트를 준비합니다 <ol><li> 2 L의 삼각 플라스크에 멸균 다이어트 (표 2)를 준비한다. 이 3 연속 번 삶은 때까지 음식을 전자 레인지; 각 종기 사이에 섞는다. </li><li> 원뿔 원심 분리기 튜브에 다이어트를 전송하는 동안 교반 유지하기 위해 볶음 접시에 플라스크를 배치합니다. 50 ㎖ 원심 분리기 튜브에 다이어트의 7.5 ml에 전송합니다. 느슨하게 덮여, 오토 클레이브 폴리 프로필렌 랙에 튜브를 모자, 장소. </li><li> 121 ° C에서 오토 클레이브 25 분 15 PSI를 사용하여 비행 다이어트를 소독. 오토 클레이브에서 랙을 제거하고 즉시 냉각 동안 분리하지 않는 다이어트를 위해 수평으로 각 랙을 흔들어. 뚜껑 또는 튜브의 테두리에 다이어트의 전송을 방지하기 위해 수직 선반을 흔들지에주의하십시오. 다이어트 정확히 45 분 동안 진탕 기에서 냉각 할 수 있도록 허용하고다시 손으로 수평으로 다이어트를 흔들. 참고 : 다이어트는 일주일까지에 대해 4-15 ° C에 저장할 수 있습니다. </li><li> 적용 오토 클레이브 랙을 사용하는 대신 (2.1-2.3 단계), 또는 산 방부제를 함유 다이어트에 파리를 높이기 위해 다음 단계를 수행합니다 : <ol><li> 플라스크에 교반 막대와 2 L 플라스크 1 L 액체 음식을 준비합니다. 다이어트를 압력솥. </li><li> 고압 증기 멸균 한 후, 10 ml의 방부제를 추가하고 가열 교반 접시에 계속 저어. 한천은 50 ~ 60 ℃로 냉각되면, 50 ~ 60 ℃에서 가열 플라스크 온도를 바이오 안전성 캐비닛에 가열 교반 판에 플라스크를 이동하고 유지한다. </li><li> 바이오 안전성 캐비닛에서 개별적으로 원뿔 튜브에 피펫 ~ 7.5 ml로. </li></ol></li></ol> 3. 달걀 누워 케이지를 준비합니다 <ol><li> 100 ml의 물, 10g의 맥주 효모, 10g 포도당, 한천 1 g의은 전자 레인지에 의해 포도 주스 한천 플레이트를 확인합니다. 단계 1.1 종기로 3 회를 가져와 냉동 포도 주스 공동의 10g을 추가ncentrate는 한천 접시에 계란의 가시성을 증가시킵니다. </li><li> 한천은 55 ° C로 냉각되면, 100mm 배양 접시에 20 ㎖를 부어 응고 할 수 있습니다. </li><li> 15g의 물에 1g의 맥주 효모를 혼합하여 효모 페이스트와 한천 플레이트의 표면을 커버. 뒤에 얇은 효모 찌꺼기를 떠나, 초과를 부어 다음, 표면이 덮여 확인하는 한천 접시에 효모 페이스트를 따르십시오. 복수의 판을 사용하는 경우, 페이스트를 순차적으로 복수의 플레이트에 붓고 수있다. </li><li> 케이지의 바닥에 한천 플레이트를 전송합니다. 참고 : 32 온스 델리 컨테이너 아크릴 플라이 케이지를위한 좋은 대용품이다. <ol><li> 상단에 구멍을 절단하고 무독성 접착제로 구멍을 통해 통기성 메쉬를 접착하여 32온스 델리 용기 뚜껑을합니다. 접착제이면 수용성 뚜껑 물 노출을 방지한다. </li></ol></li><li> 전송 200-300 컨테이너로 날아와 뚜껑 커버. 을 예방하기 위해 빈 페트리 접시의 뚜껑 메쉬 보호 구멍을 커버원하는 경우 한천 표면에서 t의 증발과 뚜껑 내부에 습기 티슈 페이퍼를 추가합니다. 16 ~ 20 시간 동안 25 ℃로 하룻밤에 파리를 품어. </li></ol> 4. 달걀을 수집 <ol><li> 플라스틱 부싱에 나일론 메쉬를 배치하여 계란 수집 체를 준비합니다. </li><li> 거기에 계란 판을 검색하려면, 빈 용기에 전송하여 케이지에서 파리를 제거합니다. 같은 파리 다음날을 사용할 경우, 새로 yeasted 포도 주스 한천 플레이트를 포함하는 새로운 케이지에 바로 전송할 수 있습니다. 파리 순차 3-5 일 동안 사용될 수있다 </li><li> 한천을 아프게하지주의하면서 깨끗한 페인트 브러시와 한천에서 죽은 파리를 제거합니다. </li><li> 부드럽게, 증류수로 한천 플레이트를 세척 한천 표면에서 계란을 솔질하고, 메쉬를 통해 슬러리를 부어 계란을 수집합니다. 전부 또는 계란의 대부분이 한천 플레이트에서 제거 될 때까지 3 ~ 4 번 반복합니다. </li></ol> 5. Dechorionate 계란과 무균 D로 전송보자구 <ol><li> 70 % 에탄올 (양쪽 포함) 내부를 분사하여 바이오 안전성 캐비닛을 준비합니다. 실험실 조직과 바닥을 닦아, 그리고 ~ 15 분 동안 자외선과 후드를 소독. 에탄올로 분사 즉시 바이오 안전성 캐비닛에 배치하여 모든 비 생물학적 용품 (표본 컵, 붓, 집게, 폐기물 용기, 400 ml의 멸균, 0.6 %의 차아 염소산 나트륨의 100 ml)에 소독. 15 분 동안 UV 광으로 소독. </li><li> 120 ml의 시료 컵 또는 다른 멸균 용기에 계란 부싱을 배치하여이 차아 염소산 나트륨 세척 첫 시작. 단지 천천히 림 아래까지 상기 부싱으로 ~ 0.6 % 차아 염소산 나트륨 용액 90 ㎖에 붓는다. </li><li> 2.5 분 동안 계란을 씻어. 주기적으로 상하 염소산 용액 부싱을 이동 집게를 사용하여 알을 다시 일시. </li><li> 두 번째 시료 컵에 직접 부싱을 전송, 바이오 안전성 캐비닛 내부에, 90 ml의 표백제 사전이 가득. </li><li> 반복바이오 안전성 캐비닛 내부에 5.3 단계. 제 표백 처리의 끝에서, 계란 부싱의 측면에 부착하기 시작한다. </li><li> 수행은 바이오 안전성 캐비닛 5.7-5.8 단계를 반복합니다. </li><li> 표백제를 취소하고 멸균 수로 3 회 부싱을 씻는다. 집게 부싱 이동하여 달걀 각 세정 중에 수회 다시 중단. 세 번째 세척 말 가장 달걀 부싱의 측면에 부착한다. </li><li> 에탄올 살균 붓을 사용하여 멸균 다이어트 부싱 측으로부터 알 옮긴다. 개별적으로 또는 소량의 계란을 전송합니다. 유리 병 당 30 ~ 50 알을 목표로. 산소 튜브를 입력 할 수 있도록 느슨한 모자를 남겨주세요. 유리 병은 무균 남아있는 경우, 곤충 인큐베이터로 전송; 그렇지 않으면, 다음과 같이 박테리아를 추가합니다. </li></ol> 6. 무균 4 세균 종을 사용하여 파리 확인 <ol><li> 박테리아 준비 <ol><li> 필요한 소모품과 살균 바이오 안전성 캐비닛을 준비합니다 (Pipettes, 피펫 팁 상자, 멸균 원심 분리기 튜브, MRS 배지, 단계 4.1에서와 같이 테스트 튜브 랙). 에탄올을 묻힌 연구소와 테스트 튜브의 외부를 닦아은 바이오 안전성 캐비닛에 배치하기 전에 닦아주십시오. </li><li> 제 멸균 미세 원심 분리 튜브로 밤새 성장의 500 μl를 전송하여 세균 펠렛. 세균 밀도가 낮은 경우, 각각의 튜브에 1.5 ml의를 추가 또는 순차적으로 뜨는을 제거하고 동일한 튜브에 여분의 문화를 추가 할 수 있습니다. 10,000 × g으로 10 분 동안 바이오 안전성 캐비닛과 원심 분리기에서 샘플을 제거합니다. 샘플 사이의 오염을 방지하기 위해 필터 팁을 사용합니다. </li><li> OD 600을 측정하여 각 문화의 밀도를 결정합니다. 멀티 - 웰 플레이트 판독기를 사용하는 경우, 1-, 2-, 4- 배 희석 한 96 웰 플레이트에 각 배양 200㎕를 옮긴다. </li><li> 평판 판독 분광기를 사용하여 각 세포 펠렛 (5.2.2) 및 다음 식을 희​​석 할 수있는 MMRS의 양을 결정한다. &amp; 50을 접종하기에 충분한 국물을 추가 할 계획# 956; 각 플라이 유리 병에 리터. <ol><li> 1, 1 : 2, 1 : 판 독서 분광 광도계의 각 세균 배양의 4 희석 OD에게 1 (600) 수치를 수집합니다. 0.1과 0.2이 값과 6.1.4.2 또는 6.1.4.3에 주어진 공식에 &#39;O&#39;와 &#39;D&#39;로 해당 희석 배수를 사용 사이의 OD 600 값을 생성 각 균주의 희석을 선택합니다. </li><li> 여기에 설명 된 4 종을 사용하는 경우, (결정 이전에 CFU 변환에 20 OD 600)이 식을 이용하여 해당하는 집락 형성 단위로 셀 (CFU) / ㎖ 밀도를 정상화 : E = ((OB) × V의 X 용 D) / C E = 볼륨 (μL)에 펠렛을 재현 탁하는 경우, O = OD 600 박테리아, B = OD 600 빈 미디어, D = 배 희석, V = ㎕의 세균 배양 전에 원심 분리, 소정의 상수 C = OD 600. 기업 코드는 다음 방정식을 사용하여 계산 예제 파일을 참조하십시오. 분광 광도계를 들어&quot;OB&quot;대신에 &quot;O&quot;를 자동으로 빈 사용의. 참고 : 다음과 같이 소정의 상수 (10 7 CFU ml를 -1로 정규화 단위 OD (600), (20)에서 파생 된 상수)은 다음과 같습니다 A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0.038), L. 브레비스 (0.056), L. 란타 (0.077). </li><li> 다른 박테리아 종을 사용하는 경우,이 방정식을 사용하여 600 = 0.1 중독에 밀도를 정상화 (더 CFU / OD 600 상수는 사용할 수 없습니다) E = ((OB) × V의 X 용 D) /0.1 OD (600) 주 : 단위 6.1.4.2 단계와 동일하다. 기업 코드는 다음 방정식을 사용하여 계산 예제 파일을 참조하십시오. </li></ol></li><li> 바이오 안전성 캐비닛에 피펫 팁으로 뜨는을 제거 단계 6.1.4.2에서 계산 된 신선한 MMRS 또는 PBS의 펠렛을 재현 탁. </li></ol></li><li> 박테리아를 접종 <ol><li> 멸균 다이어트과 원뿔 튜브로 전송 박테리아의 50 μl를D는 바이오 안전성 캐비닛에 알을 dechorionated. 유리 병 사이의 오염을 방지하기 위해 달걀 전송 후 박테리아를 추가합니다. </li><li> 25 ℃에서 인큐베이터에 접종 튜브를 배치 </li></ol></li></ol> 불임 7. 측정 CFU로드 / 테스트 <ol><li> 세라믹 구슬 125 μL와 MMRS 국물의 125 μl를 포함하는 1.7 ml의 미세 원심 분리 튜브에 몸 전체 비행 균질, 전송 5 파리 (5-7일 포스트 우화)의 CFU 부하를 측정합니다. 4.0 M / 초에서 30 초 동안 조직 균질를 사용하여 파리를 균질화. <ol><li> 또한, 구슬과 손을 1 분 동안 플라스틱 방앗와의 microcentrifuge 튜브에 균질화 생략합니다. </li><li> 장내 미생물을 정량화하는 경우, 외래 미생물 (22)을 제거하기 위해 파리를 소독 표면. 전송 homogenizations위한 새로운 마이크로 원심 튜브에 1 분, 흡 에탄올 및 전송을 위해 100 ㎕의 70 % 에탄올을 함유하는 마이크로 원심 튜브에 날아간다. 소화관의 DNA 함량을 측정 할 경우, F 린스또는 에탄올 세척 전에 0.6 %의 차아 염소산 나트륨 1 분. </li></ol></li><li> 875 μL의 MMRS 5 초 동안 소용돌이 균질 희석하고, 마이크로 타이 터 플레이트의 제 1 웰에 120 μL의 파쇄를 피펫. </li><li> 10 μl를 균질하고 다음 두 우물에 70 μl의 MRS를 사용하여 8 희석 :이 순차적를 수행합니다. <ol><li> 첫 번째 우물에서 10 μl를 제거하고 제 2 웰 포함 70 μl를 MRS에 추가합니다. 세 번째도 포함하는 70 μl를 MRS에 전송, 철저하게 제 2 웰에서 10 μl를 두 번째 우물의 내용을 혼합하고, 철저하게 섞는다. 희석하지, 1 : 8, 및 1:64이 3 총 원래 1000 ㎕를 균질의 농도에 연결됩니다. </li></ol></li><li> 전송할 MMRS 플레이트 각 희석액 10 ㎕를 (원하는 경우 멀티 채널 피펫을 사용하여). 약간 한천 표면 아래로 희석을 몇 mm를 확산 액체가 판을 이동하기 전에 건조 할 수 있도록 접시를 경사. 액체는 일에 건조플레이트는 이웃하는 두 방울의 혼합을 감소 2 일 오래된 빠르게 경우 전자 판. </li><li> 1~2일 30 ° C에서 품어. 한 번 별개의 개별 식민지 볼 수 있습니다 인큐베이터에서 접시를 제거하고, 10 ~ 100 절연 식민지와 희석에서 계산합니다. </li><li> 방정식 E = C의 X D / P의 X의 V 비행 당 E는 = CFU, C는 = 콜로니의 수를 계산 / F, D = 희석, P는 μL 플라이 균질의, V는 = 볼륨을 도금 = 사용하여 비행 당 CFU를 계산하고, F = 균질화 파리의 수입니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

<html> 여기에 설명 된 방법은 함께 무균 성인 18,27의 시리얼 전송 또는 항생제 치료 13,18 포함 무균 파리, 양육의 대체 방법으로, 배아 dechorionation 8,11,18,25,26,27에 대한 몇 가지 방법 중 하나입니다. 다른 dechorionation 방법은 에탄올 세척을 포함 11,25,26를 줄이거 나 8 차아 염소산 치료를 확장합니다. (에탄올 세척하지 않고) 여기에 설명 된대로 사육 할 때 100 초파리 유전자형이 무균했다 ~ 대부분의 이전 연구에서,하지만 일부 라인은 오염 (24)을 폐기했다 : 다른 세척 단계는 서로 다른 비행 유전자형을 양육 도움이 될 수. 에탄올 세척 이상 차아 염소산 치료를 사육하는 경우 아마도 약간의 오염 된 라인은 무균했을 것이다. 여기에 설명 된 방법은 특정 호스트의 유전자형에 대한 무균 파리의 고립으로 이어질하지 않을 경우 우리는 ...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/54219/rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic">Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions</a>. The Protocol was updated.
Step 6.1.4.2 of the Protocol was updated from:
If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation: 
E = ((O-B) x V x D)/C 
where E = volume to resuspend pellet in (&#956;l), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = &#181;l bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use &#34;O&#34; in place of &#34;O-B&#34;. 
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.056), L. plantarum (0.077).
to:
If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation: 
E = ((O-B) x V x D)/C 
where E = volume to resuspend pellet in (&#956;l), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = &#181;l bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use &#34;O&#34; in place of &#34;O-B&#34;. 
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.053), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.077), L. plantarum (0.056).

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Erratum: Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

대부분의 동물은 밀접하게 죽음 일에 출생에서 박테리아 ( &#39;미생물&#39;)과 연결되어 있습니다. 미생물이없는 ( &#39;무균&#39;) 및 미생물 관련 ( &#39;기존&#39;) 동물의 비교는 미생물 대사, 영양, 혈관, 간, 호흡기, 면역, 내분비 및 신경 기능이 포함 동물 건강의 다양한 측면을 영향을 보여 주었다. 열매는 초파리 melanogaster의 3,4- 미생물의 존재 하에서 이러한 프로세스의 많은 이해 및 동물 건강에 5,6- 미생물의 영향을 연구하기위한 주요 모델 비행. 어떤 박테리아 종은 모든 개인 ( &#39;코어&#39;)에 존재하지 않지만 아세토 및 락토 바실러스 종은 수치 모두 실험실 사육 및 야생 잡은 D.의 미생물을 지배 melanogaster의. Acetobacteraceae, Firmi (Komagataeibacter 및 글루 포함) 기타및 장내 세균 (예 : 엔테로 및 로이코 노 스톡 등) cutes 중 하나 높은 풍부 7-12에서 낮은 풍부에서 초파리 개인에서 자주 본, 또는 불규칙하게 존재한다. 초파리와 포유 동물의 미생물은 내 세대 14,19에 걸쳐 일정하지 않습니다. 미생물에 의존하는 특성을 측정 할 때 미생물의 변덕은 표현형 노이즈가 발생할 수 있습니다. 예를 들어, 초파리 15-18에서 Acetobacteraceae 영향 지질 (중성 지방) 저장. Acetobacteraceae 다른 19 이상의 유리 병의 파리에서 더 풍부 경우, 동종 파리는 서로 다른 표현형 (20)를 가질 수있다. 쥐 14 미생물의 변덕의 문제에 대한 해결책은 마우스 새끼로 (Schaedler 식물 변경) 각각의 새로운 세대를 8 지배적 인 미생물 종의 정의 사회를 도입하여, 1960 년대 이후 실제로있다각 강아지가 마우스 미생물 동일한 키 부재에 노출되는 것을 보장한다. 미생물이 연구 (32)의 주 대상이 아니며, 실험 조건의 다양한 키 미생물의 존재를 확인하기 위해 전례를 설정하는 경우에도이 방법은 미생물 조성에 대한 제어합니다. 초파리 영양 미생물의 영향을 정의하려면, 무균 플라이 라인을 도출하기위한 여러 가지 프로토콜은 배아의 차아 염소산 dechorionation (중 파생 드 노보 각 세대 또는 멸균 사료로 전송하여 generationally 유지) 및 항생제 치료 (13)를 포함하여 개발되었다. 항생제 처리 및 시리얼 전송, 드 노보 dechorionation와 교란 변수 (예를 들어, 계란 밀도, 잔류 오염 미생물, 오프 - 타겟 항생제 효과)의 대 더 제어 모두 용이성과 신속성 등 다양한 접근 방법에 장점이있다. 상관없이 방법의배아를 무균하는 특정 미생물 종의 준비, 도입은 정의 ( &#39;무균&#39;) 사회와 초파리의 문화를 허용한다. 또한, Schaedler 식물의 사용을 모방,이 커뮤니티는 각 유리 병의 특성-에 영향을 미치는 미생물의 존재를 확인하고 미생물의 변덕의 합병증을 피하기 위해 (만 단계 6-7 다음) 종래 누워 계란에 접종 할 수있다. 여기에서 우리는 배아의 드 노보 dechorionation에 의해 무균 및 무균 초파리를 제기하기위한 프로토콜을 설명하고 소개 또는 오염 미생물 분류군의 존재를 확인합니다.

<table><tbody><tr><td>맥주 효모</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>903312</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=02903312</td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>시그마 Aldrich</td><td>158968-3KG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/158968?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>한천</td><td>피셔 - Lab Scientific</td><td>fly802010</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.com/shop/products/drosophila-agar-8-100mesh-10kg/nc9349177 Welch의 100 % 포도 주스 농축액</td><td>월마트 또는 기타 식료품점</td><td></td><td>9116196 http://www.walmart.com/ip/Welch-s-Frozen-100-Grape-Juice-Concentrate-11.5-oz/10804406</td></tr><tr><td>케이지: 32 oz. 반투명 라운드 델리 컨테이너</td><td>Webstaurant 스토어</td><td>999L5032Y</td><td>http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-sd5032y-32-oz-translucent-round-deli-container-24-pack/999L5032Y.html</td></tr><tr><td>반투명 라운드 델리 컨테이너 뚜껑</td><td>Webstaurant 스토어</td><td>999YNL500</td><td></td></tr><tr><td>http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-ynl500-translucent-round-deli-container-lid-60-pack/999YNL500.html 재고 병</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-130</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=32-130</td></tr><tr><td>Droso-Plugs</td><td>Genesee Scientific</td><td>49-101</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=49-101</td></tr><tr><td>나일론 메쉬</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102&nbsp;</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/715/?product=57-102</td></tr><tr><td>플라스틱 부싱</td><td>홈 디포</td><td>100404002</td><td>http://www.homedepot.com/p/Carlon-1-in-Non-Metallic-Terminal-Adapter-E943FR-CTN/100404002</td></tr><tr><td>플라스틱 부싱 캡</td><td>홈 디포</td><td>100153897</td><td>http://www.homedepot.com/p/1-1-4-in-rigid-plastic-insulated-bushing-2-pack-27529/100153897</td></tr><tr><td>표본 컵</td><td>MedSupply Partners</td><td>K01-207067</td><td>http://www.medsupplypartners.com/covidien-specimen-containers.html</td></tr><tr><td>리피터 M4</td><td>Eppendorf</td><td>4982000322 https://online-shop.eppendorf.us/US-en/Manual-Liquid-Handling-44563/Dispensers--Burettes-44566/Repeater-M4-PF-44619.html</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 원심분리기 튜브</td><td>TrueLine 원심분리기 튜브</td><td>TR2003</td><td></td></tr><tr><td>https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=TR2003 Food Boxes</td><td>대한민국 Scientific</td><td>2316-5001</td><td></td></tr><tr><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=2316-5001 용해 매트릭스 D 벌크</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>116540434</td><td>http://www.mpbio.com/search.php?q=6540-434&s=Search</td></tr><tr><td>필터 피펫 팁, 300 &mu; l</td><td>USA Scientific</td><td>1120-9810</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1120-9810</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>실험실 제품 판매</td><td>M089303</td><td>https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=M089303</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories, INC.</td><td>2701</td><td>http://www.deconlabs.com/products.php?ID=88</td></tr><tr><td>페인트 브러시</td><td>월마트</td><td>5133</td><td></td></tr><tr><td>http://www.walmart.com/ip/Chenille-Kraft-5133-Acrylic-Handled-Brush-Set-Assorted-Sizes-colors-8-Brushes-set/41446005 집게</td><td>Fisher</td><td>08-882</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-medium-pointed-forceps-3/p-128693 가정용 표백제 (6-8% 차아염소산염)</td><td>월마트</td><td>550646751</td><td>http://www.walmart.com/ip/Clorox-Concentrated-Regular-Bleach-121-fl-oz/21618295</td></tr><tr><td>유니버설 펩톤</td><td>제네시 사이언티픽</td><td>20-260</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=20-260</td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>&nbsp; Fisher Scientific</td><td>BP1422-500</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-bioreagents-microbiology-media-additives-yeast-extract-3/bp1422500?matchedCatNo=BP1422500</td></tr><tr><td>인산이칼륨</td><td>시그마 Aldrich</td><td>P3786-1KG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=P3786-1KG&interface=All&amp; 
N=0& 모드=match%20partialmax& lang= 
ko& 지역=US& focus=제품</td></tr><tr><td>암모늄 구연산</td><td>염 시그마 Aldrich</td><td>25102-500g</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=25102-500g&interface=All&N 
=0& 모드=match%20partialmax& lang= 
ko& 지역=US& focus=제품</td></tr><tr><td>아세트산 나트륨</td><td>VWR</td><td>97061-994</td><td>https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=97061-994</td></tr><tr><td>황산 마그네슘</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63-500</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?matchedCatNo=M63500 황산 망간</td><td>시그마 Aldrich</td><td>10034-96-5</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=10034-96-5&interface=CAS%20No.&N=0&mode=match 
%20부분최대& 언어=ko& 지역 =US& focus=제품</td></tr><tr><td>MRS 파우더</td><td>Sigma Aldrich</td><td>69966-500G</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/69966?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>96웰 플레이트 리더</td><td>BioTek (Epoch)&nbsp;</td><td>NA</td><td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/epoch_microplate_ spectrophotometer.html</td></tr><tr><td>1.7 ml 원심분리기 튜브</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1615-5500 필터 피펫 팁, 1,000 &mu; l</td><td>USA Scientific</td><td>1122-1830</td><td></td></tr><tr><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1122-1830 96 웰 플레이트</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655101</td><td>https://shop.gbo.com/en/usa/articles/catalogue/article/0110_0040_0120_0010/ 13243/</td></tr><tr><td>Ceramic Beads</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>6540-434</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=116540434</td></tr><tr><td>조직 균질화 장치</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>116004500</td><td></td></tr><tr><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=116004500 클래스 1 생물 안전 캐비닛</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>모델 1395</td><td>http://www.thermoscientific.com/en/product/1300-series-class-ii-type-a2-biological-safety-cabinet-packages.html</td></tr></tbody></table>

과일 비행을 양육<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 무균 및 무균 조건에서

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

최근 몇 년 동안 무수한 동물의 특성과 행동에 대한 미생물의 영향이 점점 더 인식되고 있습니다. 초파리 Drosophila melanogaster는 미생물이 없는(axenic) 조건 또는 정의된 미생물 군집(gnotobiotic)에서 큰 크기의 초파리를 기르는 접근 방식을 통해 동물 숙주와 미생물 상호 작용을 이해하기 위한 모델입니다. 이 연구는 초파리 배아 채취, 차아염소산염 탈부착 및 살균, 멸균 식단으로의 전환 방법을 간략하게 설명합니다. 멸균된 배아는 50ml 원심분리기 튜브에 담겨 멸균 사료로 옮겨지며, 발육 중인 유충과 성충은 바이알이 열릴 때까지 외인성 미생물이 없는 상태로 유지됩니다. 대안적으로, 정의된 미생물총(microbiota)을 가진 파리는 멸균 사료와 배아에 관심 미생물 종을 접종하여 사육할 수 있습니다. 우리는 초파리 에서 대표적인 gnotobiotic microbiota를 확립하기 위해 4가지 박테리아 종의 도입을 설명합니다.마지막으로, 액세닉 초파리(axenic Drosophila)가 성인이 될 때까지 박테리아가 없는지 테스트하는 것을 포함하여 박테리아 군집 구성을 확인하기 위한 접근 방식을 설명합니다.

무균 파리의 성공적인 양육은 D.의 전신 homogenizations에서 더 CFUs의 분리에 의해 확인 melanogaster의 성인 (그림 1). 도금 균질가 식민지를 산출하는 경우 또는, 유리 병은 오염 및 폐기해야합니다. 무균 파리를 들어, 네 개의 박테리아 균주의 각은 성인 파리 (그림 1)과 관련된 총 가능한 CFUs의 차이를 보여, 5 성인 남성의 풀에서 분리 하였다. 각 세균 종은 뚜렷한 형태를 가지며, 시각 (도 2)를 구별 할 수있다. 하나 이상의 콜로니 종류가 검출되지 않으면 박테리아 접종원을 준비하고 에러가있을 수있다 (예를 들어, 세정, 정규화 혼합) 또는 대응하는 종 배양 조건과 호환되지 않을 수있다 (예를 들어 초파리 밀도 23 또는 유전자형 2...

무균 및 무균 조건에서 초파리 melanogaster의를 양육하는 방법이 제공된다. 플라이 배아는, 차아 염소산 나트륨에 dechorionated 멸균 다이어트에 무균 적으로 전송하고, 밀폐 용기에 양육된다. 박테리아와식이 요법과 배아를 접종은 무균 협회에 이르게하고, 세균의 존재는 전신 초파리 균질 도금에 의해 확인된다.

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

이 절차의 전반적인 목표는 관련 미생물이 없는 초파리를 사육하는 것입니다. 이 방법은 Drosophila 분야의 연구자가 미생물군집과 다양한 숙주 형질 간의 관계를 포함하여, 미생물군집을 제어, 조작 또는 연구하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연구자가 외부 미생물이 완전히 없는 상태에서 초파리를 사육할 수 있게 한다는 점입니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 사람들은 멸균 및 세척 단계에서 오염 미생물이 유입되지 않도록 수행해야 하므로 어려움을 겪을 수 있습니다. 실험을 시작하려면, 미리 준비된 배양물을 수정된 MRS(mMRS) 한천 배지에 스트리킹합니다. 플레이트를 30 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다.혐기성 배양물을 밀폐 용기에 넣고, 밀봉 전 이산화탄소를 가득 채워 배양합니다. 다음 날, mMRS 플레이트에서 단일 콜로니를 선택하여 mMRS 배지가 들어 있는 시험관에 접종합니다. 락토바실러스(lactobacillus) 종은 정지 상태에서 배양하고, 아세토박터(acetobacter) 종은 진탕 배양합니다.1리터 삼각 플라스크에 멸균 사료를 준비합니다. 사료가 세 번 연속으로 끓을 때까지 전자레인지로 가열하며, 각 끓음 사이에 플라스크를 흔들어 섞어줍니다. 교반 상태를 유지하기 위해 자석 교반기 위에 놓인 광구 용기에 사료를 옮긴 후, 이를 원심분리용 코니컬 튜브에 분배합니다.튜브의 캡을 느슨하게 닫고 덮개가 있는 오토클레이브 가능 폴리프로필렌 랙에 넣습니다. 초파리 배지를 오토클레이브합니다. 오토클레이브가 완료되면 랙을 꺼내 즉시 각 랙을 수평으로 흔들어 배지가 분리되지 않도록 합니다.식단을 쉐이커 위에서 정확히 45분 동안 식힙니다. 식힌 후, 즉시 식단을 손으로 수평하게 흔들어 섞어줍니다. 포도 주스 한천 성분들을 전자레인지로 가열합니다.혼합물을 세 번 끓인 후, 한천 배지에서 알의 가시성을 높이기 위해 냉동 포도 주스 농축액 10 grams를 첨가합니다. 한천이 55 °C로 식으면, 100-millimeter 페트리 접시에 20 milliliters씩 붓고 한천을 응고시킵니다. 다음으로, 한천 배지 위에 효모 페이스트를 붓고 표면이 완전히 덮이도록 한 뒤, 과잉분을 따라내어 얇은 효모 잔여물만 남깁니다.한천 배지를 케이지 바닥으로 옮깁니다. 초파리 250마리를 컨테이너에 넣고 뚜껑을 덮습니다. 망으로 보호된 구멍을 빈 페트리 접시 뚜껑으로 덮습니다.파리를 배양합니다. 알 수집을

rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

초파리 배아는 보호막으로 둘러싸여 있습니다. 배아에 접근하기 위해, 막의 가장 바깥쪽에 있는 융모막(chorion)은 종종 제거된다. 이 비디오는 차아염소산나트륨을 사용하여 일반적으로 사용되는 탈부착 방법을 설명합니다. 예시 프로토콜은 축(axenic) 또는 그노토바이오틱(gnotobiotic) 동물 사육에 필요한 멸균 기술을 사용하면서 절차를 보여줍니다.

초파리 난자 채취 및 탈echorionation: 가장 바깥쪽 난자를 제거하는 방법

초파리 미생물총(Drosophila microbiota)은 동물의 발달, 면역 및 생리학에 영향을 미칩니다. 이 비디오는 전신 제제에서 집락 형성 단위를 결정하여 파리의 박테리아를 정량화하는 방법을 설명합니다. 주요 프로토콜은 4종의 박테리아를 사용하여 gnotobiotic 조건에서 사육된 파리를 이용한 기술을 보여줍니다.

CFU(Colony Forming Units) 계수: 파리 몸체의 박테리아 정량화

출처: 시바-조시, J. A. 외 Drosophila melanogaster의 구강 세균 감염 및 탈출. J . Vis. Exp. (2018)영상은 병원성 박테리아에 의한 초파리 멜라노가스터 의 구강 감염을 보여줍니다. 감염 바이알 준비와 굶주린 파리를 옮겨 박테리아 섭취를 가능하게 하는 과정이 포함됩니다. 이 절차는 장내 정착을 포착한 후 파리의 표면 멸균과 균질화를 진행합니다. 마지막으로, 연속 희석과 집단 수를 통해 내부 박테리아 부하를 정량화하는 과정을 보여줍니다.

병원성 박테리아에 의한 초파리 멜라노가스터 의 구강 감염

이 원고는 파리 개체군 케이지를 사용하여 정기적으로 Drosophila melanogaster 개체군을 배양하기 위한 자세한 프로토콜을 보고합니다.

(A)의 유지 보수<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 인구 케이지

우리는 Drosophila melanogaster 채집 경로 길이 분석에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 우리는 실험 동물의 준비 및 취급, 분석 수행 및 데이터 분석 방법에 대해 논의합니다.

대한 꼴 경로 길이 프로토콜<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 애벌레

이 프로토콜에는 구두 노출 및 감염 세균성 병원 체, 과일 파리 초파리 melanogaster 하 고 전염 성 박테리아 헛간 창 자 감염을 다음의 수를 측정 하는 방법을 설명 합니다. 우리는 더 비행 생존 다음 구강 세균 감염에 면역 돌연변이의 효과 설명 합니다.

세균성 감염 및 Shedding 초파리 melanogaster 에

이 프로토콜은 배아에서 성인에 이르기까지 모든 발달 단계에서 Drosophila의 생존 가능성을 평가하기 위해 고안되었습니다. 이 방법은 상이한 유전자형 또는 성장 조건의 생존 가능성을 결정하고 비교하는 데 사용될 수 있다.

초적혈구 멜라노가스터의생존능력을 배아에서 성인으로 평가하는 직접적이고 간단한 방법

초파리 멜라노가스터 성인 파리는 숙주 항미생물 선천적 면역 반응 및 미생물 감염 전략의 기초가 되는 분자 메커니즘을 조사하기 위한 모델 유기체로서 광범위하게 활용되고 있다. D. melanogaster 유충 단계를 추가 또는 대안 모델 시스템으로서 촉진하기 위해, 애벌레 주입 기술이 기술된다.

초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

배양된 초파리 뇌 외식편에서 정동작 신경줄기세포를 재활성화시키는 방법이 확립되었다. 이 방법을 사용하여, 전신 신호의 역할은 신경 줄기 세포 정지, 출입의 조절에서 조직 내재적 신호로부터 결합되지 않을 수 있다.

배양된 초파리 뇌 외래 식물에서 신경 줄기 세포 재활성화

초파리 혈액 세포 또는 혈구는 거주 부위와 순환 사이를 순환합니다.  유충에서 상주(고착성) 혈구는 유도성 미세환경인 Hematopoietic Pockets에 국한되는 반면, 순환하는 혈구는 혈림프에서 자유롭게 움직입니다. 이 프로토콜의 목표는 행동적으로 다르지만 상호 변화하는 이 두 가지 혈구 집단의 표준화된 분리 및 정량화입니다.

의 시금 혈액 세포 집단<em&gt; 초파리</em&gt; 유충

배우세요 Drosophila melanogaster를 무균 및 특정 미생물 조건에서 양육하는 방법을. 이 기술은 미생물군과 숙주 특성 간의 관계를 연구하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

과일 비행을 양육

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