Name: 인간의 혈액에서 측정 과립구와 단핵구 식균 작용 및 산화 버스트 활동 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: 배우세요 인간 혈액에서 과립구와 단핵구의 식균 작용 및 산화 버스트 활동을 측정하는 방법을. 이 기법은 선천성 면역 기능을 연구하고 운동에 대한 면역 반응을 평가하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는이 절차의 최적화 동안 그들의 도움을 잭 슈, 케이시 존, 린 Cialdella - 캄을 인정하고 싶습니다.

<ol><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+pistachios+on+performance+and+exercise-induced+inflammation%2C+oxidative+stress%2C+immune+dysfunction%2C+and+metabolite+shifts+in+cyclists%3A+a+randomized%2C+crossover+trial%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Influence of pistachios on performance and exercise-induced inflammation, oxidative stress, immune dysfunction, and metabolite shifts in cyclists: a randomized, crossover trial.</a> PLoS One. 9, e113725(2014).</li>
<li>Knab, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+freeze-dried+juice+blend+powder+on+exercise-induced+inflammation%2C+oxidative+stress%2C+and+immune+function+in+cyclists%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Physiol+Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">Effects of a freeze-dried juice blend powder on exercise-induced inflammation, oxidative stress, and immune function in cyclists.</a> Appl Physiol Nutr Metab. 39, 381-385 (2014).</li>
<li>Konrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+effect+of+ingesting+a+quercetin-based+supplement+on+exercise-induced+inflammation+and+immune+changes+in+runners%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">The acute effect of ingesting a quercetin-based supplement on exercise-induced inflammation and immune changes in runners.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 21, 338-346 (2011).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+and+inflammation+responses+to+a+3-day+period+of+intensified+running+versus+cycling%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Immune and inflammation responses to a 3-day period of intensified running versus cycling.</a> Brain Behav Immun. 39, 180-185 (2014).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbohydrate+supplementation+affects+blood+granulocyte+and+monocyte+trafficking+but+not+function+after+2.5+h+of+running%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Carbohydrate supplementation affects blood granulocyte and monocyte trafficking but not function after 2.5 h of running.</a> Am J Clin Nutr. 66, 153-159 (1997).</li>
<li>Tidball, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cell+response+to+acute+muscle+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cell response to acute muscle injury.</a> Med Sci Sports Exerc. 27, 1022-1032 (1995).</li>
<li>McFarlin, B. K., Williams, R. R., Venable, A. S., Dwyer, K. C., Haviland, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+cytometry+reveals+three+distinct+subsets+of+activated+granulocytes+based+on+phagocytosis+and+oxidative+burst%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Image-based cytometry reveals three distinct subsets of activated granulocytes based on phagocytosis and oxidative burst.</a> Cytometry A. 83, 745-751 (2013).</li>
<li>Liao, Y., Liu, P., Guo, F., Zhang, Z. Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+burst+of+circulating+neutrophils+following+traumatic+brain+injury+in+human%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidative burst of circulating neutrophils following traumatic brain injury in human.</a> PLoS One. 8, e68963(2013).</li>
<li>McFarlin, B. K., Venable, A. S., Prado, E. A., Henning, A. L., Williams, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+flow+cytometry+technique+to+evaluate+changes+in+granulocyte+function+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Image-based flow cytometry technique to evaluate changes in granulocyte function in vitro.</a> J Vis Exp. , (2014).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+to+obesity+and+moderate+weight+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+Relat+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Immune response to obesity and moderate weight loss.</a> Int J Obes Relat Metab Disord. 20, 353-360 (1996).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+function+in+female+elite+rowers+and+non-athletes%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Immune function in female elite rowers and non-athletes.</a> Br J Sports Med. 34, 181-187 (2000).</li>
<li>Ichii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+sucrose+impairs+phagocytic+function+and+promotes+apoptosis+in+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Iron sucrose impairs phagocytic function and promotes apoptosis in polymorphonuclear leukocytes.</a> Am J Nephrol. 36, 50-57 (2012).</li>
<li>Gomes, A., Fernandes, E., Lima, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+probes+used+for+detection+of+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorescence probes used for detection of reactive oxygen species.</a> J Biochem Biophys Methods. 65, 45-80 (2005).</li>
<li>Gruger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+impact+of+linezolid+on+human+neutrophil+functions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Negative impact of linezolid on human neutrophil functions in vitro.</a> Chemotherapy. 58, 206-211 (2012).</li>
<li>Dementhon, K., El-Kirat-Chatel, S., Noel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+vitro+model+for+the+multi-parametric+quantification+of+the+cellular+interactions+between+Candida+yeasts+and+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of an in vitro model for the multi-parametric quantification of the cellular interactions between Candida yeasts and phagocytes.</a> PLoS One. 7, e32621(2012).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

이 원고는 과립구 및 단핵구 함수의 두 개의 지표를 결정하기위한 단계적인 프로토콜을 제공한다. 우리는이 분석의 성공에 중요한 몇 가지 단계를 확인했다. 그러한 단계는 세균의 첨가 직전에 발생 빙욕 배양한다. 모든 샘플을 철저히 냉각 식세포 및 OB 활성에 대한 온도의 영향을 최소화한다. 다른 중요한 단계는 각각의 샘플에 대한 박테리아의 추가이다. 8 : 1 세균 : 식세포 비율이 최적의 결과를 생성한다; 그러나 다른 연구자들은이 비율이 적절한 결과를 산출하도록 수정 될 필요가 있는지 찾을 수있다. 또 다른 중요한 단계는 백혈구를 적혈구를 용균하고 해결하기 위해 RBC의 용균과 WBC 고정 시약의 사용이다. 이 같은 시약의 사용은 적혈구의 완전한 용해를 보장하고 안전하게 밤새 4 ℃에서 처리 된 샘플을 저장 한 후 다음날 흐름 cytometer 통해 실행할 연구자 수있다. 이전 작업 (미 출판) 인도어RBC의 용균 및 WBC 고정 데이터 무결성을 손상시키지 않고 많은 12 시간 고정하여 시료의 유동 세포 계측법을 지연시키는 축열...

과립구 및 단핵구 식세포 / 산화 버스트 (OB) 활성 분석은 종종 장시간 집중 운동 다음 선천성 면역 기능에 대한 정보를 수집하는 데 사용되는 간단한 직선적 기술이다. 1-4 면역계의 반응을 연구 할 때 이들이 숙주 방어에서 중요한 역할을 감염 부위에 축적 한 최초의 면역 세포이기 때문에, 자극, 과립구 및 단핵구는 특히 중요하다. 5 호중구 과립구의 일종 손상된 근육시키다 최초 셀은 집중 운동 다음 티슈. 6 탐식 및 OB 활성 과립구 및 단핵구 기능 (7)의 가장 일반적인 방법이며 때문에 감염 과정 및 복구 프로세스 모두에서의 중추적 인 역할의 선천성 면역 세포 기능의 지표로서 바람직하다. 이 원고 utili에서 설명하는 분석ZES 기본적인 플로우 사이토 전혈 과립구 및 단핵구와 OB 탐식 활성의 정량적 측정을 제공한다. 이 분석은 시간 소모적 정제 과정없이 수행 될 수 있기 때문에 이러한 기술에서 전혈의 사용은 유리하다. 이러한 분석을 용이하게 연구 설계 및 실험실 기능의 다양성을 수용하기 위해 수정 될 수있다. 예를 들어, 리아 등. 그 호중구 OB 활동을 표시하는 유사한 기술을 이용 외상성 뇌 손상 후 증가되고 호중구 식세포 감소된다. (8) 또 다른 예에서, McFarlin는 외. 알로 사용하는이 기술은 우아한 변형 (APC 바와 )는 식세포 작용 및 OB 활동의 관점에서 과립구 분류 이미지 기반 유동 세포 계측법으로 CD66b 고성능 직렬 APC 공역 CD45 라벨링 π 공역. 7,9 우리의 연구 그룹은이 테의 다양한 적응을 사용하고있다거의 20 년 동안 과체중 비만, 체육 인구의 선천성 면역 기능의 지표로 chnique. 10, 11 텍스트 아래이 분석을 수행하기위한 단계별 지침과 독자를 제공하고 독자가 적응할 수있는 영역을 강조합니다 연구의 요구를 충족한다.

<table><tbody><tr><td>12 x 75 mm 튜브, 캡 VWR</td><td></td><td>20170-579</td><td>포함샘플당 2개의 튜브("H" 및 "F")와 배치당 3개의 튜브(분석 대조군의 경우, "F", "H" 및 "혈액만")가 필요합니다.</td></tr><tr><td>PBS (10x), pH 7.4</td><td>Life Technologies</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>병 상단 0.2 &마이크로; m 셀룰로오스 아세테이트 필터 (500ml 용량)</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>09-741-07&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>포도당, 분말</td><td>Life Technologies</td><td>15023-021</td><td></td></tr><tr><td>구연산(무수, 세포 배양 테스트, 식물 세포 배양 테스트)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2404-100G</td><td></td></tr><tr><td>구연산나트륨 삼염기성 이수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4641-25G</td><td></td></tr><tr><td>디하이드로에티듐(하이드로에티딘) (HE)</td><td>Life Technologies</td><td>D11347</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드(DMSO) 무수</td><td>생명 기술</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>황색포도상구균&nbsp;( 단백질이 없는 목재 균주 A) BioParticles, fluorescein conjugate (FITC)</td><td>Life Technologies</td><td>S2851</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp;( 단백질이 없는 목재 균주 A) BioParticles, unlabeled</td><td>Life Technologies</td><td>S-2859</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Life Technologies</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>7.2mg K2EDTA를 함유한 4.0ml 진공제, 분무 건조된</td><td>VWR</td><td>BD367861</td><td>샘플당 1개의 K2EDTA 혈액 수집 튜브가 필요합니다.</td></tr><tr><td>68 USP 단위의 리튬 헤파린을 함유한 4.0ml 진공 청소기, 스프레이 코팅된</td><td>VWR</td><td>BD367884</td><td>샘플당 1개의 리튬 헤파린 혈액 채취 튜브가 필요합니다.</td></tr><tr><td>쿨터 Ac&middot; T 5diff CP</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605705</td><td>i.e., 혈액학 분석기</td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff 린스</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547167</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Fix</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547171</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff WBC Lyse</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547170</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Hgb Lyse</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547168</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Cal Cal Becker</td><td>7547175</td><td></td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Control Plus</td><td>Beckman Coulter</td><td>7547198</td><td></td></tr><tr><td>AcT 5diff 희석제</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547169</td><td></td></tr><tr><td>200 &micro; l 확장 길이 피펫 팁</td><td>VWR</td><td>37001-526</td><td></td></tr><tr><td>절연 얼음 팬</td><td>VWR</td><td>89198-980</td><td>얼음물 목욕 용.</td></tr><tr><td>개방형 금속 튜브 랙</td><td>VWR</td><td>60916-702</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>Life Technologies</td><td>26140-111</td><td></td></tr><tr><td>TQ-Prep 워크스테이션</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605429</td><td>i.e., 자동 세포 용해 준비 워크스테이션</td></tr><tr><td>ImmunoPrep 시약 시스템 Beckman</td><td>Coulter</td><td>7546999</td><td>i.e., RBC lyse/WBC fix 시약 시스템</td></tr><tr><td>CXP 소프트웨어가 포함된 Cytomics FC500 MCL 유세포 분석 시스템</td><td>Beckman Coulter</td><td>626553</td><td></td></tr><tr><td>IsoFlow Sheath 유체</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547008</td><td></td></tr><tr><td>COULTER CLENZ</td><td>Beckman Coulter</td><td>8546929</td><td></td></tr><tr><td>Flow-Check Fluorospheres&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605359</td><td>i.e., 정렬 및 유체 검증 형광구</td></tr><tr><td>FlowJo 소프트웨어</td><td>FlowJo</td><td></td><td>i.e., 유세포 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>Excel 소프트웨어 Microsoft</td><td></td><td>Microsoft Excel</td><td>i.e., 전자 스프레드시트 프로그램</td></tr></tbody></table>

인간의 혈액에서 측정 과립구와 단핵구 식균 작용 및 산화 버스트 활동

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

과립구 및 단핵구 식세포작용 및 산화 버스트(OB) 활성 분석은 선천면역계를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 원고는 이 분석을 운동 면역학 무기고에 추가하는 데 필요한 방법론을 제공합니다. 이 분석의 첫 번째 단계는 전혈(헤파린)의 두 가지 부분 표본("H" 및 "F")을 준비하는 것입니다. 그런 다음 디하이드로에티듐을 H 분취액에 첨가하고 두 분취액을 따뜻한 수조에서 배양한 후 냉수 수조를 합니다. 다음으로, 황색포도상구균(S. aureus)을 H 분취량에 첨가하고 플루오레세인 이소티오시아네이트로 표지된 S. aureus를 F 분취량(박테리아:식세포 = 8:1)에 첨가하고, 두 분취액을 따뜻한 수조에서 배양한 후 냉수 수분을 주입합니다. 그런 다음 각 분취액에 트리판 블루를 첨가하여 세포외 형광을 소멸시키고 세포를 인산염 완충 식염수로 세척합니다. 다음으로, 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정합니다. 마지막으로, 유세포 분석기와 적절한 분석 소프트웨어를 사용하여 과립구 및 단핵구 식세포작용 및 OB 활성을 측정합니다. 이 분석법은 20년 이상 사용되어 왔습니다. 격렬하고 장시간의 운동 후에 운동 선수는 식균 작용이 현저하지만 일시적인 증가와 OB 활동의 장기적인 감소를 경험합니다. 운동 후 식세포작용(phagocytosis)의 증가는 염증과 상관관계가 있습니다. 정상 체중의 개인과 대조적으로, 과립구 및 단핵구 식세포작용은 과체중 및 비만 참가자에서 만성적으로 증가하며 C 반응성 단백질과 완만한 상관관계가 있습니다. 요약하면, 이 유세포 분석 기반 분석법은 식세포의 식세포작용 및 OB 활성을 측정하며 운동 및 비만으로 인한 염증의 추가 측정으로 사용할 수 있습니다.

장기간 집중적 인 운동은 자연 살해 세포 기능, 바이러스 성 감염에 대 식세포 사이토 카인 매개 응답 및 과립구와 단핵구의 식균 작용 및 OB 활동을 포함한 선천성 면역 기능에 심각한 영향을 보유하고 있습니다. 여러 연구는 근육 손상 및 신진 대사 요구에 의해 유도 된 염증을 반영하는 과립구와 단핵 탐식의 대폭 증가 후 운동을 나타냅니다. 반면, 과립구와 단핵구 OB 활동은 운동 후 감소 및 감염에 대한 감수성 증가의 한 면역 지표가 될 수있다. 예를 들어, 그림 1은 S.의 식균 작용을 보여줍니다 과립구에 의해 구균은 다음 날 아침에 정상에 복귀, 75 km의 자전거 한판 승부 (70 % VO 2MAX) 후 즉시 1.5 시간 증가된다. 단핵 세포의 식균 작용은 유사 운동이 수준에 의해 영향을 받는다. 2는 그림 과립구 OB 활동의 감소가 있음적어도 21 시...

이 원고의 목적은 인간 혈액 샘플에서 단핵구 및 과립구 식세포작용과 산화 폭발 활성을 측정하는 방법을 제시하는 것입니다.

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

이 분석의 전반적인 목표는 전혈 내 과립구 및 단핵구의 식세포 작용과 산화적 폭발 활성을 측정하는 것입니다. 이 방법은 특정 식이 중재가 운동에 대한 면역 반응에 어떤 영향을 미치는지와 같이 면역학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 단순하고 명확한 분석법으로, 가용 가능한 실험실 자원과 연구 관심 분야에 맞춰 쉽게 수정할 수 있다는 점입니다.저희는 지난 20년 동안 많은 운동 시험에서 이 선천 면역 기능 측정법을 사용해 왔으며, 영상 후반부에 관련 데이터 일부를 공유하겠습니다. 절차를 시작하기 전에, 제조업체의 지침에 따라 혈액 분석기를 사용하여 혈액 샘플의 전체 혈구 계산 및 백혈구 감별 분석을 수행하십시오. 샘플의 밀리리터당 백혈구 수와 중성구 및 단핵구의 백분율 값을 기록하십시오.그 다음, 각 실험군 및 대조군 튜브에 대해 연장 팁(extended length pipette tip)을 사용하여 리튬 헤파린 혈액 채취 튜브에 담긴 각 전혈 샘플 100 microliters를 적절하게 라벨링된 12 by 75 millimeter 튜브 바닥으로 옮깁니다. 모든 혈액을 옮긴 후, HE 대조군 튜브를 포함하여 빨간색 잉크와 H로 라벨링된 튜브들에 HE 작동 용액 10 microliters를 첨가합니다. 튜브의 캡을 엽니다.샘플을 짧게 볼텍싱한 후, 5분마다 가볍게 흔들어 주며 튜브를 37°C의 항온 수조 내 오픈 메탈 랙에 옮깁니다. 15분 후, 랙과 튜브를 빠르게 얼음 수조로 옮겨 5분마다 가볍게 흔들어 주며 12분 동안 유지합니다. 배양이 끝나면, HE 대조군 튜브를 포함하여 빨간색 잉크와 H가 표시된 튜브에 적정량의 라벨이 없는 S.aureus 작업 용액을 첨가합니다.캡을 닫은 상태에서 튜브를 짧게 볼텍싱합니다. 그다음, FITC 컨트롤 튜브를 포함하여 검은색 잉크와 F로 표시된 튜브에 적정 부피의 FITC 표지 S.aureus 작동 용액을 첨가하고 샘플을 짧게 볼텍싱합니다. 이어서 모든 튜브를 37°C 항온수조에서 20분 동안 배양하며, 5분마다 흔들어 준 뒤 얼음물에서 1분간 냉각시킵니다.시료를 상온에 둔 후, 리피터 파이펫을 사용하여 모든 튜브에 얼음처럼 차가운 퀀치 용액(quench solution) 100 µL를 첨가하고 시료를 볼텍싱합니다. 시료를 다시 얼음 수조에 넣습니다. 1분 후, 리피터 파이펫을 사용하여 각 튜브에 얼음처럼 차가운 PBS 1 mm를 첨가합니다.그런 다음 튜브를 볼텍싱하고 샘플에 PBS 2 mL를 추가로 넣습니다. 이제 세포를 원심분리하고 상층액을 흡입하여 제거합니다. 리피터 피펫을 사용하여 얼음처럼 차가운 FBS 50 µL를 튜브에 넣습니다.볼텍싱 후, 모든 튜브를 캐러셀로 옮깁니다. 제조사의 지침에 따라 자동 세포 용해 준비 워크스테이션을 사용하여 적혈구를 용해하고 백혈구를 고정합니다. 유세포 분석기로 분석 결과를 분석하려면, 유세포 분석 시스템 획득 소프트웨어를 열고 새 프로토콜을 생성하십시오.식세포 작용 분석을 위한 FL1 파라미터로는 FITC를, 산화적 폭발 활성 분석을 위한 FL2 파라미터로는 HE를 선택하십시오. 전방 산란광 대 측방 산란광 점 도표, FL1 히스토그램 및 FL2 히스토그램을 생성하십시오. 그런 다음 전방 산란광 대 측방 산란광 도표에서 백혈구, 과립구 및 단핵구 집단에 해당하는 다각형 영역을 지정하고, 히스토그램에서 선형 영역을 지정하십시오.이제 혈액만 포함된 음성 대조군 샘플을 실행한 다음, HE 및 FITC 양성 대조군 샘플을 실행하며 히스토그램을 검토하고 필요에 따라 FITC 및 PE 채널의 광전증배관 전압을 조정하십시오. 그런 다음 대조군 샘플에 대한 데이터 수집을 시작하십시오. 15분간의 평형 시간을 거친 후, 작업 목록의 순서에 따라 실험 샘플을 캐러셀에 로드하고 연구 샘플 분석을 시작하십시오.시료의 식세포 활성을 평가하기 위해, 먼저 모든 F-표지 시료와 대조군 리스트 모드 데이터 파일을 단일 폴더로 통합하고 해당 파일들을 유세포 분석 소프트웨어의 시료 공간으로 드래그합니다. 대조군 시료를 더블 클릭하고 폴리곤 게이트 선택기를 사용하여 전체 백혈구 군집을 위한 게이트를 설정하며, 이때 차트 가장자리에 있는 모든 세포가 포함되도록 주의합니다. 이 게이트의 이름을 WBC로 지정합니다.WBC 게이트를 더블 클릭하고 타원형 게이트 선택기를 사용하여 림프구 게이트를 설정하십시오. 게이트에 적절한 레이블을 지정하고, 세포가 잘 보이도록 게이트 데이터 백분율을 옆으로 드래그하십시오. 그런 다음 다각형 게이트 선택기를 사용하여 과립구 게이트와 단핵구 게이트를 설정하십시오.각 게이트에 적절한 레이블을 지정하고 게이트 데이터 퍼센트를 옆으로 드래그하십시오. FITC 대조군 샘플을 더블 클릭한 다음 과립구 게이트를 더블 클릭하고, 드롭다운 메뉴를 사용하여 X축을 FL1로, Y축을 측방 산란광(side scatter) 또는 SS로 설정하십시오. 사각형 게이트 선택기를 사용하여 식세포 작용 음성 게이트와 식세포 작용 양성 게이트를 설정하십시오. 과립구 집단의 식세포 작용 양성 게이트를 강조 표시하십시오.그 다음 Workspace를 클릭하고 Add Statistic을 선택하십시오. Geometric Mean과 FL1을으로 강조 표시하여 식세포 작용 양성 과립구의 형광 강도를 생성한 후 Add를 클릭하십시오. 이어서 parent statistic의 frequency를 선택하고 Add를 클릭하여 식세포 작용 양성 과립구의 백분율을 생성하십시오.이 설정을 모든 연구 샘플에 적용하려면, FITC 대조군 샘플에서 생성한 모든 게이트와 통계 항목을 강조 표시한 다음, 그룹 패널의 All Samples 영역으로 드래그하십시오. 작업 내용을 리스트 모드 데이터 폴더가 포함된 동일한 폴더에 WSP 파일로 저장하십시오. 이제 데이터 세트의 첫 번째 실험 샘플을 클릭하고, 백혈구 게이트가 각 샘플의 세포 분포에 적절하게 맞는지 확인하며 필요에 따라 게이트의 경계선을 조정하십시오.이제 첫 번째 실험 샘플의 백혈구 게이트를 클릭하고, 과립구, 단핵구 및 림프구 게이트가 각 샘플의 세포 분포에 적합한지 확인하며 필요에 따라 게이트를 조정하십시오. 파일을 저장한 후, 테이블 에디터 아이콘을 클릭하고 관심 있는 각 통계 항목을 테이블로 드래그하십시오. 'Create Table'을 클릭하여 데이터를 스프레드시트 형식으로 표시하고 작업을 XLSX 파일로 저장하십시오.그런 다음, 방금 시연한 것과 동일하게 H-표지 산화적 버스트 활성 샘플과 대조군 리스트 모드 데이터 파일에 대해 분석을 반복합니다. 이 대표 실험에서 보여준 바와 같이, S.aureus의 과립구 매개 식세포 작용은 75km 사이클링 운동 직후와 1.5시간 후에 증가하며, 다음 날 아침까지 정상으로 돌아옵니다. 과립구의 산화적 버스트 활성은 이러한 수준의 활동 후 최소 21시간 동안 감소합니다.또한, 과체중 또는 비만 여성 106명을 대상으로 한 본 분석에서 관찰된 바와 같이, 과립구 식세포 작용과 혈청 C-reactive protein 수치 사이에 완만한 상관관계가 있으며, 이는 휴식 상태의 피험자에게서 나타나는 높은 과립구 및 단핵구 식세포 작용이 전신 염증의 지표가 될 수 있음을 나타냅니다. 이 기술을 숙달하면 적절히 수행했을 때 7시간 동안 약 30개의 샘플에 대해 완료할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때는 샘플 간의 설명되지 않는 변동성을 최소화하기 위해 박테리아를 첨가하기 전 샘플을 완전히 냉각시키는 것이 중요하다는 점을 기억하십시오.이 절차 이후에 사이토카인 정량화와 같은 다른 방법을 수행하여 중재 조치가 염증 반응에 미치는 영향을 결정할 수 있습니다. 이 기술은 개발 이후 면역학 분야의 연구자들이 다양한 생활 습관의 변화와 인간의 선천 면역 기능의 효과를 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다. 이 영상을 시청한 후에는 유세포 분석기를 사용하여 과립구 및 단핵구의 식세포 작용과 산화적 폭발 활성을 측정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.사람의 혈액을 다루는 것은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행할 때는 항상 적절한 개인보호구(PPE) 착용과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

measuring-granulocyte-monocyte-phagocytosis-oxidative-burst-activity

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 인간 백혈구에 의한 FITC 표지 병원성 진균 포자의 식세포작용을 정량화하는 방법을 보여줍니다. 식세포작용된 포자는 counterstaining을 통해 세포 부착 포자에서 식별한 후 유세포 분석을 수행합니다.

인간 식세포에 의한 Fungal Spore Phagocytosis의 정량적 유세포 분석 측정

이 비디오는 유세포 분석을 통해 인간 혈액 내 세포의 식세포 활성을 확인하는 분석을 보여줍니다. 과립구와 단핵구는 각각 포위된 박테리아의 존재와 산화 폭발 활성을 확인하는 녹색과 적색 형광을 보여줌으로써 식세포 활성을 확인합니다.

An Assay to Assess Phagocytosis and Oxidative Burst Activity In Granulocytes and Monocytes(과립구 및 단핵구에서 식세포작용 및 산화 버스트 활성을 평가하기 위한 분석)

이 비디오는 말초 혈액의 1차 단핵구를 활용하여 poly D 항체 옵소니화 R2R2 적혈구를 이용한 Fcγ 수용체 매개 식세포작용을 평가하는 단핵구 단층 분석을 보여줍니다.

단핵구 단층에서 Fcγ 수용체 주도 식세포작용 연구를 위한 분석

단핵구 유래 대 식세포는 타고난 면역 시스템의 중요한 세포입니다. 여기, 우리는 사용하기 쉬운...

<em&gt; 체외</em인간 대식 세포의 분화와 양극화의 이질성을 연구&gt; 모델

혈액 백혈구 및 혈소판은 개인의 생체 에너지 전반적인 건강의 마커로 사용하고 있으므로 병적 과정 및 치료의 효과를 모니터링하기위한 잠재력을 가질 수있다. 여기에서 우리는 미토콘드리아의 기능이 세포의 산화 버스트를 분리하고 측정하는 방법을 설명합니다.

인간 백혈구 및 혈소판의 분리 및 평가를위한 프로토콜 : 생물 에너지와 산화 버스트

이 방법은 박테리아의 식균작용과 산화 버스트를 동시에 측정하여 과립구 기능을 평가하는 기술을 보여줍니다. 이미지 기반 유세포 분석을 통해 상대적 기능적 용량이 모두 다른 활성 과립구의 세 가지 별개의 subset을 식별할 수 있었습니다.

이미지 기반 유동 세포 계측법 기술은 과립구 기능의 변화를 평가하기 체외

단핵구 단층 분석법(MMA)은 포유류 말초 전혈에서 얻은 분리된 1차 단핵구를 사용하여 Fcγ 수용체(FcγR) 매개 식세포작용을 평가하는 체외 분석법입니다.

단핵구 단층 분석의 사용은 Fcγ 수용체 - 매개 식균 작용을 평가하기

여기는 마우스 주민 복 막 대 식 세포에 의해 회전 디스크 confocal 현미경 이미지 단일 phagocytic 이벤트를 사용 하 여 방법에 설명 합니다. 프로토콜은 다른 phagocytic 세포를 확장할 수 있습니다.

마우스 대 식 세포에 의해 식 균 작용의 시간 경과 3D 영상

헤모필루스 인플루엔자는 호흡기에서 염증을 유발합니다. 이 기사에서는 이 박테리아에 대한 반응으로 식세포와 림프구에 의한 면역 반응을 정의하기 위해 유세포분석 및 컨포칼 현미경을 사용하는 방법에 중점을 둘 것입니다.

헤모필루스 인플루엔자에 대한 호흡기 면역 반응 평가

당사는 기존 단핵구-단층 분석법(MMA)에 대한 개선 사항을 개발하고 방법을 업데이트했으며, 이 분석에서는 대식세포를 사용하여 수혈 의학 및 면역학에서 적혈구 동종 항체의 임상적 관련성을 더 잘 예측하는 데 도움을 줍니다. 이 분석법은 단핵구-대식세포 분석법(M-MA)이라고 합니다.

Monocyte-Macrophage Assay를 이용한 적혈구 항체 유의성 예측(Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay)

이 연구는 분리된 쥐 대식세포에 의한 이종(인간) 및 동종(쥐) 적혈구의 식균 작용 속도를 정량화하고 비교하기 위한 표준화된 시험관 내 프로토콜을 설명합니다.

시험관 내 쥐 대식세포에 의한 동종 및 이종 적혈구의 식균작용에 대한 정량적 평가

배우세요 인간 혈액에서 과립구와 단핵구의 식균 작용 및 산화 버스트 활동을 측정하는 방법을. 이 기법은 선천성 면역 기능을 연구하고 운동에 대한 면역 반응을 평가하는 데 활용됩니다.

인간의 혈액에서 측정 과립구와 단핵구 식균 작용 및 산화 버스트 활동

더 많은 동영상 탐색