Name: 췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: 배우세요 형광 동소 이식 마우스 모델을 이용한 췌장암 연구 방법을. GFP 발현 췌장암 세포를 Balb-c Ola Hsd-Fox1nu 마우스에 이식하여 비침습적으로 종양 진행과 전이를 실시간 모니터링할 수 있습니다.

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교내 보조금에 대해 Western University of Health Sciences에 감사드립니다.

아래에서 설명하는 프로토콜은지도와 웨스턴 대학의 동물 관리 및 사용위원회의 승인하에 실행된다. 모든 실험은 모든 관련 지침, 규정 및 규제 기관 준수 수행됩니다. 1. 세포 배양 <ol><li> 전체 매체의 제조 <ol><li> 클래스 II 생물학적 안전 캐비넷을 사용 무균 RPMI 배지 500㎖의 병에 소 태아 혈청 (FBS) 및 페니실린 스트렙토 마이신 (P / S)을 첨가하여 완전 배지를 준비한다. 소용돌이에 의해 부드럽게 섞는다. 각 보충제의 최종 농도는 10 % FBS와 1 % P / S (V / V). 예를 들어, 56 ML의 FBS 6 ML의 P / S와 미디어 500㎖의 보충. </li><li> 37 ° C에서 물을 욕조에 완전 배지를 놓습니다. </li></ol></li><li> 해동 및 전파 세포 <ol><li> 액체 질소에서 PANC-1 GFP 세포를 검색합니다. 37 ° C에서 물을 욕조에 부드러운 교반하여 병을 해동. 노트:(- 3 분 약 2) 해동은 신속해야한다. </li><li> 라벨 T-75 플라스크 (a) 셀 라인 명, (B)의 통로 번호, (c) 기간, 및 (d) 연구자의 글자와 함께 사용될 수있다. </li><li> 바이오 안전성 캐비닛에 70 % 에탄올 및 전송 유리 병으로 병을 닦습니다. </li><li> 세포를 전파 15 ML 원뿔 튜브에 완전한 매체의 9.0 ml에 추가합니다. 1.0 ml의 피펫을 사용하여 조심스럽게 세포 현탁액을 전송하고 완전 배지 9 mL에이를 중지. </li><li> 실온에서 8 분 동안 125 XG에 원심 분리기. 바이오 안전성 캐비닛에 원뿔 병을 전송하고 펠렛을 방해하지 않고 뜨는을 대기음. </li><li> 부드럽게 상하 현탁액을 피펫 팅하여 신선한 완전 배지 10ml에 펠릿을 정지. </li><li> 혈구와 세포를 세어 2.1 × 10 6 세포 / 플라스크의 밀도로 T-75 플라스크에서 그들을 판. 37 ° C에서 인큐베이터에서 플라스크를 놓고 5 % CO 2. </li><li> 눈으로하고 현미경 매일 세포를 모니터링합니다. 독감의 경우갱신이 필요한 ID는, 무균 플라스크에서 완전한 성장 매체를 대기음 및 폐기합니다. 신선한 완전 배지의 동일한 볼륨을 추가합니다. </li></ol></li><li> 세포를 전파 <ol><li> 무균 플라스크에서 매체를 제거합니다. 세포를 씻어 버리고 둘 베코의 인산 완충 식염수 (DPBS)의 5 ML을 추가합니다. </li><li> 0.25 % 트립신 3 ㎖를 첨가하여 플라스크로부터 세포를 분리. 5 내지 10 분 동안 37 ° C에서 트립신 및 5 % CO 2를 함유하는 플라스크를 인큐베이션. </li><li> 현미경 (10X 배율)에서 세포를 관찰하고 그들이 라운드 빠질 수 있습니다 확인합니다. </li><li> 완전 배지의 동일한 볼륨을 추가하여 트립신을 중화하고 부드럽게 피펫 팅 아래로 대단히 짧은 시간을 휴식. </li><li> 혈구를 사용하여 세포를 세어 1.2.7에서 언급 한 세포 밀도로 새로운 플라스크로 적절한 세포 현탁액 부피를 전달; 최종 부피 플라스크 당 10 ml의 그래서 충분히 신선한 매체를 추가 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 셀 Suspens주입을위한 이온 준비 참고 : 기저막 매트릭스, 높은 농도, 실온에서 응고하기 때문에, 얼음에 모든 재료를 보관하십시오. 하룻밤 냉장고에있는 모든 멸균 피펫 팁 및 튜브를 놓고 정지에서 작업하는 동안 얼음에 보관하십시오. <ol><li> 얼음에 어떤 첨가물없이 RPMI 미디어의 병을 유지합니다. 제조업체의 지침에 따라 기저막 매트릭스, 고농도, 해동. 바람직하게는, 작은 유리 병에 나누어 여러 동결 해동 사이클 (10)을 방지 할 수 있습니다. </li><li> 대기음 모든 플라스크에서 미디어 및 DPBS 5 ㎖로 씻어냅니다. 1.3.4 단계로까지 이전 섹션의 모든 단계를 반복합니다. </li><li> 실온에서 8 분 동안 125 XG에 15 ML 원뿔 튜브와 원심 분리기에 내용을 전송합니다. 바이오 안전성 캐비닛에 원뿔 유리 병을 전송하고 DPBS 10 ㎖를 사용하여 펠렛을 다시 일시 중지합니다. </li><li> 조심스럽게 펠렛을 헤어 위아래 정지를 피펫. 혈구를 사용하여 세포를 계산합니다. </li><li> 의에 설명을 다시 원심 분리기로1.4.3 TEP. 대기음 상등액과 세포의 수에 따라, 50 μL의 부피에 3 × 106 세포를 수득하기 위해 적절한 희석제를 추가한다. 1 (v / v)의 비율 희석제는 한 혈청이없는 배지 고농도 지하 매트릭스 멤브레인의 혼합물 일 것이다. </li><li> 부드럽게 정지 와동과 항상 얼음에 보관하십시오. 서스펜션은 이제 주입을위한 준비가되어 있습니다. </li></ol></li><li> 외과 주입 참고 : 모든 수술 용 재료 및기구는 멸균 있는지 확인합니다. 항상 무균 기술을 연습 할 수 있습니다. <ol><li> 테이블에 가열 패드를 놓고 멸균 드레이프로 커버. 마취 기계를 설정하고 모든 소모품은 손이 닿는 내에 확인합니다. </li><li> 마취 마스크에 동물의 주둥이를 놓고 산소 1 L / 분, 2.5 %의 이소 플루 란으로 마취를 설정합니다. </li><li> 조심스럽게 요오드와 동물의 측면 스크럽, 70 % 에탄올로 씻어냅니다. 세 번 반복합니다. </li><li> 확인하려면동물 완전히 뒷 발을​​ 곤란하게하여 마취됩니다. 응답이 관찰되지 않은 경우 동물은 수술을 위해 완전히 마취와 준비가되어 있습니다. 그러나 동물이 움찔 경우, 기화기에 충분한 마취가 확인하고 동물 마취에서 완전히 이동하는 데 더 많은 시간을 허용합니다. </li><li> 부하는 약 18 G 바늘을 1.0 ml의 TB 주사기에 세포 현탁액 200 ㎕를가 (이전 냉각). 27 G 바늘과 바늘을 교체하고 사용할 준비가 될 때까지 얼음으로 돌아갑니다. </li><li> 비장의 일반 영역 (복부의 왼쪽 상단 사분면)를 찾아 사용하는 집게 해당 지역의 상단에 피부를 꼬집어. 수술 가위는 약 1.0 cm의 절개를 사용하여 포켓을 만들 수 있습니다. 마찬가지로, 비장 위에 평활근 핀치 및 복강에 접근하기 위해 실수로. </li><li> 조심스럽게 비장의 꼬리 끝을 잡고 몸 밖으로 당깁니다. 췌장은 비장에 첨부됩니다. 습식 성을 이용하여 췌장 확산erile Q-팁은 췌장의 꼬리를 찾아. </li><li> 췌장의 꼬리에 50 μL 주입을 제공, 10 초 안에 바늘을두고 천천히 췌장에서 바늘을 돌립니다. 성공적인 주입은 누수없이 피상적 거품과 같이 표시됩니다. </li><li> 복강에 췌장과 비장을 돌려줍니다. 먼저 근육을 넣고 다음 개별적으로 피부를 묶습니다. 절개를 닫 6-0 봉합 또는 스테이플을 사용합니다. 관리] 케토 프로 펜 피하 (SC) (5 ㎎ / ㎏) 24 시간 이상 동물의 고통을 방지 할 수 있습니다. (- 0.1 ㎎ / ㎏ 0.05) 36 시간에 걸쳐 매 12 시간 또는 프레 노르 핀 사우스 캐롤라이나를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 마취에서 동물을 복구하고 케이지로 돌아갑니다. 또한 통증 모니터링 할 수 있습니다. 수술 - 동물 (선제 또는 이전에)시의 통증 완화와 함께 제공해야합니다. 추가 통증 완화가에서 정하는 IACCUC 프로토콜에 따라 고통을 경험 동물에 제공해야합니다수의사 또는 지명을 돌봐. </li></ol></li><li> 생체 내 이미징에서 주 : 촬상 어두운 챔버 GFP 영상에 적절한 필터를 구비 한 상용 촬상 시스템을 이용하여 수행 하였다. (-; 513-557 nm의 방출 495 nm의 여기 455) 이미지 획득은 CCD 카메라와 교체 여기 / 발광 렌즈로 이루어진 광학 시스템을 사용하여 수행 하였다. 밝은 필드 이미지는 각 시점에 대한 1 × 1 비닝 (binning)에서 필터없이 촬영했다. GFP의 여자는 크세논 멀티 스펙트럼 광원을 이용했다. 동물은 이미징 시스템의 어두운 챔버로 통합 된 가스 매니 폴드 마취로 마취 기계를 연결하여 촬영 과정에서 마취를 유지 하였다. <ol><li> 1.5.2에 설명 된대로 동물을 마취. 마취 마스크는 이미징 동안 마취하에 동물을 유지하기 위해 상용 촬상 시스템의 어두운 챔버의 내부에방법. </li><li> 올바른 여기 및 방출 필터를 설정합니다. </li><li> 단지 백색광을 사용하여 초기 화상을 획득함으로써 시작한다. 이미징 세션에 걸쳐 동물의 같은 위치를 유지하고 두 번째 이미지를 촬영하기 위해 GFP 필터로 전환합니다. </li><li> 최선의 결과는 두 이미지를 중첩. 형광 영역과 강도에 대한 이미지를 분석합니다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. Pancreatic Cancer Stats: American Cancer Society: Cancer Facts & Figures. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf">http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf</a> (2014).</li>
<li>Smyth, E., Cunningham, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmyth%2C+E+%22Harrison%27s+Principles+of+Internal+Medicine%22">Harrison's Principles of Internal Medicine</a>. Kasper, D., et al. , 19th edn, McGraw-Hill Education. (2015).</li>
<li>Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+borderline+resectable+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastrointest+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of borderline resectable pancreatic cancer.</a> World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).</li>
<li>De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of pancreatic cancer.</a> Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).</li>
<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+mouse+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7, 645-658 (2007).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenografts%3A+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multiple+uses+of+fluorescent+proteins+to+visualize+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo.</a> Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).</li>
<li>Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+orthotopic+pancreatic+cancer+mouse+model%3A+cells+suspended+and+injected+in+Matrigel%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel.</a> World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).</li>
<li>Arranz, A., Ripoll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+optical+imaging+for+pharmacological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Advances in optical imaging for pharmacological studies.</a> Front Pharmacol. 6, 189(2015).</li>
<li>Corning. Corning Matrigel Matrix: Frequently Asked Questions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf">http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf</a> (2013).</li>
<li>Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+serial+selection+of+human+pancreatic+cancer+cells+in+orthotopic+mouse+models+produces+high+metastatic+variants+irrespective+of+Kras+status%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status.</a> J Surg Res. 184, 290-298 (2013).</li>
<li>Kim, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).</li>
<li>Katz, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+efficacy+of+adjuvant+cytosine-analogue+CS-682+in+a+fluorescent+orthotopic+model+of+human+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer.</a> Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).</li>
<li>Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).</li>
</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

따라서 우리는 생체 내 형광 이미징 (그림 1) 몸 전체를 사용하여 종양 성장의 비 침습적 모니터링을 허용, GFP를 표현 췌장암의 소성을 쥐 모델을 설명합니다. 이 기술은 실시간으로 종양 발생을 모니터링있게 해준다 (도 3); 이 연구팀은 췌장암에 대한 새로운 제제의 치료 효과를 연구하기위한 중요한 도구가 될 수 있습니다. 이 모델의 또 다른 중요한 측면은 GFP의 형광이 성공적으로 주입 및 췌장암의 성장을 나타내는 시각적으로 제공하는 것입니다; 이는 달리 살아있는 동물에서 측정하기 어려울 것입니다. 임상 설정과 일치,이 모델은 전이에 대한 통찰력을 제공한다. 비장, 장간막 림프절, 간 및 위장관 (그림 4)는 주변 장기에 전이를 보여줍니다. 우리는 일찍 칠주 이식을 게시로 전이를 관찰했다. PANC-1 전이는 담당자되었습니다18주 11-10의 범위 orted. 전이가 관찰되는 시간이...

췌장암은 다른 암에 비해 빈도 증가로 진단하고 미국에서 암 관련 사망의 4 번째 주요 원인이다. 진단시에서 환자의 90 % 이상이 5 년 이내에 1,2- 다이. 현재 외과 적 종양 제거 췌장암 유일한 치료법이지만, 환자의 20 % 이하로 인해 질병이 상당히 진행되고 3,4 전이있다 진단시 주로 수술을받을 수있다. 특정 증상의 부족은 췌장암에게 자동 질병을 만든다; 증상 중 일부는 복부 통증, 허리 통증, 식욕 부진, 황달과 구토의 손실을 포함한다; 이는 쉽게 일반적인 소화기 질환 (4)로 해석 될 수있다. 이 때문에, 췌장 암의 진단 및 치료에 도움이 새로운 약물 학적 도구를 개발하는 것이 중요하다. 동물 모델의 사용은 pancre의 생물학을 이해하기 위해 우리가 할 수 있습니다ATIC 암과 인간이 지식을 적용에 대한 통찰력을 제공한다. 종양이 기원 (5)의 장기 성장 때문에 췌장암의 이종 이식 동 소성 모델은 현실이다. 세포주 또는 종양 단편을 피하 주입 이소성 모델과 달리 소성을 모델링 주변 6 종양 미세 환경을 모방하고 종양 세포의 상호 작용의 오락을 허용한다. 여기에 설명 된 이종 이식 모델은 유전 녹색 형광 단백질 (GFP)을 발현하도록 유전자 조작 된 인간 췌장암 세포주 PANC-1 GFP에서 종양을 유도한다. GFP 검출은 비파괴 이미징 및 종양의 성장 및 전이 (7)의 모니터링을 가능하게한다. 종양 발생 자발적 빠르게 발생하며, 밀접 인간 췌장암 환자 (8)의 일차 종양의 것을 닮았다. 동소 이식 모델 동안 치료제에 반응하여 약효의보다 정확한 예측을 제공하는종양 미세 환경을 흉내 낸. 전술 한 바와 같이, 이러한 동물 모델은 실시간 종양 성장 및 전이의 형광 검출 할 수있다. 형광 검출 발광에 비해 더 직접적인 / 라이브 영상 수 있습니다. 형광 발광은 짧은 파장의 다른 광에 의해 여기 한 결과이고; 발광에 반해, 발광은 화학 반응의 결과와 강한 발광 구를 수 없다. 또한, 생체 내 형광 이미징 몸 전체 동물에 해가되지 않으며 연구자들은 치료 적 치료에 반응 시간에 따른 종양의 성장을 모니터링 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>RPMI 미디어 1640</td><td>Caisson Labs</td><td>RPL03-500ML</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 세럼&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10437-077</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토마이신&nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel HC 기저막, 고농도</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>SutureVet PGA 6-0 PGA</td><td>Henry Schein</td><td>39010</td><td></td></tr><tr><td>Alcare 또는 Foamed Antiseptic Handrub</td><td>Steris</td><td>639680</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>21300025</td><td></td></tr><tr><td>TB 주사기 27 G 1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Blutler Schein</td><td>50562</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge 동물 건강</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위, 5.5" 직선 마요네즈&nbsp;</td><td>Henry Schein</td><td>22-1600</td><td></td></tr><tr><td>PANC-1 GFP 세포주&nbsp;</td><td>Anticancer, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>소동물 이미징 시스템: iBox Scientia</td><td>UVP, LLC. Upland, CA.</td><td></td><td>살아있는 동물의 형광 종양을 관찰하기 위한 소동물 이미징 시스템</td></tr></tbody></table>

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델



Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

췌장암은 생존 지난 수십 년에 실질적으로 개선되지 않은의 암 중 하나 남아있다. 만 진단 된 환자의 7 % 5 년 이상 살아남을 것입니다. 이해 췌장 종양 미세 환경을 모방하기 위해, 우리는 실시간 종양 진행의 비 침습성 영상화를 허용 췌장암 동소 뮤린 모델을 이용했다. 녹색 형광 단백질 (PANC-1 GFP)을 발현 췌장암 세포 (예, 마트 리겔 HC), 혈청이없는 배지로하고이 개복술을 통해 췌장의 꼬리 주입 기저막 매트릭스 높은 농도로 현탁시켰다. 실온에 도달하면 고농도 기저막 매트릭스에서 세포 현탁액은 겔상 물질된다; 이 주사 부위에서의 밀봉을 만들고 셀 누설 방지 췌장과 접촉 할 때 따라서 겔화. 다른 장기에 종양의 성장과 전이를 실시간으로 모니터링된다형광을 이용하여 동물. 이 GFP의 여기 및 방출에 대한 적절한 필터를 사용하는 것이 중요합니다. 연구자들이 쉽게 누드 마우스의 절차를 복제 할 수 있도록 소성을 주입하는 단계는이 문서에 자세히 설명되어 있습니다. 이 프로토콜의 주요 단계는 생체 이미징 세포 현탁액의 제조 외과 이식 및 전신 형광이다. 이 동 소성 모델은 기본 및 전이성 종양에 대한 새로운 치료제의 효능을 조사하기 위해 설계되었습니다.

이 방법은 주사, 설치류 적절한 마취 개복술을 통해 세포 현탁액을 전달하기위한 세포 현탁액의 제조에 초점을 형광 인간 췌장암 세포 수술 동 소성 이식을 설명 형광 생체 작은 동물 이미징 용도. 이 3 주 사이에 녹색 형광 신호 (GFP 신호) 후 주입의 검출은, 현상 췌장암 종양 (그림 1)의 존재를 확인하기 위해 연구자에게 시각적 큐를 제공한다. (1)와 마우스의 세 가지 이미지로 구성도 PANC-1 GFP 형광 종양. 첫 번째는 백색광 (그림 1A)에서 촬영입니다; 두 번째 이미지는 푸른 형광 빛에서 촬영입니다 (여자 : 455-495 nm의, 방출 : 513-557 nm의) 이미지에 PANC-1 췌장 종양 (그림 1B)에서 방출 된 녹색 형광; 세 번째의 복합체 인처음 두 및 마우스 ...

Balb-c Ola Hsd-Fox1nu 마우스의 췌장에 녹색 형광 단백질 발현 췌장암 세포(PANC-1 GFP)를 항소적으로 이식하여 종양 진행 및 전이를 평가하는 절차가 여기에 나와 있습니다.

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

이 절차의 전체적인 목표는 살아있는 동물에서 비침습적으로 모니터링할 수 있는 형광 췌장암 마우스 정위 모델을 개발하는 것입니다. 이 모델을 통해 특정 관심 약물이 살아있는 동물의 원발성 종양 및 전이에 미치는 영향을 비침습적으로 연구할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 치료 효과를 제자리(in situ)에서 쉽게 관찰할 수 있다는 점입니다.제조사의 지침에 따라 고농도 Matrigel 분주액을 해동하는 것으로 시작합니다. 다음으로, 각 세포 플라스크를 5 mL의 DPBS로 세척하고, trypsin을 사용하여 배양물을 회수합니다. RPMI 배지를 첨가한 후, 생성된 세포 현탁액을 15 mL 튜브로 옮기고 세포를 원심 분리합니다.원심분리가 끝나면 세포를 생물안전작업대(bio-safety cabinet)로 옮기고, 부드럽게 피펫팅하여 펠렛을 10 milliliters의 신선한 DPBS에 재현탁합니다. 세포 수를 센 후, 세포를 다시 원심분리하고 세포 현탁액을 얼음처럼 차가운 무혈청 배지와 고농도 기저막 기질인 Matrigel을 사용하여 50 microliters당 3 × 10⁶ cells의 농도로 희석합니다. 그런 다음 샘플을 부드럽게 볼텍싱하고 얼음에 둡니다.세포를 이식하려면 먼저 마취된 생쥐의 눈에 연고를 바르고 멸균 드레이프로 덮인 가열 패드 위에 동물을 놓습니다. 그 다음, 동물의 옆구리를 요오드 세척 3회와 70% ethanol 헹굼 3회 순으로 부드럽게 소독합니다. 발가락 꼬집기 자극에 반응이 없는 것을 확인한 후, 18-gauge 바늘이 장착된 사전 냉각된 1 mL TB 주사기에 준비된 세포 약 200 µL를 주입합니다.18-gauge 바늘을 27-gauge 바늘로 교체하고 세포를 다시 얼음에 둡니다. 그 후, 복부의 좌상단 영역에서 비장의 일반적인 위치를 찾습니다. 핀셋을 사용하여 비장 위의 피부를 집어 올린 다음, 약 1cm 정도의 절개를 통해 포켓을 만듭니다.그런 다음, 비장 상단의 평활근을 집어 조직을 절개하여 복강에 접근합니다. 다음으로, 비장의 꼬리쪽 끝부분을 조심스럽게 잡아 체강 밖으로 끌어냅니다. 젖은 멸균 면봉을 사용하여 비장 끝에 붙어 있는 췌장을 펼쳐 췌장 꼬리 부분을 찾습니다.췌장 미부(pancreatic tail)에 50 µL의 세포를 주입한 다음, 바늘을 췌장에서 천천히 회전시키며 뽑아냅니다. 성공적으로 이식되었다면 누출 없이 표면에 거품 같은 모양이 나타납니다. 장기를 복강으

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 비디오는 췌장암 발병을 위해 암성 기증자의 종양 조각을 비암성 수용자 마우스의 췌장으로 이식하는 단계적 수술 방법을 설명합니다. 정소적으로 이식된 PDAC는 기존의 피하(SC) 모델보다 인간 췌장암의 조직 미세환경을 더 정확하게 재현할 수 있습니다.

정소성 동종이식 종양 이식: 췌장 종양 마우스 모델을 생성하는 기술

이 비디오는 녹색 형광 단백질 발현 췌장암 세포를 마우스의 췌장에 이식하는 프로토콜을 보여줍니다. 정소성 마우스 모델은 원발성 및 전이성 종양에 대한 새로운 치료법의 효능을 조사하는 데 도움이 됩니다.

형광 정교성 마우스 모델: 생체 내 종양 진행을 평가하기 위해 암세포를 발현하는 GFP를 마우스에 이식

이 비디오는 종양 진행의 비침습적 모니터링을 위해 국소 세포 전달 및 생체 내 생물 발광 이미징을 위해 Matrigel을 활용하는 췌장암의 정소성 모델을 보여줍니다. 정소성 모델은 신유전 및 이종 이식 모델 모두에 적합하며 원발성 췌장 종양의 성장 및 전이에 대한 새로운 항암 치료제의 영향을 조사하기 위한 전임상 시험에 사용할 수 있습니다.

생물 발광 직소성 췌장암 마우스 모델: 마우스의 암 진행을 모니터링하기 위한 비침습적 기술

췌장암 생물학의 개선 이해는 매우 췌장암을 치료하는 더 나은 치료 옵션의 개발을 가능하게하기 위해 필요합니다. 이러한 요구를 해결하기 위해, 우리는 사용하여 암 진행의 비 침습 모니터링을 허용 췌장암의 동소 모델을...

췌장암의 진행 발광 동소 모델

이 프로토콜의 목표는 마우스의 정소성 췌장 종양 이종 이식편에 동적 대비 강화 자기 공명 영상(DCE-MRI)을 적용하는 것입니다. DCE-MRI는 표적 조직의 미세혈관 구조를 분석하는 비침습적 방법이며, 새로운 요법 후 종양의 혈관 반응을 평가하는 데 유용합니다.

동소 이식 췌장 암 마우스 모델의 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상

이 작업은 녹색 형광 단백질 및 생물 발광 신호의 검출뿐만 아니라 정량적 분자 검출 기술의 통합에 의해 종양 하중을 정확하게 평가하기 위한 고급 프로토콜을 미리 설정합니다.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

우리는 모린 유래 췌장 선암 세포주를 직접 네이티브 종양 부위로 유도하는 초음파 유도 이식프로토콜을 설명합니다. 이 접근법은 주사 후 2-4주 이내에 초음파 스캐닝에 의해 검출가능한 췌장 종양을 초래하고, 외과 정형외과 이식에 비해 각막벽에 종양 세포 파종을 현저히 감소시켰다.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

임상 맥락에서, 국소췌암을 가진 환자는 부주 처리를 선행한 pancreatectomy를 겪게 될 것입니다. 여기에서 보고된 이 프로토콜은 말단 판생성 절제술 및 비장 절제술다음에 췌장암의 정형소 이식을 통해 누드 마우스에서 이 임상 시나리오를 모델링하는 안전하고 효과적인 방법을 확립하는 것을 목표로 합니다.

췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델

췌장의 생체 내 고해상도 이미징은 췌장 내 생체 내 이미징 창으로 촉진되었다.

췌장 인트라바이탈 이미징 창이 있는 뮤린 모델에서 췌장의 생체 내 세포 수준 시각화안정화

췌관 선암종(PDAC)의 Syngeneic mouse orthotopic 동종이식편은 질병 아형의 생물학, 표현형 및 치료 반응을 요약합니다. 빠르고 재현 가능한 종양 진행으로 인해 전임상 연구에 널리 사용됩니다. 여기에서는 syngeneic murine PDAC 배양을 췌장에 주입하여 이러한 모델을 생성하는 일반적인 방법을 보여줍니다.

췌장암을 모델링하기 위한 Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts

우리는 양자 세포 전달을 위해 유세포 분석을 통해 마우스의 종양 침윤 림프구(TIL)를 활용하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 syngeneic pancreatic cancer 마우스 모델에서 종양에 대한 TIL의 특정 세포 독성을 검증하여 췌장암에 대한 입양 세포 요법 개발에 대한 통찰력을 제공하는 것을 목표로 합니다.

췌장암의 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구의 유세포 분석 기반 분리 및 치료 평가

배우세요 형광 동소 이식 마우스 모델을 이용한 췌장암 연구 방법을. GFP 발현 췌장암 세포를 Balb-c Ola Hsd-Fox1nu 마우스에 이식하여 비침습적으로 종양 진행과 전이를 실시간 모니터링할 수 있습니다.

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

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