췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

이 절차의 전반적인 목표는 살아있는 동물에서 비침습적으로 모니터링할 수 있는 형광 췌장암의 마우스 orthotopic 모델을 개발하는 것입니다. 이 모델을 통해 원발성 종양에 대한 특정 관심 약물의 효과와 살아있는 동물의 전이에 대한 비침습적 연구를 수행할 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 치료의 효과를 현장에서 쉽게 관찰할 수 있다는 것입니다.

제조업체의 지침에 따라 고농도 Matrigel의 분취액을 해동하는 것으로 시작합니다. 다음으로, 세포의 각 플라스크를 5ml의 DPBS로 세척하고 트립신으로 배양액을 수확합니다. RPMI 배지를 첨가한 후 생성된 세포 현탁액을 15ml 튜브로 옮기고 세포를 스핀다운합니다.

원심분리가 끝나면 세포를 생물 안전 작업대로 옮기고 부드러운 피펫팅으로 10ml의 새 DPBS에 펠릿을 다시 현탁시킵니다. 계수 후, 세포를 다시 원심분리하고 세포 현탁액을 얼음처럼 차갑고 혈청이 없는 배지 및 고농도의 기저 매트릭스 멤브레인인 Matrigel의 50마이크로리터당 6번째 세포의 3배 농도로 희석합니다. 그런 다음 샘플을 부드럽게 소용돌이치고 얼음 위에 놓습니다.

세포를 이식하려면 먼저 마취된 쥐의 눈에 연고를 바르고 멸균 드레이프로 덮인 발열 패드 위에 동물을 놓습니다. 그런 다음 요오드 스크럽 3회, 70% 에탄올 헹굼 3회를 통해 동물의 옆구리를 부드럽게 소독한다. 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족을 확인한 후, 약 200마이크로리터의 준비된 세포를 18게이지 바늘이 장착된 사전 냉각된 1밀리리터 TB 주사기에 로드합니다.

18 게이지 바늘을 27 게이지 바늘로 교체하고 세포를 다시 얼음 위에 놓습니다. 그런 다음 복부의 왼쪽 상단 사분면에서 비장의 일반적인 영역을 찾습니다. 겸자를 사용하여 비장 위의 피부를 꼬집고 약 1cm 절개를 만들어 주머니를 만듭니다.

그런 다음 비장 상단의 평활근을 꼬집고 조직을 잘라 복막강에 접근합니다. 다음으로, 비장의 꼬리 끝을 부드럽게 잡고 체강 밖으로 빼냅니다. 젖은 멸균 면봉을 사용하여 비장 끝에 붙어 있는 췌장을 펴서 췌장 꼬리를 찾습니다.

50마이크로리터의 세포를 췌장 꼬리로 전달한 다음 췌장에서 바늘을 천천히 회전시켜 빼냅니다. 성공적인 이식은 누출이 없는 표면 거품처럼 보일 것입니다. 장기를 복막강으로 되돌리고 모든 것을 근육과 피부로 둘러쌉니다.

그런 다음 6-0 봉합사를 사용하여 절개 부위를 봉합합니다. 그 후, 동물에게 케토프로펜을 주사하고 완전히 회복될 때까지 모니터링한다. 적절한 실험 시점에 상업용 소동물 이미지 시스템을 사용하여 마취 중인 살아있는 동물의 종양 성장을 이미지화하고 적절한 여기 및 방출 필터를 선택합니다.

다음으로, 백색광만 사용하여 초기 이미지를 얻습니다. 동물을 같은 위치에 두고 GFP 필터로 전환하고 두 번째 이미지를 획득합니다. 종양 성장을 분석하려면 백색 이미지와 형광 이미지를 중첩하여 종양 세포의 형광 영역과 강도를 평가합니다.

이식 후 2주에서 3주 사이에 녹색 형광 신호를 감지하면 종양이 발생하지 않는 동물은 GFP 신호를 나타내지 않기 때문에 진행 중인 췌장암 종양의 존재를 확인하기 위한 시각적 단서를 제공합니다. 또한, 이 방법을 사용하면 종양 성장 진행을 비침습적으로 모니터링할 수 있으며, 종양 크기가 증가함에 따라 시간이 지남에 따라 관찰되는 GFP 신호의 증가가 가능합니다. 특정 장기로의 종양 전이는 추가 생체 외 형광 이미징을 위해 관심 조직을 제거할 때 확인할 수 있습니다.

이 기법을 완전히 익히면 6분에서 8분 안에 완료할 수 있으며 췌장암과 그 전이에 대한 다양한 화학요법제의 효과를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 Matrigel을 얼음 속에 보관하는 것이 중요하며, 그렇지 않으면 젤을 주입하기 어려울 것입니다. 또한 무균 기술을 사용하고 항상 모든 마취 수준을 모니터링하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 마우스에서 췌장암의 정형소 모델을 생성하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 인간 암 세포주를 다루는 것은 위험할 수 있으며, 보호 장비를 착용하고 생물학적 폐기물을 적절하게 처리하는 등의 예방 조치를 항상 취해야 한다는 점을 잊지 마십시오.