Name: 항원 중심의 성 대장염 모델의 개발은 항원이 T 세포에 세포를 제시하여 항원의 프리젠 테이션을 공부하기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: 학습하세요 항원 중심 대장염 모델을 통해 CX3CR1 양성 단핵구와 CD4 양성 T 세포의 상호작용을 연구하는 방법을. 형광 단백질을 이용하여 장 점막층에서 면역 세포 반응을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

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다른 모든 모델과 같이, 상술 한 항원 구동 대장염 모델 기술을 수행하는 연구자는 유의해야 할 몇 가지 문제점을 제시 할 수있다. 구약-II 호스트에서 / 레드 + CD4 + T CD62L + 세포를 주입 할 때, 연구자는 복강에 주사 바늘을 ​​삽입하는 것은 매우 온화하고주의해야합니다. 그렇게하지 ​​않으면 사망에이를 수있는 마우스 또는 질병을 유발하지 않습니다 세포의 피하 투여의 소장의 파열 될 수 있습니다. 일반적으로 마우스는 셀 전송 후 첫 주 동안 체중이 증가 할 것이다. 연구자는 각각 중량 시점에서 동시에 마우스 무게 및 전체 공정에 걸쳐 동일한 무게 저울을 사용한다. 때로는 실험 쥐 실험의 시작에서 그 무게가 18g 이하이며, 특히 낭비 증후군의 징후를 개발하지 않는다. 그러나 이러한 동물 might는 여전히 거시적 평가에서 중요한 장내 염증을 개발한다. ...

대장은 외부 환경에 노출되어 상기 몸체의 큰 표면이다. 상주 균의 광대 한 배열 장내 미생물 (또는 미생물)를 형성하는 인간의 장내 정착. 이는 최대 100 조 미생물 세포로 구성되어 것으로 추정 생물학 1-3에 알려진 가장 인구 밀도가 세균의 서식지 중 하나 구성된다. 망할 놈의 박테리아는 생존과 4를 곱 장내 틈새 시장을 식민지화. 반환에서, 미생물은 유전자 1 인코딩되지 않은 추가 기능 기능 호스트를 부여한다. 예를 들어, 미생물은 상피 세포의 증식을 자극 스스로 호스트가 생성 할 수없는 비타민을 생산하고, 신진 대사를 조절하고 병원균 4-6을 방지합니다. 이 유익한 관계를 감안할 때, 몇몇 저자는 인간이 박테리아와 인간의 유전자 7,8의 혼합이다 &quot;슈퍼 유기체&quot;또는 &quot;holobionts&quot;것을 제안했다. 제 (인간) 호스트에있는 미생물의 수익에 미치는 영향을 감안할 때, 장내 면역 시스템은 루멘에서 자신의 존재를 가능하게뿐만 아니라 내강 측 9-11에서 침입 병원균을 죽일 공생 미생물을 허용 할 필요가있다. 장내 면역 시스템은 무해하고 잠재적으로 유해한 내강 미생물을 구별하는 메커니즘을 개발했다; 그러나 이러한 메커니즘은 아직 잘 (12)을 이해하지 않습니다. 장 무결성을 유지하는 것은 관용과 면역 (13) 사이의 균형을 유지하기 위해 엄격하게 규제 면역 항상성을 필요로한다. 면역 항상성의 불균형은 염증성 장 질환 (IBD) 3,14로 장 질환의 유도에 기여한다. 크론 병 (CD)과 궤양 성 대장염 (UC) : 두 가지 주요 IBD의 유형이있다. 이러한 질병을 가진 환자는 일반적으로 직장 출혈, 심한 설사와 복통 15, 16 겪는다. IBD의 하나의 원인은 아직유전 적 요인, 환경 적 영향 및 조절 이상 면역 반응의 알 수없는,하지만 조합이 질병 개발 (15)의 키 이벤트가 될 수 있습니다. IBD에 대한 동물 모델은 50 년 이상 사용되어왔다. 지난 수십 년에 새로운 IBD 모델 시스템은 IBD (17, 18)의 발병 기전에 관련된 여러 가지 가설을 테스트하기 위해 개발되었다. 만성 대장염의 가장 특징으로하는 모델은 T 세포의 항상성 (19, 20)의 붕괴를 유도 T 세포 전달 모델이다. 16,21이 모델은 T 및 - (- / SCID 마우스와 같은 RAG 같은) B 세포가 부족 호스트로 면역 된 마우스에서 나이브 T 세포 전사 포함한다. 이 모델에서 질병의 발달은 체중 설사 존재 감소 신체 활동과 손실을 평가 3-10 주 동안 모니터링된다. 이 때문에 낭비 증후군 (16)이라고합니다. 건강한 쥐에 비해 이식 호스트의 대장 조직 thicke입니다R, 짧고 (16) 무거운. T 개의 셀의 전송 모델을 사용하면, T 세포 개체군은 22 IBD의 병인에 기여할 수있는 다른 방법을 이해할 수있다. T 개의 셀 전송 모델은 항원 특이 적 방식으로 질병 과정에 장갑차 및 T 세포 사이의 상호 작용을 분석하지 않는다. 또한 골수 세포 및 림프구 세포 간의 상호 작용은 염증 창자 (23)의 개발을 담당 할 수 있음을 보여왔다. IBD의 많은 부분이 밝혀져 있지만, 질환의 개발로 이어질 초기 사건은 여전히​​ 명확하게 이해되어야한다. 이는 미생물 전송 대장염이없는 것을 도시하고있다 (24)를 확립 할 수 없다. 최근 몇 이론 IBD는 공생 세균 (25)에 대한 면역 반응의 결과 일 수 있음을 시사한다. 저자는 공생 박테리아 말단 부위에 염증을 유발하는 데 필수적인 것이 제안26. 세균 무연 (GF) 동물 장 면역 체계는 일반적으로 (27, 28)을 손상되지만 완전 권한 장 면역계 (29)의 발전에 관련되는 무균 박테리아 결과의 혼합물이 마우스의 집락. 따라서, 미생물은에 걸리기 또는 장내 염증 30, 31의 개발에 대해 보호하는 메커니즘으로 하나, IBD의 발병 기전에 중요한 요소가 될 것으로 보인다. 현재의 이론에서는 유전 적 소인이 IBD 환자 32, dysbiosis 불리는 미생물 불균형의 결과임을 암시하지만, 분명하지 아직 dysbiosis가 원인 또는 병 (12)의 결과 인 경우. IBD의 개발 미생물의 역할을 고려하여, 시험 관내 실험에서 CD4 + T 세포는 장내 세균 (33, 34)와 펄스 장갑차에 의해 활성화 될 수 있음을 보여 주었다. 또한, 항원은 그 도시 된같은 E. 등 다양한 공생 박테리아 종, 대장균, 박 테로이드, Eubacterium 및 테우스는 CD4 + T 세포 (35)를 활성화 할 수 있습니다. 이 세포를 T로 세균의 항원 제시는 IBD의 개발에 대한 중요성을 나타냅니다. 질병 과정에서 미생물에 의해 도출 된 여러 항원의 복잡성을 줄이기 위하여, 대장균 균주은 OVA 항원을 생성하는 생성되었다. - / - 전송 대장염은 RAG에 OVA 특이 적 T 세포를 주입하여 유도 하였다 OVA 동물 발현 E. 집락 대장균. 이 모델은 3 CR1 CX + 의원, 대장 점막 고유 층 (CLP) (36)의 주요 세포 서브 세트가 전송 중에 CD4 + T 세포와 상호 작용하는 것을 암시하는 최근 증거에 기초 37 대장염. 의원은 돌기 (36), (38, 39)를 이용하여 박테리아 등의 미립자 항원 창자 내강, 샘플링. 이전의 연구의원도 40, 41 루멘 장 도입 등의 OVA와 같은 수용성 항원을, 걸릴 수 있음을 보여 주었다. CLP를에 CX (3) CR1 + 의원의 풍요 로움을 감안할 때, 이러한 세포 내강 박테리아를 샘플링하고 CD4 T 세포와 상호 작용할 수있는 가능성이있다. E. 집락 OVA 특이 적 CD4 + T 세포를 이식 한 생쥐의 공 초점 화상 대장균 CFP-OVA는, CX (3) CR1 + 의원은 항원 중심 대장염의 개발 과정 OT-II CD4 + T 세포와 접촉하는 것을 보여준다. 이 모델은 장내 장갑차 만 장내 루멘에 특정 항원을 발현하는 박테리아에 특이적인 T 세포의 항원 제시 공정을 연구 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>LB 국물, 밀러 (Luria-Bertani)</td> <td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>로타리 쉐이크</td><td>레이스 Laborbedarf e. K.</td><td>모델 3020 GFL</td><td></td></tr><tr><td>2mm 갭 쿠벳&nbsp;</td><td>Peqlab Biotechnologie GmbH</td><td>71-2020</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마-알드리치</td><td>G5516-100ML</td><td></td></tr><tr><td>유전자 펄서 Xcell 시스템&nbsp;</td><td>BioRad Laboratories GmbH</td><td>1652660</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244510</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393-5G</td><td></td></tr><tr><td>SOC Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1797-100ML</td><td></td></tr><tr><td>고순도 플라스미드 분리 키트</td><td>Roche</td><td>11754777001</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth GmbH & Co</td><td>3810.1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5941</td><td></td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>젤 챔버&nbsp;</td><td>PEQLAB Biotechnology GmbH</td><td>40-0708</td><td></td></tr><tr><td>로딩 염료</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb DNA 래더&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>SM0312</td><td></td></tr><tr><td>에티듐 브로마이드 용액</td><td>Carl Roth GmbH & Co. KG</td><td>2218.3</td><td></td></tr><tr><td>사진 문서화 시스템&nbsp;</td><td>Decon Science Tech GmbH</td><td>DeVision G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA 염기서열분석&nbsp;</td><td>MWG-Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L182-50</td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>HBO 100</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra System</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Prestained Protein Ladder&nbsp;</td><td>Fermentas, St. Leon-Rot, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IstanBlue Solution</td><td>Expedeon, Cambridgeshire, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>니트로셀룰로오스 멤브레인&nbsp;</td><td>Macherey-Nagel GmbH & Co. KG</td><td>741280</td><td></td></tr><tr><td>전기 블로터&nbsp;</td><td>Biometra GmbH</td><td>846-015-600</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003-25G</td><td></td></tr><tr><td>항-오브알부민 항체&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab181688</td><td></td></tr><tr><td>안티-토끼 IgG&nbsp; HRP</td><td>시그마-알드리치</td><td>A0545&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pierce ECL Plus 웨스턴 블로팅 기질</td><td>Pierce Biotechnology, Thermo Fischer Scientific Inc</td><td>32132</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td>2594.00.00</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Cell Strainers</td><td>Fischer Scientific&nbsp;</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>암모늄 클로라이드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>254134-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris 베이스</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ CD62 L+ T 격리 키트&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MACS LS 열&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MS 컬럼&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>MidiMACS 분리기</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS 분리기</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Feeding Needle 20G</td><td>SouthPointe Surgical Supply, Inc</td><td>FN-7903</td><td></td></tr><tr><td>포르말린 용액, 중성 완충, 10%</td><td>시그마-알드리치</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>파라핀</td><td>시그마-알드리치</td><td>1496904</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린</td><td>시그마-알드리치</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>에오신 Y</td><td>시그마-알드리치</td><td>230251&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>디티오트레이톨</td><td>시그마-알드리치</td><td>D9779&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 VIII 타입</td><td>시그마-알드리치</td><td>C-2139</td><td></td></tr><tr><td>로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트 (RPMI) 매체</td><td>AppliChem</td><td>A2044, 9050</td><td></td></tr><tr><td>소듐 아지드</td><td>시그마-알드리치</td><td>438456</td><td></td></tr><tr><td>마우스 BD Fc 블록</td><td>BD 파밍겐</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>FITC-conjugated mAb 결합 V&szlig; 5.1, 5.2&nbsp;</td><td>BD Pharmingen</td><td>553189</td><td></td></tr><tr><td>APC-conjugated mAb binding CD4 GK1.5&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>17-0041-83</td><td></td></tr><tr><td>FACS 칼리버&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS Express V3 소프트웨어</td><td>DeNovo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meta 스캐닝 컨포칼 현미경&nbsp;</td><td>자이스</td><td>LSM 710&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>자이스 워크스테이션</td><td>자이스</td><td>LSM 7</td><td></td></tr><tr><td>자이스 ZEM 소프트웨어&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>v4.2.0.121</td><td></td></tr><tr><td>Maxisorp 면역 플레이트&nbsp;</td><td>NUNC, Roskilde</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin conjugated alkaline phosphatase</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>016-050-084</td><td></td></tr><tr><td>알칼리성 인산가수분해효소 기질 4-Nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71768-5G</td><td></td></tr><tr><td>mAb R4-6A2</td><td>BD Biosciences</td><td>551216</td><td></td></tr><tr><td>mAb XMG1.2&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>554410</td><td></td></tr><tr><td>TECAN 마이크로플레이트-ELISA 리더</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasyWin 소프트웨어</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNase I 재조합</td><td></td><td>4536282001</td><td></td></tr></tbody></table>

항원 중심의 성 대장염 모델의 개발은 항원이 t 세포에 세포를 제시하여 항원의 프리젠 테이션을 공부하기

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

염증성 장 질환(IBD)은 위장관(GIT)에 영향을 미치는 만성 염증입니다. 질병 중에 관여하는 면역학적 메커니즘을 연구하는 가장 좋은 방법 중 하나는 대장염의 T 세포 전달 모델입니다. 이 모델에서는 면역결핍 마우스(RAG-/- 수용자)를 건강한 야생형 숙주에서 유래한 미성숙한 CD4+ T 세포로 재구성합니다.
이 모델을 사용하면 장 염증이 지속되지만 정의된 항원에 의존하지 않는 질병 및 만성 염증으로 이어지는 가장 초기의 면역학적 사건을 검사할 수 있습니다. 질병 진행에서 항원제시세포(APC)의 잠재적인 역할을 연구하기 위해서는 정의된 공생 유래 항원이 대장염을 유발하는 항원 주도 질병 모델을 갖는 것이 도움이 됩니다. 따라서 항원 주도 대장염 모델이 개발되었습니다. 이 모델에서 OVA 단백질의 특정 항원결정기만 인식할 수 있는 OT-II CD4+ T 세포는 CFP-OVA 발현 E. coli에 도전하는 RAG-/- 숙주로 전달됩니다. 이 모델을 통해 lamina propria에서 APC와 T 세포 간의 상호 작용을 검사할 수 있습니다.

항원 중심 대장염 모델 E.을 설정하려면 콜라이 균주 강한 구성 적 프로모터 P 하이퍼 (도 1a)의 제어 하에서 발현되는 CFP 유전자가 닭 오브 알부민 단백질과 융합 구조체에 대한 코딩 서열에 융합 된 플라스미드를 포함하는 구성되었다. 형광 현미경 보여줍니다 재조합 E. 대장균 pCFP-OVA가 아니라 부모의 E. 대장균 DH10B는 CFP (그림 1B)를 표현한다. E.을 생산하는 CFP-OVA- 대장균은 시험 관내 OT-II 세포를 활성화 및 E. 대조적으로 IFN-γ의 생산을 유도 할 수있다 CFP를 표현하는 대장균 균주 만 (그림 2 참조). 그림 3a는</...

이 항원 주도 대장염 모델에서는 적색 형광 단백질을 발현하는 OT-II CD4+ T 세포를 단핵 식세포(MP)에서 녹색 형광 단백질을 발현하는 RAG-/- 마우스로 채택하여 전달했습니다. 숙주는 청록색 형광 단백질(CFP)에 융합된 오브알부민 단백질(OVA)을 발현하는 대장균(E.coli)에 도전했습니다.

항원 중심의 성 대장염 모델의 개발은 항원이 T 세포에 세포를 제시하여 항원의 프리젠 테이션을 공부하기

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

이 항원 유도성 대장염 모델의 전반적인 목표는 항원 특이적 대장염 과정에서 CX3, CR1 양성 단핵 구상세포가 CD4 양성 T 세포와 상호작용하여 이를 활성화하는지, 그리고 이러한 단핵 구상세포 의존적 작동 T 세포 확장이 장 고유층 내에서 발생하는지 확인하는 것입니다. 이 방법은 대장 고유층의 항원 제시 세포와 작동 T 세포 사이에서 어떤 유형의 상호작용이 일어나는지와 같은 염증성 장질환 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 면역 세포의 상호작용 및 염증성 장질환의 병원성을 유발하는 요인들을 연구할 수 있다는 점입니다.이 방법은 적색 형광 항원 특이적 나이브 CD4 T 세포를 단핵구에서 녹색 형광 단백질을 발현하는 면역 결핍 숙주로 이식하는 T 세포 전이성 결장염 모델을 이용합니다. 세포 전이 후에는 청색 형광 항원 발현 박테리아를 경구 투여합니다. 이를 통해 숙주의 장 고유층에서 발생하는 면역 반응을 질병 진행의 다양한 단계에서 모니터링할 수 있습니다.해부 가위를 사용하여 결장을 세로로 절개하고, 25 milliliters의 PBS가 담긴 페트리 접시에서 조직을 세척하여 잔해물과 점액을 제거합니다. 결장을 5~8 millimeter 크기로 자른 후, 10 millimolar HEPES와 5 millimolar EDTA가 첨가되고 칼슘과 마그네슘이 없는 20 milliliters의 신선한 DPBS에 조각들을 넣습니다. 샘플이 든 튜브를 최대 속도로 30초 동안 볼텍싱합니다.그 다음, 상피세포를 제거하기 위해 37 °C에서 10분 동안 부드럽게 흔들어주며 배양합니다. 배양이 끝나면 다시 30초 동안 Vortex 합니다. 그런 다음, 상피세포가 포함된 상층액을 제거합니다.조직 조각들을 20 milliliters의 신선한 PBS, HEPES 및 EDTA 완충액이 들어 있는 새 튜브로 옮기고, 전후로 볼텍싱 단계를 포함하여 배양 과정을 반복합니다. 세 번째 반복 후에는 모든 상피 세포가 제거되어 상층액이 투명해집니다. 잔류 상피 세포를 제거하기 위해 PBS로 조직 조각들을 가볍게 세척합니다.조직 조각을 2x2 mm 크기로 자른 후, 0.5 mg/mL의 collagenase type VIII과 10 U/mL의 DNAse I이 첨가된 10 mL의 RPI 배지로 옮겨 소화를 진행합니다. 샘플을 30초 동안 Vortex 합니다. 그 다음, 조직 조각을 37 °C에서 30~35분 동안 흔들어주며 배양하고, 배양하는 동안 5분마다 튜브를 Vortex 합니다.조직의 소화가 완료되면, 생성된 슬러리를 70 micron 셀 스트레이너를 통해 50 milliliter 원심분리관에 거릅니다. 셀 스트레이너를 한 번 세척하고, 원심분리를 통해 단일 세포 현탁액을 침전시킵니다. 마지막으로, 세포를 PBS로 한 번 세척한 후 원심분리합니다.그 후, trypan blue 배제법을 통해 생존 세포 수를 측정합니다. Cyan fluorescent protein ovalbumin 단백질을 생성하는 e. coli는 e. coli와 대조적으로 인 비트로(in vitro)에서 OT-II 세포의 interferon gamma 생성을 활성화합니다.CFP만 발현하는 coli입니다. e. coli PCFP ova를 섭취한 형광 녹색 단백질 발현 형질전환 생쥐의 결장 조직을 ex vivo 3D 공초점 영상으로 촬영한 결과, 장 상피 세포 근처의 결장 은와 내에 형광 단백질 발현 박테리아가 존재하며 숙주의 장 내 포식세포와 공국소화되어 있음을 보여줍니다.OT-II red 동물에서 CD4 양성 T 세포는 적색 형광 단백질과 V beta 5.1을 공동 발현하는 것이 특징입니다. e. coli PCFP ova로 자극했을 때, OT-II red CD4 양성 CD62 ligand 양성 T 세포를 입양 이식한 BNT 림프구 결핍 녹색 형광 단백질 발현 형질전환 마우스는 체중이 빠르게 감소하며 결장염의 임상 증상을 나타냅니다.세포 전이 7일 후, 소수의 숙주 식세포만이 e. coli PCFP ova를 샘플링했으며 OT-II red 양성 세포는 검출되지 않았습니다. 세포 전이 14일 후, e.를 샘플링한 숙주 식세포는coli PCFP ova는 입양 전이된 OT-II red 양성 세포와 매우 인접하게 위치해 있습니다. 세포 전이 후 21일이 되면 다수의 숙주 세포가 e. coli PCFP ova를 섭취하며, 결장 고유층 전체에 분산되어 있는 공여자 OT-II red 양성 세포들이 숙주 장 phagocyte들과 밀접하게 접촉하고 있는 것을 확인할 수 있습니다.이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 4시간 이내에 완료할 수 있습니다. 본 절차 이후에 장 림프구 염색 및 혈청 사이토카인 분석과 같은 다른 방법을 수행하여 CD4 T 세포의 활성화 상태에 관한 추가적인 의문에 답하고 결장염의 중증도를 확인할 수 있습니다. 각 단계의 발전을 통해, 이 기술은 마우스 모델에서 염증성 장질환을 유발하는 미세한 사건들을 탐구하기 위한 면역학 분야 연구의 토대를 마련합니다.이 영상을 시청한 후에는 후속 ex vivo 분석을 위해 결장 고유층 면역 세포를 분리하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

development-an-antigen-driven-colitis-model-to-study-presentation

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

여기서는 자세하게 마우스 장 돌기 세포 (DC가)와 macrophages의 급속한 분리를위한 방법론. 창자 DCS 및 macrophages의 Phenotypic 특성은 세포 정렬 뒤에 자석 구슬 농축은 기능적 연구를위한 매우 순수 인구를 얻을하는 데 사용하는 동안 멀티 컬러 플로우에게 cytometric 분석을 사용하여 수행됩니다.

마우스 소장에서 돌기 세포 및 Macrophages의 분리 및 특성화

이 비디오는 염증성 장 질환인 대장염의 화학적 유도 쥐 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 마우스는 적절한 기간 동안 덱스트란 황산나트륨(DSS) 용액을 섭취할 수 있습니다. DSS를 섭취하면 결장의 점액과 상피층 장벽이 손상되어 장내 미생물이 기저 조직으로 들어가 상주 면역 세포가 이를 감지하여 과장된 면역 반응을 매개하여 염증을 유발합니다.

덱스트란 황산염 나트륨 유발 대장염의 쥐 모델을 생성하는 기술

DNBS / TNBS 유도 대장염은 다른 염증성 장 질환의 한테 진찰 Pathobiology을 연구하는 저렴한 방법을 제공합니다. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 생쥐와 쥐 대장염을 유도하는 DNBS의 성공적인 응용 프로그램을 설명 하나는 철저하게 호스트 매개 장 반응을 연구 할 수 있습니다.

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

여기에서는 syngeneic CD4+CD45RBhigh T cell을 T 및 B cell 결핍 수용자로 이식하여 마우스에서 결장 염증을 유도하는 프로토콜을 제시합니다. 임상적 및 조직병리학적 특징은 인간의 염증성 장 질환을 모방합니다. 이 방법을 사용하면 결장 염증의 시작과 질병의 진행에 대한 연구를 할 수 있습니다.

이펙터 CD4의 입양 전송하여 쥐과 장내 염증의 유도<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; 높은</sup&gt; 면역 결핍 마우스에게 T 세포

뚜렷한 수지상 세포 부분 집합은 림프 기관에서 드문 집단으로 존재하므로 면역학 실험을 위한 충분한 수와 순도로 분리하기가 어렵습니다. 여기에서는 현재 알려진 마우스 비장 수지상 세포의 모든 주요 부분 집합을 분리하기 위한 고효율, 고수율 방법에 대해 설명합니다.

마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법

여기서는 서로 다른 마우스 조직 내에서 IL-22 생성 세포를 시각화하기 위한 형질전환 리포터 마우스 모델을 설명합니다. 이 방법은 마우스에서 다른 사이토카인 또는 비서 단백질의 위치를 추적하는 데 사용할 수 있습니다.

기자 마우스를 사용하여 IL-22 발현 림프구의 시각화

Murine 원심 인공 인간의 전환 colitis, 지저분한 스트림에서 제외 콜론 세그먼트에서 주로 림프 colitis 위한 murine 모델을 제공 합니다.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

이 프로토콜은 파라핀에 내장된 포르말린 고정 결장 섹션의 면역형광을 이용한 면역성 화학에 의한 에스트로겐 수용체의 시각화 방법 및 크론병의 완전한 검증된 TNBS 유도 뮤린 모델을 제시한다.

면역 형광을 사용하여 TNBS 유도 크론 병을 가진 마우스의 결장에서 에스트로겐 수용체의 가시화

본 프로토콜에서, 장내 미생물-항원 특이적 T 세포 입양 상반염 모델이 기재된다. CD4+ T 세포는 CBir1 TCR 형질전환 마우스로부터 분리된다. 이들은 면역 지배적인 창자 microbiota 항원 CBir1 flagellin를 위해 특정합니다, 수신자 Rag1/-- 마우스로 전송되는, 장 염증으로 이끌어 내는.

CBir1 TCR 형질 전환 CD4+ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

유도 및 항원에 특정한 T 세포의 확장을위한 새로운 DC 독립적인 방법을 설명합니다. HLA A2 - IG 기반의 인공 항원 제시 세포 (aAPC)을 효율적으로 다양한 항원 특이성의 CTL 확장 HLA - A2 제한 펩티드와 함께로드됩니다. 이 기술은 CTL 기반 입양 immunotherapy에 대한 잠재력을 보유하고 있습니다.

효율에 대한 HLA - IG 기반 인공 항원 제시 세포 예 생체내</em인간 CTL의> 확장

학습하세요 항원 중심 대장염 모델을 통해 CX3CR1 양성 단핵구와 CD4 양성 T 세포의 상호작용을 연구하는 방법을. 형광 단백질을 이용하여 장 점막층에서 면역 세포 반응을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

항원 중심의 성 대장염 모델의 개발은 항원이 T 세포에 세포를 제시하여 항원의 프리젠 테이션을 공부하기

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