Name: 쥐의 굴근 힘줄 손상 및 복구 수술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 배우세요 쥐의 굴근 힘줄 손상 및 복구 수술 방법을 통해 힘줄 치유 과정에서 흉터 형성에 기여하는 세포 집단을 규명하고 재생 의학 연구에 활용하는 기술을 익히세요.

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이 작품은 부분적으로 손 파일럿 수상 및 NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (AEL에) 및 NIAMS / NIH P30AR061307의 수술에 대한 미국 사회에 의해 지원되었다.

로체스터 대학의 동물 연구에 대학위원회는 모든 동물 실험을 승인했다. 열-12 주 된 여성 C57BL은 / 6J 마우스를 사용 하였다. 굴근 힘줄 수술에 대한 동물의 1. 준비 (~ 15 분) <ol><li> 오토 클레이브 수술기구는 소독을 통해 멸균 장갑을 착용하고, 무균 조작 필드를 유지합니다. </li><li> 체중에 대응하는 양의 케타민 (80 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (10 ㎎ / ㎏)을 복강 내 주사 (IP)를 통해 마우스를 마취. 발가락 - 핀치 반사의 부재를 통해 진정의 깊이를 확인합니다. </li><li> 피하 주사를 통해 선제 진통제 (프레 노르 핀, 0.05-0.1 ㎎ / ㎏)을 관리 할 수​​ 있습니다. 건조에서 눈을 방지하기 위해 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 전체 뒷다리에 모피를 클리핑하여 수술 부위를 준비합니다. 포비돈 요오드 다시 70 % 에탄올 다음 포비돈 요오드로 순차, 세정하여 피부를 소독하고. </li></ol><ol><li> 종아리의 내측 측면에서 표면적으로 보이는 굴곡 심지 longus (FDL) 건을 찾을 수 있습니다. 메스를 사용하여 건을 노출 마이크로 가위로 피부에 작은 0.5 cm의 절개를합니다. </li><li> 주변 조직에서 FDL 건을 분리하고 myotendinous 접합에 그것을 추적 집게를 사용합니다. 후방 경골 동맥 않도록주의하면서 그것을 풀어 봄 가위로이 접합에 힘줄을 잘라. </li><li> 5-0 나일론 봉합사로 피부를 닫습니다. 참고 : FDL의 절개 및 수리 (2.4 단계) 실체 현미경을 사용하여 수행해야합니다. </li><li> 봄, 마이크로 가위를 사용하여 뒷발의 외측면에 걸쳐 3mm의 절개를합니다. 부드럽게 조직 손상을 최소화하고, FDL 건을 확인해야하고, 집게로 주변의 연부 조직과 근육을 수축. <ol><li> 조심스럽게 FDL 건 올리고 완전히 마일을 사용하여 가로로 쪼개다CRO 가위. 주기적 식염수로 습윤함으로써 힘줄의 건조를 방지 8-0 봉합 변형 케슬 패턴 힘줄 함께 FDL의 단부 봉합사. </li><li> 힘줄을 통해 부드러운 조직과 근육을 교체 한 후 5-0 나일론 봉합사와 절개를 닫습니다. </li></ol></li><li> 마취에서 회복 될 때까지 체온을 유지하기 위해, 37 ° C에 슬라이드 따뜻한 설정에 마우스를 놓습니다. </li><li> 수술 후 증가 가창과 주름 장식 모피를 포함하여 손상이나 감염의 징후 마우스를 모니터링합니다. 마우스까지 매 12 시간이 더 이상 통증이나 고통의 흔적을 보여주지 진통제로 부 프레 노르 핀 (50 μL / 마우스)를 주입한다. </li><li> 마우스는 다음 단계를 계속하기 전에 십일 수술 후 기간 동안 치료를 할 수 있습니다. 참고 : 세포가 언제든지 포인트 수술 후 수확 할 수있다. 다음 10 일이 때 조직의 상대적으로 높은 세포 수를 소정 이러한 대표적인 실험을 위해 선택된다. </li></ol> 3. Labeli사이클링 세포 NG (~ 10 분) <ol><li> EDU (5- 에틴 2&#39;deoxyuridine) 용액을 준비한다 (멸균 인산 완충 식염수에 10 ㎎ / ㎖를 [PBS]은 + 1 % 디메틸 술폭 시드 [DMSO] 용해도를 증가시키기 위해). </li><li> IP 주입을 통해 희생하기 전에 24 시간을 100 ㎕를 EDU (50 ㎎ / ㎏)와 마우스를 주입한다. </li></ol> 세포학 원심 분리 4. 수확 셀 (2.5 시간 ~ 30 분 실습 시간) <ol><li> PBS에서 3 ㎎ / ㎖의 콜라게나 제 I을 준비합니다. </li><li> 이하 3 L / min의 유량으로 이산화탄소 질식 통해 마우스를 안락사 및 보조 수단으​​로 경추 탈구를 수행한다. </li><li> 위의 단계 2.4을 사용하여 수리 건을 찾은 마이크로 가위로 부상 사이트의 양쪽에 약 2 mm로 절단하여 힘줄 조직을 격리 할 것. <ol><li> 3 ㎎ / ㎖ 콜라게나 제 1 mL를 페트리 접시에 메스 말하다 조직은 다음 조직을 분쇄하기 위해 18 G 바늘을 여러 번을 통해 혼합물을 전달합니다. 1.5 ㎖의 원심 분리기 튜브로 혼합물을 수집합니다. </li&gt; <li> 진탕하면서 37 ℃에서 1 시간 동안 건 조직 다이제스트. </li><li> 스핀 다운 조직 (5 분 300 XG), 흡 콜라게나 후 수회 피펫을 상하로 PBS 500 ㎕의 3 % 소 혈청 알부민 (BSA)과 세포 / 조직을 재현 탁. </li><li> 70 μm의 셀 스트레이너를 통해 필터 세포 현탁액 파편과 힘줄의 큰 조각, 그리고 37 ° C 배양기에서 따로 설정을 제거합니다. </li><li> 또 다른 1.5 ㎖의 원심 분리기 튜브에 힘줄 조직을 배치하고 최대 피펫 팅, 1 ml의 콜라겐 용액으로 새로 고침 아래로 혼합. </li><li> 진탕 37 ° C에서 조직에게 또 다른 시간을 품어. </li><li> 소화 건 조직 (5 분 300 XG)를 스핀 다운, 다음, 최대 피펫 팅에 의해 여러 번 아래로 PBS 500 ㎕의 3 % BSA에 재현 탁. </li><li> , 70 μm의 셀 스트레이너를 통해 세포 현탁액을 필터 4.3.3에 고립 된 서스펜션과 결합, 다음 혈구와 세포를 계산합니다. </li><li> 다음 3-6로 재현 탁, PBS에서 3 % BSA와 함께 다시 한 번 세포를 씻으× 10 1백분의 4 μL. </li></ol></li><li> 양으로 하전 된 슬라이드에 세포 검사 깔때기를 연결하고 슬라이드 캐리어에 고정. 세포학 원심 분리기로 전체 장치를 삽입하고 깔때기에 100 ㎕의 세포 현탁액을 추가합니다. 5 분 300 XG에 원심 분리기는 슬라이드에 세포를 분산합니다. </li></ol> 5. 면역 세포 화학이 EDU를 감지하기 (2 시간 ~ 45 분 실습 시간) 주 : 모든 인큐베이션 단계는 형광체의 광표백을 제한하는 암에서 수행되어야한다. <ol><li> 단계에 따라 필요한 용액을 최소화 소수성 장벽 펜, 원형 셀, 즉시 실온에서 15 분간 PBS 150 ㎕의 3 % 파라 포름 알데히드 (RT)로 고정한다. <ol><li> PBS 150 ㎕의 3 % BSA 5 분 동안 두 번 씻으십시오. </li><li> RT에서 PBS 20 분에서 0.5 % 트리톤-X 100 Permeabilize 하시려면 세포. </li><li> 5.1.1에서와 같이 반복 세척 단계. </li></ol></li><li> 에듀 반응 cockt 준비괴롭히다 킷 지시하게 사용하기 전에 최소 30 이상에 따라. <ol><li> 각 슬라이드에 150 μl의 칵테일을 추가 RT에서 30 분을 품어. </li><li> 5.1.1에서와 같이 반복 세척 단계. </li></ol></li><li> RT에서 PBS 30 분에서 2000 : 핵 Counterstain과 Hoechst33342 1 희석 150 μL와 함께 품어. <ol><li> PBS 1 배 150 ㎕를 5 분 동안 두 번 씻으십시오. </li></ol></li><li> 천천히, 1-2 세포에 매체를 장착 안티 - 페이드 방울 거품을 방지하기 위해 낮은 커버 슬립을 추가합니다. <ol><li> 실온에서 어둠 속에서 밤새 치료 매체를 장착 할 수 있습니다. </li><li> 슬라이드에 커버 슬립을 밀봉하기 위해 명확한 매니큐어를 사용합니다. </li></ol></li><li> DAPI (Hoeschst33342)를 검출 할 수 여기 / 방출 필터가 장착 된 형광 현미경을 사용하여 40X 배율에서 이미지 슬라이드, 텍사스 레드 (알렉사 플 루어 594). </li></ol>

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저자는 경쟁하는 재정적 이해관계가 없음을 선언합니다

완전 절개와 굴곡 심지 longus 건 수리의 쥐 모델에 대한 수술은이 연구에서 제시된다. 또한 세포학 원심 작은 세포 집단을 농축하는 새로운 애플리케이션은 굴근 힘줄 치유 동안에 셀룰러 환경의 면역 세포 화학적 정량 분석​​을 가능하게 입증된다. 굴근 힘줄이 수리 모델 녹아웃 모델을 사용하여 치료 과정에서 변경 또는 약리학 적 개입을 평가하기 위해 사용될 수있는 재현성 치유 반응을 보여준다. 수술 후, 염증 반응 세포가 상처 사이트에 모집 및 섬유 조직의 캘러스가 형성되기 시작하는 동안 24 시간 내에 시작합니다. 증식 단계는 14-21일 사이에 유착 형성을 선도 크게 증가 세포 수 및 복구 사이트에서 조직을 파괴 세포 외 기질의 풍부한 증착과 관련된 일 네, 약에 따른다. 조직 리모델링 콘티nues 일 (35),되는 시간의 연속성과 굴근 건 조직이 복원되고, 세포 수는 18 감소된다. 현재, 여기에 제시된 하나에 추가 굴근 건 수리의 여러 쥐 모델이있다...

굴근 팔뚝의 근육과 디지털 시스와 협력의 손 작업의 굴근 힘줄은 숫자의 굴곡과 손 잡고 기능을 활성화합니다. 굴근 힘줄은 손의 손바닥 측면을 따라 실행; 이 상대적으로 피상적 인 위치는 종종 손에 외상 동안 굴근 힘줄에 손상을 초래한다. 힘줄은 정상 힘줄 조직을 하나의 흉터 조직 응답보다는 재생을 통해 치유. 이 반흔 조직이 건에 연속성을 제공하지만, 기능은 건강한 건에 비해 감소 극적으로된다. 건 - 흉터 조직 복합체가 파열 할 가능성이 복구 된 힘줄을 렌더링, 장애인 기계적 특성 (1)을 특징으로한다. 또한 흉터 조직이 힘줄의 크기와 부피의 증가의 결과로, 고유 힘줄 콜라겐 섬유의 조직 구조 없다. 힘줄 - 시스 유닛의 해부학 적 제약, 건 크기도 완만 한 증가를 감안할 수 과감하게 빨간색활공 힘줄의 기능 및 동작과 손 기능에 따라서 숫자 범위를 UCE. 굴근 건에 1960의 부상, 손의 영역 II에서 특히 이전에 정기적으로 인해이 수리 2 일어나 치유의 심각한 합병증을 수리되지 않았다. 손이 지역은 &#39;어떤 사람의 땅&#39;3라고 하였다. 그러나, 수술 기법, 봉합 패턴과 물리 치료 재활 프로토콜의 개선은 크게 굴곡 건 수리 (2)의 결과를 개선했다. 이러한 발전에도 불구하고, 수리 40 % 손 함수 (4)를 방해하기에 충분한 유착 형성 될. 따라서, 생물학적 방법은 치료를 개선 할 필요가있다. 불행하게도, 약간은 세포 및 분자 수준에서 건 치료 과정에 대한 알려져있다. 따라서, 목표는 기본 understandin을 향상시키기 위해 사용될 수있는 쥐 모델을 개발했다치유를 개선하는 신규 한 치료 표적을 식별하기위한 수단으로서 굴근 힘줄 치유 및 흉터 형성 반응의 세포 및 분자 성분의 g. 큰 동물 모델은 굴근 건 치유 과정의 이해를 증진하는 수단이되고있다. 송곳니 토끼 연구는 굴근 힘줄 -5,6-의 고유 및 외부 치유 능력을 모두 증명 고정화 7 유착 형성에 대하여 최소화 초기 제어 수동 동작의 중요성뿐만 아니라, 치유 과정 8 가지 봉합 패턴의 영향 9. 게다가, 송곳니 치유 모델 (10)을 개선하기 위해 병진 조직 공학 방법을 테스트하는데 유용하고있다. 그러나, 상대적 비용, 뮤린 특정 시약의 이용 가능성을 포함하는 많은 동물 모델 쥐 모델 대하여 사용의 몇 가지 중요한 이점은, 글로벌 공사 생성의 용이성또는 조직 특이 삭제 / 과발현 구조 아웃 케이. 또한, 굴근 힘줄 (11)에 대한 인간과 쥐 사이의 기능적 유사성은 쥐 모델 개발에 잠재적 인 유틸리티를 나타냅니다. 굴근 건 절개 및 수리 모방 풍부한 흉터 조직 및 장애 기계적 특성의 형성을 포함하여 임상 치료의 여러 측면의 쥐 모델 개발. 여기에 설명 된 모델은 복구 사이트를 보호하기 때문에 myotendinous 접합부에서 FDL의 절개로 임상의 진정한 재현부 아니다. 복구가 발생하는 힘줄의 중앙 부분을 더 덮고 활막 시스가없는 더욱이,이 모델은 치유 응답 활막 세포 외피의 기여를 고려하지 않는다. 이러한 제한에도 불구하고,이 모델은 뮤린 모델이 더 클에서 입증 될 아직 움직임이 제한 유착의 발생 범위의 이점을 갖는다엘리는 임상 시나리오에 근접. 이 모델은 녹 - 아웃 마우스 모델 (12, 13)을 평가하고, 치료 14-17을 향상시키는 다른 약물 학적 방법을 테스트하기 위해 사용되어왔다. 조직 학적는 면역 조직 화학 염색을 사용하여,이 모델 분석 및 현장 하이브리드에, 치료 동안 키 유전자와 단백질의 현지화에 대한 중요한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 그러나, 조직학는 단면 공간 분석을 제공하고, 전체 조직에 걸쳐 정량화를 허용하지 않는다. 유세포보다 정량적 방법을 나타내지 만, 전지의 수가 매우 제한 마우스 모델에서 치료 힘줄 조직으로부터 단리 할 수​​ 있고,이 수는 상기 고정, permeabilization과 세정 단계 동안 감소된다. 계정에이 촬영, 세포 계측법으로 인해 요구되는 동물의 수에 실행할 수없는 접근을하게 흐른다. 다른 방법은 주문이 소세포 인구의 대부분을 보존 할 필요가있다상기 치료 환경을 특성화. 여기에 도시이를 달성하기 위해 사용 된 방법은, 면역 세포이어서 유리 슬라이드 상에 세포학 원심 분리를 통해 분리 된 세포의 농도를 포함한다. 본 연구 EDU (5- 에틴 2&#39;deoxyuridine, 티미 딘 유사체)에 통합 이후 라벨링 치료 부위에서 세포 증식의 상대적인 상태를 판정하는데 사용되었다. 이 방법은 세포 증식 유전자 녹아웃 또는 과발현에 약물 치료의 효능을 테스트하기 위해, 또는 다른 세포 집단을 식별 및 정량화에 적용 할 수있다.

<table><tbody><tr><td><강한>외과 준비</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스&nbsp;</td><td>잭슨 연구소</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>호스피라</td><td>NDC# 0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>자일라진</td><td>로이드 Inc.</td><td>NDC # 61311-482-10</td><td></td></tr><tr><td>부 프레 노르핀</td><td>파 제약 Inc.</td><td>NDC # 42023-179-10</td><td></td></tr><tr><td>0.9 % 염화나트륨 관개</td><td>Hospira</td><td>NDC # 0409-6138-03</td><td>케타민 / 자일라진 및 부프레 노르핀 용액</td></tr><tr><td>1ml 주사기</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>30G 바늘</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>포비돈 - 요오드 용액</td><td>Aplicare</td><td>82-226</td><td></td></tr><tr><td>70 % 에탄올</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puralube vet 안연 연고</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>NDC# 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</strong</td><td>>카탈로그 번호</td><td>코멘트</strong</td></tr><tr><td>>Surgical tools</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portable balance 200 g</td><td>오하우스</td><td>SP202</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>15124-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 집게</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11251-30</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 스프링 가위</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>12061-02</td><td></td></tr><tr><td>5-0 나일론 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>668G</td><td></td></tr><tr><td>8-0 미세 수술 나일론 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Line 조직학 슬라이드 워머</td><td>Barnstead International</td><td>26025</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Cytospin 방법</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type I, 동결건조</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>1700-017</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>세포 신호 기술</td><td>9998S</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>세포학 깔때기</td><td>Fisher HealthCare</td><td>10-354</td><td></td></tr><tr><td>HistoBond+ 현미경 슬라이드</td><td>VWR</td><td>16005-110</td><td></td></tr><tr><td>Cytospin 2 원심분리기</td><td>Shandon</td><td>SH-CYTO2</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Immunocytochemistry</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Slide staining tray with black lid</td><td>IHC World</td><td>M920-2</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT Plus EdU 이미징 키트</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>C10639</td>는 <td>EdU를 포함하고&nbsp; Hoeschst 33342</td></tr><tr><td>Immedge 소수성 배리어 펜</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>ProLong 다이아몬드 마운팅 매체</td><td>Thermo Fisher</td><td>P36970</td><td></td></tr><tr><td>유리 커버 슬립 24 x 50 mm # 1.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>투명 매니큐어</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

쥐의 굴근 힘줄 손상 및 복구 수술

Murine Flexor Tendon Injury and Repair Surgery

건 거의 몸 전체의 움직임을 촉진, 골격 근육과 뼈를 연결합니다. 손에, 굴근 힘줄 (FT들)은 손가락과 일반 손 기능의 굴곡을 할 수 있습니다. FT들에게 ​​부상은 공통이며, 만족스러운 치료는 종종 인해 과잉 흉터 조직 및 힘줄과 주변 조직 사이의 유착에 손상된다. 그러나, 거의 FT 수리의 분자 및 세포 성분에 대한 알려져있다. 이를 위해, 운동 장애를 포함한 다양한 인간 치료의 많은 부분을 되풀이되었습니다 및 기계적 특성을 저하 FT 수리의 뮤린 모델이 개발하고 이전에 설명되었다. 다음은이 수술에 대한 심층적 인 시위는 절개와 쥐의 뒷발의 굴곡 심지 longus (FDL) 힘줄의 후속 수리를 포함, 제공된다. 이 방법은 유전자 이득 또는 기능 상실의 영향을 평가하고 effi을 테스트하는 다른 세포 유형의 계통 분석을 수행하는데 사용될 수있다치유 과정의 약리학 적 개입 cacy. ⅰ) 절개 및 수리가 발생 쥐의 뒷발의 중간 부분에서 FDL 건을하는 활막 외피로 둘러싸여되지 않습니다 그러나,이 모델의 두 가지 주요 제한 사항이 있습니다. 따라서이 모델은 흉터 형성 공정에 시스의 잠재적 인 기여를 고려하지 않는다. ii) 상기 보수 사이트의 무결성을 보호하기 위해, FT는 가능성 증가 흉터 형성에 기여하고, 힘줄의 기계적 힘을 감소시키는 상기 myotendinous 교차점에서 해제된다. 유세포 분석을위한 치료 과정 동안 FT의 육아 조직의 충분한 세포의 분리는 어려운 입증되었다; 이들 세포를 집중 세포학 원심 분리에 사용되는 다른 방법이며, 면역 표지가 수행 될 수있는 세포 제제의 생성을 허용한다. 이 방법, FT 치유하는 동안 세포 또는 관심의 단백질의 정량이 가능하게된다.

굴근 심지 longus 종아리에있는 (FDL) 근육,의 myotendinous에서 근위 실행되는, (도 1a에 파란색으로 설명하고,도 2a에 조직 학적으로 표시) 굴근 건을 통해 마우스의 뒷발의 숫자를 플렉스 역할 접합 및 원위 지골의 종료. 상기 뒷발의 숫자 (빨간색 화살표, 그림 1A)에있는 분기에, 근위을 굴근 건 치유의이 모델에서, FDL 건은 횡단하고, 중간 발에서 제품을 수리. 실험 분석을 배제 할 수리의 파열을 방지하기 위해 건 (인접 근육)을 절단, 또는 myotendinous 접합 (그림 1B 노란색 화살표, 그림 1C에 표시된 자료)에서 발표했다. 이 단계는 임상 시나리오를 나타내는 것은 아니지만,이 부상 부위의 변형을 감소시킴으로써 보수를 보호하는 것이 중요하다.도 2D...

손에 굴근 힘줄은 일반적으로 손상된 손 기능에 이르는 부상하고 있습니다. 그러나, 흉터 조직의 치유 반응은 잘 특징되지 않습니다. 굴곡 건 치유의 쥐 모델은 여기에 설명된다. 이 모델은 치유 과정의 전체적인 이해를 향상시키고 치유를 개선하는 치료 적 접근 방식을 평가할 수있다.

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers ...

이 수술 절차의 전반적인 목표는 굴곡건 치유 과정 중 흉터 및 유착 형성의 세포 및 분자적 과정에 대한 이해를 높이는 것입니다. 이 방법은 어떤 세포 유형이 흉터 형성과 복구에 기여하는지와 같은 굴곡건 치유 과정에 관한 핵심 질문에 대한 답을 얻는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 형질전환 및 유전자 결손 마우스를 사용하여 치유 과정을 더 잘 이해할 수 있다는 점입니다.이 기술은 흉터 형성에 기여하는 분석 대상이 불분명한 세포 집단에 대한 조사를 용이하게 하여, 굴곡건 치유 결과를 개선하기 위한 잠재적 생물학적 표적을 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 발가락 꼬집기에 반응이 없는 것을 확인한 후, 동물의 눈에 안연고를 도포하고 뒷다리 전체의 털을 깎습니다. 수술 부위를 포비돈 요오드와 70% ethanol로 순차적으로 세척하여 멸균하고, 종아리의 내측에서 장지굴근 또는 FDL 건의 위치를 찾습니다.다음으로, 건을 노출시키기 위해 피부에 0.5~1 cm 정도의 절개를 가합니다. 포셉을 사용하여 FDL 건을 주변 조직에서 분리하고, 근건 접합부까지 건을 따라 올라갑니다. 스프링 가위를 사용하여 후경골 동맥이 손상되지 않도록 주의하며 접합부에서 건을 절단합니다.그런 다음 5-0 나일론 봉합사로 피부를 봉합합니다. 이제 마우스를 실체 현미경 아래로 옮기고, 스프링 미세 가위를 사용하여 뒷발의 후외측 부위에 3mm 절개를 가합니다. 핀셋을 사용하여 주변 연조직과 근육을 조심스럽게 견인하여 조직 손상을 최소화하고 FDL 건을 확인합니다.그 다음 건을 조심스럽게 들어 올리고 미세 가위(micro scissors)를 사용하여 조직을 완전히 절단합니다. 변형된 Kessler 봉합법을 이용해 8.0 봉합사로 FDL 건의 끝단을 결찰합니다. 필요에 따라 시술 과정 전반에 걸쳐 생리식염수로 건에 주기적으로 수분을 공급합니다.양 끝단을 봉합한 후, 연조직과 근육을 힘줄 위로 되돌려 놓고 5.0 nylon 봉합사를 사용하여 절개 부위를 폐쇄합니다. 그런 다음 마우스가 완전히 회복될 때까지 모니터링하며 37 °C 슬라이드 워머 위에 둡니다. 실험 종료 시점 24시간 전에 마우스에 100 µL의 EDU를 주입합니다.다음 날, 앞서 시연한 것과 같이 복구된 힘줄의 위치를 확인하고 절단된 조직을 채취합니다. 치유 중인 힘줄 주변의 육아 조직을 분리하는 것은 향후 아미노세포화학 분석을 가능하게 하는 매우 중요한 단계입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Dalkin, W., et al. 비골 신경 손상 방법: 신경근 접합부를 복구하는 요인을 식별하고 테스트하기 위한 신뢰할 수 있는 분석법입니다. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 신경근 접합부(NMJ) 재생을 연구하기 위해 마우스에서 비골 신경 손상을 유도하는 수술 절차를 보여줍니다. 이 절차에는 비골 신경을 노출시키고, 통제된 압력을 가하여 손상을 유도하고, 축삭 재생을 지원하기 위해 신경외막이 손상되지 않도록 하는 것이 포함됩니다. 시간이 지남에 따라 대식세포는 축삭 파편을 제거하여 신경 복구와 NMJ의 재건을 촉진합니다.

신경근 접합부 재생을 연구하기 위해 마우스에서 비골 신경 손상 유도

이 프로토콜의 정형 외과 수술 후 neuroinflammation 및 행동 변화, 그리고 노화 중 조직 재생 연구 parabiosis와 결합 메커니즘을 연구 하는 데 사용 되었습니다 마우스 모델을 설명 합니다.

정형 외과 수술 후 인지 기능 장애 및 조직 재생 연구의 마우스 모델

이 논문에서는 엔지니어링 콜라겐 이식으로 작성하여 최대 1.5cm의 힘줄 간격을 복구하기 위해 시험관 내 및 현장 프로토콜을 제시합니다. 이것은 접목이 숙주 조직으로 성숙할 때까지 기계적 부하를 취하는 변형된 봉합사 기술을 개발함으로써 수행되었다.

큰 힘줄 결함을 복구하는 조직 엔지니어링 콜라겐 이식과 새로운 테노르래피 봉합사 기술

여기서, 우리는 쥐 모델에서 무릎 관절 고정에 대한 최소 침습 기술을 설명하는 프로토콜을 제시한다. 근육 갭 분리 modus 및 미니 절개 기술에 기초하는 이 재현 가능한 프로토콜은 취득한 합동 계약의 근본적인 분자 기계장치를 공부하기위해 적당합니다.

쥐에서 고정 유도 무릎 굴곡 계약을 연구하기위한 미니 침략적 인 내부 고정 기술

여기서, 우리는 힘줄 수리에서 수행 할 수있는 "Q"봉합 기술과 수리 된 힘줄의 갭 형성 및 인장 강도에 미치는 영향을 제시합니다. Q 봉합사는 인장 저항력과 힘줄 수리 강도를 향상시키는 데 효율적인 것으로 나타났다.

Q 봉합사를 사용하여 수리된 굴곡 텐돈의 갭 형성 및 인장 강도에 대한 저항력을 향상시킵니다.

본 프로토콜은 생체 외에서 힘줄 수복물의 생물물리학적 특성을 평가하기 위한 방법을 예시한다. 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 봉합사 재료를 이 방법으로 평가하고 다른 조건에서 다른 재료와 비교했습니다.

힘줄 수술에서 봉합사로 사용되는 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE)

발목-거골하 복합 관절(ASCJ)은 발의 핵심이며 일상 활동에서 균형을 조절하는 데 중요한 역할을 합니다. 스포츠 부상은 종종 이 관절의 불안정성을 초래합니다. 여기에서는 ASCJ의 인대 절개로 인한 불안정성의 마우스 모델을 설명합니다.

발목-거골하 복합 관절 불안정성의 마우스 모델

이 연구는 만성 토끼 회전근개(RC) 손상을 확립하기 위한 절차를 자세히 설명합니다. 특히, 부상은 견갑하(SSC) 근육-힘줄/근건성 단위에서 생성되어 심각한 근육 지방 변성(FD)을 포함한 인간 RC 해부학 및 병태생리학을 모방합니다. 이 프로토콜은 RC 손상을 연구하고 재생 요법을 평가하는 데 적용할 수 있습니다.

섬유증 및 근지방변성 연구를 위한 토끼 만성 유사 회전근개 손상 모델 개발

쥐 뒷다리 이식에서 아킬레스건 삽입의 충돌로 인한 섬유연골 변화를 지속적인 세포 생존력으로 재현하는 맞춤형 실험 플랫폼 및 조직 배양 프로토콜을 제시하여 힘줄 충돌의 역학을 탐구하는 데 적합한 모델을 제공합니다.

아킬레스건 충돌의 기계생물학 연구를 위한 쥐 뒷다리 이식 모델

우리는 쥐의 척수 손상의 급성 또는 만성 기간을위한 두 촉각 감각 테스트 방법을 설명합니다. 이러한 확인 절차는 allodynia 같은 감각의 개발과 유지 보수를 검색할 수 있습니다.

쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

배우세요 쥐의 굴근 힘줄 손상 및 복구 수술 방법을 통해 힘줄 치유 과정에서 흉터 형성에 기여하는 세포 집단을 규명하고 재생 의학 연구에 활용하는 기술을 익히세요.

쥐의 굴근 힘줄 손상 및 복구 수술

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