Name: 마우스 및 쥐에 대한 낮은 흐름 디지털 마취 시스템의 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: 학습하세요 마우스 및 쥐를 위한 저유량 디지털 마취 시스템 사용법을. 주사기 구동 직접 주입 기화기로 정확한 마취제 전달이 가능하며, 생리학적 모니터링과 체온 유지를 포함한 안전한 실험동물 관리 방법을 익히세요.

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모든 연구는 규제 및 제도적 지침에 따라 완료되었다. 이 연구의 동물 측면은 퍼듀 동물 관리 및 사용위원회 (PACUC)가 승인 한 켄트 과학 회사 동물 사용 프로그램, 평가 및 실험 동물 (22)의 관리 및 이용에 대한 안내에 따라 수행 하였다. 참고 :이 프로토콜에 사용되는 저 유량 디지털 마취 시스템이 통합 된 맥박 산소 측정기가 장착되어 있습니다. 1. 통합 맥박 산소 측정기와 저 유량 마취 시스템 설정 <ol><li> 아이소 플루 란 납품 <ol><li> 캐리어 가스 소스를 선택합니다. 내부 공기 펌프를 이용하려면 흡입 실내 공기에 내부 펌프를 허용, 뒷면에 입구 포트를 풉니 다. </li><li> 포트 배기 숯 용기를 연결합니다. </li><li> 낮은 흐름, 디지털 마취 시스템의 전면에 Y 어댑터를 연결합니다. T로 흰색 지점을 연결하기 위해 색으로 구분 클립을 사용하여그는 코 콘 및 유도 챔버에 푸른 나뭇 가지. </li><li> 닫기 흰색 클립 클램프 및 오픈 파란색 클립이 챔버에 공기 흐름을 직접 클램프. </li><li> 2 ML의 주사기를 선택합니다. </li></ol></li><li> 생리 학적 모니터링의 경우, 통합 맥박 산소 측정기를 사용하여 <ol><li> &quot;AUX&quot;로 표시된 저 유량 마취 시스템의 뒷면에 포트에 맥박 산소 측정기의 발 센서를 연결합니다. </li></ol></li></ol> 2. 설정 구성 <ol><li> 마취에 대한 <ol><li> 마취 시스템의 전원 및 설정 메뉴에 액세스 할 수 있습니다. 를 눌러 빨간색으로 메인 메뉴&gt; 마취&gt; 설정에 액세스 할 수 설정. </li><li> 마취 에이전트를 선택합니다. 를 눌러 설정까지 빨간색으로 유형 ANEST을 강조 표시합니다. 아이소 플루 란을 선택하려면 위쪽 및 아래쪽 화살표를 사용합니다. </li><li> 주사기의 크기를 설정합니다. 눌러 시르 크기를 강조하기 위해 설정. 2 ML의 주사기를 선택하려면 위쪽 및 아래쪽 화살표를 사용합니다. </li><li> 비어 위치를 설정합니다. 를 눌러 시간을 설정ighlight 빨간색으로 빈 설정합니다. 시린지 지주 클램프 주사기의 금속 고리에 장착되도록 주사기를 배치하여 주사기 유지 블록 빈, 완전 우울 유리 주사기를 고정합니다. 푸셔 블록 주사기 플런저의 상부와 빛 접촉하도록 푸셔 블록을 이동하려면 위쪽 또는 아래쪽 화살표를 누릅니다. 를 눌러 빈 위치를 설정을 선택합니다. </li><li> 눌러 빨간색으로 제거 강조하기 위해 설정. 주사기를 제거하고 병 상단 어댑터를 사용 이소 플루 란과 주사기를 입력합니다. </li><li> 마취 시스템에 주사기를 연결합니다. </li><li> 프라임 마취 배달 튜브. 를 눌러 빨간색 프라임 튜브를 강조하기 위해 설정. 마취 될 때까지 아래를 눌러 주사기를 통해 기화기 블록에 검은 피팅으로 이동한다. </li><li> 마취를 사용합니다. 눌러 빨간색으로 사용을 강조하기 위해 설정. 예를 선택하려면 위쪽 및 아래쪽 화살표를 사용하십시오. 를 눌러 실행 / 돌아 가기 메인 메뉴로 돌아갑니다. </li><li> ㄱ을 선택IR 공급 및 분 볼륨. 를 눌러 설정 위쪽은 빨간색으로 공기 공급을 강조 표시합니다. 내부 펌프를 선택하려면 위쪽 및 아래쪽 화살표를 사용합니다. 를 눌러 빨간색 분 권을 강조하기 위해 설정. 250 ml / 분으로 설정 유량. </li></ol></li><li> 생리 학적 모니터링을위한 <ol><li> 마우스 (240)에 최소 검출 심장 박동을 설정합니다. 메인 메뉴에 액세스하기 위해 설정을 눌러&gt; MouseStat. 최대 사용하고 아래쪽 화살표 최소 심박수를 설정할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3. 마취 납품 시작 <ol><li> 마우스를 유도 <ol><li> 를 눌러 실행 / 뒤로 두 번 실행 모드를 입력하고 공기 흐름을 시작합니다. </li><li> 단단히 뚜껑을 닫고, 유도 챔버에 마우스를 놓습니다. 3 %에 마취제 농도 노브를 조정합니다. </li><li> 마우스가 반사를 바로 잡고 손실에 의해 결정 마취의 원하는 평면에 도달 할 때까지 모니터링합니다. 필요에 따라 마취제의 농도를 조정합니다. </li><li> 동물은 복원력 반사 a를 잃게되면차 충분히 마취 0 %로 마취 농도 다이얼을 돌립니다. 저자는 이전의 공기 흐름을 허용하는 30 내지 60 초 마취 깊이 1을 반전하지 않고 챔버를 제거하기에 충분한 유도 ​​챔버를 세척하는 것을 발견 하였다. </li><li> 빨리 안면 마스크에 공기를 직접 흰색 클램프를 열고 유도 챔버로 이어지는 푸른 클램프를 닫습니다. </li><li> 연구원에서 멀리 챔버를 열고 마우스를 제거하고 바로 코 콘을 장착한다. </li><li> 피드백 루프에 직장 프로브로 37 ℃에서 체온을 유지하기 위해 설정 적외선 온난화 패드의 동물 센터입니다. </li><li> 마우스가 코 콘 안정 때 마취제 농도 노브를 돌려 유지 보수를 위해 필요에 따라 1.5 %로 이소 플루 란의 농도를 조정하거나. </li><li> 유지 보수를 위해 분 볼륨을 줄입니다. 동물을 지원하기위한 최소 유속은 30g의 마우스 1.5-2.2 배 동물의 분 양 (같다52 ㎖ / 분)의 최소. 코 콘 스타일의 특정 설정을 권장 유량 제조업체의 지침을 참조하고 필요에 따라 조정합니다. 를 눌러 메인 메뉴에 액세스하기 위해 설정 한 다음 분 집이 빨간색으로 강조 표시 될 때까지 설정 키를 누릅니다. 대상 흐름을 조절하기 위해 위쪽 및 아래쪽 화살표를 사용합니다. 를 눌러 실행 / 돌아 가기 메인 화면으로 돌아갑니다. </li><li> 인터 핀치 동안 철수 반사의 부족에 의해 결정되는 마취의 깊이를 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 안과 연고를 적용합니다. </li></ol></li></ol> 4. 생리 모니터링 시작 <ol><li> 뒷발의 패드에 센서를 놓습니다. 붉은 빛이 발 아래에 있고 발을 조명하도록 센서를 배치합니다. oxiwave을 표시 화면의 위, 아래 화살표를 사용합니다. 동물은 이제 안전하게 저 유량, 주사기 기반, 디지털 기화기를 사용하여 마취됩니다. </li></ol> 5. 동물을 제거 <ol><li> 끄고마취 배달. <ol><li> 마취의 전달을 중지하려면, 최소 (0 %)에 마취제 농도 노브를 돌려 및 보호구에서 동물을 제거합니다. </li><li> 마취 회복하는 동안 마우스를 모니터합니다. 마우스 완전히 외래하게되면, 케이지로 돌아갑니다. </li></ol></li></ol>

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이 프로젝트는 켄트 과학 공사, CJ Goergen에 미국 심장 협회 (SDG18220010)과 퍼듀 대학에서 장비와 자금을 지원했다. 저자 크리스타 Bigiarelli와 이리나 Toore이 문서에 사용 된 장비를 생산 켄트 과학 회사의 직원입니다. 이 문서의 오픈 액세스 출판은 켄트 과학 주식회사가 후원한다.

디지털 저 유량 마취 시스템은 사용자가 효율적으로 압축 된 가스를 사용하지 않고 매우 낮은 유속 쥐를 마취 할 수있다. 이것은 약 500 ㎖ / 분의 최소 유속 압축 가스 공급원을 필요로 대부분의 표준 수동 기화기에서 크게 다르다. 일반 기화기는 계조 간의 정밀도 부족 다이얼을 활용하고 정확도를 유지하기 위해 매년 서비스되어야한다. 주사기 마취 구동 시스템은 주사기 펌프의 정확한 필요한 속도를 계산하기 위해 설정 유량 마취제의 특정 농도를 제공 할 수있다. 일상적인 교정은 추가 비용과 시간 절감 효과 불필요하다. 권장 최소 유량 비 호흡 낭 회로에 동물을 유지하는 것은 시간 1.5-2.2 동물의 분 양이다. 본 연구에 사용 된 100 ㎖ / 분의 유량은 동물에 충분한 마취를 제공하기 위해 최소 초과. 유량 settin유량 직접 소정 기간 사용 이소 플루 란의 양에 관련 될 때 GS이 마취제 전달 기술에 중요하다. 낮은 유속에서 사용되는 경우, 동물은 여전히 유효 1,19-21 마취 상태에서,이 기술은 크게, 사용 중에 필요한 이소 플루 란의 양을 줄일 수있다. 기존 기화기 및 저 유량 디지털 기화기 사이에 새로운 장비 비용은 비교할 수 있습니다. 그러나, 디지털 저 유량 마취 시스템은 이소 플루 란 또는 세보를 전달하는 기능을 갖는다. 이는 지정된 이소 플루 란 및 세보 정밀 기화기, 마취제를 모두 사용하여 그룹의 초기 장비 비용을 감소시키기위한 필요성을 제거한다. 저 유동 디지털 기화기 1,19,20 사용시 증발기 기술 간의 최근 발표 된 비교는 시간이 지남에 비용 절감 효과를 제시 하였다. 이러한 비교의 결과는 일년에 걸쳐 잠재적 인 비용 절감을 근사화하는데 사용될 수있다. 같이52주을 위해 일주일에 2 시간 씩 5 일에서 수행 일반적인 사용 설정을 suming, 전통적인 이소 플루 란 기화기는 이소 플루 란의 3.8 L, 또는 12 250 ml의 병을 소비합니다. 동일한 주파수를 사용하는 낮은 흐름 디지털 기화기는 0.32 L, 2 250ml의 병을 소비 할 것이다. 숯 용기 소비도 감소된다. 각 캐니스터가 청소할 배기 가스의 50g를 보유하고 있다고 가정하면, 기존의 기화기 년에 걸쳐 약 21 숯 통을 채울 것입니다. 비교에서, 저 유량 디지털 기화기 6 개 이하를 필요로 할 것이다. 전통적인 기화기는 9,500 L. 디지털 저 유량의 기화기의 일부 모델에서 사용할 수있는 내부 공기 펌프의 용량으로 연간 약 5 대형 가스 실린더 각을 필요로, 압축 가스에 대한 요구 사항을 제거합니다. 압축 가스를 사용한다면, 시스템은 1 년 당 단지 하나의 실린더를 사용한다. 이 기술은 필요에 따라 변경 될 수있다. 저 유량 디지털 vaporizERS는 사용자가 빠르고 정확하게 마취 깊이를 조정할 수 있습니다. 마취 깊이가 증가되거나 감소되어야하는 경우, 사용자는 시스템의 상부에, 다이얼을 사용하여 0.1 % 씩 마취 농도를 증가시킬 수있다. 절차 내내 필요 유량도 조절할 수있다. 큰 주사기 크기 이상 절차에 사용할 수 있지만이 프로토콜은, 2 ML의 주사기를 사용합니다. 내부 공기 펌프 사용자에게 압축 된 가스 공급원을 요구하지 않고 동물을 마취하는 옵션을 제공한다. 압축 가스 또는 산소 공급을 필요로하는 절차는 사용자가 아니라 주변 공기를 사용하는 것보다 낮은 유동 시스템에 가스 공급원에 연결하기위한 옵션을 갖는다. 사용자는 과정에 걸쳐 선택된 공기 공급원을 지속적으로 제공 할 수 있고, 또는 내부 펌프 및 필요에 따라 압축 가스 소스를 전환 할 수있다. 예를 들어, 사용자는 유도 및 유지하는 동안 펌프 내부를 통해 실내 공기를 제공하도록 시스템을 설정하지만, 보충 산소를 제공 할 수있다복구 중에 세대. 저 유동 디지털 증발기를 이용하여 많은 이점이 있기는하지만,도 한계가있다. 플러시 밸브가 포함되어 있지 않기 때문에, 수동 개방 전에 청정 공기 챔버를 세척하는 유도 챔버를 제거하는 유일한 방법이다. 이 시스템은 낮은 유속에서 작동하도록 설계되어 전통적인 기화기 10 L / min의 최대 유량으로 사용될 수 800 ㎖ / 분의 유량 이상으로 마취를 제공하지 않는다. 이 특별한 시스템은 따라서 작은 동물 종에만 적합합니다. 또한, 시스템은 기존의 기화기에 비해 적은 마취제를 보유하고있다. 주사기이 절차를 수행하는 동안 리필해야합니다 상황이있을 수 있습니다. 그러나, 재충전시 지연들은 빈 주사기를 교체 근처 초 주사기를 미리 작성하여 감소 될 수있다. 10 ml의 최대 주사기 크기는 중간 절차 주사기를 리필 할 필요성을 줄일 수 있습니다. 마지막으로, 기존의 기화기와는 달리, 저 FL유동 디지털 기화기는 전기를 필요로한다. 전력 사용할 수 없거나 정전의 경우에 어디 배터리는 경우에 사용할 수 있습니다. 이전 연구는 저 유량 디지털 시스템은 기존의 마취 시스템 1,19,20에 비해 작은 이소 플루 란, 캐리어 가스, 숯불 통을 소비하는 것으로 나타났습니다. 추가 작업은이 분야에 필요하다하더라도 청소했습니다 마취 가스의 감소는 또한 폐 마취 가스의 감소를 확인할 수 있었다. 가스 적외선 분광법은 이소 플루 란 폐기물 생성을 모니터링 할 수 있고, 선량계 배지는 앞으로의 비교에서 실험 인원을 이소 플루 란 노출을 정량화하는데 사용될 수있다. 요약하면, 마취 배달이 기술로 인해 기존 시스템보다 향상된 안전성, 효능 및 정밀도 설치류 마취를 수행하는 그룹에 도움이 될 것입니다.

0.5 L / 분 (2)의 유량 사이에서 동작 수의학 사용할 많은 정밀 기화기있다. 범위가 작은 호흡기 분 볼륨에 비해 높은 이러한 유량은 설치류에 적합하지 않습니다. 높은 유속으로 인해 저체온증과 호흡기 3,4 건조 자신의 승진 수의학 실제로 사용하지 않는 것이 좋습니다. 또한, 많은 일반적인 수의학 기화기 제조사 매뉴얼 높은 유량 배압 변동의 발생을 증가시킬 수 있다는 것을 경고한다. 또한 많은 표준 기화기 500 ㎖ / 분의 유속 이하 부정확해질 것으로 도시되었으며,이 속도는 수의학 분야 5-7 최소 유량으로 간주된다. 동물은 T 피스 회로에 유지되거나 1.5-2.2 배 동물의 부피 80-10 분만큼 낮은 유량을 사용하여 베인 회로를 수정할 수있다. 이 유량은 sufficien 간주됩니다t 만료 가스 호흡 낭을 방지하고 혈중 이산화탄소 농도 8의 증가를 방지 할 수있다. 이 유량 추천 정보를 사용하여 30g의 마우스를 52 ml의 낮은 유속에서 유지 될 수 / 분, 기화기 기존의 수락 500 ㎖ / 분의 최소값보다 거의 10 배 이하이다. 전통적인 기화 가스 유량 및 수동 마취 기화 대기압에 의존하지만, 직접 분사 기화기 총 신선한 기체 유동을 측정하고 가스 스트림이 직접 증기를 주입한다. 일부 직접 분사 기화기는 가스 스트림에 마취제를 투여하기위한 주사기 펌프를 사용한다. 컴퓨터 제어 시스템이 자동 마취제의 원하는 농도에 도달하는 데 필요한 액체 제제의 양을 주입하기 위해 주사기 펌프 속도를 조절하도록 허용한다. 주사기 구동 기화기를 사용할 수 임상 및 소아 사용 승인을하고, 많은 유사한 구성은으로 간주된다심미적 임상 11-16에서 장치를 보존. 곧 그 승인 후, 시린지 펌프 증발기로 마취을 보존하는 장치 8,17,18 동물 연구에서 사용하기에 적합 하였다. 전통적인 기화기 달리, 주사기 펌프를 이용하여 직접 분사 시스템의 정확도를 유지하기 위해 최소한의 유량에 의해 제한되지 않는다. 이러한 이유로,이 기술은 설치류 마취 저 유량 필요한 다른 경우에 사용하기에 적합하다. 이 기화기 설계와 관련된 장점과 잠재적 비용 절감 설치류 1,19,20 위해 특별히 설계된 새로운 마취 시스템의 개발을 고무. 이 새로운 시스템은 통합 내장 공기 펌프, 사용자는 압축 된 가스 공급원을 요구하지 않고 마취를 관리 할 수​​ 있도록. 추가적인 이점으로서, 상기 시스템은 미리 보정 된 이소 플루 란 및 세보 모두와 함께 사용하기위한 것이다. 실험실 동물 필드에이 기화기 기술의 도입, 난t는 압축 가스의 필요없이 가깝게 권장 수준 유량 작은 실험실 동물을 마취하는 것이 가능하다.

<table><tbody><tr><td>마취 장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite 저유량 디지털 마취 시스템</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO</td><td>유출 방지, 증기 방지 병 상단 어댑터 포함; Y 어댑터 튜브; 숯 청소 필터</td></tr><tr><td>MouseSTAT 맥박 산소 농도계 & </td><td>SomnoSuite에 통합된</td><td>심박수 모니터 Kent Scientific Corporation</td><td>SS-MSTAT-모듈</td></tr><tr>마우스<td>발 센서</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>MSTAT-MSE</td><td></td></tr><tr><td>2ml 유리 주사기</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-2ML</td><td></td></tr><tr><td>저가 유도 챔버, 0.5L</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-0705</td><td></td></tr><tr><td>로우 프로파일 안면 마스크, x-small</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-0304</td><td></td></tr><tr><td>Animal Warming</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite 생리학적 모니터링 시스템 with RightTemp Homeothermic Warming</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>PS-RT</td><td>적외선 온난화 패드, 직장 프로브 및 패드 온도 프로브</td></tr><tr><td>마취제 및 약물</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 (250ml 병)</td><td>Piramal Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puralube 안과 연고</td><td>Perrigo</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 및 쥐에 대한 낮은 흐름 디지털 마취 시스템의 사용

Use of a Low-flow Digital Anesthesia System for Mice and Rats

전통적인 기화기는 수동 마취 기화를 위해 흐르는 가스와 대기압에 의존합니다. 새로 개발된 직접 분사 기화기는 주사기 펌프를 사용하여 휘발성 마취제를 가스 흐름에 직접 투여합니다. 기존의 기화기와 달리 매우 낮은 유속으로 사용할 수 있어 생쥐와 쥐에 사용하기에 이상적입니다. 
낮은 유속을 사용할 수 있는 장비의 기능은 마취제, 압축 가스 및 숯 제거 필터의 필요성 감소로 인해 상당한 비용 절감 효과를 가져올 수 있습니다1. 유속이 낮다는 것은 마취 가스의 낭비가 적다는 것을 의미하며 실험실 직원에 대한 마취제 노출 위험을 줄일 수 있습니다. 따라서 직접 분사 기화기와 관련된 높은 수준의 정밀도 및 안전성과 마취제, 압축 가스 및 숯 필터의 필요성 감소는 소동물 마취가 필요한 연구에 유용합니다. 
이 프로토콜의 목표는 디지털 저유량 마취 시스템의 일부로 주사기 구동 직접 분사 기화기의 사용을 시연하는 것입니다. 직접 분사 기화기는 기존 기화기에 비해 매우 낮은 유속으로 마취를 정확하게 전달할 수 있어 설치류에 대한 제어 가스 마취 전달을 위한 유망한 대안입니다.

동물 3 성인 C57 / BL6NTac 암컷 마우스 (코닉 나이 6~7주 중량 15 +/- 1 g)를 마취 심박수, 산소 포화도, 호흡 속도를 모니터링하는 동안 1.3-1.5 %의 이소 플루 란으로 유지시켰다. 시설에 도착하기 전에 루틴 공급 업체의 시험에 의해 결정되는 모든 마우스는 쥐 병원체 무료이었다. 동물들은 그룹 수납 microisolation의 caging에서 병에 의한 표준 쥐 차우와 물에 무료로 액세스를 제공했다. 이소 플루 란 사용법 저 유량 마취 시스템은 사용 중에 주사기에 남아 마취제의 양을 측정한다. 마취 시스템에 의해 측정 된 동물 유지 기간의 끝에서 다시 노즈콘에 옮기고,되었을 주사기 부피는, 주목 하였다. 최종 부피 w초기 볼륨으로부터 감산으로 유지 기간 (도 1) 동안에 소모 마취제의 양을 정량화한다. 생리 학적 매개 변수 심장 박동, SPO 2, 호흡 속도는 맥박 산소 측정기 (- 4 그림 2)을 통해 유지 보수 기간 동안 관찰 하였다. 몸의 온도를 적외선 온난화 패드를 통해 37.5 ° C를 유지 하였다. 인터 핀치 금단 반사의 부족에 의해 결정되는 각 마우스 성공적으로 60 분 동안, 수술 적 단계의 마취하에 실내 공기 / 분, 100 ㎖의 낮은 유속에서 유지 하였다. 마우스가 깨어하지 않았다 또는 유지 보수 기간 동안 간헐적으로 적용 인터 핀치에 응답합니다. 동물의 심장 박동수 (그림 2), 혈액 산소 (그림 3),과 호흡 (그림 4) relat 남아연구 전반에 걸쳐 ively 안정. 때문에 동물 및 센서 위치에 마우스 1 마우스 (3)로부터의 호흡 신호가 간헐적이고 측정이 중단되었습니다. 동물의 위치를​​ 조정했을 때, 신호 향상 및 호흡 측정 비슷한 시점에서 다른 비교 하​​였다. 저 유량 마취 디지털 시스템은 유지 기간 (도 1)의 60 분 동안 이소 플루 0.63 mL의 평균을 사용했다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54436/54436fig1.jpg" /> 그림 1 :.. 아이소 플루 란 사용법 디지털 저 유량 마취 시스템을 사용하여 마취 유지 보수 1 시간에 걸쳐 세 가지 다른 마우스에 대한 ㎖에 사용되는 이소 플루 란의 양 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 2 :.. 심장 박동 분 (BPM) 디지털 저 유량 마취 시스템과 초기 마취 유도 후 5-60 분 당의 비트로 세 쥐의 심장 박동 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/54436/54436fig3.jpg" /> 그림 3 :.. 산소 포화도 세 마우스 디지털 저 유량 마취 시스템과 초기 마취 유도 후 5-60 분의 혈중 산소 포화 농도 (%) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 4 :.. 호흡 속도 분 (BPM) 디지털 저 유량 마취 시스템과 초기 마취 유도 후 5-60 분 당 호흡의 세 가지 마우스의 호흡 속도는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54436/54436fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

여기에서는 주사기 구동 직접 분사 기화기를 사용하는 디지털 저유량 마취 시스템을 사용하여 마우스에 마취 가스를 보다 안전하고 효율적으로 투여하는 프로토콜을 제시합니다.

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers ...

본 프로토콜에서는 디지털 저유량 마취 시스템의 일부로 시린지 구동 방식의 직접 주입 기화기를 사용하는 방법을 설명합니다. 직접 주입 기화기는 기존의 기화기와 비교하여 매우 낮은 유량에서도 마취제를 정확하게 전달하므로, 설치류에 대한 제어된 마취제 투여를 위한 유망한 대안이 됩니다. 수의학용으로 사용 가능한 많은 정밀 기화기들은 분당 5에서 10리터 사이에서 작동합니다.이러한 유량은 설치류의 작은 분당 호흡량보다 훨씬 높으므로 이들에게 이상적이지 않습니다. 이 기화기의 주요 장점은 동물 분당 호흡량의 1.5배 정도로 낮은 유량으로도 노즈 콘(nose cone)을 사용하여 동물을 유지할 수 있다는 것입니다. 따라서 30g의 마우스는 분당 52밀리리터만큼 낮은 유량으로 유지될 수 있습니다.먼저, 운반 가스원을 선택하십시오. 내부 공기 펌프를 사용하려면 후면 유입구를 풀어 내부 펌프가 실내 공기를 흡입할 수 있도록 합니다. 그런 다음, 배기구에 활성탄 캐니스터를 연결하십시오.다음으로, 전달 튜브를 마취 시스템에 연결합니다. 색상으로 구분된 클립을 사용하여 노즈콘(nose cone)과 유도 챔버(induction chamber)로 연결되는 분기점을 지정합니다. 클램프를 열어 챔버로 공기 흐름이 향하게 합니다.생리학적 모니터링을 위해, 펄스 옥시미터 발 센서를 저유량 마취 시스템의 후면에 연결하십시오. 저유량 마취 시스템의 전원을 켜고 설정을 구성하십시오. 마취 설정(Anesthesia Setup) 메뉴로 이동하여 isoflurane을 선택하십시오.다음으로, Set Up을 눌러 Syringe Size를 강조 표시하여 주사기 크기를 설정합니다. 방향 버튼을 사용하여 2 mL 주사기를 선택하십시오. 실험 동물과 실험 절차의 길이에 적합한 크기의 주사기를 사용하는 것이 중요합니다.이 시스템은 다양한 응용 분야에 맞게 2, 5, 10 milliliter 주사기와 호환됩니다. 주사기 크기를 선택한 후, 주사기의 빈 위치(empty position)를 설정하십시오. 이제 완전히 눌린 빈 유리 주사기를 주사기 고정 블록에 고정하십시오.고정 클램프가 시린지의 금속 칼라에 안착되도록 시린지를 배치합니다. 푸셔 블록이 시린지 플런저 상단에 가볍게 접촉하도록 조정합니다. 빈 상태(empty position) 설정을 저장합니다.주사기를 제거합니다. 그다음, 병 상단 어댑터를 사용하여 이소플루레인(isoflurane)을 채웁니다. 채운 후, 주사기를 고정 블록에 다시 넣고 주입 튜브를 연결합니다.다음으로, 방향 버튼을 눌러 마취제 전달 튜브를 프라이밍하십시오. 시스템은 마취제가 기화기 블록으로 들어갈 때까지 시린지를 압착합니다. 시린지를 과하게 프라이밍하지 않는 것이 중요합니다.모든 설정이 완료되면 마취제 공급을 활성화하십시오. 이제 공기 공급(Air Supply)을 실내 공기로, 분당 환기량(Minute Volume)을 250 milliliters per minute로 선택하십시오. 생리학적 모니터링을 위해 최소 감지 심박수를 Mouse로 설정하십시오.마우스의 마취 유도를 위해 공기 흐름을 시작합니다. 마우스를 유도 챔버에 넣고 덮개를 단단히 닫은 후, 마취제 농도 조절 다이얼을 3%로 설정합니다. 정위 반응(righting reflex)의 소실로 판단되는 원하는 마취 단계에 도달할 때까지 마우스를 관찰합니다. 동물이 충분히 마취되면, 마취제 농도 조절 다이얼을 0%로 돌립니다. 그런 다음, 클램프를 열어 공기 흐름이 노즈 콘(nose cone)으로 향하게 하고, 유도 챔버로 이어지는 클램프를 닫습니다.마우스를 챔버에서 꺼내 즉시 노즈 콘(nose cone) 위에 놓습니다. 그다음, 직장 프로브의 피드백 루프를 통해 체온이 37 °C로 유지되도록 설정된 적외선 가온 패드 중앙에 동물을 배치합니다. 마우스가 노즈 콘 위에 위치하면, isoflurane 농도를 1.5%로 조절합니다. 이제 마취 상태를 유지하기 위해 분당 환기량(minute volume)을 줄입니다.발가락 사이를 꼬집었을 때 회피 반사가 나타나지 않는 것을 통해 마취 깊이를 확인합니다. 마취 중 안구 건조를 방지하기 위해 눈에 안연고를 도포합니다. 뒷발 바닥 위에 센서를 부착하여 생체 징후 모니터링을 시작합니다.빨간색 빛이 발을 비추도록 센서를 배치합니다. 센서 신호를 시각화하기 위해 oxiwave를 표시합니다. 마취제 농도(Anesthetic Agent Concentration) 다이얼을 Minimum으로 돌려 0%를 공급하고, 노즈콘에서 동물을 제거합니다.마취 회복 기간 동안 마우스를 면밀히 관찰하십시오. 마우스가 완전히 보행 가능해지면 케이지로 돌려보냅니다. 이 그림은 디지털 저유량 마취 시스템을 사용하여 6~7주령의 C57 Black 6 암컷 마우스 3마리를 1시간 동안 마취 유지했을 때 사용된 isoflurane의 양을 밀리리터 단위로 나타낸 것입니다.낮은 유량으로 인해, 저유량 시린지 구동 디지털 기화기는 1시간 동안 1mL 미만의 isoflurane을 소모하였습니다. 유도 후 5분에서 60분 사이에 펄스 옥시미터를 사용하여 측정한 생쥐 3마리의 분당 심박수가 여기에 표시되어 있습니다. 동물의 심박수는 유지 기간 동안 비교적 안정적이고 일정하게 유지되었습니다.이 그림은 동일한 기간 동안 세 마리 마우스의 산소 포화도 수준을 보여줍니다. 마지막으로, 디지털 저유량 마취 시스템으로 유도한 후 5분에서 60분 사이의 마우스 호흡수(분당 호흡수)가 여기에 표시되어 있습니다. 내장 공기 펌프를 통해 사용자는 압축 가스 공급원 없이도 동물을 마취할 수 있는 옵션을 제공받습니다.압축 가스나 보충 산소가 필요한 절차의 경우, 사용자는 공기 대신 가스 공급원을 저유량 기화기에 연결하는 옵션을 선택할 수 있습니다. 저유량 주사기 구동 기화기는 정확한 마취 농도를 전달하면서 분당 10밀리리터만큼 낮은 유량까지 구현할 수 있습니다. 따라서 이 기술은 기존 시스템보다 안전성, 효능 및 정밀도가 향상되어 설치류 마취를 수행하는 연구 그룹에 유용할 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 카테터를 이식하거나 마우스의 오른쪽 측면 뇌실에 알약 주입을 수행하여 중추 신경계에 약물을 대상으로하는 방법을 설명합니다. 우리는 안티센스 올리고 뉴클레오티드의 전달에 특히 초점을 맞 춥니 다. 이 기술은 다른 약물과 쥐에 쉽게 적응할 수있다.

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

비 구속 된 EEG radiotelemetry 자유롭게 이동 설치류에서 생체 장기 뇌파를 기록하기위한 유용한 방법 론적 접근이다. 상세한 프로토콜은 CNS의 리듬 성 CNS와 관련된 행동 단계 안정적인 기록을 얻기 위해 다양한 뇌 영역에 정위 경막 깊은 뇌내 전극 배치를 설명한다.

비 금지 EEG Radiotelemetry : 경막 외 및 깊은 뇌내 정위 EEG 전극 위치

이 종이 마이크로 단층 (µCT) 스캐너 vivo에서 의 사용자 anesthetize, 올바르게 위치 하 고 경골의 고해상도 이미징 동안 최소한의 운동에 대 한 쥐의 뒷 다리를 제 지 하는 방법을 지시 합니다. 결과 뼈 마이크로-아키텍처를 정확 하 게 계량을 처리할 수 있는 높은 품질의 이미지.

적절 한 위치와 뼈 마이크로 아키텍처를 사용 하 여 생체 내에서 마이크로-단층의 집중된 고해상도 이미징 쥐 뒷 다리의 구속

이 연구에서는 동굴 같은 신경 자극 신경 전극의 절연을 수행 하기 위한 기술과 간단한 수술에 설명 합니다 intracavernous 압력 측정 및 실리콘 접착제를 사용 하 여 복잡 한.

동굴 같은 신경 자극 및 쥐에 Intracavernous 압력의 녹음

이 프로토콜은 쥐의 척수에 유리 창을 이식하여 분사 내 현미경 검사법에 의한 시각화를 용이하게 합니다.

마우스에 있는 Laminectomy 및 척수 창 이식

쥐에서 실험제의 INTracheal (IT) 투여는 종종 말단 폐에 비대칭 전달을 초래한다.  이 보고에서는, 우리는 살아있는 마우스에 있는 각 폐를 비 작동가능하게 캐뉼기 위하여 직접적인 기관내 (IB) 접근을 기술합니다.  이러한 접근법은 하나의 폐에 제제를 선택적으로 투여하기 위해 사용될 수 있거나 또는 두 폐에 대한 대칭에이전트 전달을 개선하기 위해 적응될 수 있다.

마우스 폐 내 선택적 에이전트 침착을 개선하기 위한 직접 기관내 투여

여기서, 우리는 통합 된 인공 호흡기 및 생리 모니터링 모듈을 갖춘 디지털, 저류 마취 시스템을 사용하여 마우스에게 마취 가스를 안전하고 효과적으로 투여하는 프로토콜을 제시합니다.

설치류를 위한 통합 저유량 마취 기화기, 인공호흡기 및 생리적 모니터링 시스템 사용

여기에서, 우리는 마우스 뒷다리에 있는 혈류를 측정하기 위하여 레이저 도플러 관류 화상 진찰을 위한 기술 그리고 필요한 통제를 보여주는 프로토콜을 제시합니다.

마우스 힌드림에 있는 레이저 도플러 관류 화상 진찰

우리는 복부 측에서 성인 마우스의 뇌간을 노출하는 프로토콜을 제시합니다. 소형 현미경을 가진 그라데이션 굴절 지수 렌즈를 사용하여, 칼슘 화상 진찰은 생체 내의 열등한 올리브 신경 소마타의 활동을 검사하기 위하여 이용될 수 있습니다.

생체 내 마우스 열등올리브의 칼슘 이미징

본 프로토콜은 저용량 디졸루란을 사용하여 낮은 용량의 이소플루란을 사용하여 쥐로부터 안정적인 휴식 상태 기능성 자기 공명 영상(rs-fMRI) 데이터를 낮은 용량 덱스메데토미딘과 결합하여 얻는 방법을 설명합니다.

쥐에서 휴식 상태 기능 자기 공명 이미징 데이터 획득

학습하세요 마우스 및 쥐를 위한 저유량 디지털 마취 시스템 사용법을. 주사기 구동 직접 주입 기화기로 정확한 마취제 전달이 가능하며, 생리학적 모니터링과 체온 유지를 포함한 안전한 실험동물 관리 방법을 익히세요.

마우스 및 쥐에 대한 낮은 흐름 디지털 마취 시스템의 사용

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