Name: 격리 된 작업 쥐의 심장에서 포도당과 지방산 산화의 가격의 결정 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: 학습하세요 격리된 작업 쥐 심장에서 포도당과 지방산 산화율을 동시에 측정하는 방법을. 이 기술은 심장 대사 적응과 수축 기능을 실시간으로 평가하여 심혈관 질환 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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이 작업은 National Institutes of Health Grants R00 HL112952(to R. H.), R01 HL108618(to J.P.G.), P01 HL051971 및 P20 GM104357의 지원을 받았습니다. 이 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 공식 견해를 나타내는 것은 아닙니다.

<ol><li>Neely, J. R., Morgan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+carbohydrate+and+lipid+metabolism+and+the+energy+balance+of+heart+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationship between carbohydrate and lipid metabolism and the energy balance of heart muscle.</a> Annu Rev Physiol. 36, 413-459 (1974).</li>
<li>Sen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+regulation+of+load-induced+mTOR+signaling+and+ER+stress+in+mammalian+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Glucose regulation of load-induced mTOR signaling and ER stress in mammalian heart.</a> J Am Heart Assoc. 2, e004796(2013).</li>
<li>Young, M. E., McNulty, P., Taegtmeyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+and+maladaptation+of+the+heart+in+diabetes%3A+Part+II%3A+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Adaptation and maladaptation of the heart in diabetes: Part II: potential mechanisms.</a> Circulation. 105, 1861-1870 (2002).</li>
<li>Stanley, W. C., Recchia, F. A., Lopaschuk, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+substrate+metabolism+in+the+normal+and+failing+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Myocardial substrate metabolism in the normal and failing heart.</a> Physiol Rev. 85, 1093-1129 (2005).</li>
<li>Fillmore, N., Lopaschuk, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+mitochondrial+oxidative+metabolism+as+an+approach+to+treat+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Targeting mitochondrial oxidative metabolism as an approach to treat heart failure.</a> Biochim Biophys Acta. 1833, 857-865 (2013).</li>
<li>Jaswal, J. S., Keung, W., Wang, W., Ussher, J. R., Lopaschuk, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+fatty+acid+and+carbohydrate+oxidation--a+novel+therapeutic+intervention+in+the+ischemic+and+failing+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Targeting fatty acid and carbohydrate oxidation--a novel therapeutic intervention in the ischemic and failing heart.</a> Biochim Biophys Acta. 1813, 1333-1350 (2011).</li>
<li>Taegtmeyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+metabolism+as+a+target+for+the+treatment+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac metabolism as a target for the treatment of heart failure.</a> Circulation. 110, 894-896 (2004).</li>
<li>Taegtmeyer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Cardiac+Metabolism%3A+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Assessing Cardiac Metabolism: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Circ Res. , (2016).</li>
<li>Barr, R. L., Lopaschuk, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodology+for+measuring+in+vitro%2Fex+vivo+cardiac+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Methodology for measuring in vitro/ex vivo cardiac energy metabolism.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 43, 141-152 (2000).</li>
<li>Neely, J. R., Liebermeister, H., Battersby, E. J., Morgan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+pressure+development+on+oxygen+consumption+by+isolated+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of pressure development on oxygen consumption by isolated rat heart.</a> Am J Physiol. 212, 804-814 (1967).</li>
<li>Taegtmeyer, H., Hems, R., Krebs, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilization+of+energy-providing+substrates+in+the+isolated+working+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Utilization of energy-providing substrates in the isolated working rat heart.</a> Biochem J. 186, 701-711 (1980).</li>
<li>Liao, R., Podesser, B. K., Lim, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+continuing+evolution+of+the+Langendorff+and+ejecting+murine+heart%3A+new+advances+in+cardiac+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">The continuing evolution of the Langendorff and ejecting murine heart: new advances in cardiac phenotyping.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 303, H156-H167 (2012).</li>
<li>Cingolani, O. H., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pressure-volume+relation+analysis+of+mouse+ventricular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pressure-volume relation analysis of mouse ventricular function.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 301, H2198-H2206 (2011).</li>
<li>Pacher, P., Nagayama, T., Mukhopadhyay, P., Batkai, S., Kass, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cardiac+function+using+pressure-volume+conductance+catheter+technique+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats.</a> Nat Protoc. 3, 1422-1434 (2008).</li>
<li>Abraham, D., Mao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+Pressure-Volume+Loop+Analysis+Using+Conductance+Catheters+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice.</a> J Vis Exp. , (2015).</li>
<li>Harmancey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+improves+metabolic+and+contractile+efficiency+in+stressed+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance improves metabolic and contractile efficiency in stressed rat heart.</a> FASEB J. 26, 3118-3126 (2012).</li>
<li>Harmancey, R., Vasquez, H. G., Guthrie, P. H., Taegtmeyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+long-chain+fatty+acid+oxidation+impairs+postischemic+recovery+of+the+insulin-resistant+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Decreased long-chain fatty acid oxidation impairs postischemic recovery of the insulin-resistant rat heart.</a> FASEB J. 27, 3966-3978 (2013).</li>
<li>Goodwin, G. W., Taylor, C. S., Taegtmeyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+energy+metabolism+of+the+heart+during+acute+increase+in+heart+work%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Regulation of energy metabolism of the heart during acute increase in heart work.</a> J Biol Chem. 273, 29530-29539 (1998).</li>
<li>Lopaschuk, G. D., Ussher, J. R., Folmes, C. D., Jaswal, J. S., Stanley, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+fatty+acid+metabolism+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Myocardial fatty acid metabolism in health and disease.</a> Physiol Rev. 90, 207-258 (2010).</li>
<li>Neely, J. R., Denton, R. M., England, P. J., Randle, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+increased+heart+work+on+the+tricarboxylate+cycle+and+its+interactions+with+glycolysis+in+the+perfused+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">The effects of increased heart work on the tricarboxylate cycle and its interactions with glycolysis in the perfused rat heart.</a> Biochem J. 128, 147-159 (1972).</li>
<li>Katz, J., Dunn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-2-t+as+a+tracer+for+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Glucose-2-t as a tracer for glucose metabolism.</a> Biochemistry. 6, 1-5 (1967).</li>
<li>Gillis, A. M., Kulisz, E., Mathison, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+electrophysiological+variables+in+blood-perfused+and+buffer-perfused%2C+isolated%2C+working+rabbit+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac electrophysiological variables in blood-perfused and buffer-perfused, isolated, working rabbit heart.</a> Am J Physiol. 271, H784-H789 (1996).</li>
<li>Qiu, Y., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+ischemic+vulnerability+and+responsiveness+to+cardioplegic+protection+in+crystalloid-perfused+versus+blood-perfused+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Comparison of ischemic vulnerability and responsiveness to cardioplegic protection in crystalloid-perfused versus blood-perfused hearts.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 103, 960-968 (1992).</li>
<li>Cotter, D. G., Schugar, R. C., Crawford, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketone+body+metabolism+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ketone body metabolism and cardiovascular disease.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304, H1060-H1076 (2013).</li>
<li>Huang, Y., Zhou, M., Sun, H., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Branched-chain+amino+acid+metabolism+in+heart+disease%3A+an+epiphenomenon+or+a+real+culprit%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Branched-chain amino acid metabolism in heart disease: an epiphenomenon or a real culprit?</a> Cardiovasc Res. 90, 220-223 (2011).</li>
<li>Buse, M. G., Biggers, J. F., Friderici, K. H., Buse, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidation+of+branched+chain+amino+acids+by+isolated+hearts+and+diaphragms+of+the+rat.+The+effect+of+fatty+acids%2C+glucose%2C+and+pyruvate+respiration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Oxidation of branched chain amino acids by isolated hearts and diaphragms of the rat. The effect of fatty acids, glucose, and pyruvate respiration.</a> J Biol Chem. 247, 8085-8096 (1972).</li>
<li>Liepinsh, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heart+is+better+protected+against+myocardial+infarction+in+the+fed+state+compared+to+the+fasted+state%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">The heart is better protected against myocardial infarction in the fed state compared to the fasted state.</a> Metabolism. 63, 127-136 (2014).</li>
<li>Niu, Y. G., Hauton, D., Evans, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilization+of+triacylglycerol-rich+lipoproteins+by+the+working+rat+heart%3A+routes+of+uptake+and+metabolic+fates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Utilization of triacylglycerol-rich lipoproteins by the working rat heart: routes of uptake and metabolic fates.</a> J Physiol. 558, 225-237 (2004).</li>
<li>Goodwin, G. W., Arteaga, J. R., Taegtmeyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+turnover+in+the+isolated+working+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Glycogen turnover in the isolated working rat heart.</a> J Biol Chem. 270, 9234-9240 (1995).</li>
<li>Sender, P. M., Garlick, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+rates+of+protein+in+the+Langendorff-perfused+rat+heart+in+the+presence+and+absence+of+insulin%2C+and+in+the+working+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Synthesis rates of protein in the Langendorff-perfused rat heart in the presence and absence of insulin, and in the working heart.</a> Biochem J. 132, 603-608 (1973).</li>
<li>Hindlycke, M., Jansson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+tolerance+and+pancreatic+islet+blood+flow+in+rats+after+intraperitoneal+administration+of+different+anesthetic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Ups+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Glucose tolerance and pancreatic islet blood flow in rats after intraperitoneal administration of different anesthetic drugs.</a> Ups J Med Sci. 97, 27-35 (1992).</li>
<li>Zuurbier, C. J., Keijzers, P. J., Koeman, A., Van Wezel, H. B., Hollmann, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia%27s+effects+on+plasma+glucose+and+insulin+and+cardiac+hexokinase+at+similar+hemodynamics+and+without+major+surgical+stress+in+fed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Anesthesia's effects on plasma glucose and insulin and cardiac hexokinase at similar hemodynamics and without major surgical stress in fed rats.</a> Anesth Analg. 106, 135-142 (2008).</li>
<li>Oguchi, T., Kashimoto, S., Yamaguchi, T., Nakamura, T., Kumazawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+pentobarbital+appropriate+for+basal+anesthesia+in+the+working+rat+heart+model%3F%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Is pentobarbital appropriate for basal anesthesia in the working rat heart model?</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 29, 37-43 (1993).</li>
<li>Segal, J., Schwalb, H., Shmorak, V., Uretzky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+anesthesia+on+cardiac+function+and+response+in+the+perfused+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Effect of anesthesia on cardiac function and response in the perfused rat heart.</a> J Mol Cell Cardiol. 22, 1317-1324 (1990).</li>
<li>Webster, I., Smith, A., Lochner, A., Huisamen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sanguinarine+non-+versus+re-circulation+during+isolated+heart+perfusion--a+Jekyll+and+Hyde+effect%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Drugs+Ther%22%5BJournal%5D)">Sanguinarine non- versus re-circulation during isolated heart perfusion--a Jekyll and Hyde effect?</a> Cardiovasc Drugs Ther. 28, 489-491 (2014).</li>
<li>Belke, D. D., Larsen, T. S., Lopaschuk, G. D., Severson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+and+fatty+acid+metabolism+in+the+isolated+working+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glucose and fatty acid metabolism in the isolated working mouse heart.</a> Am J Physiol. 277, R1210-R1217 (1999).</li>
<li>Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rats%21+%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Rats! </a> Dis Model Mech. 2, 206-210 (2009).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

위의 프로토콜을 동시에 분리 작업 쥐 심장 글루코스 산화 및 지방산 산화를 통해 기판의 광속을 정량화하는 방법을 자세히. 측정은 (... 등의 부하 변화, 허혈 재관류) 기준선 스트레스 조건 하에서 기판 대사 심장 워크 간의 관계를 결정하기 위해 기록 된 심장 기능 파라미터에 중첩 될 수있다. 이는 대사 / 수축 관계 심부전 및 당뇨병과 같은 기존의 상태에 의해 영향을받는 방법을 평가하는 것도 가능하다. 또한, 유전자 변형 된 쥐의 심장 심장 대사와 기능의 특정 단백질의 효과를 심문하는 데 사용될 수있다. 최근, 이들 매개 변수에 대한 다른 약물과 순환 요인의 영향이 개별적으로 시험 될 수있다. 당분 통한 글루코스의 흐름은 항상 글루코스 산화의 속도와 상관 관계가 없기 때문에, 그것은 수있다 인포하나의 실험 설정에서 두 경로를 통해 포도당 플럭스의 속도를 따라 포지티브,. 3 H 2 O의 방출은 해당 작용 (20...

임상 관련성 포유 동물의 심장에서 산화 적 대사 경로, ATP 생성과 심장 작품 (1)을 통해 기판의 플럭스 사이에 강한 긍정적 인 관계가있다. 지난 20 년 동안 심장 대사와 기능 사이의 복잡한 링크의 조사는 심장 대사의 변화는 심장 질환 2-4의 다른 유형의 설정에서 수축 기능 장애 가능성이 병리학 적 구조 리모델링에 대한 원인을 인식하게되었다. 따라서, 스트레인 된 심장의 대사 리모델링을 관리하는 메커니즘에 대한 이해 심부전 5-7의 예방 또는 치료를위한 치료 표적의 확인을 초래할 것으로 예상된다. &quot;심장 대사의 평가&quot;에 미국 심장 협회에서 과학적 진술의 최근 간행물은 t에 대한 과학계의 관심이 점점 강조연구 (8) 자신의 분야. 심장 이미징 기술의 진보는 이제 심장 형태와 기능의 신속하고 정확한 평가를 허용 반면, 심장 대사의 생체 내 연구는 제한적이고 부담이 남아있다 : 핵 자기 공명 (NMR) 분광법과 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 영상 수 생체 외 날짜 .TO 정상 상태 조건에서 산화 대사에 대한 다양한 기판 기여 9 판별 심장 고 에너지 인산 대사 크렙스 회로 활동을 수행하는데 사용될 수 있지만, 이러한 기술들은 높은 운영 비용으로 자신의 무능력 퍼진 마음의 준비 작업을 동시에 실시간으로, 산화 적 대사 경로 7,9에 수축 기능과 기판의 플럭스에서 공부하는 유일하고 독특한 기술을 사용할 나타냅니다. 다음 프로토콜 래트를 결정하는데 사용될 시약의 제조 및 이용의 지침을 제공하는 것이다격리 된 작업 쥐의 심장에 기판 활용 말이지. 격리 된 작업 쥐 심장 장치 기술은 반세기 이전이지만, 분리 작업 쥐 심장 제제는 심혈관 연구를 선택하는 방법을 남아있다. 랑겐 돌프 심장 제조와 마찬가지로 작용 쥐 심장 신경 호르몬 다른 장기와 다른 순환 계수의 교란 효과는 독립적으로 심장의 다양한 파라미터를 측정 할 수있는 비교적 간단한 신뢰성 있고 저렴한 방법을 제공한다. 그러나 랑겐 돌프 - 관류 마음 대조적으로, 작업 심장에 가까운 생리 심장 연구, 생체 조건에 관련이있는 수준으로 산화 대사 플럭스의 생성을위한 전제 조건을 수행하고 있습니다. 이것은 좌심방 접속 캐뉼라를 통해 좌심실 (LV)로 관류 버퍼를 제공함으로써 달성되고 LV는 채우고 계약으로되어버퍼가 결정된 후 부하 수압에 대한 대동맥 라인을 통해 배출됩니다. 원래 10 이후 Taegtmeyer, HEMS와 크렙스 (11)에 의해 개선 되었으나 닐리와 동료에 의해 기술 된 관류 장치의 디자인은 이후 약간 변경되었습니다. 원래 장치에서 설명한 바와 같이, 수축 기능은 대동맥 측정하기 위해 더 이상 메스 실린더 및 스톱워치를 사용하지 않고, 심 박출량의 측정을 통해 평가 될 수 있고, 관상 동맥은 10, 11을 흐른다. 여러 벤더가 완료 작업 쥐 심장 관류 시스템을 제공합니다. 이들 시판되는 장치 flowprobes, 압력 센서, 압력 볼륨 카테터와 심장 기능의 데이터 수집과 분석에 필요한 모든 장비를 얻을 수있다. 공급 업체는 장비와 새로운 사용자 익숙해 광범위한 문서 및 교육 세션을 제공합니다. 작업 심장기구도에 여러 또한 리뷰 기사 상세 프로토콜[슬라이드 쇼와 카테터의 사용에 설치류 12-15에서 심장 기능을 측정합니다. 이러한 이유로, 우리는 잠시 관류 장치 및 기록 장치의 설정을 언급한다. 본 프로토콜은 다소 동시에 포도당과 장쇄 지방산 산화의 속도는 정상적인 심장의 두 가지 에너지를 제공하는 기판을 측정하도록 구현 될 수있는 방법에 대한 설명과 함께 이미 이용 가능한 정보를 보완하는 것이다. 우리는 데이터 분석 샘플의 회수 및 처리 시약 및 버퍼의 제조에서, 심근 산화 대사 평가 방사성 에너지 기판의 사용에 관련된 현재의 모든 단계를 설명한다. 이 방법의 원리 심근 (glucos를 지방산 (주로 장쇄 지방산)과 탄수화물의 산화 적 인산화의 수축 에너지의 대부분을 생성전자 및 락 테이트). 심장은 매우 정력 보유 제한 및 순환에서 이러한 에너지 제공 기판의 지속적인 공급에 의존하고있다. 당분 경로를 통한 글루코오스의 이화는 미토콘드리아 내막의 피루 베이트 탈수소 효소 복합체에 의해 탈 카복실 화되는 피루브산을 산출한다. 알부민 또는 지단백질 순환하는 트리글리세리드에서 추출한 장쇄 지방산은 제 세포질에서 아실 CoA를 분자로 활성화되고,이어서 베타 산화 경로를 입력 카르니틴 셔틀 통하여 미토콘드리아 기질 내부에 반송된다. 포도당 지방산의 분해 작용에 의해 생성 된 아세틸 -CoA 분자 미토콘드리아 내막을 가로 질러 양성자 원동력을 구축하는 전자 전달계에 사용되는 환원 등가물 (NADH와 FADH 2)를 생성하는 크렙스 회로 연료 및 ATP에 합성 효소의 활동을 통해 ATP를 생성합니다. 물과 이산화탄소의 단부 부산물이다크렙스 사이클 내에서 일어나는 효소 반응. 14 C- 3 H- 방사성 표지 된 기질의 공급은 절연 작업 심장 (예 : C-14 방사성 표지 된 글루코스, 3 H-방사성 올레산) 따라서 14 CO 2, 3 H 2 O의 생산을 유도 할 수있다 정량적 관상 동맥 유출 물로부터 회복 될 수있다. 14 CO 2의 컬렉션은 밀폐 챔버에 격리 관류 심장을 유지하여 그것을 중심을 빠져 나올 때 바로 관상 동맥 유출 물을 회수하여 실시된다. 작은 음이온 교환 컬럼 분리하여 관상 동맥 유출 물로부터 3 H 2 O를 복구하기 위해 사용된다. 처리 된 샘플의 방사능을 액체 섬광 계수기로 측정 한 결과, 사용 된 방사성 표지 된 기질의 특정 활성의 기술로, 개별적으로 포도당과 지방산의 광속을 정량하는 것이 가능하다산화는 16, 17을 경로.

<table><tbody><tr><td>염화나트륨(NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨(KCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨 일염기성(KH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>P284</td><td></td></tr><tr><td>황산마그네슘 헵타하이드레이트(MgSO4*7H2O)</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨(NaHCO3)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S233</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘(CaCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>AG 1-X8 수지, 염화물 형태, 100 - 200 건조 메쉬 크기, 500g</td><td>Bio-Rad</td><td>1401441</td><td>이 제품은 직접 하이드옥사이드 형태로 교체하실 수 있습니다&nbsp; (아래 참조 참조) 그러나 이것은 거의 8 배 더 많은 비용이 듭니다</td></tr><tr><td>AG 1-X8 수지, 수산화물 형태, 100-200 건조 메쉬 크기, 100g</td><td>Bio-Rad</td><td>1432445</td><td>이 항목을 구입하면 음이온 교환 수지를 염화물 형태에서 수산화물 형태로 변환하는 것을 건너 뛸 수 있습니다 (프로토콜의 섹션 1.2 참조)</td></tr><tr><td>유리 미세 분석 진공 필터 홀더</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-753-2</td><td></td></tr><tr><td>수산화 나트륨 (NaOH)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318</td><td>부식성. 적절한 취급 및 보관에 대해서는 제품 MSDS를 참조하십시오.</td></tr><tr><td>프릿 실린더</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>11-138B</td><td></td></tr><tr><td>Probumin 소 혈청 알부민 지방산 프리, 분말</td><td>EMD Millipore</td><td>820027</td> 가스 분산 튜브 <td>차가운 에탄올 분별과 같은 다른 정제 공정은 심장에 유독한 잔류물을 남길 수 있으므로 숯 탈지 BSA의 사용을 권장합니다.</td></tr><tr><td>올레산나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>O7501</td><td></td></tr><tr><td>올레산, [9,10-3H(N)]-</td><td>PerkinElmer</td><td>NET289005MC</td><td>방사성 물질. 주문 및 취급에 대한 기관의 방사선 안전 사무소 지침을 따르십시오.</td></tr><tr><td>투석 멤브레인 튜브, 직경 29mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-667E</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-포도</td>당 <td>시그마-알드리치</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>포도당, D-[14C(U)]-</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC042B005MC</td><td>방사성 물질. 주문 및 취급에 대한 기관의 방사선 안전 사무소 지침을 따르십시오.</td></tr><tr><td>Humulin R U-100</td><td>Eli Lilly and Company</td><td>NDC 0002-8215-01 (HI-210)</td><td></td></tr><tr><td>Inactin Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T133</td><td>USDEA Schedule III</td></tr><tr><td>3-0 Silk Black Braid</td><td>Roboz Surgical</td><td>SUT-15-3</td><td></td></tr><tr><td>10x Hyamine Hydroxide</td><td>PerkinElmer</td><td>6003005</td><td>독성이 강하고 심각한 화상을 유발합니다. 적절한 취급 및 보관을 위해 MSDS 제품을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>20ml 유리 섬광 바이알</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-25E</td><td>14CO2</td></tr><tr><td>20ml HDPE 섬광 바이알</td>의 정량 회수를 위해 유리 바이알을 사용하십시오. <td>Fisher Scientific</td><td>03-337-23B</td><td>3H2O Red의 정량 회수를 위해 HDPE 바이알을 사용하십시오</td></tr>.<tr><td> 고무 슬리브 스토퍼</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-126DD</td><td>Fit 20 mL 섬광 바이알; 재사용 가능한</td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide 바늘 23G x 40mm</td><td>BD</td><td>305194</td><td>CO2 트랩 과염소산의 고무 슬리브 스토퍼를 통해 과염소산을 주입하는 데 사용</td></tr><tr><td>, 60%</td><td>Fisher Scientific</td><td>A228</td><td>부식성이 높으며 산화제 및/또는 폭발 위험을 유발할 수 있습니다. 적절한 취급 및 보관을 위해 제품 MSDS를 참조하십시오</td></tr><tr><td>Ultima Gold, Scintillation Cocktail</td><td>PerkinElmer</td><td>6013327</td><td></td></tr><tr><td>Glass Wool</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC38606</td><td></td></tr><tr><td>Decon Dri-Clean Detergent Powder</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355</td><td>유리 제품, 플라스틱 부품 및 튜브 청소용</td></tr><tr><td>Alconox Tergazyme Enzyme-Active Powered Detergent</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-000-115</td><td>지방산-BSA 잔류물로 오염된 "손이 닿기 어려운" 표면(튜브, 유리 제품) 청소용</td></tr></tbody></table>

격리 된 작업 쥐의 심장에서 포도당과 지방산 산화의 가격의 결정 방법

Methods for the Determination of Rates of Glucose and Fatty Acid Oxidation in the Isolated Working Rat Heart

포유류 마음은 ATP의 주요 소비자이며, 수축의 에너지 기판의 지속적인 공급이 필요합니다. 당연히 심근 대사의 변화가 수축 부전 심부전의 개발과 연결되어있다. 따라서, 신진 대사 및 수축 사이의 링크를 푸는 것은 질병 상태에서 심장 적응 또는 부적응을 지배하는 메커니즘의 일부에 빛을 흘렸다한다. 분리 된 래트 심장 작동 준비를 동시에 실시간 심장 수축 기능 및 산화 적 대사 경로에 기판을 제공하는 에너지의 흐름에 따라 사용될 수있다. 본 프로토콜은 포도당 지방산, 심장의 기판을 제공하는 주된 에너지 산화 비율의 정량적 측정을 위해 버퍼의 제조 및 이용에 사용되는 방법에 대한 상세한 설명을 제공하는 것을 목적으로한다. 시료 분석 및 데이터 해석에 사용되는 방법에 대해서도 설명합니다.간단히 말해서,이 기술은 정상 체온 결정질 관류 통해 생체 심장 박동로 (14)의 공급 C- 방사성 포도당과 3 H- 방사성 장쇄 지방산에 기초한다. 14 CO 2, 3 H 2 O, 최종 부산물 이러한 에너지 제공 기판의 사용에 관여하는 효소 반응은 다음 정량적 관상 동맥 유출 물로부터 회수된다. 사용되는 방사성 표지 된 기질의 특정 활성의 기술로, 개별적으로 산화 경로에 포도당과 지방산의 광속을 정량하는 것이 가능하다. 분리 된 심장의 수축 기능은 해당 기록 장치와 병렬로 결정될 직접 대사 플럭스 값과 상관 될 수있다. 이 기술은 사전에로드 및 국소 빈혈, 약물 또는 circula 후 변경 등 다양한 스트레스 조건에 대한 응답으로 대사 / 수축 관계를 연구하는 것이 매우 유용하다유전자 산물의 발현의 변화 다음 팅 계수 나.

두 대표 실험은 아래 그림에 설명되어 있습니다. 두 경우 모두, 16 주령의 수컷 스프 라그 돌리 래트의 심장을 분리하고, 선행하는 프로토콜에 따라 제조 KH 완충액 작업 모드 관류. 각 실험에서, 심장 심장 작업에 영향을 미치는 응력 상태로 하였다. 심장 수축 기능 대동맥 라인의 압력 센서의 삽입을 통해 심장의 전력 측정하여 맥압의 연속 촬영에 의해 평가 하였다. 에너지 제공 기판의 사용의 각 스트레스 조건의 결과를 동시에 포도당과 올레산의 산화 속도를 측정함으로써 결정 하였다. 첫 번째 실험에서, 부하의 급성 증가가 40 %로 후 부하를 증가시킴으로써 거의 생리 부하에서 20 분 재관류 후 모의 하였다 (수동에 의해 달성대동맥 오버 플로우 챔버를 상승) 및 재관류 버퍼 (그림 3A)에 에피네프린 (1 μmol / L)을 추가하...

다음 프로토콜은 분리된 작동 랫드 심장에서 포도당 및 지방산 산화 속도의 정량적 측정을 위한 완충액의 준비 및 활용을 설명합니다. 샘플 분석 및 데이터 해석에 사용되는 방법도 논의됩니다.

The mammalian heart is a major consumer of ATP and requires a constant supply of energy substrates for contraction. Not surprisingly, alterations of ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 분리된 작동 상태의 쥐 심장에서 포도당 산화 및 지방산 산화의 심근 속도와 심장 수축 기능을 동시에 실시간으로 측정하는 것입니다. 이 방법은 심장이 에너지 수요의 급격한 변화에 대사적으로 어떻게 적응하는지, 그리고 병리적 조건에서 이러한 반응이 어떻게 영향을 받는지와 같은 심혈관 분야의 핵심 질문들에 대한 답을 얻는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 기질, 약물 또는 심장에 전달되는 호르몬의 성질 및 농도와 같은 환경 변수를 연구자가 완전히 제어할 수 있다는 점입니다. 시연은 미시시피 대학교 의료 센터(University of Mississippi Medical Center) 심혈관 레노 리소스 센터(cardiovascular Reno resource center)의 박사 후 연구원인 Bhavisha Bakrania가 진행합니다. 먼저, 관류 장치를 프라이밍하고 완충액에 산소를 공급하기 위해 펌프를 작동시키십시오.재료를 준비한 후, 쥐를 마취하고 수술 준비를 합니다. 복부의 털을 깎아내고 측면으로 확장하는 정중선 절개를 실시합니다. 하대정맥에 접근하기 위해 위와 장을 옆으로 밀어내고 Heparin 200 USP units를 주입합니다.5~10초 동안 기다린 후, 가위를 사용하여 횡격막과 흉곽의 측면을 절개하여 흉강 내부를 노출시킵니다. 다음으로, 손으로 심장을 조심스럽게 잡고 심장과 폐를 함께 적출합니다. 이때 대동맥궁과 상행 대동맥이 손상되지 않도록 주의하면서 하행 대동맥 높이에서 절단합니다.심장과 폐를 얼음처럼 차가운 KH 버퍼가 채워진 해부 접시로 즉시 옮깁니다. 심장 박동이 멈춘 후, 1~2분 이내에 다시 박동을 시작하게 하려면 신속하게 작업하는 법을 익혀야 합니다. 이제 심장과 폐를 얼음처럼 차가운 KH 버퍼가 담긴 새 접시에 담급니다.폐 조직의 큰 조각들을 빠르게 제거한 다음, 대동맥궁 바로 위쪽의 하행 대동맥을 절단합니다. 다음 단계들을 수행할 때는 방사성 물질 사용에 따른 필요한 예방 조치를 취하십시오. 이어서 핀셋을 사용하여 대동맥을 조심스럽게 열고 심장을 캐뉼라 위로 밀어 올립니다.캐뉼라가 대동맥 경로를 지나치지 않도록 매우 주의하십시오. 이는 심장의 저관류 및 대동맥판막 손상을 유발할 수 있습니다. 이제 마이크로 클립으로 접합부를 고정하고 심장의 Lagendorff 관류를 시작하십시오. 서두르지 말고 3 0 silk 봉합사를 사용하여 대동맥을 대동맥 캐뉼라에 고정한 후 마이크로 클립을 제거하십시오.그런 다음 폐정맥을 찾아 필요에 따라 심장 이외의 조직을 제거합니다. 좌심방을 캐뉼라에 고정할 수 있도록 충분한 조직을 남겨둡니다. 좌심방의 캐뉼라 삽입은 프로토콜에서 두 번째로 중요한 단계로, 캐뉼라가 잘못 삽입되거나 누출이 발생하면 수축력이 약해져 대사율 정량 분석에 영향을 줄 수 있습니다.다음으로, 오른쪽 캐뉼라와 동일한 방식으로 좌심방 라인 캐뉼라를 준비합니다. 그런 다음 핀셋을 사용하여 폐정맥의 입구를 조심스럽게 잡고 심장을 심방 캐뉼라 위로 밀어 올립니다. 대동맥을 굽히거나 심장에 과도한 무리가 가지 않도록 주의하며 필요에 따라 조직을 이동시킵니다.그 다음 3 0 실크 봉합사로 캐뉼라를 고정합니다. 마지막으로, 대동맥 라인을 작동 모드로 전환함과 동시에 심방 라인을 엽니다. 만약 좌심방에서 완충액이 누출되면, 심방 라인을 닫고 다시 Lagendorff 모드로 전환하십시오.그 다음, 캐뉼라를 더 단단히 고정하기 위해 봉합사를 추가로 사용하고 다시 작동 모드로 전환해 봅니다. 실험에 카테터를 이용한 LV 기능의 직접 측정이 포함된 경우, 26 gauge 바늘을 사용하여 LV apex를 천자한 후, 압력-부피 카테터를 삽입하고 샤프트를 LV 종축에 맞춥니다. 이어서 원위 전극 E1을 대동맥판막 바로 아래의 심내막 경계에 인접하게 배치하고, 근위 전극 E4를 심실벽 바로 안쪽에 배치합니다.이제 심장을 워터 재킷 챔버(water jacketed chamber)에 밀폐합니다. 그런 다음 소프트웨어에서 기능적 파라미터 모니터링을 시작하십시오. 베이스라인 파라미터가 최소 5분 동안 안정되면 데이터 기록을 시작합니다.관상동맥 유량을 측정하려면, 유출액 20 milliliters를 수집하는 데 걸리는 시간을 기록하십시오. 그다음 3방향 스톱콕을 통해 유출액 2 milliliters를 주사기로 취하고 나머지는 버립니다. 해당 2 milliliter 샘플을 즉시 마이크로 원심분리 튜브로 옮긴 후, 포도당 산화 속도를 결정하기 위해 0.5 milliliter 분취액을 취하십시오.나머지는 얼음 위에 보관하십시오. 주기적으로 관상동맥 유출액 샘플 채취를 계속하고, 종료 전 심방 라인에 고장성 식염수 10 micro liters를 주입하십시오. 캐뉼라에 연결되기 직전에 주입합니다.이 볼루스 투여에 대한 반응을 이용하여 심장 용적을 정확하게 결정하기 위한 평행 전도도를 계산합니다. 다음으로, 심장 챔버의 밀봉을 해제하고 LV에 삽입된 카테터를 제거합니다. 그런 다음 캐뉼라에서 심장을 절단하여 얼음처럼 차가운 KH 완충액에 넣습니다. 이제 종이 타월로 심장의 물기를 빠르게 닦아내고 습중량을 측정합니다.무게를 측정한 후, 필요한 조직 샘플을 박리하고 드라이아이스로 냉각시킨 집게를 사용하여 남은 조직을 동결합니다. 준비 과정으로, 유리 신틸레이션 바이알에 10x hyamine hydroxide 1 mL를 넣습니다. 각 관상동맥 유출액 샘플당 하나씩, 그리고 대조군용으로 두 개를 준비하십시오.샘플 바이알을 적재하는 즉시, 이를 적재된 신틸레이션 바이알에 직접 넣습니다. 분석을 위해, 고무 슬리브 스토퍼로 바이알 캡을 조심스럽게 닫고 파라필름을 사용하여 바이알을 밀봉합니다. 이제 23 gauge의 긴 바늘이 달린 1 mL 주사기를 사용하여 60% 과염소산 200 µL를 고무 슬리브를 통해 주입합니다.모든 샘플 바이알을 하룻밤 동안 그대로 둡니다. 다음 날, 핀셋을 사용하여 각 샘플 튜브를 조심스럽게 꺼내고, 하이드록사이드 하이아민(hydroxide of hyamine)을 모두 회수하기 위해 개방된 바이알 위에 1 mL의 신틸레이션 칵테일을 부어 튜브 바닥을 씻어냅니다. 그 다음, 각 바이알에 신틸레이션 칵테일 9 mL를 추가로 넣습니다.비활성도를 구하기 위해, 두 개의 바이알에 profusion buffer 0.5 milliliters를 첨가합니다. 이제 바이알을 세게 흔든 후, 측정을 수행하기 전 최소 6시간 동안 바이알을 그대로 둡니다. 심근 올레산 산화 속도를 결정하려면, 먼저 각 샘플에 대해 음이온 교환 수지 컬럼을 준비하십시오.3 mL 주사기 튜브의 팁 부분에 유리솜을 채웁니다. 그런 다음 트랜스퍼 피펫을 사용하여 각 컬럼의 2 mL 표시선까지 수지 수성 슬러리를 추가합니다. 다음으로 각 컬럼에 2 mL의 초순수를 세 번 통과시켜 수지를 세척합니다.그런 다음 컬럼 아래에 신틸레이션 바이알을 배치하고, 컬럼에 0.5 mL의 관상동맥 유출액을 로딩합니다. 배경 측정의 경우에는 대신 관류 완충액을 사용하십시오. 이제 초순수를 각각 0.5 mL, 1 mL, 마지막으로 2 mL씩 순차적으로 사용하여 컬럼을 용리합니다.컬럼을 폐기합니다. 그다지 바이알에 13 milliliters의 신틸레이션 칵테일(scintillation cocktail)을 추가합니다. 비방사능(specific activity) 측정을 위해 13 milliliters의 액체 신틸레이션 칵테일이 채워진 바이알 두 개에 0.5 milliliters의 관류 완충액(perfusion buffer)을 직접 추가합니다.바이알을 세게 흔든 후 6시간 이상 그대로 두어 가라앉히고 측정값을 측정합니다. 16주 된 쥐 2마리로부터 심장을 분리하여 서로 다른 스트레스 조건에 노출시켰습니다. 심장 하나에 대해서는 후부하를 40% 증가시키고 관류 버퍼에 epinephrine을 첨가하여 급성 작업 부하 증가를 시뮬레이션했습니다.부하 급증(work jump) 유도 직후 심박수가 50% 이상 증가했습니다. 부하 급증 시 심장 출력(cardiac power)이 40% 이상 증가했으며, 이와 동시에 포도당과 올레산(oleate)의 산화 속도가 모두 증가했습니다. 특히 기저치 대비 포도당 산화의 상대적 증가 폭이 두드러졌습니다.다른 심장에는 15분간의 전심장 허혈과 30분간의 재관류를 수행하였습니다. 이러한 실험 조건 하에서, 재관류 시작 후 몇 분 이내에 거의 정상에 가까운 맥압이 회복되었습니다. 10분 이내에 심장 출력은 허혈 전 수치 이상으로 빠르게 증가했다가 다시 기저치에 가까운 수치로 돌아왔습니다.이는 올레산 산화의 증가로 인해 발생한 결과였습니다. 반면 포도당 산화는 허혈 전 수준의 활성으로 빠르게 회복되었습니다. 숙련된 경우, 적절히 수행한다면 심장 적출부터 작동 모드에서의 초기 재관류까지 5분 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차 이후에, 약물이나 스트레스 조건이 분자 신호 전달 경로에 미치는 영향과 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 RNA 및 단백질 발현 분석과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 방사성 추적자를 사용하는 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안 전체 개인 보호 장비를 착용하는 것과 같은 예방 조치를 항상 취해야 함을 잊지 마십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

목표는 physiologic 미리와 afterload 압력의 컨텍스트 내에서 격리된 마음의 mitochondrial 산화 환원 상태를 모니터링하는 것입니다. biventricular 작업 토끼 심장 모델이 제공됩니다. NADH 높은 spatiotemporal 해상도 형광 이미지는 epicardial 조직의 mitochondrial 산화 환원 상태를 모니터링하는 데 사용됩니다.

절연 Biventricular의 NADH 형광 이미징은 토끼 하트 워킹

광근의 lateralis의 조직 검사, 정제 미토콘드리아의 준비, 호흡계 프로파일 링하는 방법이 설명되어 있습니다. 작은 부피의 근육 사용은 임상 연구 애플리케이션이 기술에 적합하다.

경피적 바늘 생검에 의해 획득 골격근 조직에서 고립 된 미토콘드리아의 준비 및 호흡계 평가

드 노보 지방 생성 및 β - 지방산 산화는 간세포의 주요 대사 경로, 지방간 질환 등 여러 가지 대사 장애에 교란되는 경로를 구성한다. 여기에서 우리는 마우스 차 간세포의 분리를 보여와 β-지방산 산화 및 지방 생성의 정량화를 설명합니다.

마우스 차 간세포에서 지방산 산화 및 지방 생성의 결정

제시된 방법은 최소한의 마우스 골격근에서 분리된 미토콘드리아를 사용하여 마이크로플레이트 기반 호흡 측정 분석 모음의 수행을 위한 단계별 지침을 제공합니다. 이러한 분석은 일반적으로 사용되는 동물 모델에서 미토콘드리아 산소 소비량의 기계론적 변화/적응을 측정할 수 있습니다.

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아 격리 사용

해당작용은 여러 생물학적 시스템에서 정의하는 대사 마커입니다. H+의 세포외 플럭스를 측정하여 해당과정을 모니터링하는 것은 일반적이지만, 정량적이고 명확한 보정이 필요합니다. 여기에서는 세포 외 산성화의 호흡기 및 해당작용 원인을 구별하기 위해 세포 외 플럭스 데이터를 수집하고 수정하는 방법을 보여줍니다.

세포 외 산 생산의 측정 및 분석은 당분 속도를 확인하는

신진대사에 대한 연구는 면역학 연구와 점점 더 관련성이 높아지고 있습니다. 여기에서는 마우스 비장 세포와 T 및 B 림프구에서 해당작용 및 미토콘드리아 호흡을 측정하기 위한 최적화된 방법을 제시합니다.

최적화 된 프로토콜은 림프구에 해당 작용과 미토콘드리아 호흡을 분석하는

여기에서 우리는 심혼에 있는 심실 광학 카테터를 심장 벽을 가로질러 흡광도 분광학을 능력을 발휘하기 위하여 공류된 심혼에 이용하는 방법을 소개합니다. 얻은 데이터는 조직 산소 장력뿐만 아니라 기질 활용 및 멤브레인 잠재력에 대한 강력한 정보를 이 유비쿼터스 제제에서 심장 성능 측정과 동시에 제공합니다.

교란 성 포유류 심장의 경부 흡광도 분광학을 사용하여 세포 대사를 모니터링하기위한 심장 내 측 발사 라이트 카테터

근육 포도당 흡수의 온전한 조절은 전신 포도당 항상성을 유지하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 전신 포도당 대사에 대한 다양한 생리적 개입의 영향을 묘사 할 때 단리되고 배양 된 성숙한 골격근에서 인슐린 및 수축 자극 포도당 흡수에 대한 평가를 제시합니다.

마우스로부터 단리되고 배양된 성숙한 골격근에서의 인슐린- 및 수축-자극된 글루코스 흡수의 측정

지방산 β산화는 간세포를 포함한 다양한 세포 유형에서 에너지를 생성하는 데 필수적인 대사 경로입니다. 여기에서, 우리는 14C표지된 팔미트산을 사용하여 갓 분리된 원발성 간세포에서 지방산 β산화를 측정하는 방법을 설명한다.

갓 분리된 마우스 간세포의 현탁액에서의 지방산 β산화의 측정

여기에 기재된 미토콘드리아 응력 분석기 및 글리코리질 속도 분석기의 상세한 프로토콜은 상용 생체 분석기를 이용한 전 생체 망 막 조직 샘플에서 이다.

전 비보 망막 조직 샘플에서 미토콘드리아 호흡 및 글리코리시스의 결정

우리는 연속 관류 모드에서 과분극된 13C표지 대사산물을 분리된 관류된 마우스 심장에 투여하기 위한 실험 설정을 설명합니다. 전용 13C-NMR 획득 접근법을 통해 대사 효소 활성을 실시간으로 정량화할 수 있었고, 다중모수 31P-NMR 분석을 통해 조직 ATP 함량 및 pH를 측정할 수 있었습니다.

과분극 [1-13C] 피루브산 및 13C / 31P NMR 분광법을 사용하여 분리 된 관류 마우스 심장에서 심장 대사 조사

학습하세요 격리된 작업 쥐 심장에서 포도당과 지방산 산화율을 동시에 측정하는 방법을. 이 기술은 심장 대사 적응과 수축 기능을 실시간으로 평가하여 심혈관 질환 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

격리 된 작업 쥐의 심장에서 포도당과 지방산 산화의 가격의 결정 방법

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