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DOI: 10.3791/54522-v
Kristin Bösch*1,2, Lamprinos Frantzeskakis*1, Miroslav Vraneš3, Jörg Kämper3, Kerstin Schipper1,2, Vera Göhre1,2,4
1Institute for Microbiology,Heinrich-Heine University Düsseldorf, 2Bioeconomy Science Center (BioSC), 3Department of Genetics, Institute of Applied Biosciences,Karlsruhe Institute of Technology, 4Cluster of Excellence in Plant Sciences (CEPLAS),Heinrich-Heine University Düsseldorf
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol describes a gene replacement strategy for genetically manipulating the smut fungus Ustilago maydis. It allows for the generation of deletion mutants to study infection phenotypes and can be adapted for various genetic modifications.
유전자 Ustilago이 maydis 검댕 곰팡이 조작에 우리는 강력한 유전자 교체 전략을 설명합니다. 이 프로토콜은 감염 표현형을 조사하기 위해 삭제 돌연변이를 생성하는 방법에 대해 설명합니다. 형광 표지 단백질을 코딩하는 서열을 추가하여, 예를 들어, 임의의 방법으로 유전자를 수정하도록 확장 될 수있다.
이 프로토콜의 전반적인 목표는 검댕이 곰팡이인 ustilago maydis를 유전적으로 변형하는 것입니다. 이 균주 생성 방법을 사용하면 다양한 방법으로 유전자의 기능적 특성을 분석할 수 있습니다. 예를 들어, 유전자를 삭제하거나, 프로모터스를 교환하거나, 융합 구조를 생성할 수 있습니다.
이 방법의 가장 큰 장점은 변형을 정확하게 확인할 수 있으므로 모든 표현형이 관심 유전자의 변화와 직접 연결될 수 있다는 것입니다. 이 방법의 시각적 시연은 원형지속형 반응을 멈출 때를 아는 것이 성공적인 변환을 위해 중요하기 때문에 필수적입니다. 준비 과정에서 섭씨 영하 20도에서 두 개의 밀리리터 원형 바닥 튜브를 식히십시오.
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