Name: 와 실험 감염 리스테리아 호스트 인터페론-γ 응답 유학을위한 모델로 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 배우세요 C57BL/6J 마우스에 Listeria monocytogenes를 감염시키고 간편한 실험실 기법으로 NK 세포, NKT 세포, 적응성 T 림프구의 인터페론-γ 반응을 측정하는 방법. 이 프로토콜은 세균 감염 후 면역 반응과 동물 생존에 영향을 미치는 물질이나 유전자를 선별하는 데 도움을 줍니다.

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<ol><li>Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune responses to Listeria monocytogenes.</a> Nat Rev Immunol. 4 (10), 812-823 (2004).</li>
<li>Ranson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+V+alpha+14%2B+NKT+cells+participate+in+the+early+response+to+enteric+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Invariant V alpha 14+ NKT cells participate in the early response to enteric Listeria monocytogenes infection.</a> J Immunol. 175 (2), 1137-1144 (2005).</li>
<li>Bancroft, G. J., Schreiber, R. D., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+immunity%3A+a+T-cell-independent+pathway+of+macrophage+activation%2C+defined+in+the+scid+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Natural immunity: a T-cell-independent pathway of macrophage activation, defined in the scid mouse.</a> Immunol Rev. 124, 5-24 (1991).</li>
<li>Soudja, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory-T-cell-derived+interferon-gamma+instructs+potent+innate+cell+activation+for+protective+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Memory-T-cell-derived interferon-gamma instructs potent innate cell activation for protective immunity.</a> Immunity. 40 (6), 974-988 (2014).</li>
<li>Schoenborn, J. R., Wilson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+interferon-gamma+during+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.</a> Adv Immunol. 96, 41-101 (2007).</li>
<li>Filipe-Santos, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inborn+errors+of+IL-12%2F23-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%3A+molecular%2C+cellular%2C+and+clinical+features%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inborn errors of IL-12/23- and IFN-gamma-mediated immunity: molecular, cellular, and clinical features.</a> Semin Immunol. 18 (6), 347-361 (2006).</li>
<li>Flynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+essential+role+for+interferon+gamma+in+resistance+to+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">An essential role for interferon gamma in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection.</a> J Exp Med. 178 (6), 2249-2254 (1993).</li>
<li>Cooper, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disseminated+tuberculosis+in+interferon+gamma+gene-disrupted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Disseminated tuberculosis in interferon gamma gene-disrupted mice.</a> J Exp Med. 178 (6), 2243-2247 (1993).</li>
<li>Dalton, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+of+immune+cell+function+in+mice+with+disrupted+interferon-gamma+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes.</a> Science. 259 (5102), 1739-1742 (1993).</li>
<li>Harty, J. T., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+immunity+to+Listeria+monocytogenes+in+the+absence+of+IFN+gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific immunity to Listeria monocytogenes in the absence of IFN gamma.</a> Immunity. 3 (1), 109-117 (1995).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+mice+that+lack+the+interferon-gamma+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Immune response in mice that lack the interferon-gamma receptor.</a> Science. 259 (5102), 1742-1745 (1993).</li>
<li>Wang, Z. E., Reiner, S. L., Zheng, S., Dalton, D. K., Locksley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+effector+cells+default+to+the+Th2+pathway+in+interferon+gamma-deficient+mice+infected+with+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD4+ effector cells default to the Th2 pathway in interferon gamma-deficient mice infected with Leishmania major.</a> J Exp Med. 179 (4), 1367-1371 (1994).</li>
<li>Hess, J., Ladel, C., Miko, D., Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhimurium+aroA-+infection+in+gene-targeted+immunodeficient+mice%3A+major+role+of+CD4%2B+TCR-alpha+beta+cells+and+IFN-gamma+in+bacterial+clearance+independent+of+intracellular+location%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhimurium aroA- infection in gene-targeted immunodeficient mice: major role of CD4+ TCR-alpha beta cells and IFN-gamma in bacterial clearance independent of intracellular location.</a> J Immunol. 156 (9), 3321-3326 (1996).</li>
<li>Ikeda, H., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+IFN+gamma+in+protection+against+tumor+development+and+cancer+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">The roles of IFN gamma in protection against tumor development and cancer immunoediting.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 13 (2), 95-109 (2002).</li>
<li>Hodge, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+AU-rich+element+removal+promotes+chronic+IFN-gamma+expression+and+autoimmunity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma AU-rich element removal promotes chronic IFN-gamma expression and autoimmunity in mice.</a> J Autoimmun. 53, 33-45 (2014).</li>
<li>Seery, J. P., Carroll, J. M., Cattell, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinuclear+autoantibodies+and+lupus+nephritis+in+transgenic+mice+expressing+interferon+gamma+in+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Antinuclear autoantibodies and lupus nephritis in transgenic mice expressing interferon gamma in the epidermis.</a> J Exp Med. 186 (9), 1451-1459 (1997).</li>
<li>Peng, S. L., Moslehi, J., Craft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+interferon-gamma+and+interleukin-4+in+murine+lupus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Roles of interferon-gamma and interleukin-4 in murine lupus.</a> J Clin Invest. 99 (8), 1936-1946 (1997).</li>
<li>Savinov, A. Y., Wong, F. S., Chervonsky, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+affects+homing+of+diabetogenic+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma affects homing of diabetogenic T cells.</a> J Immunol. 167 (11), 6637-6643 (2001).</li>
<li>Miller, C. H., Maher, S. G., Young, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Use+of+Interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical Use of Interferon-gamma.</a> Ann N Y Acad Sci. 1182, 69-79 (2009).</li>
<li>Paget, C., Chow, M. T., Duret, H., Mattarollo, S. R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gammadelta+T+cells+in+alpha-galactosylceramide-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of gammadelta T cells in alpha-galactosylceramide-mediated immunity.</a> J Immunol. 188 (8), 3928-3939 (2012).</li>
<li>Leonard, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+single-dose+interleukin-12+exposure+on+interleukin-12-associated+toxicity+and+interferon-gamma+production%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Effects of single-dose interleukin-12 exposure on interleukin-12-associated toxicity and interferon-gamma production.</a> Blood. 90 (7), 2541-2548 (1997).</li>
<li>Zenewicz, L. A., Shen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%3A+a+short+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune responses to Listeria monocytogenes: a short overview.</a> Microbes Infect. 9 (10), 1208-1215 (2007).</li>
<li>Viegas, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+production+by+CD27%28%2B%29+NK+cells+exacerbates+Listeria+monocytogenes+infection+in+mice+by+inhibiting+granulocyte+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma production by CD27(+) NK cells exacerbates Listeria monocytogenes infection in mice by inhibiting granulocyte mobilization.</a> Eur J Immunol. 43 (10), 2626-2637 (2013).</li>
<li>Selvanantham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+and+Nod2+enhance+TLR-mediated+invariant+NKT+cell+activation+during+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nod1 and Nod2 enhance TLR-mediated invariant NKT cell activation during bacterial infection.</a> J Immunol. 191 (11), 5646-5654 (2013).</li>
<li>Becavin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+widely+used+Listeria+monocytogenes+strains+EGD%2C+10403S%2C+and+EGD-e+highlights+genomic+variations+underlying+differences+in+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity.</a> MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).</li>
<li>Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unit+9B.2+Listeria+monocytogenes%3A+cultivation+and+laboratory+maintenance%2C+Chapter+31B%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unit 9B.2 Listeria monocytogenes: cultivation and laboratory maintenance, Chapter 31B.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2013).</li>
<li>Conour, L. A., Murray, K. A., Brown, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+animals+for+research--issues+to+consider+for+rodents+and+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Preparation of animals for research--issues to consider for rodents and rabbits.</a> ILAR J. 47 (4), 283-293 (2006).</li>
<li>Obernier, J. A., Baldwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+an+appropriate+period+of+acclimatization+following+transportation+of+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals.</a> ILAR J. 47 (4), 364-369 (2006).</li>
<li>BD LSR II User's Guide. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf">http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf</a> (2007).</li>
<li>Flowjo Tutorial. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://www.flowjo.com/tutorials">http://www.flowjo.com/tutorials</a> (2016).</li>
<li>Zhang, M. A., Ahn, J. J., Zhao, F. L., Selvanantham, T., Mallevaey, T., Stock, N., Correa, L., Clark, R., Spaner, D., Dunn, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonizing+peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+%28PPARalpha%29+activity+enhances+Th1+immunity+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antagonizing peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) activity enhances Th1 immunity in male mice.</a> J. Immunol. , (2015).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric+estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Amer+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Nonparametric estimation from incomplete observations.</a> J Amer Stat Assoc. 53, 457-481 (1958).</li>
<li>Brown, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+CD28-mediated+signals+in+T+helper+subset+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Limited role of CD28-mediated signals in T helper subset differentiation.</a> J Exp Med. 184 (3), 803-810 (1996).</li>
<li>Czuprynski, C. J., Brown, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+difference+in+anti-Listeria+resistance+of+C57BL%2F6+and+A%2FJ+mice+is+not+eliminated+by+active+immunization+or+by+transfer+of+Listeria-immune+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The relative difference in anti-Listeria resistance of C57BL/6 and A/J mice is not eliminated by active immunization or by transfer of Listeria-immune T cells.</a> Immunology. 58 (3), 437-443 (1986).</li>
<li>Busch, D. H., Vijh, S., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+infection+with+Listeria+monocytogenes%2C++Chapter+19%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Animal model for infection with Listeria monocytogenes, Chapter 19.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li>
<li>Mekada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+differences+among+C57BL%2F6+substrains%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58 (2), 141-149 (2009).</li>
<li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+microbiota+direct+the+differentiation+of+IL-17-producing+T-helper+cells+in+the+mucosa+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Specific microbiota direct the differentiation of IL-17-producing T-helper cells in the mucosa of the small intestine.</a> Cell Host Microbe. 4 (4), 337-349 (2008).</li>
<li>Bou Ghanem, N. E., Myers-Morales, T., Jones, G. S., D'Orazio, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+mice+via+ingestion+of+contaminated+food%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Oral transmission of Listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food.</a> J Vis Exp. (75), e50381(2013).</li>
<li>Lecuit, M., Dramsi, S., Gottardi, C., Fedor-Chaiken, M., Gumbiner, B., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+in+E-cadherin+responsible+for+host+specificity+towards+the+human+pathogen+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes.</a> Embo J. 18 (14), 3956-3963 (1999).</li>
<li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129 (5), 891-902 (2007).</li>
<li>Brunt, L. M., Portnoy, D. A., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presentation+of+Listeria+monocytogenes+to+CD8%2B+T+cells+requires+secretion+of+hemolysin+and+intracellular+bacterial+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Presentation of Listeria monocytogenes to CD8+ T cells requires secretion of hemolysin and intracellular bacterial growth.</a> J Immunol. 145 (11), 3540-3546 (1990).</li>
<li>Muraille, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+in+vivo+dendritic+cell+activation+by+live+versus+killed+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distinct in vivo dendritic cell activation by live versus killed Listeria monocytogenes.</a> Eur J Immunol. 35 (5), 1463-1471 (2005).</li>
<li>Datta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+with+irradiated+Listeria+induces+protective+T+cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Vaccination with irradiated Listeria induces protective T cell immunity.</a> Immunity. 25 (1), 143-152 (2006).</li>
<li>Geginat, G., Schenk, S., Skoberne, M., Goebel, W., Hof, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+of+direct+ex+vivo+epitope+mapping+identifies+dominant+and+subdominant+CD4+and+CD8+T+cell+epitopes+from+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel approach of direct ex vivo epitope mapping identifies dominant and subdominant CD4 and CD8 T cell epitopes from Listeria monocytogenes.</a> J Immunol. 166 (3), 1877-1884 (2001).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Listeria+monocytogenes+as+a+live+vaccine+vehicle+for+the+induction+of+protective+anti-viral+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recombinant Listeria monocytogenes as a live vaccine vehicle for the induction of protective anti-viral cell-mediated immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (9), 3987-3991 (1995).</li>
<li>Foulds, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+CD4+and+CD8+T+cells+are+intrinsically+different+in+their+proliferative+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: CD4 and CD8 T cells are intrinsically different in their proliferative responses.</a> J Immunol. 168 (4), 1528-1532 (2002).</li>
</ol>

공개할 이해 상충이 없습니다.

여기에서 우리는 L.의 EGD 균주가 남성 또는 여성 C57BL / 6J 마우스에서 25 모노 사이토 기본 실험 감염을 수행하는 방법에 대한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 생체 (31)에 타고난 및 적응 림프구에 의한 IFN-γ 생산에 새로운 작은 분자 IS001의 효과를 연구하기위한 목적으로 설립되었다. 세균 통관과 생존 후 감염을 모니터링함으로써, 통찰력 IFN-γ의 이러한 변화는 감염을 제어 할 수있는 호스트의 능력에 영향을 방법으로 획득 하였다. 의정서에 중요한 고려 사항 연구의이 유형의 디자인에서 중요한 고려 사항은 각 실험 적절히 구동하고 적절하게 제어 될 수 있다는 것이다. 때문에 감염에 대한 면역 반응의 생물학적 변화에 (그림 4 참조 6), 그것은 N = 4 것이 좋습니다 - 그룹 당 5 ...

IFN-γ는 세포 내 병원체에 대한 면역 매개 종양 성장을 제어하기위한 5 중요 사이토킨이다. 박테리아 내성이 사이토 카인의 중요성은 IFN-γ의 신호 전달 경로에서의 돌연변이는 마이코 박테리아 및 살모넬라 6 감염에 매우 민감하여 인간 관찰에 분명하다. 마찬가지로, 마우스, IFN-γ 또는 L.는 10, 11 모노 사이토 겐을 포함 마이코 박테리아 7-9 및 기타 세포 내 병원균에 저항의 IFN-γ 수용체 전시 결함 중 하나에 슈만 편모충 주요 12, 살모넬라 티피 무리 움 (13), 특정 바이러스 (11) 결핍. 맞서 싸우는 병원균뿐만 아니라, IFN-γ 종양 (14)에 대한 호스트 방어에 중요한 역할을한다. IFN-γ의 높은 생산은 감염 또는 암의 맥락에서 유용하지만, 이러한 사이토 카인의 생산을 장기간 t 연계 된비 - 비만 당뇨 마우스 모델 (18) 전신성자가 면역 15-17의 발전 형 가속도 O I 당뇨병. IFN-γ의 주요 소스는 NK 세포, NKT 세포, γδ T 세포, T 헬퍼 1 (받은 Th1) 세포 및 세포 독성 T 림프구 (CTL)를 포함 5,19,20. IFN-γ에 의해 선천성 및 후천성 면역을 모두 향상 (1)를 조절 (3) 강화 식세포, (2) 항원 제시 세포상의 공동 - 자극 분자의 발현을 증가시키는 주요 조직 적합성 복합체 (MHC) 클래스 I 및 II 발현 식세포 작용 및 염증성 사이토 카인의 생산 및 살균 요인 (예를 들면, 일산화 질소 및 활성 산소 종), (4) (5) (면역 글로불린 항체 클래스 스위칭을 촉진하는 Th1 효과기 세포로의 나이브 CD4 + T 세포의 분화를 촉진 IG) 2a 및 마우스에서 IgG3 ()는 (6) 케모카인의 생성을 유도하는 난 부위로 면역 세포를 모집nfection 및 (7) NK 세포 및 CTL 반응을 향상 5,19. 병원균과 종양 호스트 응답 IFN-γ의 결정적인 중요성을 감안할 때, 재조합 IFN-γ는 (19에서 검토) 다양한 감염과 악성 종양에 대한 치료로 테스트되었습니다. IFN-γ 또는받은 Th1 촉진 사이토킨 인터루킨 -12 (IL-12)의 전신 투여는 부작용과 연관 투여 량 관련 독성 (19, 21)가되기 때문에, 의한 IFN-γ 생산을 증가시키기 위해 대안적인 전략의 개발에 대한 관심이있다 면역 세포. 새로운 바이오 작은 분자의 개발은 에이전트가 면역 반응 중 IFN-γ의 생산을 증가 여부를 테스트하기 위해 생체 검사 도구의 필요 여부이는 동물의 생존의 증가로 의미있는 생물학적 효과로 변환합니다. 그램 양성 세균 리스테리아 모노 사이토 겐 쥐의 실험 감염에 대한 쓸모있는 모델이었다세포 내 병원균 1,22에 대한 호스트 면역 IFN-γ의 역할을 해독. 병원균 정맥 또는 복강 (IP)와 쥐의 감염은이 일 포스트 (3) 사이에 4를 발생하는 비장의 피크 세균 부하 주민 대식 세포 및 간세포에 의해 내면화 될 비장과 간,에 박테리아의 급속한 보급에 이르게 감염 1,3,22. NK 세포에 의한 IFN-γ의 생산은 대 식세포의 활성화 및 병원체 3에 대한 초기 저항 중요하다; 그러나 높은 전염성 투여 량, IFN-γ의 생산은 병원균 통관 (23)에 유해 할 수 있습니다. NKT 세포는 병원균 2,24 초기 제어시 비장, 간에서 IFN-γ의 공급원이며, 이러한 제조는 NK 세포를 포함하는 다른 2 종류의 세포에 의한 IFN-γ 생산을 증폭하는 것으로 나타났다. 이상적 상대있는 반면, 적응 형 T 림프구 이상 작용, CD8 + T 세포큘라은 병원균의 간극을 매개하고 다시 감염 1,4,22에 대한 보호를 제공하기위한 중요하다. 이 감염 모델 (1 검토) 이유에서 연구자 매력적인왔다. 우선, 병원체 감염이 높은 재현성과 강한받은 Th1 세포 성 면역 반응을 유도한다. 둘째, 치사 감염시 세균 부하가 쉽게 측정 될 수있는 간 및 비장에서 농축된다. 셋째, 병원체 안전하게 바이오 레벨 2 (BSL2) 조건 하에서 처리 될 수있다. 넷째, 생물 및 면역 반응이 광범위하게 특성화되었다 생성있다. 마지막으로, 돌연변이와 유전자 변형 종자의 다양한 사용할 수 있습니다 개발되었다. L.의 EGD 균주와 C57BL / 6J 마우스의 접종을위한 기본 프로토콜은 여기에 25 모노 사이토 겐입니다 설명 및 IFN 측정 - γ 다시NK, NKT, 적응 림프구 후 감염에 의해 sponses. 또한 설명 치사 감염 후에 박테리아 비장, 간 부하를 측정하고, 병원체의 변형 LD 50 복용량 감염 후 생존 연구를 수행하는 방법이다. 마지막으로, 대표 데이터는이 프로토콜은 감염 L. 모노 사이토 겐에서 IFN-γ 반응과 마우스의 생존에 대한 새로운 치료법의 효과를 스크리닝하기 위해 사용될 수 있는지 나타낸다.

<table><tbody><tr><td>뇌 심장 주입 국물, 변형</td><td>BD</td><td>299070</td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>모든 브랜드가 적절해야</td></tr> 합니다<tr><td>: 염화암모늄(NH3Cl)</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr>. <tr><td>KHCO3</td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td>. <td></td><td></td></tr><tr><td>Na2EDTA</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr>. <tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>22400089</td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다.</td></tr><tr><td>소 태아 혈청&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12483</td><td>사용 전에 56°C에서 불활성화; C 30 분 동안</td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>Gibco</td><td>25030</td><td>모든 브랜드가 적절해야합니다</td></tr><tr><td>- 비 필수 아미노산</td><td>Gibco</td><td>11140</td><td>모든 브랜드가 적절해야합니다</td></tr><tr><td>페니실린 / 스트렙토 마이신</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>모든 브랜드가 적절해야합니다</td></tr><tr><td>GolgiStop 단백질 수송 억제제 (Monensin 포함)</td> <td>BD</td><td>554724</td><td>사용 4 &mu; l 6 ml 세포 배양</td></tr><tr><td>16 % Paraformaldehye</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15710</td><td>ddH 2 O 또는 1x PBS</td></tr><tr><td>10x Perm / Wash 버퍼</td><td>BD</td><td>554723</td><td>ddH 2 O</td></tr><tr><td>Fc 블록, 안티 마우스 CD16 / CD32 정제</td><td>eBioscience</td><td>14-0161</td><td>희석 1:50</td></tr><tr><td>고정 생존도 염료 eFluor 506</td><td>eBioscience</td><td>65-0866</td><td>Dilute 1:1,000 (우리는 또한 Molecular Probes의 생존력 염료를 사용했습니다)</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD4-PE-Cy5 (GK1.5)</td><td>eBioscience</td><td>15-0041</td><td>제조업체는 특정 테스트 크기를 권장하지만 사용하기 전에 적정해야 합니다.</td></tr><tr><td>안티 마우스 CD8-FITC (53-6.7)</td><td>eBioscience</td><td>11-0081</td><td>제조업체는 특정 테스트 크기를 권장하지만 사용 전에 적정해야 합니다.</td></tr><tr><td>PBS57/mCD1d tetramer-APC</td><td>NIH Tetramer Core Facility</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>anti-Mouse TCR&beta;-PE-Cy7 (H56-597)</td><td>eBioscience</td><td>25-5961</td> 제조업체로부터 선물로 획득 제조사<td>는 특정 테스트 크기를 권장하지만, 이는 사용 전에 적정해야 합니다.</td></tr><tr><td>안티-마우스 NKp46-APC-eFluor780 (29A1.4)</td><td>eBioscience</td><td>47-3351</td><td>제조업체는 특정 테스트 크기를 권장하지만 사용하기 전에 적정해야 합니다.</td></tr><tr><td>안티-마우스 CD45 PE-Cyanine7 (30-F11)</td><td>eBioscience</td><td>25-0451</td><td>제조사는 특정 크기의 테스트를 권장하지만, 이는 사용 전에 적정해야 합니다.</td></tr><tr><td>안티 마우스 IFN 감마-PE (XMG1.2)</td><td>eBioscience</td><td>12-7311</td><td>제조업체는 특정 테스트 크기를 권장하지만 사용하기 전에 적정해야 합니다.</td></tr><tr><td>OneComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-1111</td><td>염색당 1방울 사용</td></tr><tr><td>마우스 IFN 감마 ELISA 키트</td><td>eBioscience</td><td>88-7314</td><td>배양액 내 인터페론 감마를 측정하는 데 사용</td></tr> 배<tr><td>양</td><td></td><td></td>용 상등액 50ml 통풍관 <td>박테리아 배양에 사용되며 모든 브랜드가 적합해야 합니다</td></tr>. <tr><td>1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브</td><td></td><td></td><td>가 적절해야 합니다. 모든 브랜드가 적절해야 합니다.</td></tr><tr><td>박테리아 페트리 접시</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>2ml cyrovials</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드는</td></tr><tr><td>UV 분광계</td><td></td><td></td>가 적절해야 합니다 <td>모든 브랜드는 적절한</td></tr><tr><td>안전 엔지니어링 바늘</td><td></td><td></td>이어야 합니다 <td>모든 브랜드는 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson laboratories</td><td>Stock#000664</td><td>Order for 7 주 도착</td></tr><tr>오염 <td>제거를 위한</td><td>표백제</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td></td><td></td><td>오염 제거를 위해</td></tr><tr><td>유리 구슬</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td></td><td></td><td>로터, 양동이, 양동이 덮개.</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기는</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>멸균 글리세롤</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td></td><td></td><td>은 모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>피펫</td><td></td><td></td><td>은 모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>수술 기구</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드는 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>70 미크론 스트레이너</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>3ml 주사기</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>피펫 건</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>여과 장치</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td></td><td></td>는 <td>ddH2O에서 1-9로 희석해야 합니다. 모든 브랜드가 적절해야 합니다.</td></tr><tr><td>혈구분석기</td><td></td><td></td><td>모든 브랜드는 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>둥근 바닥 플레이트</td><td></td><td></td><td>는 모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>FACs 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>BD LSR II</td><td>BD</td><td></td><td>모든 유세포 분석기는 형광을 구별하기 위해 적절한 레이저 구성 및 필터 세트가 있는 수집에 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Flowjo 소프트웨어</td><td>Treestar</td><td></td><td>데이터 분석에 사용됩니다. 다른 유형의 데이터 분석 소프트웨어도 적합합니다.</td></tr><tr><td>멀티채널 피펫터(0 - 300 &마이크로; l)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>유세포 분석 염색 중 세포 세척 및 항체 추가에 사용</td></tr><tr><td>아세트산</td><td></td><td></td><td>유리 구슬 세척에 사용되며 모든 브랜드가 적절해야 합니다</td></tr><tr><td>Microbank Bacterial Preservation System</td><td>Pro-lab 진단</td><td></td><td>박테리아의 장기 보관을 위한 글리세롤 재고의 대안으로 사용</td></tr></tbody></table>

와 실험 감염<em&gt; 리스테리아</em&gt; 호스트 인터페론-γ 응답 유학을위한 모델로

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. 모노 사이토 인간 식품 매개 질환의 원인이되는 그람 양성 세균이다. 이 병원체와 쥐의 실험 감염은 세포 내 병원체에 대한 숙주의 면역 타고난 및 적응 면역 세포와 특정 사이토 카인의 역할에 매우 유익하고있다. 리스테리아 모노 사이토 겐과 치사 감염시 타고난 세포에 의한 IFN-γ의 생산은 대 식세포 및 병원균 1-3의 초기 제어 활성화를위한 중요합니다. 또한, 적응 메모리 림프구에 의한 IFN-γ 생산에 재감염 4 선천성 세포의 활성화를 프라이밍 중요하다. L. 따라서 감염 모델 모노 사이토 겐 IFN-γ 생산을 증가시키기 위해 설계된 새로운 치료법은 생체 내 IFN-γ 반응에 영향을 미치는 등과 같은 세균 간극을 증가 또는 마우스의 생존을 개선 생산적 생물학적 효과가 있는지 여부를 조사하기위한 훌륭한 도구 역할 ...에서감염. 리스테리아 모노 사이토 겐의 EGD 균주 C57BL / 6J 마우스의 복강 내 감염을 수행하고, 유동 세포 계측법에 의한 NK 세포, NKT 세포, 및 적응 림프구에 의한 IFN-γ 생산을 측정하는 방법의 기본 프로토콜이 여기에서 설명한다. (1) 성장하고 접종에 대한 박테리아를 준비 (2) 엔드 포인트로 비장과 간, 그리고 (3) 측정 동물의 생존에 박테리아 부하를 측정 : 또한, 절차에 설명되어 있습니다. 대표 데이터는이 감염 모델 L. 모노 사이토 겐이 감염 마우스의 생존에 대한 IFN-γ 반응의 특정 제제의 효과를 테스트 할 수있는 방법을 예시하기 위해 제공된다.

그림 3은 병원균의 10 5 CFU와 24 시간 후 감염에 비장 NK와 NKT 세포에서 IFN-γ의 염색 세포 계측법 몇 가지 일반적인 흐름을 제공합니다. 이 도면은 또한 표 2에 기재된 염색 패널 게이팅 전략을 예시한다. 그림 4는 105 CFU 리스테리아 모노 사이토 겐에 감염된 수컷 마우스는 PPARα 길항제 IS001 또는 차량 제어로 처리 한 실험에서 얻을 수 있었다 몇 가지 대표적인 데이터를 표시 한 후 24 시간 후 NK와 NKT 세포에서 IFN-γ에 대한 분석 . 이 그림은 IS001 치료는 병원체와 감염 후 IFN-γ의 NKT 세포에 의한 반응,하지만 NK 세포를 밀어 것을 알 수있다. 그림 5는 열 살해 아빠와 다시 자극 생체 후 7 일 후 감염...

이 프로토콜은, 리스테리아의 EGD 균주 (L. 모노 사이토 겐)을 C57BL / 6J 마우스에 접종하고, 자연 살해 (NK) 세포, 자연 살해 T (NKT) 세포에 의한 인터페론 - γ (IFN-γ) 응답을 측정하는 방법을 설명 적응 T 포스트 감염 림프구. 이 프로토콜은 또한 병원균의 수정 된 LD (50) 투여로 감염 후 쥐에서 생존 연구를 수행하는 방법에 대해 설명합니다.

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

본 프로토콜의 전반적인 목적은 C57 blacksix 마우스를 배양하고 listeria monocytogenes의 EGG 균주를 감염시킨 후, 세균 부하, 인터페론 감마 반응, 그리고 이 병원체에 의한 감염 시 생존율 및 반응을 측정하는 것입니다. 본 프로토콜은 연구자가 세균 감염 후 인터페론 감마 반응 및 동물 생존에 영향을 미치는 약물이나 유전자를 스크리닝하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실험실에서 비교적 간단하게 구축할 수 있다는 점입니다.박테리아 배양 경험이 거의 없는 분들도 가능합니다. 또한 저희 연구실의 대학원생인 Jennifer Ahn이 해당 절차를 시연할 예정입니다. 먼저 멸균된 피펫 팁을 실온에서 해동된 L monocytogenes EGG 균주의 글리세롤 스톡에 담그는 것으로 시작하십시오.그 후 즉시 팁을 brain heart infusion 또는 BHI 플레이트의 일부 구역에 대고 앞뒤로 도말합니다. 이것이 1차 도말입니다. 플레이트를 90도 회전시킨 다음, 새로운 피펫 팁으로 1차 도말 부위를 가로질러 긁어내어 균주를 플레이트의 다음 4분지 구역으로 확산시킵니다.이것이 2차 도말입니다. 그다지, 플레이트의 세 번째 구역으로 2차 도말 부위를 회전하며 펼쳐 3차 도말을 수행합니다. 이제 플레이트를 뒤집어 37 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다.16~24시간 후에 마지막 스트리킹 영역에서 단일 균일 콜로니가 관찰되어야 합니다. 콜로니가 나타나면, 멸균된 통기성 50 milliliter 튜브에 멸균된 BHI broth 10 milliliters를 분주하고, 멸균된 피펫 팁을 사용하여 플레이트에서 L monocytogenes 콜로니 하나를 broth로 옮깁니다. 접종된 broth를 궤도 진탕 배양기에서 37 degrees celsius, 225 rotations per minute로 OD600이 1이 될 때까지 하룻밤 동안 배양합니다.실험용 L monocytogenes 감염 접종액을 준비하기 위해, 생물안전작업대 내에서 BHI 배지 튜브에 하룻밤 배양한 배양액 100 µL를 접종합니다. 원하는 OD600 값에 도달할 때까지 37 °C에서 진탕 배양한 후, 배양액 내용을 멸균 원심분리 튜브로 옮겨 원심분리합니다. 그리고 표백제가 담긴 트랩 플라스크에 연결된 진공 흡입기를 사용하여 상층액을 흡입하여 제거합니다.동일한 원심분리 조건에서 PBS로 펠렛을 두 번 세척합니다. 두 번째 세척 후, 박테리아를 PBS에 재현탁하고 적절한 농도로 희석합니다. 이는 각 마우스에 원하는 CFU를 200 µL 부피로 투여하기 위함입니다.다음으로, 박테리아가 균일하게 분포되도록 멸균 피펫 팁으로 현탁액을 충분히 섞습니다. 그런 다음 25 gauge 바늘이 장착된 1 mL 안전 공학 시린지에 접종액 200 µL를 흡입합니다. 이제 덜 사용하는 손으로 마우스의 어깨 주변 느슨한 피부를 잡아 고정합니다.그리고 각 동물마다 새로운 바늘과 주사기를 사용하여, 방광을 피하기 위해 정중선 바로 가측의 하복부 사분면에 접종액 200 µL 전체를 주입합니다. 최대 감염 세균 부하를 측정하기 위해, 감염 후 3일째에 실험 동물의 사지를 해부판 위에서 앙와위로 고정합니다. 그리고 70 % 에탄올로 피부를 소독합니다.멸균된 tough cut 가위로 가슴부터 서혜부까지 절개합니다. 그 다음 서혜부 중앙에서 각 무릎 방향으로, 그리고 가슴 중앙에서 각 팔꿈치 방향으로 절개합니다. 둔성 박리를 통해 피부를 젖힌 후, 25 gauge 바늘로 피부를 고정하여 개방합니다.70% 에탄올로 근육층을 추가로 소독합니다. 그 다음 멸균된 미세 가위를 사용하여 복벽의 정중선 절개를 시행합니다. 포셉을 사용하여 검상돌기를 잡습니다.검상돌기에서 시작하여 양측으로 가측 방향으로 복벽을 절개합니다. 늑골을 따라 횡격막 바로 아래까지 절개하면 간이 나타납니다.다음으로, 멸균 가위를 사용하여 한쪽 엽에서 약 100밀리그램의 조각을 절취합니다. 이 조직을 0.2~0.3그램의 1.5~2밀리미터 산 세척 멸균 유리 구슬이 들어 있고 미리 무게를 잰 1.5밀리리터 마이크로 원심분리 튜브에 넣습니다. 그리고 핀셋을 사용하여 복강 좌측의 장기들을 조심스럽게 밀어내어 비장을 확인합니다.포셉을 사용하여 비장을 조심스럽게 잡고, 주변 결합 조직을 절제하여 복강에서 장기를 분리합니다. 비장을 간과 다른 튜브에 넣고, 얼음이 담긴 누출 방지 용기에 조직을 넣어 실험실로 옮깁니다. 비드 밀 균질기(bead mill homogenizer)를 사용하여 30 hertz 주파수로 3분 동안 튜브를 흔들어 줍니다.그런 다음, 0.1% Triton X 100이 포함된 PBS에서 균질액의 10배 희석 계열을 준비합니다. 다음으로, 멸균 스프레더를 사용하여 각 희석된 균질액 100 µL를 BHI 한천 배지에 도말합니다. 그리고 해당 플레이트를 37 °C 배양기에 넣고 하룻밤 동안 배양합니다.플레이트당 콜로니 수가 최대 300개까지 포함된 플레이트만 유지합니다. 각 플레이트의 콜로니 수를 측정합니다. CT8 T 세포의 인터페론 감마 반응에서 CD4를 측정하려면, 방금 시연한 것과 같이 병원체 0.2 CFU를 감염시킨 마우스에서 비장을 적출합니다.비장을 처리하여 단일 적혈구 생존 현탁액으로 만듭니다. 그리고 펠렛을 FCS가 포함된 완전 RPMI 배지에서 4 × 10⁶ cells/mL 농도로 재현탁합니다. 다음으로, 24-웰 플레이트의 각 웰에 1 mL의 세포를 분주하고, 동일한 부피의 해동된 열처리 사멸 L. monocytogenes를 넣은 후, 냉각된 배양물을 37 °C 인큐베이터에 넣습니다.20시간 후, 웰에 밀리리터당 0.66 µL의 단백질 수송 억제제를 첨가합니다. 그리고 플레이트를 다시 인큐베이터에 넣습니다. 4시간 후, 생물안전작업대(biosafety cabinet)에서 500 µL의 배양 상층액을 수집하고, 이후 ELISA를 통한 인터페론 감마(interferon gamma) 측정을 위해 샘플을 -80 °C에서 냉동 보관합니다.그 다음, PBS로 웰을 세척하고 세척액을 수집된 세포와 함께 모아 유세포 분석 염색 및 분석을 위해 단일 멸균 15 milliliter 튜브로 세포를 옮깁니다. 박테리아 부하의 정점은 감염 후 2~3일째에 비장에서 나타납니다. 그리고 감염 전 PPAR Alpha 길항제를 투여하면 이 부하가 급격히 감소합니다.감염 후 7일째에, 비장의 CD4 양성 및 CD8 양성 T 세포를 열처리 사멸시킨 병원체로 ex vivo에서 재자극하면, 유세포 분석법으로 검출되는 CD4 양성 및 CD8 양성 세포로부터 양성의 인터페론 감마 반응이 유도됩니다. 감염 전 PPAR alpha 길항제로 처리하면 CD4 및 CD8 세포의 인터페론 감마 반응이 증강됩니다. 또한, PPAR alpha 길항제 처리는 병원체의 LD50 용량 감염 후 생존율을 높이며, 이는 인터페론 감마 반응을 조절하는 신약이 감염 후 동물 생존에 미치는 영향을 조사하는 데 이 모델이 유용함을 보여줍니다.숙달된 후 이 프로토콜의 모든 절차를 적절히 수행하면 몇 주 안에 원하는 데이터를 생성할 수 있습니다. 이 기술은 모델 항원을 발현하는 listeria monocytogenes 균주를 마우스에 감염시키고, 이러한 항원에 특이적인 MAC class one 및 two tetramery 시약을 사용하여 더욱 발전시킬 수 있습니다. 이를 통해 감염 후 T 세포의 확장을 측정할 수 있습니다.이 기술은 개발 이후 세포 내 병원체에 대한 숙주 면역에서 인터페론 감마의 역할을 규명하는 데 중요한 모델이 되었습니다. 이 영상을 시청하고 나면 C57 blacksix 마우스를 배양하고 listeria monocytogenes를 감염시키는 방법, 그리고 감염에 따른 세균 수치와 인터페론 감마 반응을 측정하는 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.Listeria monocytogenes를 이용한 실험은 임산부, 영유아 또는 노인과 같이 면역력이 저하된 개인에게 위험할 수 있음을 유의하십시오. 따라서 해당 병원균은 반드시 생물 안전 등급 2(biosafety level two) 조건 하에 면역 능력이 정상인 사람만 취급해야 합니다.

experimental-infection-with-listeria-monocytogenes-as-model-for

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

리스테리아 monocytogenes는 생쥐에서 세균을 세포에 면역 반응과 유전 자화율을 연구를위한 모델 생물이다. 이 방법은 박테리아 부하를 측정하고 리스테리아 감염으로 인한 면역 세포의 변화를 결정하는 외과 분석을위한 생쥐의 간 및 비장의 단일 셀 suspensions를 생성하는 하나 있습니다.

감염된 마우스에 세균 하중과 면역 응답 측정 리스테리아 monocytogenes</em

출처: Seman, B. G. 외 그람 음성 세균성 패혈증의 신생아 영상 모델. J. Vis. 경험 (2020)이 영상은 캡슐화된 생물발광 박테리아를 이용한 신생아 마우스 모델을 시연하여 전신 감염을 연구합니다. 신생아 새끼들은 고용량 또는 저용량 박테리아 현탁액을 주사한 후 산후 관리를 위해 어미에게 돌려보냅니다. 캡슐화된 박테리아는 조기 면역 검출을 피하고 전신적으로 퍼지며, 발광 영상을 통해 시간이 지남에 따라 시각화됩니다. 이 모델은 신생아 쥐에서 감염 진행을 비침습적으로 추적할 수 있게 합니다.

캡슐화된 생물발광 박테리아를 이용한 신생아 쥐 감염 모델링

출처: Radulovic, K. 외 장벽 돌파 후 미생물 유래 산물이 유입되는 모습을 모방하기 위해 쥐에 지폴리당을 주입하는 것. J. Vis. 경험 (2018)이 영상은 복강 내 주사를 통해 전신 염증을 유도하기 위해 쥐에게 지다당류(LPS)를 주입하는 단계별 절차를 시연합니다.

전신 면역 반응 연구를 위한 쥐 내 박테리아 지방다당류 내 주사

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

In Vitro Stimulation of Mouse Splenocytes with Heat-Killed Listeria monocytogenes

이 비디오는 쥐의 비장에서 IFN-γ(in situ interferon-gamma) 분비를 시각화하는 이미징 방법을 보여줍니다. 세균 감염 및 T 세포 및 자연 살해 세포 내부에 IFN-γ 축적 유도 후 비장은 마우스에서 채취됩니다. 조직 절편을 얻으면 세포 내부의 IFN-γ을 시각화하기 위해 면역염색을 수행합니다.

쥐 림프구 기관에서 인터페론-감마 분비 식별을 위한 분석

이 비디오는 리스테리아 모노사이토제네스에 감염된 관류된 쥐 뇌의 감염성 박테리아 부하를 정량화하는 방법을 보여줍니다.

리스테리아 모노사이토제네스 감염에 따른 쥐 뇌의 박테리아 집락화 평가

이 논문은 사용하는 마우스의 경구 감염에 대한 새로운 방법을...

경구 전송<em&gt; 리스테리아</em&gt; 오염 된 음식의 섭취를 통해 마우스의

리스테리아 균은 자주 세포 내 기생의 연구를위한 주요 모델로 사용되는 그람 양성 세균 병원체이다. 후반 L. 이미징 소 간섭 RNA 화면의 문맥 내 감염 단계 모노 사이토 겐은 표적 숙주 세포의 세균 감염에 필요한 세포 경로의 글로벌 학습을 허용한다.

세균성 병원체에 의해 세포 감염을 조사하기 위해 InlC 분비 이미징<em&gt; 리스테리아</em

우리 둘 다 생체 외에서 그리고 vivo에서 감염 분석 호스트 인코딩 요인의 활동을 분석 하는 데 사용할 수 있습니다 설명 합니다.

셀룰러 및 Organismic 수준 호스트 응답 세균성 병원 체 프로브를 사용 하 여

여기서, 우리는 뮤린 이차 림프기관에서 사이토카인 인터페론 감마를 분비하는 세포의 내부 국소화를 가시화하는 간단한 공초점 이미징 방법을 기술한다. 이 프로토콜은 다양한 조직에서 다른 사이토카인의 시각화를 위해 확장될 수 있다.

리스테리아 단세포 유전자 감염 다음 마우스 비장에서 시투 인터페론 감마 생산의 이미징

배우세요 C57BL/6J 마우스에 Listeria monocytogenes를 감염시키고 간편한 실험실 기법으로 NK 세포, NKT 세포, 적응성 T 림프구의 인터페론-γ 반응을 측정하는 방법. 이 프로토콜은 세균 감염 후 면역 반응과 동물 생존에 영향을 미치는 물질이나 유전자를 선별하는 데 도움을 줍니다.

와 실험 감염

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