2016년 12월 18일
조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 다양한 뇌 질환의 중증도, 임상적 병리학적 병기 및 반구 분포를 평가하기 위해 인간 뇌의 양쪽 반구에서 대칭적으로 절개된 일련의 일정한 대뇌 영역을 체계적으로 수집하고 분석하는 것입니다. 이 방법은 신경병리학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 자세한 임상 병리학 및 영상 병리학적 상관관계를 위해 정성적 및 정량적 신경병리학적 데이터를 체계적으로 조직화한 컬렉션을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 병리학적 과정 자체와 관련된 관련 데이터뿐만 아니라 각 대뇌 반구의 조직기능적 특수 측면을 생성하는 것입니다.
텍스트 프로토콜에 따라 사후 인간 뇌 조직을 고정한 후, 전두엽이 조사자의 반대쪽을 향하도록 하여 뇌를 평평한 표면에 놓습니다. 전체 대뇌의 모든 피질 gyri 및 sulci를 완전하고 명확하게 시각화할 수 있도록 뇌의 방향을 지정합니다. 조직에서 수막 기형, 거시적 반구 비대칭, 거시적 조직 충성도, 선천적 기형, 혈관 이상 또는 기타 이상 또는 대뇌 표면의 비정상적인 징후가 있는지 검사합니다.
전두엽이 조사자로부터 멀어지는 방향을 향하고 반구의 표면적인 측면이 조사자를 향하고 있는 상태에서 가능한 거시적 이상을 문서화하고 가능한 임상, 신경, 해부학적 및 절단 후 고려 사항을 설명하는 데 필요한 만큼 많은 디지털 사진을 촬영합니다. 전체 피질 표면을 캡처하기 위해 뇌에 수직으로 디지털 사진을 찍습니다. 그런 다음 잉크나 색깔이 있는 바늘을 사용하여 전후 중앙 피질 회랑을 표시합니다.
다음으로, 전두엽이 여전히 반대쪽을 향하게 한 상태에서 뇌를 180도 뒤집은 다음 뇌간 출구와 입구 수준에서 뇌혈관 시스템과 뇌 신경에 특히 주의를 기울이면서 뇌의 기저부를 주의 깊게 검사합니다. 후각구와 후각관은 극도로 연약하기 때문에 조직이 열상되지 않도록 특별한 주의를 기울여 관리하십시오. 피질과 뇌간 표면 전체를 포착하기 위해 뇌에 수직으로 디지털 사진을 찍습니다.
뇌의 기저부를 향하고 메스를 사용하여 뇌간의 윗부분에서 뇌간을 대뇌의 기저부에 최대한 가깝게 가로로 자릅니다. substantia nigra에 창백함이 있는지 주의 깊게 검사하고 다른 주변 구조물을 검사합니다. 오디오 녹음 장치를 사용하여 정상적인 뇌와 비교하여 뇌의 특이한 모습을 기록하십시오.
여기에서 왼쪽 반구와 오른쪽 반구의 후각구와 관이 해부되고 있습니다. 뇌를 다시 뒤집고 날카로운 칼을 사용하여 전두-후두 방향을 따라 내측 세로 열구를 통해 중앙의 말뭉치를 절단하여 두 반구를 분리합니다. 각 반구의 각 측면에 가능한 이상 징후가 있는지 검사합니다.
전체 피질 표면을 캡처하기 위해 뇌에 수직으로 사진을 찍는 것을 포함하여 필요한 만큼 사진을 찍은 후, 두 개의 반구를 전두엽이 연구자로부터 반대쪽을 향하고 중심이 닿도록 내측 측면에 평평하게 놓습니다. 날카로운 칼을 사용하여 전두극에서 시작하여 양쪽 대뇌 반구를 수동으로 자르고 반구의 전체 길이를 통해 후두극을 향해 이동하여 1cm 두께의 뇌 조직 슬라브 두 개를 얻습니다. 뇌 석판을 해부학적으로 조직되고 대칭적인 순서로 평평한 흰색 표면에 배치하고 사진 촬영을 위해 눈금자가 인쇄되어 있습니다.
직접적인 눈 검사 및 디지털 사진 촬영을 위해 슬래브의 코로나 표면이 보이는지 확인하십시오. 양쪽에 밀리미터 그리드가 인쇄된 절단 표면을 사용하여 뇌 구조, 크기 및 가능한 이상을 보다 정확한 방식으로 파악합니다. 코로나 표면이 보이는 상태에서 전체 피질 표면을 캡처하기 위해 수직으로 디지털 사진을 찍습니다.
정상적인 뇌와 비교하여 뇌의 특이한 측면을 기록하십시오. 다음으로, 날카로운 메스를 사용하여 확립된 각 대뇌 영역에 대한 작은 직사각형 뇌 조직 블록을 수동으로 절개합니다. 이 표에 설명된 제안된 대뇌 영역 수집 계획을 따릅니다.
AD는 Alzheimer's Disease Study(알츠하이머병 연구)를 나타내고, 16은 부검이 수행된 연도를 나타내고, 0001은 점진적 접근 표본 번호인 각 사례에 대해 무작위 또는 반 무작위 번호를 생성하여 히스토 카세트에 레이블을 지정하는 식별 코드를 만듭니다. 각 조직 블록을 별도의 히스토 카세트에 넣습니다. 앞에서 설명한 대로 전체 절단 뇌와 관련 히스토 카세트에 대해 설명한 만큼 많은 디지털 사진을 찍습니다.
완전한 사진 세트를 찍은 후 DNA 추출 및 유전자 분석을 위해 2-5mm 조직 조각을 펀칭합니다. 마지막으로, 뇌 조직 블록을 포함하는 모든 히스토 카세트를 이전에 사용된 것과 동일한 유형의 고정 용액에 담그고 텍스트 프로토콜에 따라 조직을 처리합니다. 이 표는 뇌 은행에 수집된 일련의 인간 뇌에 대해 수행된 대칭 이반구 뇌 절단 절차를 사용하여 몇 가지 예비 반량적 데이터를 설명합니다.
예비 데이터에 따르면 나이가 많은 피험자의 대부분의 대조 뇌는 실제로 베타-A 신경플라크와 타우-신경섬유다발에 양성이었으며, 베타-A 신경플라크의 불용성 수치는 오른쪽의 동일한 뇌 영역에 비해 좌측 내후각 피질과 해마에서 더 높았다. 일단 숙달되면, 이 기술은 고정된 뇌의 경우 한 시간 안에 완료할 수 있으며, 제대로 수행된다면 새로운 뇌의 경우 두 시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 제안된 절단 계획에 따라 정확한 인체 해부학적 지식을 기반으로 양쪽 반구에서 각 대뇌 영역을 수집한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.
이 절차에 따라 DNA, RNA 또는 단백질 추출과 같은 다른 방법을 수행하여 특정 뇌 질환의 특정 반구에 있는 특정 뇌 영역에서 특정 유전자의 활성화 수준이 무엇인지와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다. 확산될 때마다 이 기술은 신경병리학, 임상병리학 및 영상 병리학 상관관계 분야의 연구자들이 다양한 신경정신질환의 반구 관련 병리학적 측면을 탐구할 수 있는 길을 열어줄 것입니다. 이 비디오를 시청한 후에는 인간 두뇌의 양쪽 반구에서 특정 해부학적 영역을 수집하여 질병의 중증도, 질병의 병리학적 단계 및 다양한 신경 병리학적 과정의 반구 분포를 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
인간의 뇌를 다루는 것은 복잡한 신경 해부학적 회로를 가진 사람의 역사와 다른 질병을 가지고 일하는 것이며 칼날, 메스, 포르말린은 극도의 주의를 기울여 다루어야 한다는 것을 잊지 마십시오.
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본 프로토콜은 인간 뇌 병변의 반구 간 차이를 조사하기 위한 대칭적 양측 뇌 절단 절차를 설명합니다. 이는 임상 및 영상 병리적 상관관계를 강화하기 위해 정성적 및 정량적 신경병리 데이터 수집을 용이하게 합니다.
대칭적 양측 뇌 절단법은 양쪽 대뇌 반구에서 신경병리학적 데이터를 체계적으로 수집할 수 있게 하여, 신경정신과적 표적 검증 과정에서 기전적 위험 완화(de-risking)를 지원합니다. 이 접근 방식은 임상적 표현형을 반구 특이적 병리와 상관시키기 위해 해부학적으로 조직화된 조직을 제공함으로써 예측 신뢰도를 높이며, 중추신경계(CNS) 약물 개발의 초기 발굴 결정에 유용한 정보를 제공합니다.
본 방법은 가설 기반 연구를 위해 해부학적으로 제어된 인간 뇌 조직을 제공함으로써 타겟 검증부터 전임상 연구에 이르는 발견 연속체에 통합됩니다.