Name: 다발성 경화증의 마우스 모델에서 진보적 인 신경 학적 장애를 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: 학습하세요 TMEV 감염 마우스에서 로타로드 테스트를 활용한 진행성 신경학적 장애 측정 방법을. 이 최적화된 프로토콜은 다발성 경화증 치료제 효과를 객관적으로 평가하는 데 활용됩니다.

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저자는 이러한 연구에 사용된 쥐를 전문적으로 관리해 준 다트머스 대학의 CCMR(Center for Comparative Medicine and Research) 직원에게 감사를 표합니다. 저자는 또한 Emily Clough의 탁월한 행정적 지원을 인정합니다.

모든 동물의 작업은 다트머스 대학에서 의학 이젤 학교에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 검토 및 승인 프로토콜을 사용합니다. 1. 마우스 모델 <ol><li> TMEV 유발 탈수 초성 질환의 유도 <ol><li> 편안한 작업 공간으로 랙에서 4 ~ 6 주 된 여성 SJL / JHan 마우스가 들어있는 새장을 이동합니다. 임상 및 조직 학적 질환의 개별 평가를 할 수 있도록 (귀 태그 또는 귀 펀치 예) 쥐를 표시합니다. </li><li> 29 게이지 인슐린 주사기와 바늘로 PBS에서, TMEV 감염 재고 (PFU 2 × 10 6 플라크 형성 단위)의 30 μl를 그립니다. </li><li> 마취 가스 시스템을 준비 : 절차의 지속 기간에 대한 산소 및 이소 플루 란 충분한 양의 존재를 보장하기 위해 시스템을 확인한다. </li><li> / 분 1 L에 유량계를 켭니다. 유도 챔버에 동물을 배치하고 상부를 밀봉. 버지니아 켭니다3.5 %에 porizer 및 기댄 때까지 동물을 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 챔버에서 동물을 제거하고 적절한 마취를 보장하기 위해 발바닥을 곤란하게하여 마우스를 테스트합니다. 강한 핀치에 대한 응답의 부족은 충분한 마취를 나타냅니다. </li><li> 70 % 이소 프로필 알코올로 주사 부위를 청소합니다. </li><li> 자유 주입 (그림 1)에 의해 오른쪽 대뇌 반구에 TMEV 감염 주식의 30 μl를 주입한다. 주사 부위는 약 반쯤 눈과 귀 라인 사이에 단지 중간 선 꺼져 있습니다. </li><li> (- 5 분 ​​보통 3)의 유지 케이지 번 완전히 경고 및 모바일 마우스를 돌려줍니다. </li><li> 질병의 발전의 신속성에 따라 3-6 개월 TMEV 감염 후 방혈 또는 심장 관류 쥐를 안락사. </li></ol></li></ol> 2. 로타로드 (rotarod) 분석 <ol><li> 로타로드 (rotarod)기구 <ol><li> 이전 TMEV 감염 테스트 마우스는 그들을했습니다합니다기계 및 일반 기준 밸런스 조정 및 모터 제어를 평가하기. </li><li> -5 일에 적응 프로토콜 후 감염 (, 즉 5 일 TMEV 감염 전에 dpi로)를 시작합니다. </li><li> 생쥐들을 환경에 적응할 수 있도록하기 위해, 적어도 30 분 전에 로타로드 (rotarod)에 테스트 시험장에 적응하도록 허용한다. </li><li> 로타로드 (rotarod) 장치와 컴퓨터가 연결되어 있고 서로 (그림 2)에 연결되어 있는지 확인합니다. </li><li> 표 1에 기재된 바와 같이, -5 dpi의 트레이닝 프로토콜 파라미터와 로타로드 (rotarod)는 미리 설정된. </li><li> 날짜 및 식별 정보와 함께 작업 파일을 저장합니다. </li><li> 로타로드 (rotarod)에 인접 테이블에 랙에서 테스트 할 분대를 포함하는 케이지를 이동합니다. 마우스는 일반적으로 4 분대에서 시험한다. </li><li> 멀리 연산자에서 직면, 꼬리로 마우스를 들고로드에 놓습니다. 네 번째 마우스를 통해 초 동안 반복합니다. 마우스 FAL 경우모든 마우스 위치에까지 LS 또는 점프는 로타로드 (rotarod)에 그 차선에 다시 배치합니다. 어떤 마우스 조작에 직면 돌아서 경우 무시합니다. </li><li> 모든 쥐를로드 한 후 실험을 시작하기 위해 &quot;입력&quot;버튼을 누릅니다. 타이머가 자동으로 시작 관찰하고 각 레인의 표시에 분 (RPM) 당 회전. <ol><li> 각 동물을 막대에서 내려 가면 동물로드에 잔류 하강시로드의 속도뿐만 아니라, 시간의 지속 시간을 기록한다. 로드는 마지막 동물이로드 어셈블리에서 떨어졌다 때까지 회전 할 것입니다. </li></ol></li><li> 모든 마우스가 떨어진 후,로드에서 모든 배설물 boli과 소변을 제거하기 위해 조직을 사용합니다. 소변 및 대변 물질의 존재는 그립 마우스로드의 능력에 영향을 미칠 수있다. <ol><li> 3 분 휴식 후, 쥐에게 시험 제 다음 두 번째 및 준다. 하나의 시험 당 최대 시간은 240 초입니다. 각 테스트 하루 동안 3 시험의 총을 관리 할 수 ​​있습니다. </li></ol></li><li> 자신의 홈 케이지에 마우스를 반환하고 다시 랙을 반환합니다. 실험 세션의 끝에서, 기계 오프 모든 찌꺼기를 제거하기 위해 비누와 물로 세척 로타로드 (rotarod). </li><li> 에탄올 70 %와 깨끗한베이스 플레이트를 닦습니다. 소독 이산화 염소로 전체 시스템을 스프레이. </li><li> 4 - - 3 - 2, - 날 1 파이, 표 1에 설명 된대로 적절한 훈련 프로토콜 매개 변수와 로타로드 (rotarod)을 미리 설정하고, 반복 2.1.12에 2.1.2 단계를 반복합니다. </li><li> 기준선 측정을 얻은 후, TMEV 가진 쥐를 감염. 6 일 파이 회복 기간을 허용합니다. </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"> 실험 계획안 </td><td rowspan="2"> 시험 날 </td><td rowspan="2"> 회수 </td><td rowspan="2"> 시작 속도 (RPM) </td><td rowspan="2"> 최대속도 (rpm) </td><td> 가속 </td><td> 시도 </td><td> ITI </td></tr><tr><td> (RPM / 초) </td><td> (N의 X 초) </td><td> (분) </td></tr><tr><td rowspan="4"> 훈련 </td><td> - 5 dpi의 </td><td> 1 일 </td><td> 1 </td><td> (12) </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 초 </td><td> 삼 </td></tr><tr><td> - 4 dpi의 </td><td> 1 일 </td><td> 1 </td><td> (13) </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 초 </td><td> 삼 </td></tr><tr><td> - 3 dpi의 </td><td> 1 일 </td><td> 1 </td><td> (14) </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 초 </td><td> 삼 </td></tr><tr><td> - 2; - 1 dpi의 </td><td> 1 일 </td><td> (5) </td><td> (40) </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 초 </td><td> 삼 </td></tr><tr><td rowspan="2"> 실험 </td><td> +7에서 +50 dpi의에 </td><td> 2 / 주 </td><td>(5) </td><td> (40) </td><td> 5월 30일 </td><td> 3x240 초 </td><td> 삼 </td></tr><tr><td> 51에서 150 dpi의에 </td><td> 일주 </td><td> (5) </td><td> (40) </td><td> 5월 30일 </td><td> 3x240 초 </td><td> 삼 </td></tr></tbody></table> 표 1 : 교육 및 실험 프로토콜에서 로타로드 (rotarod) 매개 변수. <ol start="2"><li> 로타로드 (rotarod) 실험 프로토콜 <ol><li> 표에 설명 된대로 +7 dpi의에서, 적절한 실험 프로토콜 매개 변수와 함께 로타로드 (rotarod)을 미리 설정 한. 반복 2.1.10에 2.1.2 단계를 반복합니다. </li><li> 시험 # 3의 끝에서, 각 마우스의 무게와 데이터 시트에 체중을 기록합니다. 깨끗하고 단계 2.1.11 및 2.1.12에 따라, 로타로드 (rotarod)을 소독. </li><li> 전술 한 바와 같이, 다음 6주 두번 주 마우스를 테스트한다. 같은 experimenta와 함께 일주일에 한 번 마우스를, 8,9 (마우스 가능성이 고원 단계에 도달하는) 테스트 육주 후리터 프로토콜입니다. 실제 시험 프로토콜은 특정 질병 과정에 따라 150 일 평균 지속된다. </li></ol></li><li> 신경 기능 지수 <ol><li> 스프레드 시트 파일에 원시 데이터를 내보내기하고 결과를 분석 할 수 있습니다. </li><li> 실행 시간 (도 3a)와 같은 고속 데이터 : 이는 정상 주행 시간 + 수동 회전 시간을 뺀 회전 지연 시간 (표 2) (10)이다. 하루에 세 가지 시험의 평균 실행 시간을 계산합니다. </li><li> 신경 기능 지수 (도 3B NFI)와 같은 데이터를 표현한다. <ol><li> 각 마우스의 기본 성능 임계 값을 계산합니다. 베이스 라인 성능 임계 값은 45 + 15 + PI 6,7 일에 모든 실행하는 시간의 평균으로 결정된다. </li><li> 특정 마우스 6,7의 기본 성능 임계 값으로 나눈 세 가장 최근의 평균 실행 시간의 평균으로 NFI을 계산 &lt;/ SUP&gt;. 주 : 135 초, 즉 마우스의 NFI 있었다 일 + 72 마우스, + 76에 대한 실행 시간을 테스트하고, + 79 파이 55 초, 45 초, 50 초, 같은 마우스의 기준 시간 인 경우 79 dpi로 [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 또는 0.37 될 것입니다. </li></ol></li><li> 하나의 실험 인구 값으로 NFI 데이터를 조정합니다 (그림 3C adjNFI) 조정 된 NFI로 데이터를 표현한다. <ol><li> 특정 일에 가성 처리 군에 의해 얻어진 평균 NFI 의해 NFI 값을 나누어 계산 adjNFI. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 기간 </td><td> 정의 </td></tr><tr><td> 일반 상영 시간 </td><td> 마우스가 적극적으로 회전로드에서 실행 소비하는 총 시간, 즉, 대기 시간은 가을. </td></tr><tr><td> 수동 회전 시간 </td><td> 다음은마운트 시간의 마우스 수동 회전 모드에서 상기로드 상에 남아있다. </td></tr><tr><td> 회전 지연 시간 </td><td> 마우스를 수동 회전 모드 중에 상기로드에 남아있는 시간의 양 </td></tr><tr><td> 수동 회전 모드 </td><td> 마우스가 막대를 잡고 ambulate하지 않고 회전합니다. </td></tr><tr><td> 총 세션 시간 </td><td> 시간의 총량은 마우스가 세션 동안 회전 막대에 남아 있습니다. </td></tr><tr><td> 기본 성능 </td><td> 사전 손상 모터 성능은 최소 성능 임계 값을 결정하기 위해 평가 하였다. </td></tr><tr><td> 신경 기능 지수 (NFI) </td><td> 각 마우스의 모터 성능을 비교 임상 지수는, 즉, 피크 성능에 언제든지 시간을 실행할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 조정 된 신경 기능 지수 (adjNFI) </td><td> 정규화 처리를위한 모집단 값 NFI 데이터를 조정인가되면하나의 실험. </td></tr><tr><td> 인구 값 </td><td> 특정 일에 가짜 처리 그룹에 의해 얻어진 평균 NFI 값입니다. </td></tr></tbody></table> 표 2 : 신경 손상을 정량화하기 위해 채택 로타로드 (rotarod) 매개 변수의 정의.

<ol><li>Lipton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theiler%27s+virus+infection+in+mice%3A+an+unusual+biphasic+disease+process+leading+to+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Theiler's virus infection in mice: an unusual biphasic disease process leading to demyelination.</a> Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).</li>
<li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPachner%2C+AR+%22A+Primer+of+Neuroimmunological+Disease%22">A Primer of Neuroimmunological Disease</a>. , Springer. New York. (2012).</li>
<li>Rustay, N. R., Wahlsten, D., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+genetic+susceptibility+to+ethanol+intoxication+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Assessment of genetic susceptibility to ethanol intoxication in mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2917-2922 (2003).</li>
<li>McGavern, D. B., Zoecklein, L., Drescher, K. M., Rodriguez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+neurologic+deficits+in+a+chronic+progressive+murine+model+of+CNS+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of neurologic deficits in a chronic progressive murine model of CNS demyelination.</a> Exp Neurol. 158, 171-181 (1999).</li>
<li>Zoecklein, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+comparison+of+demyelinating+disease+induced+by+the+Daniel%27s+strain+and+BeAn+strain+of+Theiler%27s+murine+encephalomyelitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Direct comparison of demyelinating disease induced by the Daniel's strain and BeAn strain of Theiler's murine encephalomyelitis virus.</a> Brain Pathol. 13, 291-308 (2003).</li>
<li>Gilli, F., Li, L., Campbell, S. J., Anthony, D. C., Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+B-cell+depletion+in+the+Theiler%27s+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of B-cell depletion in the Theiler's model of multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 359, 40-47 (2015).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+FTY720+in+the+Theiler%27s+virus+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of FTY720 in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 308, 41-48 (2011).</li>
<li>Homanics, G. E., Quinlan, J. J., Firestone, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+and+behavioral+responses+of+inbred+C57BL%2F6J+and+strain+129%2FSvJ+mouse+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Be%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic and behavioral responses of inbred C57BL/6J and strain 129/SvJ mouse lines.</a> Pharmacol Biochem Be. 63, 21-26 (1999).</li>
<li>Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cerebr+Blood+F+Met%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cerebr Blood F Met. 33, 330-338 (2013).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Columbus+Instruments+Rotamex-5+Manual%22">Columbus Instruments Rotamex-5 Manual</a>. , 1-33 (2005).</li>
<li>Dunham, N. W., Miya, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+note+on+a+simple+apparatus+for+detecting+neurological+deficit+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Pharm+Ass%22%5BJournal%5D)">A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice.</a> J Am Pharm Ass. 46, 208-209 (1957).</li>
<li>Ulrich, R., Kalkuhl, A., Deschl, U., Baumgartner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+learning+approach+identifies+new+pathways+associated+with+demyelination+in+a+viral+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Machine learning approach identifies new pathways associated with demyelination in a viral model of multiple sclerosis.</a> J Cell Mol Med. 14, 434-448 (2010).</li>
<li>Lynch, J. L., Gallus, N. J., Ericson, M. E., Beitz, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nociception%2C+sex+and+peripheral+nerve+innervation+in+the+TMEV+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Analysis of nociception, sex and peripheral nerve innervation in the TMEV animal model of multiple sclerosis.</a> Pain. 136, 293-304 (2008).</li>
<li>Pirko, I., Johnson, A. J., Lohrey, A. K., Chen, Y., Ying, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+gray+matter+T2+hypointensity+correlates+with+disability+in+a+murine+model+of+MS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Deep gray matter T2 hypointensity correlates with disability in a murine model of MS.</a> J Neurol Sci. 282, 34-38 (2009).</li>
<li>Oleszak, E. L., Chang, J. R., Friedman, H., Katsetos, C. D., Platsoucas, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theiler%27s+virus+infection%3A+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Theiler's virus infection: a model for multiple sclerosis.</a> Clin Microbiol Rev. 17, 174-207 (2004).</li>
<li>McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+multiple+sclerosis%3A+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler%27s+virus-induced+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods Mol Biol. 900, Clifton, N.J. 381-401 (2012).</li>
<li>International Mouse Phenotyping Resource of Standardised Screens. , Available from:
 Rotarod. https://www.mousephenotype.org/impress/protocol/158/12 (2016).</li>
<li>Bohlen, M., Cameron, A., Metten, P., Crabbe, J. C., Wahlsten, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+rotational+acceleration+for+the+rotarod+test+of+rodent+motor+coordination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Calibration of rotational acceleration for the rotarod test of rodent motor coordination.</a> J Neurosci Methods. 178, 10-14 (2009).</li>
<li>Hopkins, M. E., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpreting+the+effects+of+exercise+on+fear+conditioning%3A+the+influence+of+time+of+day%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Interpreting the effects of exercise on fear conditioning: the influence of time of day.</a> Behav Neurosci. 124, 868-872 (2010).</li>
</ol>

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몇 가지 한계에도 불구하고, 로타로드 (rotarod) 성능 테스트는 운동 기능 장애와 TMEV-IDD뿐만 아니라 마우스 장애의 진행에 대한 약리학 적 개입의 영향을 평가하기위한 중요한 도구를 나타낸다. 로타로드 (rotarod) 시험 제 11 설치류에서 신경 학적 결손을 측정하는 도구로써 1957에 기술되었다. 설치류는 회전 속도가 증가함에 따라, 회전 막대에 걸어, 땅에 떨어지는 피하려고합니다. 떨어 지연 기록 운동 기능에 대한 정량 종점으로서 사용된다 : 동물이 더 신경 손상은 빨리 그들이로드 떨어지지. 전통적인 시각 채점 시스템을 통해이 시험의 분명한 장점은 장애의 진행 3 요법 및 실험 절차의 효과를 정량화하는 통계 목적으로 사용될 수있는 대물 변수를 생성하는 것이다. 예를 들면 바로 잡고 refle 같은 시각적 채점 시스템X 시험 마우스에서 전위의 능력을 평가하기위한 간단하고 신속한 테스트로서 바람직 할 수있다. 그러나, 이들...

Theiler의 쥐 뇌척수염 바이러스 (TMEV)는 지속적으로 쥐의 중추 신경계 (CNS)를 감염시키는 neurotropic 단일 가닥 RNA 바이러스이다. 민감한 쥐에서 TMEV 감염은 TMEV에 의한 탈수 초성 질환 (TMEV - IDD)로 알려진 면역 매개 만성 프로그레시브 탈수 초성 질환을 발생합니다. 쥐의 실험 감염은 다발성 경화증 (MS)의 진보적 인 형태에서 본 그 유사한 질병 과정을합니다. 급성기와 만성기 : TMEV - IDD는 두 가지 단계를 특징으로한다. 급성 단계는 가벼운, 일반적으로 무증상 뇌염 1,2입니다. 두 번째, 만성 단계는 감염 후 약 한달 시작, 탈수 초화, 염증, 및 축삭 손상 1,2 특징으로하는 천천히 진행 장애로 구성되어 있습니다. 마우스에서 관찰 약점은 경직하고, 때때로 심한 토닉 경련과 관련이있다. 현재 더 medicatio이 없기 때문에NS 환자에서 진행성 장애를 개선하는 연구는 특히 질병의 진행에 질병 변경 약물의 효과를 모니터링하기위한 최적의 동물 모델을 나타내는 TMEV-IDD 의해 끌린다. 그러나, 마우스에서뿐만 아니라 MS 환자, 장애의 진행의 모니터링은 장시간에 걸쳐 연속적인 임상 적 관찰이 필요하다. 마우스에서, 장애의 진행 장기 모니터링은 로타로드 (rotarod) 성능 테스트로 달성 될 수있다. 로타로드 (rotarod) 성능 테스트는 설치류 조정, 밸런스 및 피로와 같은 모터 연관된 함수를 평가 표준 행동 시험이다. 생쥐들은 연속적인 가속하에 회전되는 회전로드에 자신의 균형을 유지해야한다; 이로드가 기록에서 시간 지연이 떨어져있다. 신경 학적 장애를 가진 동물은 대조군으로 한 회전 막대에 머물 수없는, 그리고 회전 속도를 초과 할 때 일반적으로 내려 자신의모터 용량. 동물이 더 신경 손상은 빨리 그들이로드 떨어지지하고 짧은 시간 지연이다. 전통적인 시각 채점 시스템을 통해 로타로드 (rotarod) 시험의 장점은 목표를 생성하는 것이다 측정 가능한 가변 시간 지연에 궁극적으로 치료 및 실험 절차 (3)의 효과를 정량화하기 위해 통계 분석을 위해 사용될 수있다. 다트머스에서 Neuroimmunology (LONI)의 실험에서, 쥐 위해 기계로 익숙하고 정상 &quot;기준&quot;균형 조정 및 모터 제어 (4)을 평가하기 위해 그들이 이전에 TMEV 감염 테스트 적응 프로토콜을 실시한다, 5. 기준이 설정되고 마우스 TMEV 감염되면, 이들은 수개월에 걸쳐 한 번 또는 두 번 주 시험된다. 실제 시험 프로토콜에 따라서의 평가를 허용 150 일 평균 지속탈수 초성 질환의 전체 과정을 통해 균형, 조정 및 모터 제어의 감소. 수백 TMEV - IDD와 가짜 처리 된 마우스는 다트머스 대학에서 신경 학적 장애에 대한 지금까지 테스트되었습니다. 이러한 마우스는 다양한 면역 치료를받은하지만 약학 제제는 장애의 진행을 완화 -6,7- 효과적인 것으로 발견되었다. 본 기사와 관련 프로토콜은 TMEV - IDD 마우스에 의해 표시되는 진보적 인 신경 학적 손상을 특성화하는 방법에 대해 설명합니다. 특히, 프로토콜은 로타로드 (rotarod) 테스트를 사용 TMEV-IDD 생쥐에서 신경 학적 장애를 연구하는데 일반적으로 적합한 것으로 믿어 특정 테스트 파라미터의 추천을 제공한다. 이 절차는 평가하기위한 기준 (1) 등 MS와 같은 진보적 인 신경 학적 상태를 치료하기위한 치료를 테스트하기위한 진보적 인 MS (2) 그 유용성이 마우스 모델의 관련성을 제공합니다. 분명히,로타로드 (rotarod) 성능 테스트와 현재 최적화 테스트 파라미터 및 프로토콜 TMEV-IDD 마우스 모델에서 진행성 신경계 장애 검출에 유용하지 않은뿐만 아니라, 신경 변성 질환의 다른 바이러스 - 유도 및 / 또는 유전자 마우스 모델에서 장애를 커버링에 유용하다.

<table><tbody><tr><td>생쥐 SJL/JCrHsd 4-6주 된</td><td>Envigo</td><td>#052</td><td></td></tr><tr><td>TMEV 바이러스 재고</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 기화기</td><td>Harvard Apparatus</td><td>#340471</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기 U-100 29 g x 0.5 cc</td><td>BD#</td><td>328203</td><td></td></tr><tr><td>Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod for Mice with RS-232 and Software</td><td>Columbus Instruments</td><td>#0890M</td><td></td></tr></tbody></table>

다발성 경화증의 마우스 모델에서 진보적 인 신경 학적 장애를 측정

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus(TMEV)에 뇌내 감염이 발생한 후, 감수성이 있는 SJL 마우스는 다발성 경화증(MS)의 진행성 형태와 유사한 임상 특징을 가진 만성 진행성 탈수초성 질환을 발병합니다. 이 쥐는 운동 및 감각 기능의 상실을 동반한 진행성 장애를 보이며, 이는 여러 장치 및 프로토콜로 평가할 수 있습니다. 그 중 Rotarod 성능 테스트는 매우 일반적인 동작 테스트로 객관적인 측정을 제공한다는 장점이 있지만 간단하고 간단하다고 가정하여 자주 사용됩니다. 매우 주관적인 일부 MS 모델에 사용되는 시각적 채점 시스템과 달리, Rotarod 테스트는 객관적이고 측정 가능한 연속 변수(즉, 시간)를 생성하여 거의 완벽한 평가자 간 일치를 가능하게 합니다. 그러나 실험실 간 신뢰성은 다양한 테스트 매개변수가 복제되는 경우에만 달성됩니다. 이 원고에서는 막대의 크기, 속도 및 가속도와 같은 특정 테스트 매개변수에 대한 권장 사항; 동물에게 주어진 훈련의 양; 및 데이터 처리는 Rotarod 테스트를 위해 제공됩니다.

이 대표 실험의 목적은 다니엘스 (DA) 변형 및 TMEV의 콩 변형에 의해 유도 된 신경 학적 장애를 비교하는 것이다. 본 연구의 목적 32 여성 SJL 마우스의 그룹 (N = 16), TMEV 두개골 내에 검찰 균주 (N = 16) 또는 빈 균주를 감염시키고, 임상 적 징후가 시간이 지남에 따라 관찰 하였다. 마우스 (20)의 또 다른 그룹은 가짜 처리 하였다 (즉, 식염수의 두개골 내에 주입) 및 건강한 대조군 역임. 로타로드 (rotarod) 성능 테스트 TMEV 감염된 쥐와 허위 대조군 만성 질병의 진행을 평가하기 위해 사용되었다. 마우스는 개별적으로 귀 표시 전에 TMEV의 주입 후 125일 지속 실제 시험 프로토콜에 주에 매일 적응 프로토콜을 실시했다. 각 시험 날, 실행 시간, TI의 길이로 정의나 마우스,로드에 머물렀다 그 날의...

이 백서에서는 TMEV에 감염된 마우스의 진행성 신경 장애를 측정하는 데 사용되는 Rotarod 성능 테스트에 대한 최적화된 테스트 프로토콜을 제시합니다.

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

이 절차의 전반적인 목표는 만성 탈수초성 질환이 있는 마우스의 점진적인 신경학적 손상을 평가하는 것입니다. 저희는 Rotarod 테스트를 사용하여 점진적 다발성 경화증의 Theilers 바이러스 모델에서 장기적인 신경학적 장애를 연구하는 데 적합한 테스트 매개변수 권장 사항을 제시함으로써 이를 달성합니다. 이 절차는 점진적 탈수초화에 대한 마우스 모델의 관련성과 다발성 경화증과 같은 점진적 신경 질환 치료를 목표로 하는 치료법을 테스트하는 데 있어 해당 모델의 유용성을 평가할 수 있는 기준선을 제공합니다.이 최적화된 테스트가 기존의 시각적 점수 산정 시스템보다 유리한 점은, 치료법 및 실험적 절차가 운동 기능에 미치는 장기적 영향을 정량화할 수 있는 객관적인 변수를 생성한다는 것입니다. 이 절차는 다트머스 신경면역학 연구실의 기술자인 Darlene Royce가 시연할 예정입니다. 기저 상태의 균형 조정 및 운동 제어 능력을 평가하기 위해, 먼저 마우스가 테스트 룸에 최소 30분 동안 적응하도록 하여 TMEV 감염 5일 전부터 적응 프로토콜을 시작하십시오.마우스가 적응하는 동안, Rotarod를 -5 DPI 훈련 파라미터로 미리 설정하십시오. 그런 다음, 마우스의 꼬리를 잡아 들어 올려 실험자와 반대 방향을 향하도록 로드 위에 놓습니다. 마우스가 떨어지거나 뛰어내리면, 모든 마우스가 제자리에 위치할 때까지 Rotarod의 해당 레인에 다시 놓아주십시오.네 마리의 생쥐를 모두 올린 후, 엔터 버튼을 눌러 실험을 시작합니다. 타이머가 자동으로 시작되는지 확인하고, 각 레인에 표시되는 분당 회전수를 관찰하십시오. 그 후, 각 동물이 봉에서 떨어질 때, 낙하 시점의 봉 속도와 동물이 봉 위에 머문 시간을 기록하십시오.모든 마우스가 떨어진 후, 소변과 분변이 마우스의 봉 잡기 능력에 영향을 줄 수 있으므로 티슈를 사용하여 봉에 묻은 분변 덩어리와 소변을 제거합니다. 3분간 휴식을 취한 후, 두 번째와 세 번째 시도를 진행하며, 단일 시도당 최대 시간은 240초로 제한합니다. 각 테스트일마다 총 3회의 시도를 실시합니다.마지막으로, 마우스를 홈 케이지로 돌려보냅니다. PI 기준 -4일, -3일, -2일, -1일에 적절한 훈련 프로토콜 파라미터로 로타로드(Rotarod)를 사전 설정하고 로타로드 실험을 반복합니다. 먼저 4~6주령의 암컷 SJL 마우스가 들어 있는 케이지를 랙에서 편안한 작업 공간으로 이동시키는 것부터 시작하십시오.마우스의 귀에 펀칭을 하여 표시함으로써 임상 및 조직학적 질환의 개별 평가가 가능하도록 합니다. 다음으로, 29게이지 인슐린 주사기 바늘에 PBS에 희석된 30 µL의 TMEV 감염 스톡을 흡입합니다. 마취 가스 기계를 준비하여 시술 시간 동안 충분한 양의 산소와 이소플루레인(isoflurane)이 공급되는지 확인합니다.동물을 유도 챔버에 넣고 상단을 밀폐합니다. 몇 분 후 동물을 챔버에서 꺼내고, 발바닥 패드를 꼬집어 적절한 마취가 되었는지 확인합니다. 다음으로, 주사 부위를 70% isopropyl alcohol로 세척하고, TMEV 감염 스톡 30 µL를 핸드 프리 주사 방식으로 우측 대뇌 반구에 주입합니다.마지막으로, 마우스가 완전히 깨어나 움직임이 자유로워지면 사육 케이지로 돌려보냅니다. 감염 후 7일째에, Rotarod를 적절한 실험 매개변수로 사전 설정하고, 해당 실험 프로토콜 매개변수에 따라 전체 Rotarod 훈련 과정을 반복합니다. 매일 세 번째 시행 후에 각 마우스의 체중을 측정하고 데이터 시트에 기록합니다.다음 6주 동안 동일한 방식으로 주 2회 쥐를 테스트합니다. 6주 후에는 동일한 실험 프로토콜을 사용하여 주 1회 테스트를 수행하며, 평균 실험 기간은 150일로 합니다. 그다음, 원시 데이터를 분석하여 신경학적 기능 지수(neurological functional index, NFI)로 나타냅니다.개별 NFI 값을 결정하기 위해, 감염 후 15일에서 45일 사이의 모든 주행 시간 평균을 각 마우스의 기저 성능 임계값으로 계산합니다. 이는 초기 뇌염으로 인한 결손의 영향을 배제하고, 진행성 탈수초화의 결과로 인한 운동 성능 평가가 가능하도록 하기 위함입니다. 그런 다음, 가장 최근 3회 평균 주행 시간의 평균을 해당 마우스의 기저 성능 임계값으로 나누어 NFI 값을 계산합니다.마지막으로, NFI 값을 해당 특정일에 위약 처리군(sham treated group)에서 얻은 평균 NFI 값으로 나누어 보정된 NFI를 계산합니다. 이 수치는 TMEV 감염 쥐가 대조군 쥐와 비교했을 때 시간이 경과함에 따라 신경학적 결손이 유의하게 증가함을 보여줍니다. 두 가지 서로 다른 TMEV 균주에 의한 만성 감염은 쥐의 주행 시간에 부정적인 영향을 미쳤습니다.TMEV에 감염된 두 그룹의 마우스 모두 sham 마우스보다 NFI 값이 유의하게 낮았습니다. 또한, 모든 시점에서 BeAn 균주에 감염된 마우스와 DA 균주에 감염된 마우스의 장애 진행도를 비교했을 때 차이가 없었습니다. 본 절차 이후에는 마우스의 전반적인 건강 상태를 신속하게 평가하기 위해 정위 반사 테스트와 같은 전통적인 시각적 점수 산정법을 수행할 수 있습니다.이 기술은 개발 이후, 다발성 경화증 및 신경퇴행성 질환 분야의 연구자들이 진행성 장애를 지연시키는 치료법 및 기타 중재법의 효과를 테스트할 수 있는 길을 열어주었습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 마우스에서 장기적인 진행성 장애를 평가하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이 절차는 Theiler 바이러스 모델에서 진행성 신경학적 장애를 탐지하는 데 유용할 뿐만 아니라, 다른 신경퇴행성 질환 마우스 모델의 손상을 밝혀내는 데에도 유용합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

프로토콜은 두도 설립 모터 조정 작업 가속화 로타로드 및 수평 막대, 최근 옥스퍼드에서 개발 된 두 개의 테스트, 정적로드 및 병렬 막대를 위해 제공됩니다. 이 테스트는 모터 잠재적으로 자신의 권리에 대한 관심의 손상뿐만 아니라, 행동의 다른 지역의 시험에서 가능한 변수 인를 검색 할 수 있습니다.

마우스에 모터 조정을 측정

루게릭병 (ALS)에 대한 마우스 모델은 임상 및 behaviorally 면밀히 검토합니다. 동반 immunohistological 분석을위한 전제 조건으로서 척수의 준비가 상세하게 그려져 있습니다.

루게릭병에 대한 마우스 모델 (ALS)의 임상 시험 및 척수 제거

다발성 경화증에있는 신경 및 신경 심리학 적 손상과 장애의 정확한 측정은 도전이다. 우리는 새로운 시험, 다발성 경화증 성능 테스트 (MSPT)에 대한 방법 론적 세부 사항을보고한다. MS 관련 장애의 정량화의 목적이 새로운 접근 방식은 MS의 심각도의 정확한 유효 측정을위한 컴퓨터 기반의 플랫폼을 제공합니다.

다발성 경화증 성능 테스트 (MSPT) : 아이 패드 기반 장애 평가 도구

이 비디오 프로토콜은 근위축성 측삭 경화증의 형질전환 마우스 모델에서 신경근 결손을 평가하기 위한 민감하고 신뢰할 수 있으며 빠른 방법을 설명합니다.

ALS의 SOD1-G93A 마우스 모델에서 질병의 진행을 평가하기위한 빠른 표현형 신경 채점 시스템

우리는 생체 살아있는 생물 발광 및 근적외선 SJL / J 마우스에서 다발성 경화증에 대한 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 모델에서 시신경염과 뇌염의 이미징 기술을 보여준다.

마우스의 다발성 경화증의 EAE 모델에서 시신경염 및 뇌 염증의 생물 발광 및 근적외선 영상

화살 비행기에서 운동학 걸음 걸이 분석 운동 실행 하는 방법에 대 한 매우 정확한 정보를 생성 합니다. 우리는 중재 면역 demyelination 대상이 쥐에 대 한 걸음 걸이 적자를 식별 하기 위해 이러한 기술의 응용 프로그램을 설명 합니다. 이러한 방법은 다른 마우스 모델을 갖춘 장애인된 운동에 대 한 걸음 걸이 적자 하 사용할 수 있습니다.

MOG35-55를 받게 하는 C57BL/6 쥐에 화살 평면 운동학 걸음 걸이 분석 실험적인 자기 면역 뇌 유발

신경 유도의 측정 neurodegeneration의 마우스 모델을 평가 하는 유용한 도구 이지만 그것은 자주 hindlimbs에 좌 골 신경을 자극에 적용 됩니다. 여기, 복합 근육 활동 전위 (CMAP) vivo에서 상 완 신경 총에 의해 innervated 마우스 forelimb 근육에서 측정 하는 기술을 설명 합니다.

Vivo에서 모터 신경 퇴보의 마우스 모델에서 앞 발에서 복합 근육 활동 전위의 electrophysiological 측정

마우스워커(MW) 툴박스를 사용하여 자유롭게 걷는 쥐의 운동 패턴을 정량적으로 설명하는 실험 파이프라인이 제공되며, 초기 비디오 녹화 및 추적에서 정량화 후 분석에 이르기까지 다양합니다. 생쥐의 척수 타박상 손상 모델은 MW 시스템의 유용성을 입증하기 위해 사용됩니다.

MouseWalker를 사용하여 척수 손상 마우스 모델에서 운동 기능 장애 정량화

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증의 동물 모델 역할을 합니다. 이 기사에서는 EAE에서 척수 염증, 탈수초화 및 축삭 손상을 채점하는 접근 방식을 설명합니다. 또한, 생쥐 혈청에서 용해성 신경 필라멘트 광 수준을 정량화하는 방법이 제시되어 살아있는 생쥐의 축삭 손상 평가를 용이하게 합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염에서 중추신경계 염증, 탈수초화 및 축삭 손상 채점

실험적 자가면역 뇌척수염은 다발성 경화증에서 가장 널리 사용되는 쥐 모델 중 하나입니다. 현재 프로토콜에서는 남녀 모두의 C57BL/6J 마우스에 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드를 면역하여 주로 꼬리와 팔다리의 상행 마비를 초래합니다. 여기서는 EAE 유도 및 평가 프로토콜에 대해 논의합니다.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

이 글은 대형 스트로크 마우스에서 고도로 번역되고 독립적으로 입증된 마우스 mSU(Stroke Unit) 개념을 실행하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 또한 생쥐에서 초점 실험 뇌졸중 척도를 실행하기 위한 표준화된 프로토콜을 제공하며, 이는 장기간 감지된 뇌졸중 국소 결손을 평가합니다.

중개 마우스 스트로크 연구를 위한 표준화된 신경학적 점수를 사용한 마우스 스트로크 단위 프로토콜

학습하세요 TMEV 감염 마우스에서 로타로드 테스트를 활용한 진행성 신경학적 장애 측정 방법을. 이 최적화된 프로토콜은 다발성 경화증 치료제 효과를 객관적으로 평가하는 데 활용됩니다.

다발성 경화증의 마우스 모델에서 진보적 인 신경 학적 장애를 측정

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