Name: 작은 별 말미의 반구 Physa에서 전체 폴립 재생을 유도 Nematostella의 vectensis (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: 배우세요 Nematostella vectensis에서 전체 폴립 재생을 유도하는 방법을. 작은 별 말미의 반구 Physa를 활용한 이 기법은 재생 생물학 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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이 작품은 GHT에 뉴욕 줄기 세포 과학 (NYSTEM C028107) 그랜트에 의해 지원되었다.

온도, 영양과 빛 / 어둠의 사이클에 대한 동물의 1. 컨디셔닝 <ol><li> 전 세계적으로 수많은 Nematostella 연구소 중 하나, 또는 비영리 업체에서 Nematostella vectensis 성인을 얻습니다 (표 1) </li><li> 에, 어둠 속에서 일정한 온도 (일반적으로 사이 18 및 21 ° C)에서 Nematostella 유지 &quot;/ 배 1&quot;인공 해수 천 (PPT) 당 12 부품의 염분에서 (ASW). 일반적으로, 간단한 소다 석회 유리 배양 접시에 250 mL의 1.5 L 용량 (11) 문화를 유지한다. 참고 :이 간단한 배양 조건은 일반적으로 Nematostella을 연구 실험실들 사이에서 사용되지만, 문화주의는 19 자동화 할 수 있습니다. </li><li> 일주일에 4 배 - 2 노 플리 우스 Nematostella 갓 부화 아테 피드. 얕은 직사각형 유리 접시 (20) 또는 30 ° C에서 전체 강도 (36 PPT) 또는 1 / 3 배 ASW에서 해치 아테 미아는 낭종,소규모, 상업적 또는 집에서 소금물 새우 부화장의 수의. 인큐베이터를 사용할 수없는 경우, 새우 RT에서 부화하지만 그래서 더 느리게 할 것입니다. 참고 :이 종종 완성을위한 이상 24 시간을 필요로한다. </li><li> 적어도 일주일에 한 번 말미잘 배양 물을 교체합니다. 최고의 성인 건강을 위해, (비누)없이 철저하게 깨끗한 문화 트랩 먹지 않는 음식 폐기물, 그리고 동물을 얽히게 할 수 코트 그릇과 축적 된 점액 분비물의 일주일에 한 번 그릇. </li></ol> 영양 금연실 동물 2. 선택 및 휴식 <ol><li> 거의 같은 길이의 선택 크기 일치 용종 (3-5cm, 때 자연적으로 완화) 이전 절단에 사흘 동안 식민지에서 분리 한 그릇에 배치합니다. 주 : 절삭 선정 동물의 수는 실험에 의해 결정된다 물론 진행되고 있지만, 일반적으로 우리는 여섯 복제 샘플 포인트 당 적어도 다섯 동물을 추천한다. 그러므로,전형적인 실험에서 30 동물의 최소 미리 선택 될 것이다. 일반적으로, 나중에 점수에 영향을 줄 수 있습니다 (아래 참조) 불규칙 절단 이후 최소 수 (30) 이상을 선택하는 것이 현명합니다. </li><li> 이전에 절단에 실내 조명에 인큐베이터에서 한 시간 이상을 선택 동물의 접시를 제거합니다. 실내 조명 및 취급의 진동에 노출 가능성이 동물이 수축하게됩니다, 그래서 그들은 적응 또는 실험실 벤치에 배양하여 &quot;완화&quot;할 필요합니다. 동물 접촉하는 내화물과 빛에 노출이 될 것이며, 그 시점에서 부드러운 피펫 팅에 의해 이동 될 수있다. </li><li> 선택 사항 : (1 / 3X ASW에서) 7.5 %의 MgCl 2를 첨가하여 동물을 마취. 부드럽게 표준 플라스틱 5 mL를 피펫으로 그릇에의 MgCl 2 솔루션을 추가 할 수 있습니다. 동물은 결국 빛을 물리적 조작에 길들여 될 것입니다 있지만, 그것은 t &quot;수정&quot;유지하거나 동물을 마취하는 것이 유리할 수있다 : 참고그들은 긴 16,21,22하게 한 후 그 상태를 편안합니다. </li><li> 12 PPT의 ASW를 포함 100mm 직경의 멸균 유리 절단 접시의 바닥에, 절단 할 수있는 풀에서 다섯 동물 (1 / 3 배 ASW에서) 전송 넓은 구멍 (&gt; 0.5 cm) 플라스틱 피펫을 사용합니다. 40X - 10 사이의 가변 배율의 실체 현미경의 무대에 접시를 놓습니다. 참고 : 동물 마취 및 절단 완화되지 않은 경우, 그들은 여전히 ​​다시 편안하게하는 데 몇 분 정도 필요할 수 있습니다 따라서 터치 입체경 조명에 응답하고있다. </li></ol> 3. 절단 수술 <ol><li> 멸균 메스를 사용하여, 약 한이 넓고 더 장간막을 포함하지 않는 그대로입니다 physa의 섹션을 얻을 목적으로, 각각의 폴립에서 반구 physa을 절단. 참고 : 이상적인 컷 사이트가 장간막의 종료에 불과 반구입니다. 절단의면에 얇은 리터에 적절한 장간막에서 변화가있다아이 네스는 각 mesenterial 삽입 (그림 1, 화살표)에 대응. 이 구멍 17,30를 &#39;연결&#39;용이하게 할 수있다 점액을 생산하기 때문에 장간막의 부재는 매우 중요하다. <ol><li> 절단의 원하는 사이트에서 동물과 접촉 메스 블레이드를 배치합니다. 이 중 비 보조 (프리 핸드)를 수행하거나 부드럽게 # 5 포셉 (뒤몽 스타일 또는 유사한)와 함께 동물의 몸을 파악하여. </li><li> 몸에 걸쳐 &#39;흔들&#39;운동에 메스의 곡선 블레이드를 활용하여 조직을 잘라. 참고 : 조직이 메스가 요동으로 깨끗하게 절단 및 기증자로부터 physa의 원하는 부분을 해방해야합니다. 조직의 작은 조각들이 여전히 본체와 연결 physa 경우, 메스로 절단. 이것은 physa에 손상을 줄 수 있으므로, 당겨 연결 부분을 분리하지 마십시오. </li></ol></li><li> 접시에서 각 절단 &#39;기증자&#39;용종을 제거하고 SEPA에 반환&#39;풀 절단 수술&#39;라고 표시된 속도 그릇; 그릇 날짜 및 주식 문화에 반환. 참고 : 절단 용종이 정상적으로 공급 될 수 후 하루 내에 반구 상처를 치유하고 있습니다. 그들은 원하는 경우 physa 다시 절단 할 수있는 시점에서 2 주 이내에 정상적인 찾고 physa를 다시 생성합니다. </li><li> 다음, 이미 각 웰 12의 PPT ASW의 10 ㎖를 갖는 멀티 웰 세포 배양 접시에 별도 멸균 웰에 각각 physa 전송할 12의 PPT ASW 절삭 접시에 남아 절제 physa 린스. 참고 :이 예에서는 각 해수 잘 잡고 10 mL의 다섯 적출 physa으로, 여섯 웰 플레이트를 사용합니다. 일반적으로 해수에 의한 처리 및 잠재 증발의 움직임에 공기에 노출을 방지하기 위해 충분히 physa을 포함해야한다. 플레이트 또는 우물 뚜껑이 있어야합니다. </li><li> 3.3 각각의 실험적인 치료를 위해 각 웰 예약에 적어도 5 physa를 수집 - 반복 3.1 단계를 반복합니다. </li><li> 잠하는 온도에서 physa을 품어계획된 실험 심문에 대한 재생의 최고 속도를 IDE. 중생의 원하는 속도에 의해 결정되는 고정 된 온도에서 온도 조절 배양기에 physa을 포함하는 판을 놓습니다. 참고 : physa이 누락 된 조직을 재생, 15 및 27 ° C 사이의 온도에서 배양 할 때 전체 용종을 형성 할 것이다. 재생 속도는 처음 두 단계 제외한 온도 의존적이다. 모든 온도에 대해 4 단계에 도달 평균 하루는 절단 후 7 일 이내입니다,이 또한 21 ° C에서의 재생과 일치한다. 27 ° C에서 4 단계는 약 3 일 이전에 도달하고 15 ° C에서, 4 단계는 21 ° C (또한 참조 참조 10)에서 재생에 비해 약 3 일 지연됩니다. </li></ol> 4. Nematostella 회생 준비 시스템과 재생을 평가 (NRSS) <ol><li> 변수 magnific와 스테레오 화합물 현미경을 사용하여 physa 점수ATION (10 - 80X). 스테이지 0으로 갓 잘라 Nematostella의 physa 점수와 동시에 NRSS (10)를 사용하여 매일 포스트 절단 (DPA)에 점수를 계속합니다. 참고 : 키 준비 기준 및 세부 사항 참조 (10)를 참조하십시오. <ol><li> 갓 잘라 physa이 이완 풍선을 닮은 컵 - 모양의 덩어리로 나타나는 경우 열려있는 상처 부위로, 스테이지 0 (오픈 상처) 등 physa 점수 것은 가능성을 볼 수 있습니다. 주 : 상처의 가장자리는 처음부터 뭉쳐 수 있지만, 티슈 계속 축소되고 강성이 부족하다. 오픈 상처의 가장자리는 상처 치유 등의 방사형 수축을 겪고 관찰 할 수있다. </li><li> 절단 상처가 닫혀 나타나는 경우 1 단계 (폐쇄 상처) 등 physa 점수. 주 : 상처 위치가 미래 경구 자극에 해당 할 것이다. 미래 구두 극 주변의 외부 표면은 기본 방사상으로 대칭 내배엽 mesenterial 삽입에 해당하는 별개의 아치를 표시하기 시작할 수 있습니다. </li><li> 점수 산도YSA 구강 극의 표면이 방사상으로 대칭 패턴으로 배열하고 홈으로 구분 팔 제기 아치를 공개, 비정상적으로 나타나는 경우 2 단계 (레이디 얼 아치) 등. 아치의 정점에 작은 반구형 소포을 준수하십시오. 그들은 같은 높이 넓은 가능성 과도 대해, 그리고 초기 단일 외배엽 세포 층에 의해 구성된다. 참고 : 어떤 경우에는 두 층 소포가 안정 수 있습니다. 참고 :이 이상이 단계에서 점액 층이 physa 멤브레인 &#39;시스&#39;에서 (그림 2) 캡슐화 나타날 수 있습니다. 이 밀봉재 득점을 용이하게 제거되어야한다. </li><li> 내배엽과 외배엽 조직 층을 포함하는 촉수의 싹이 안정적으로 적어도 일부 반경 아치의 구두 끝 부분에 형성되어있는 경우 3 단계 (촉수)로 physa 점수. 참고 : 촉수들이 넓은하고 최소한의 운동성보다 길다. physa 증가 보여하지만, 장간막의 초보가 마주 변수 인플레이션이 될 수 있도록체강 (coelenteron)에 mesenterial 삽입에서 연장 ible. </li><li> physa들이 연결 표시되는 위치에서 측정 된 두 배로 반경 폭 이상입니다 구강 - 반구 길이로, 몸 벽에 삽입에서 coelenteron로 연장 팔 구별, 눈에 보이는 장간막이 포함 된 경우 4 단계 (선형 장간막)로 physa 점수 그 반구 끝 (enterostome)에서 인두합니다. 참고 : 네 개 이하의 장간막은 &quot;주름&quot;내부 무료 가장자리가. 인두 볼 수 있습니다. 이상 팔 촉수는 운동성, 볼 수 있습니다 때때로 그들은 몸으로 계약. </li><li> physa이 주름과 개 이상의 장간막을 가지고 있으며, 주름 무대 동물은 거의 &quot;정상&quot;성인 외관이 4보다 더 완전하고 꾸불 꾸불 한 경우 5 단계 (우세 주름 장간막)로 physa 점수 있지만 볼 수는 없다 생식 세포. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Lenhoff, S. G., Lenhoff, H. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLenhoff%2C+SG+%22Hydra+and+the+Birth+of+Experimental+Biology%3A+Abraham+Trembley%27s+Memoirs+Concerning+the+Natural+History+of+a+Type+of+Freshwater+Polyp+with+Arms+Shaped+like+Horns%22">Hydra and the Birth of Experimental Biology: Abraham Trembley's Memoirs Concerning the Natural History of a Type of Freshwater Polyp with Arms Shaped like Horns</a>. , The Boxwood Press. (1986).</li>
<li>Trembley, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTrembley%2C+A+%22M%C3%A9moires+pour+servir+%C3%A0+l%27histoire+d%27un+genre+de+polypes+d%27eau+douce%2C+%C3%A0+bras+en+forme+de+cornes%22">Mémoires pour servir à l'histoire d'un genre de polypes d'eau douce, à bras en forme de cornes</a>. , Jean & Herman Verbeek. (1744).</li>
<li>Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+tissue+regenerative+capacity+and+mechanisms+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals.</a> Nat Rev Genet. 11 (10), 710-722 (2010).</li>
<li>Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydra%2C+a+fruitful+model+system+for+270+years%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Hydra, a fruitful model system for 270 years.</a> Int J Dev Biol. 56 (6-8), 411-423 (2012).</li>
<li>Gold, D. A., Jacobs, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+dynamics+in+Cnidaria%3A+are+there+unifying+principles%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Stem cell dynamics in Cnidaria: are there unifying principles?</a> Dev Genes Evol. 233 (1-2), 53-66 (2013).</li>
<li>Holstein, T. W., Hobmayer, E., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cnidarians%3A+an+evolutionarily+conserved+model+system+for+regeneration%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Cnidarians: an evolutionarily conserved model system for regeneration?</a> Dev Dyn. 226 (2), 257-267 (2003).</li>
<li>Amiel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Morphological+and+Cellular+Events+Underlying+Oral+Regeneration+in+the+Sea+Anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of Morphological and Cellular Events Underlying Oral Regeneration in the Sea Anemone, Nematostella vectensis.</a> Int J Mol Sci. 16 (12), 28449-28471 (2015).</li>
<li>Warren, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+perlecan%2FHSPG2+gene+and+its+activation+in+regenerating+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evolution of the perlecan/HSPG2 gene and its activation in regenerating Nematostella vectensis.</a> PLoS One. 10 (4), e0124578(2015).</li>
<li>Gong, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrins+of+the+starlet+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Integrins of the starlet sea anemone Nematostella vectensis.</a> Biol Bull. 227 (3), 211-220 (2014).</li>
<li>Bossert, P. E., Dunn, M. P., Thomsen, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+staging+system+for+the+regeneration+of+a+polyp+from+the+aboral+physa+of+the+anthozoan+Cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A staging system for the regeneration of a polyp from the aboral physa of the anthozoan Cnidarian Nematostella vectensis.</a> Dev Dyn. 242 (11), 1320-1331 (2013).</li>
<li>Stefanik, D. J., Friedman, L. E., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting%2C+rearing%2C+spawning+and+inducing+regeneration+of+the+starlet+sea+anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Collecting, rearing, spawning and inducing regeneration of the starlet sea anemone, Nematostella vectensis.</a> Nat Protoc. 8 (5), 916-923 (2013).</li>
<li>Tucker, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thrombospondin+in+the+anthozoan+Nematostella+vectensis+is+associated+with+the+nervous+system+and+upregulated+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">A thrombospondin in the anthozoan Nematostella vectensis is associated with the nervous system and upregulated during regeneration.</a> Biol Open. 2 (2), 217-226 (2013).</li>
<li>Passamaneck, Y. J., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+proliferation+is+necessary+for+the+regeneration+of+oral+structures+in+the+anthozoan+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell proliferation is necessary for the regeneration of oral structures in the anthozoan cnidarian Nematostella vectensis.</a> BMC Dev Biol. 12, (2012).</li>
<li>Trevino, M., Stefanik, D. J., Rodriguez, R., Harmon, S., Burton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+canonical+Wnt+signaling+by+alsterpaullone+is+sufficient+for+oral+tissue+fate+during+regeneration+and+embryogenesis+in+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Induction of canonical Wnt signaling by alsterpaullone is sufficient for oral tissue fate during regeneration and embryogenesis in Nematostella vectensis.</a> Dev Dyn. 240 (12), 2673-2679 (2011).</li>
<li>Renfer, E., Amon-Hassenzahl, A., Steinmetz, P. R., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+muscle-specific+transgenic+reporter+line+of+the+sea+anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A muscle-specific transgenic reporter line of the sea anemone, Nematostella vectensis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (1), 104-108 (2010).</li>
<li>Burton, P. M., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+novel+gene+expression+between+regeneration+and+asexual+fission+in+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Conserved and novel gene expression between regeneration and asexual fission in Nematostella vectensis.</a> Dev Genes Evol. 219 (2), 79-87 (2009).</li>
<li>DuBuc, T. Q., Traylor-Knowles, N., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiating+a+regenerative+response%3B+cellular+and+molecular+features+of+wound+healing+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Initiating a regenerative response; cellular and molecular features of wound healing in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> BMC Biol. 12, (2014).</li>
<li>Hand, C., Uhlinger, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asexual+reproduction+by+transverse+fission+and+some+anomalies+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Invert+Biol%22%5BJournal%5D)">Asexual reproduction by transverse fission and some anomalies in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Invert Biol. 114, 9-18 (1995).</li>
<li>Fritzenwanker, J. H., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+gametogenesis+in+the+basal+cnidarian+Nematostella+vectensis%28Anthozoa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Induction of gametogenesis in the basal cnidarian Nematostella vectensis(Anthozoa).</a> Dev Genes Evol. 212 (2), 99-103 (2002).</li>
<li>Magie, C., Bossert, P., Aramli, L., Thomsen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Science%27s+super+star%3A+The+starlet+sea+anemone+is+an+ideal+tool+for+student+inquiry%5BTitle%5D)+AND+%22The+Science+Teacher%22%5BJournal%5D)">Science's super star: The starlet sea anemone is an ideal tool for student inquiry.</a> The Science Teacher. 83 (3), 33-40 (2016).</li>
<li>Genikhovich, G., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization+of+starlet+sea+anemone+%28Nematostella+vectensis%29+embryos%2C+larvae%2C+and+polyps%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization of starlet sea anemone (Nematostella vectensis) embryos, larvae, and polyps.</a> Cold Spring Harb Protoc. (9), (2009).</li>
<li>Magie, C. R., Pang, K., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+inventory+and+expression+of+Sox+and+Fox+genes+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Genomic inventory and expression of Sox and Fox genes in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> Dev Genes Evol. 215 (12), 618-630 (2005).</li>
<li>Chera, S., Kaloulis, K., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP+response+element+binding+protein+%28CREB%29+as+an+integrative+HUB+selector+in+metazoans%3A+clues+from+the+hydra+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">The cAMP response element binding protein (CREB) as an integrative HUB selector in metazoans: clues from the hydra model system.</a> Biosystems. 87 (2-3), 191-203 (2007).</li>
<li>Reitzel, A. M., Burton, P. M., Krone, C., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+developmental+trajectories+in+the+starlet+sea+anemone+Nematostella+vectensis%3A+embryogenesis%2C+regeneration%2C+and+two+forms+of+asexual+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of developmental trajectories in the starlet sea anemone Nematostella vectensis: embryogenesis, regeneration, and two forms of asexual fission.</a> Invertebr Biol. 126, 99-112 (2007).</li>
<li>Ikmi, A., McKinney, S. A., Delventhal, K. M., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TALEN+and+CRISPR%2FCas9-mediated+genome+editing+in+the+early-branching+metazoan+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">TALEN and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the early-branching metazoan Nematostella vectensis.</a> Nat Commun. 5, 5486(2014).</li>
<li>Jahnel, S. M., Walzl, M., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+epithelial+organisation+of+muscle+cells+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Zool%22%5BJournal%5D)">Development and epithelial organisation of muscle cells in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Front Zool. 11, 44(2014).</li>
<li>Kelava, I., Rentzsch, F., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+eumetazoan+nervous+systems%3A+insights+from+cnidarians%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of eumetazoan nervous systems: insights from cnidarians.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370 (1684), (2015).</li>
<li>Nakanishi, N., Renfer, E., Technau, U., Rentzsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nervous+systems+of+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis+are+generated+by+ectoderm+and+endoderm+and+shaped+by+distinct+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Nervous systems of the sea anemone Nematostella vectensis are generated by ectoderm and endoderm and shaped by distinct mechanisms.</a> Development. 139 (2), 347-357 (2012).</li>
<li>Richards, G. S., Rentzsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+analysis+of+a+SoxB+gene+reveals+neural+progenitor+cells+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Transgenic analysis of a SoxB gene reveals neural progenitor cells in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> Development. 141 (24), 4681-4689 (2014).</li>
<li>DuBuc, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+Nematostella+vectensis+embryogenesis+and+late+development+using+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of Nematostella vectensis embryogenesis and late development using fluorescent probes.</a> BMC Cell Biol. 15, (2014).</li>
<li>Kaur, J., Debnath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+at+the+crossroads+of+catabolism+and+anabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Autophagy at the crossroads of catabolism and anabolism.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16 (8), 461-472 (2015).</li>
<li>Carroll, B., Korolchuk, V. I., Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acids+and+autophagy%3A+cross-talk+and+co-operation+to+control+cellular+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Amino acids and autophagy: cross-talk and co-operation to control cellular homeostasis.</a> Amino Acids. 47 (10), 2065-2088 (2015).</li>
<li>Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy%3A+cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Autophagy: cellular and molecular mechanisms.</a> J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).</li>
<li>Rodolfo, C., Di Bartolomeo, S., Cecconi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem and progenitor cells.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (3), 475-496 (2016).</li>
<li>Guan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem cells.</a> Autophagy. 9 (6), 830-849 (2013).</li>
<li>Phadwal, K., Watson, A. S., Simon, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tightrope+act%3A+autophagy+in+stem+cell+renewal%2C+differentiation%2C+proliferation%2C+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Tightrope act: autophagy in stem cell renewal, differentiation, proliferation, and aging.</a> Cell Mol Life Sci. 70 (1), 89-103 (2013).</li>
<li>Varga, M., Fodor, E., Vellai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Autophagy in zebrafish.</a> Methods. 75, 172-180 (2015).</li>
<li>Varga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+is+required+for+zebrafish+caudal+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Autophagy is required for zebrafish caudal fin regeneration.</a> Cell Death Differ. 21 (4), 547-556 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Estevez, C., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+apoptosis+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Autophagy and apoptosis in planarians.</a> Apoptosis. 15 (3), 279-292 (2010).</li>
<li>Buzgariu, W., Chera, S., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+investigate+autophagy+during+starvation+and+regeneration+in+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Methods to investigate autophagy during starvation and regeneration in hydra.</a> Methods Enzymol. 451, 409-437 (2008).</li>
<li>Tettamanti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+invertebrates%3A+insights+into+development%2C+regeneration+and+body+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Autophagy in invertebrates: insights into development, regeneration and body remodeling.</a> Curr Pharm Des. 14 (2), 116-125 (2008).</li>
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상처 치유 및 재생의 모델로 Nematostella의 사용은 점점 더 인기를 끌고있다. 따라서,이 할당과 비교 될 수 효과적인 세포 및 분자 분석 전에 특정 프로토콜의 형태 패턴을 가시화 할 수있는 것이 중요하다. 삶의 포스트 플랜 울라 단계에서, 거의 모든 위치에서 절단 누락 된 구조를 개혁 할 수있는, 재생 &quot;유연성&quot;의 높은 수준을 Nematostella. 따라서, 여러 연구자들은 다른 연령대에, 재생 절단으로 인한 또는 폴립의 다른 지역에서 부상을 조사하고 7-18 크기했다. 여기에 설명 된 준비 시스템은 생식 조직을 부족 해부학 전체 청소년 용종에 성인의 반구 끝에서 절단 physa의 형태 학적으로 균일 한 섹션의 변화를, (이 재생 청소년들이 성적 m가 될 때 우리는 아직 결정하지 않은 다음ature). 이 접근법은 최대 근처 복잡 하나 조직 간단한 퇴화로부터 재생을 조사한다. 최소 그룹 크기가 잠...

하나의 히드라의 재생의 관찰 실험 과학 1, 2 등 생물학의 출현에 정액 사건이었다. 재생은 생물학에 매우 폭 넓은 매력의 현상 유지와 비슷하게 사람을 누워. 인간의 재생에 한계를 이해하고 극복하기 위해 발달 생물 학자, 의사, 의학자 및 조직 엔지니어를위한 잠재력은 더 본질적으로 재미보다 재생 생물학을합니다. 이제, 이러한 게놈 시퀀싱 및 이득 및 기능 도구의 손실과 같은 새로운 기술의 사용으로, 필드가 떨어져 재생 메커니즘을 애타게 태세 궁극적으로 재생하는 방법을 다양한 종 이해할 수있는 동안 다른 사람은 할 수 없습니다. 분자 세포 및 형태 학적 반응에 공통성의 정도는 밝혀지지 남아 있지만 지금까지 그것을 다시 생성 할 수 있습니다 동물 중 기본 응답이 있었다 imagi있는 것보다 더 유사하다는 것을 나타납니다NED 만 10 년 전 3. 특히 자포 동물은 형태 학적 다양성의 폭 넓은 스펙트럼 속에서 거의 모든 신체 부위의 재생에서 손쉬운 있습니다. 고독한 신선한 물 용종에서 히드라는 포르투갈 사람-O-전쟁과 같은 복잡한 식민지 siphonophores에, 거대한 산호초를 구축 작은 해양 폴립과 함께, 재생을위한 메커니즘 이외에, 자주 재생하는 모드입니다 수리 또는 부상 포식으로 인해 손상되거나 손실 된 신체 부위를 개혁. 자포 동물의 다양한 종의 재생을 위해 유사하거나 다른 메커니즘을 사용할지 여부를 근본적으로 흥미로운 질문 4-6이다. 우리와 다른 사람들이 anthozoan을 개발 한 Nematostella는 재생 7-17 모델로 vectensis. 우리는 최근 abora부터 타개 조직의 형태 학적으로 균일 한 편에서 전신의 재생을 설명하기위한 스테이징 시스템을 개발폴립 (10)의 리터 끝. 모든 수준에서 양분 때 Nematostella 용종이 다시 생성 할 수 있지만, 우리는이 자연 무성 분열 (18)의 정상 평면에 가까운 때문에 부분적으로 가장 형태 학적으로 단순한 지역의 physa의 반구 위치에 성인을 삭감하기로 결정하고, 또한 때문에 허가 관찰하고 몸 전체가 단순한 형태 구성 요소에서 재 조립하는 방법의 분자 분석. Nematostella 재생 스테이징 시스템 (NRSS)은 일반 배양 조건에서, 절단 physa에 의해 재생의 모든 측면의 진행을 득점하는 데 사용할 수 형태 벤치 마크의 비교적 간단한 세트를 제공하거나 실험적으로 같은 작은 분자 치료, 유전자 조작으로 상황을 교란 , 또는 환경 변경. 예상 된 바와 같이, 재생은 NRSS의 세포 및 분자 이벤트가 참조 할 수있는 형태소 지지체로서 채택되고10. 마지막으로 절단 우리의 방법은 최근의 연구 (17)에 사용되는 핀 포인트 구멍보다 큰 크기의 벌어진 구멍 여러 주문을 생산하고, 아직 모두 상처를 6 시간의 주위에 치유. 상처 봉합의 시각 체포와 별개의 단계를 문서화하는 것은 상처의 크기와이 종료하는 데 걸리는 시간의 외관상의 독립성을 설명하는 실험 방법을 제안한다. 따라서,이 프로토콜에 의해 제공되는 반구 절단 공정의 깊은 시각적 이해는,이 모델은 재생 시스템으로 추가 조사를 돕고 Nematostella의 vectensis를 사용하여이 스테이징 시스템의 적용 범위를 확장 할 것이다.

<table><tbody><tr><td>Nematostella vectensis, 성인</td><td>해양 생물학 연구소 (MBL)</td><td></td> <td>비영리 공급업체</td></tr><tr><td>유리 배양 접시, 250 mL</td><td>Carolina 생물학적 공급</td><td>741004</td><td>250 mL</td></tr><tr><td>유리 배양 접시, 1,500 mL</td><td>Carolina 생물학적 공급</td><td>741006</td><td>1,500 mL</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 전사 피펫, 5&nbsp; mL</td><td>USA 사이언티픽&nbsp;</td><td>1022-2500</td><td>좁은 구멍, 눈금이 매겨진</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 전사 피펫, 테이퍼형</td><td>Samco</td><td>202-205</td><td>넓은 구멍을 만들기 위해 팁 1인치를 잘라냅니다</td></tr>.<tr><td>일회용 메스</td><td>깃털 안전 면도기 Co. Ltd</td><td>번호 10</td><td>블레이드는 곡선이어야 합니다</td></tr><tr><td>.#5 Dumont 파인 포인트 핀셋</td><td>Roboz</td><td>RS5045</td><td>대체 공급업체 사용 가능</td></tr><tr><td>Pyrex Petri 접시, 직경 100mm</td><td>Corning</td><td>3160</td>은 <td>다른 유리 페트리 플레이트를 대체할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 멸균 6-웰 플레이트</td><td>Corning Falcon&nbsp;</td><td></td><td>다른 제조사의 353046 또는 유사한</td></tr> 멸<tr><td>균 12-웰 플레이트</td><td>Nunc&nbsp;</td><td></td><td>다른 제조업체의 150628 또는 유사</td></tr><tr><td>멸균 24웰 플레이트</td><td>Cellstar, Greiner bio-one</td><td>662-160</td><td>또는 다른 제조업체의</td></tr><tr><td>유사 염수 새우 hathery 키트</td><td>San Francisco Bay; drsfostersmith.com</td><td>CD-154005</td><td>소금물 새우 재배 옵션</td></tr><tr><td>식료품점에서</td><td></td> 흔히 볼 수 있는<td>파이렉스 베이킹 접시</td><td>소금물 새우</td></tr> <tr><td>재배 옵션인공 해수 믹스 50 갤런 이상&nbsp;</td><td>인스턴트 오션; drsfoster-smith.com</td><td>CD-116528</td><td>기타 브랜드는 충분할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>플라스틱 통은 재고 ASW 준비를 위한</td><td>다양한</td><td></td><td>일반 25 갤런 플라스틱 쓰레기통 OK</td></tr><tr><td>폴리프로필렌 Carboy Carolina</td><td>Biological Supply</td><td>716391</td><td>ASW @ 12 ppt 비커의 작업 재고</td></tr><tr><td>, 졸업, 4,000 mL</td><td>PhytoTechnology Laboratories</td><td>B199</td><td>36 ppt ASW를 12 ppt로 희석하기 위해</td></tr><tr><td>실체현미경 및 광원</td><td>다양한&nbsp;</td><td></td><td>연속 1 - 40X 배율</td></tr></tbody></table>

작은 별 말미의 반구 physa에서 전체 폴립 재생을 유도 nematostella의 vectensis

Inducing Complete Polyp Regeneration from the Aboral Physa of the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis

자포 동물, 특히 히드라가 손상되거나 절단 구조 및 참으로 틀림없이 250 개 이상의 년 전 Trembley의 작품을 통해 현대 생물학의 질문을 출시 이러한 연구를 다시 생성하는 것으로 첫 번째 동물했다. 현재 재생의 연구는 스폰지에서 포유 동물을 통해 같은 히드라, planaria 및 Urodeles 등 모두 &quot;고전적인&quot;재생 생물을 이용하여 부활뿐만 아니라, 후생 동물의 범위에 걸쳐 종의 확대 스펙트럼을 볼 수있다. 생물학적 현상과 같은 고유의 관심 외에도, 재생이 종의 다양한 작동 방식을 이해하는 재생 과정이 일반적인 기능 및 / 또는 종 또는 상황에 특정 세포 및 분자 메커니즘을 공유하는지 여부에 대한 정보를 통보하는 것입니다. 작은 별의 말미는 Nematostella의 vectensis는 재생을위한 신흥 모델 생물이다. 히드라처럼, Nematostella하지만 t에서, 고대 문, 자포 동물의 구성원 인그는 클래스 산호충 강, 진화 적으로 더 기초 인 히드로 충에 자매 계통 군. Nematostella에서 재생의 따라서 측면을 비교하고 히드라 등 자포 동물의 것과 대조 흥미로운 일이 될 것이다. 이 글에서, 우리는 이등분 관찰하고 physa 호출되는 Nematostella 성인의 반구 끝의 재생을 분류하는 방법을 제시한다. physa 자연스럽게 무성 생식의 수단으로 분열을 거쳐, 자연 분열 또는 physa 수동 절단 중 하나는 복잡한 형태학의 재 성장과 개혁을 트리거합니다. 여기서 우리는 Nematostella 재생 준비 시스템합니다 (NRSS)에 다음의 간단한 형태 학적 변화를 성문화했다. 우리는 클로로퀸의 효과, 리소좀 기능 블록의 자식 작용의 억제제를 테스트 할 NRSS를 사용합니다. 결과는 자식 작용이 억제 될 때 용종 구조, 특히 장간막의 재생이 비정상이라고 나타낸다.

절단 된 physa에서 재생하는 동안 형태 학적 이벤트의 진행은 각 NRSS 단계에서 physa의 대표적인 전망을 포함 그림 1A에 표시됩니다. 전형적인 physa 컷 사이트는 성인 (화살촉)에 표시됩니다. 그림 1A의 사진은 완전히 형성 용종을 통해 갓 잘라 physa에서 구강 및 신체 구조의 점진적 재생을 보여줍니다. 도 1b는 각각 4 단계 및 5 단계에서의 내부 격벽의 장간막의 구성을 표시 하였다. 4 단계에서 일부 장간막은 "주름"을 부족하지만, 대부분은 주름을 개발해야 5 단계로 자격을합니다. 그림 1D는 집게 (그림 1E)를 제거 할 수 있습니다 점액의 막에 싸여 physa을 보여줍니다. (가 부당 동물 트랩 않는) 재생 통상 무해은 멤브레인 physa를 기록하고 방해 할 수 ...

여기에서는 자포동물(cnidarian anthozoan) 모델인 Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis에서 재생을 유도하고 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 형태학적 병기 결정 시스템을 사용하여 재생을 절단하고 분류하는 방법을 보여주며, 이 시스템을 사용하여 폴립 구조 재생에서 자가포식에 대한 요구 사항을 밝힙니다.

작은 별 말미의 반구 Physa에서 전체 폴립 재생을 유도 Nematostella의 vectensis

Cnidarians, and specifically Hydra, were the first animals shown to regenerate damaged or severed structures, and indeed such studies arguably launched ...

이 절차의 전반적인 목표는 nematostella vectensis의 복부 끝에서 제거된 조직의 작은 부분에서 완전한 용종을 재생하는 동안 발생한 예측 가능한 일련의 형태학적 변화를 설명하는 것입니다.이 방법은 상처 부위의 세포가 누락된 구조를 다시 만들기 위해 어떻게 재조직되고 배치되는지와 같은 재생 생물학의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법에 대한 아이디어가 처음 떠오른 이유는 상대적으로 복잡한 폴립이 최소한의 형태학적 정보부터 시작하여 어떻게 다시 결합될 수 있는지 보고 싶었기 때문입니다. 이 방법의 시각적 시연은 초기 상처 후 단계 진행이 때때로 점막에 의해 가려지기 때문에 중요합니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 사람들은 용종의 부드럽고 끈적끈적한 젤라틴 같은 특성 때문에 상처 부위에서 조직을 완전히 분리하는 데 어려움을 겪을 것입니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 nematostella vectensis의 조건화로 이 절차를 시작합니다. 이 기술을 사용할 때 선택한 동물이 동일한 크기이고 동일한 먹이 및 기타 조건 매개변수와 같은 동일한 배양 이력을 갖는 것이 특히 중요합니다.절단 최소 1시간 전에 선택한 동물의 접시를 인큐베이터에서 실내 조명으로 옮깁니다. 넓은 구멍의 플라스틱 피펫을 사용하여 절단할 수영장에서 5마리의 동물을 100ppm의 염도로 인공 해수가 들어 있는 직경 12mm의 멸균 유리 절단 접시의 바닥으로 옮깁니다. 접시를 s에 놓습니다.tage 10에서 40x 사이의 가변 배율로 스테레오 현미경의 e.거의 같은 길이의 크기가 일치하는 폴립을 선택하고 절단 전 3일 동안 집락에서 떨어진 그릇에 넣습니다. 멸균 메스를 사용하여 각 폴립에서 복부 physa를 절단하여 길이가 넓고 장간막이 없는 physa 부분을 대략적으로 얻습니다. 이를 위해 메스 날을 원하는 절단 부위에 동물과 접촉시키십시오.도움 없이 하거나 숫자 5 집게로 동물의 몸을 부드럽게 움켜쥐십시오. 메스의 구부러진 칼날을 지렛대 삼아 몸을 가로질러 흔드는 동작으로 조직을 자릅니다. 접시에서 절단된 각 기증자 용종을 제거하고 pooled amputees라고 표시된 별도의 그릇에 다시 넣습니다.그릇의 연대를 측정한 후에는 스톡 배양에 되돌려 놓으십시오. 절단 접시에 남아 있는 절제된 physa를 인공 바닷물에 12/1, 000의 염분으로 헹굽니다. 그런 다음 각 physa를 각 웰에 1, 000ppm의 염도로 10ml의 인공 해수가 있는 다중 웰 세포 배양 플레이트의 별도의 멸균 웰로 옮깁니다.이 단계를 반복하여 각 실험 처리를 위해 예약할 각 웰에서 최소 5개의 physa를 수집합니다. physa를 포함하는 플레이트를 원하는 재생 속도에 따라 결정되는 고정된 온도의 온도 조절 인큐베이터에 넣습니다. 다양한 배율의 실체 복합 현미경을 사용하여 physa를 점수화합니다.갓 절단한 nematostella physa를 0단계로 점수화하고 NRSS를 사용하여 절단 후 또는 DPA를 매일 같은 시간에 계속 점수 매기기합니다. 갓 자른 physa가 상처 부위가 보일 수 있는 열린 상처 부위가 있는 연약한 풍선을 닮은 컵 모양의 덩어리로 나타나면 physa를 0단계로 점수를 매깁니다. 절단 상처가 닫힌 것처럼 보이는 경우 1단계로 물리 검사를 실시합니다.귀 기둥의 표면이 부풀어 오르면 방사형 대칭 패턴으로 배열되고 홈으로 분리된 8개의 돌출된 아치가 드러나는 경우 2단계로 physa를 점수 매기십시오. 2단계에서는 아치의 정점에서 너비만큼 높고, 일시적일 가능성이 높으며, 초기에는 단일 외배엽 세포층으로 구성된 작은 반구형 bleb를 관찰합니다. physa가 노화됨에 따라 점액으로 둘러싸여 있을 수 있으므로 집게로 조심스럽게 제거해야 합니다.내배엽 및 외배엽 조직층을 포함하는 촉수의 새싹이 적어도 일부 방사형 아치의 귀 끝에서 안정적으로 형성되는 경우 physa를 3단계로 점수 매기십시오. physa가 체벽의 삽입부에서 coelenteron으로 확장되는 8개의 뚜렷한 가시적 장간막을 포함하는 경우 physa를 4단계로 평가하며, 복부 끝 또는 장내 인두와 연결되는 것으로 보이는 위치에서 측정된 요골 너비의 두 배 이상인 귀 복부 길이를 측정합니다. 마지막으로, physa에 주름이 있는 장간막이 4개 이상 있고 주름이 4단계보다 더 꽉 차고 구불구불한 경우 physa를 5단계로 점수를 매깁니다.5단계에서 동물은 거의 정상적인 성체 외모를 갖지만 생식선 세포는 보이지 않습니다. 0.1% DMSO로 처리된 이 대조군 선마성피지사 그룹은 5기까지 완전히 재생되었습니다. 그러나 클로로퀸으로 치료한 피지사는 완전한 장간막을 형성하지 못했습니다.클로즈업은 클로로퀸에서 배양된 physa에서 장간막에 주름이 있는 것과 주름이 없는 것을 모두 보여줍니다. 이 그래프는 클로로퀸 치료의 집계 결과를 보여줍니다. 10에서 50 마이크로몰 사이의 모든 처리는 유사한 결함을 일으켰는데, 대부분 장간막에 주름이 없다는 점에서 장간막의 완전한 재형성이 부족했습니다.일단 마스터하면 이 기술은 30개의 절단 physa를 포함하는 각 6웰 플레이트에 대해 한 시간 이내에 완료할 수 있습니다. 채점은 빠르며 각 복제 플레이트에 대해 30분이 필요할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 복부 조직의 작은 부분에서 완전한 용종을 재생하는 동안 발생하는 형태학적 변화를 시각화하기 위해 physa를 절단하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.이 기술의 주요 장점은 시각적으로 균일한 조직 컵에서 완전한 폴립의 재생의 기초가 되는 분자 이벤트를 고정하는 형태학적 단계를 제공한다는 것입니다. 이 절차를 시도하는 동안 영양 이력과 관련하여 동물을 사전 조건화하고, 성체 장간막을 배제하기 위해 이등분하고, 치료 내 변동을 줄이기 위해 재생 physa의 크기를 표준화하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 예를 들어 작은 분자에 대한 유전적 돌연변이 또는 신호 경로 교란의 영향을 평가할 수 있습니다.또는 형태 유전 학적 변화는 자가 증식, 계통 추적 또는 부위 2 유전자 발현의 현미경 분석과 상관 관계가 있을 수 있습니다. 이 기술은 재생 생물학 분야의 연구자들이 이 모델 유기체의 놀라운 재생 능력의 기초가 되는 세포 생물학, 신호 경로 및 형태 유전학적 과정을 탐구할 수 있는 길을 열어줄 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

morphant 배아를 생성하는 방법은 발달 메커니즘과 유전자 규제 네트워크를 연구하는 것이 필수적이다. 바다 스타 Patiria miniata는 이러한 연구에 대한 새로운 모델 시스템입니다. 여기서 우리는 배아의 문화를, 배우자를 얻기 생산을위한 프로토콜,이 종 접합자의 빠른 미세 주입을 제시한다.

의 미세 주입을위한 방법 Patiria의 minata 접합자

Schmidtea 서 planarian 줄기 세포 및 조직 재생을 공부에 대 한 우수한 모델입니다. 이 게시는 선택적으로 한 기관, 인 두, 화학 나트륨 아 지 드를 동물을 노출 하 여 제거 하는 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 또한 인 두 재생을 모니터링 하기 위한 방법을 설명 합니다.

화학 절단 및 Planarian Schmidtea 지중해 에 인 두의 재생

거 대 한 ciliate, Stentor coeruleus, 재생을 연구 하 고 상처 치유에 뛰어난 시스템입니다. 단일 셀 또는 셀 조각에서 Stentor 셀 문화를 구축, 절단 세포 재생을 유도, 화학적 membranellar 밴드 및 구강 장치, 이미징, 및 세포의 분석의 재생성을 유도 하기 위한 절차 소개 재생입니다.

Stentor 에 중생의 연구 방법

이 프로토콜의 목표는 배아를 희생하지 않고  위도 동안 말미잘 성충을 유전자 형화하는것입니다.

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여기에서, 우리는 바다 말미잘에서 조독 추출물을 얻고 용혈성 및 포스포리파제 활성을 검출하는 프로토콜을 기술한다.

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