November 6th, 2016
여기에서 우리는 장사 표시 씨 스트립 및 테트라 졸륨 클로라이드 (TZ) 생존 능력 테스트를 사용하여 필드 조건에서 종자 생존, 발아 및 휴면을 평가하기위한 프로토콜을 제시한다.
이 절차의 전반적인 목표는 시간이 지남에 따라 밭 조건에서 종자 발아, 사망률 및 휴면 상태를 직접 관찰하고 정량화하는 것입니다. 이 방법은 종자 생태학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 예를 들어 다양한 종 또는 생태 유형이 다음 세대의 개체군에 개별 묘목을 기여하는 방법과 같은 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또는 개별 씨앗을 영구 토양 종자 은행에 이식합니다.
이 기술의 주요 장점은 여러 가지 실험 설계, 종, 처리 또는 제거 날짜를 현장에 쉽게 배치할 수 있으며 몇 주에서 몇 달 동안 매장한 후 완전한 복제물로 검색할 수 있다는 것입니다. 시작하려면 각 씨앗 스트립에 대해 20 x 105cm 천 스트립을 자릅니다. 줄자를 사용하여 스트립에 구획을 표시합니다.
천을 반으로 접고 고온 글루건을 사용하여 한쪽 끝에 접착제를 바릅니다. 접착제를 약간 식힌 다음 양쪽을 함께 눌러 밀봉을 만듭니다. 접힌 가장자리에서 열린 짧은 끝까지 각 구획 표시를 따라 접착제 선을 놓습니다.
접착제 라인을 따라 두 개의 천 면을 함께 눌러 구획 사이에 구멍이 없는 밀봉을 만듭니다. 시드 교차 유형을 각 스트립의 구획에 무작위로 할당합니다. 다음으로, 균일 한 수의 씨앗을 세어 각 구획에 넣으십시오.
플라스틱 정원 다트를 사용하여 구획에 씨앗 유형으로 레이블을 붙입니다. 글루건을 사용하여 구획을 단단히 밀봉하십시오. 스트립을 따라 진행하면서 전체 스트립이 채워지고 밀봉될 때까지 종자 주머니를 하나씩 채우고, 라벨을 붙이고, 밀봉합니다.
계속하기 전에 구획 사이에 틈이 있는지 확인하고 필요에 따라 접착제를 찾으십시오. 매장 시험을 수행하려면 먼저 실험 설계에 따라 지정된 깊이로 플롯을 파서 집을 짓습니다. 씨앗 스트립을 땅에 놓고 흙으로 덮으십시오.
다음으로, 금속 메쉬 하드웨어 천을 묻힌 종자 플롯보다 각면에서 10cm 더 큰 패널로 자릅니다. 메쉬 천의 가장자리를 흙으로 밀봉하십시오. 이 덮개는 종자 굴을 파는 포식자를 제외해야 합니다.
마지막으로, 현장 위치에 유색 플라스틱 플롯 라벨을 배치하고, 제거 날짜가 표시되어 있으며, 서면 기록을 보완하기 위해 색상으로 구분됩니다. 지정된 제거 날짜에 대상 씨앗을 파냅니다. 스트립을 젖은 신문지로 싸서 촉촉하게 유지하고 운반하기 위해 쿨러에 넣으십시오.
실험실에 들어가면 구획에 씨앗이 보일 때까지 스트립을 물로 헹구어 외부 먼지와 부스러기를 제거합니다. 가위를 사용하여 한 번에 한 칸씩 자릅니다. 존재하는 모든 발아 씨앗을 세고 제거하십시오.
명확하게 죽은 씨앗을 세고 제거하십시오. 마지막으로, 발아되지 않은 나머지 씨앗을 모두 모아 페트리 접시에 라벨이 붙은 젖은 압지 조각에 놓습니다. 발아를 위해 일주일 동안 접시를 성장실에 넣습니다.
씨앗을 조사하고 발아한 씨앗을 식별하고 세십시오. 이 씨앗은 현장 조건에서 발아하지 않았으므로 생존 가능하지만 발아되지 않은 것으로 기록하십시오. 테트라졸륨 클로라이드를 사용하여 생존력을 테스트하기 위해 나머지 씨앗을 반으로 자릅니다.
배아와 배유가 보이는 페트리 접시에 절반을 놓습니다. 씨앗 반쪽을 덮을 만큼 충분한 염화테트라졸륨을 추가합니다. 접시를 섭씨 30도로 설정된 인큐베이터에 3시간 동안 넣습니다.
마지막으로 시드 반쪽을 평가합니다. 배아의 붉은 얼룩을 나타내는 씨앗은 발아할 수 있는 반면 염색되지 않은 씨앗은 죽은 것입니다. 이 그래프는 늦가을에 묻힌 후 첫 번째 제거 날짜에 해바라기 작물 야생 십자가 유형의 발아를 보여줍니다.
교차 유형은 작물 대립유전자 비율을 증가시켜 배열되며, 각 교배에 대해 모계 부모가 표시됩니다. 일반적으로 작물 대립유전자 비율이 낮을수록 늦가을에 부적응 발아가 감소했습니다. 이른 봄 제거시 모든 유전자형은 발아율이 높았지만 발아되지 않았거나 죽은 종자의 수는 크게 달랐습니다.
특히, 작물 모계 혈통을 가진 교배형은 폐사율이 더 높았던 반면, 모계 야생 교배형은 발아되지 않은 상태로 남아 있을 가능성이 더 높았다. 봄이 되자 일부 교배 유형의 발아가 감소했습니다. 이것은 더 일찍 발아하는 교배 유형에 대한 매장지 내의 종자 사망률 때문일 수 있습니다.
따라서, 작물 모계 부모에 의해 생산된 작물과 유사한 교배형이 더 많을수록 폐사율이 더 높았다. 이 기술을 숙달하면 설계에 따라 몇 시간 안에 조립할 수 있습니다. 스트립 평가는 일반적으로 격실당 몇 분 밖에 걸리지 않지만 성장 챔버에서의 시간과 TZ의 배양 시간이 추가됩니다. 이 절차를 시도하는 동안, 성장 챔버를 통과한 후 TZ 테스트에 의해 실행 가능한 것으로 결정된 씨앗만이 진정으로 휴면 상태인 것으로 간주될 수 있다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.
성장실에서 발아하는 씨앗은 발아되지 않은 것으로 간주됩니다. 이 절차에 따라 종자 생존이 종자 출현 및 수명 주기 완료로 변환되는지 여부와 같은 추가 질문에 답하기 위해 묘목 연구를 수행할 수 있는 것과 같은 다른 방법을 병렬로 실행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 종자 발아, 폐사율 및 휴면에 대한 현장 평가를 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
염화테트라졸륨은 자극제라는 것을 잊지 말고, 이 절차를 수행하는 동안 항상 장갑 착용과 같은 예방 조치를 취해야 합니다.
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이 프로토콜은 표지된 종자 스트립과 생존력 테스트를 사용하여 현장 조건에서 종자 생존율, 발아, 휴면 상태를 평가하는 방법을 설명합니다. 이를 통해 연구자들은 시간에 따른 종자 행동을 정량화할 수 있어 종자 생태학의 이해에 기여합니다.
This method enables direct observation of seed germination, dormancy, and mortality under field conditions, providing quantitative data critical for target validation in agricultural biotechnology. By assessing seed behavior over time, it supports mechanistic de-risking of traits related to stand establishment and persistence. The approach enhances predictive confidence in early discovery by linking genetic variation to field-relevant phenotypes.
The method integrates into the discovery continuum from hypothesis testing to lead identification by providing field-based phenotypic data on seed survival traits.