Name: 이 필드 조건에서 종자 발아, 휴면 및 사망률을 평가하기위한 신뢰할 수있는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: 배우세요 종자 생존, 발아 및 휴면을 야외 조건에서 평가하는 방법을. 라벨링된 종자 스트립과 테트라졸륨 염화물(TZ) 활력 검정을 사용하여 종자 생태학 연구에 필수적인 정량적 데이터를 제공합니다.

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이 작업은 미국 농무부 산하 국립식량농업연구소(National Institute of Food and Agriculture)의 A. Snow, K. Mercer, H. Alexander에게 Biotech Risk Assessment Grant Program 경쟁 대상 번호 2006-39454-17438의 지원을 받았습니다. 이 방법을 사용한 실험은 캔자스 생물 조사국(Kansas Biological Survey)과 캔자스 대학(University of Kansas)의 연구 단위인 캔자스 대학교 필드 스테이션(University of Kansas Field Station)에서 수행되었으며 이에 의해 지원되었습니다. 저자는 이 원고의 이전 버전에 대한 유용한 검토를 해준 P. Jourdan과 E. Regnier에게 감사를 표합니다. 또한 이 작업은 University of Kansas Field Station, Ohio State University(OSU)의 Waterman Farm, OSU의 USDA 관상용 식물 생식질 센터, OSU 원예 및 작물 과학과의 종자 생물학 실험실, 특히 E. Renze, S. Stieve, A. Evans, 기술 지원을 위한 E. Grassbaugh.

1. 여러 종 (種) 또는 단일 종의 제어 십자가에서 종자를 수집 참고 : 산모 (시드 일으키기) 부모 야생, 하이브리드, 작물 유형을 사용하여 종 Helianthus의 annuus (해바라기)에서 15 크로스 타입에서이 예를 사용 씨앗을. <ol><li> 성장시기의 끝에, 라벨 가방 성숙한 씨앗 머리를 수집합니다. 표준 형식 (즉, 산모 X의 아버지)에서 부모의 십자가 형으로 표시 봉투에 왕겨와 장소 씨앗에서 청소 씨. </li><li> 동일한 부모의 크로스 유형의 같은 수의 씨앗 같은 양을 사용하여 큰 봉투에 함께 벌크 씨. 예를 들어, 같은 어머니와 아버지의 부모와 함께 10 크로스 타입 100 씨앗. 식별 (크로스 타입) 정보 봉투 레이블. 이 대형 봉투 2 장에 매장 스트립 작성에 사용 시드 주인입니다. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody&gt; <tr><td></td><td colspan="3"> 모자 부모 </td></tr><tr><td> 아버지의 부모 </td><td> 야생 : WxW </td><td> F 1 : WXC </td><td> 자르기 : CXC </td></tr><tr><td> 야생 : WxW </td><td> 0 % WxW </td><td> 25 % F 1 XW † </td><td> 50 % CXW † </td></tr><tr><td> BC : WxF1 또는 F1xW </td><td> 12.5 % WxBC </td><td> 37.5 % F 1 XBC </td><td> 62.5 % CxBC </td></tr><tr><td> F 1 : WXC </td><td> 25 % WxF 1 † </td><td> 50 % F 1 XF 1 </td><td> 75 % CXF 1 † </td></tr><tr><td> F 2 : F 1 XF 1 </td><td> 25 % WxF 2 </td><td> 50 % F 1 XF (2) </td><td> 75 % CXF 2 </td></tr><tr><td> 자르기 : CXC </td><td> 50 % WXC † </td><td> 75 % F 1 XC † </td><td> 100 % CXC </td></tr></tbody></table> 표 1. 부모의 크로스 t손 수분. 해바라기 작물 야생 하이브리드 크로스 타입에서 생산 씨네마 스테이션은 시드 매장 실험에 사용하기 위해 손 수분으로 생산되었다. 모든 크로스 유형의 경우, 산모의 부모가 먼저 나열하고 아버지의 부모는 두 번째 목록. † 표시 크로스 유형은 동일한 % 작물 대립하지만 서로 다른 산모 부모와 함께 상호 교차 형 쌍의 일부입니다. 페이스, BA 등 표는 이전에 발표되었다. (2015) 15. 2. 사용자 지정 종자 매장 스트립 만들기 참고 :이 예를 들어, 우리는 세 가지 제거 날짜 트리트먼트와 15 복제가 있었다, 그래서 우리는 총 45 스트립이 필요합니다. 이 예는 스트립 당 15 구획 그래서, 우리는 15, 7 × 10cm 구획을 수용하기에 충분한 미세 메쉬 폴리 에스테르 직물 또는 모기장이 필요합니다. 그림 1을 참조하십시오. <ol><li> 각 씨 스트립에 대한 직물의 20 × 105cm 스트립을 절단하여 시작합니다. </li><li> 다음 반으로 직물을 배, 측정 및 구획을 표시합니다. HIG를 사용하여시간 - 온도 접착제 총, 하나의 짧은 (10cm) 끝을 밀봉. 접착제가 약간 있지만 완전히 냉각되면, 시일을 생성하기 위해 함께 직물 측면을 누른다. 주의 : 피부와 접촉이 장기간 인 경우 고온 접착제 및 접착제 총 팁 화상을 입을 수 있습니다. </li><li> 각 구획 시점에서 개방 짧은 끝에 접힌 가장자리에서 접착제 라인. 구획 사이의 구멍없이 씰을 보장하기 위해 접착제 라인을 따라 함께 두 패브릭면을 누릅니다. 구획 사이에 이주 씨는 실험 오차에 기여한다. 참고 : 이제 구획이 만들어 졌는지, 펼쳐진 가장자리 씨와 자신의 식별 정보 (크로스 타입 이름)을받을 오픈 준비 남아 있어야한다. </li><li> 무작위로 각 스트립에 대한 구획 씨 크로스 유형을 지정합니다. <ol><li> 종자의 균일 한 수 (각 구획 20이 예에서 사용되는)과 종자 구획을 입력합니다. 그들이 할 수 있도록 라벨, 컷에 맞는 플라스틱 정원 다트에 산업 영구 마커를 사용매장을 견딜. 주 : 대체 라벨링 방법이 사용될 수있다. </li><li> 각 구획 시드 및 라벨로 채워진 후, 고온 접착제 총을 즉시 밀봉 구획. 전체 시드 스트립이 완전히 밀폐 될 때까지 진행합니다. 복제, 블록 및 / 또는 치료 정보 첫 번째 칸에 전체 스트립 레이블. 참고 : 우리는 시간 제거, 블록을 가지고 있었고, 블록 내에서 스트립을 복제하기 때문에 우리의 연구를 위해, 우리는이 모든 정보를 포함. </li><li> 다음 지구로 이동하기 전에 필요에 따라 구획 및 현장 접착제 사이의 간격을 확인합니다. </li></ol></li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54663/54663fig1.jpg" /> 각 구획에 대한 크로스 타입 식별을 보여주는 매장 스트립의 그림 1. 매장 씨 스트립 개략도. 예. 산모의 부모는 두 번째 나와있는 아버지의 부모와 먼저 나열됩니다. 색상이 다른 산모의 혈통을 표시작물에 대한 F 1 하이브리드 블루, 야생 노란색 및 빨간색. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54663/54663fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 3. 필드에서 시드 스트립 묻어 <ol><li> 집 스트립 지정된 깊이 플롯을 파. 분석의 줄거리 등 (이 예에서, 크로스 타입) 메인 플롯 및 구획 ID로 사용되는 스트립은 임의로 삭제 날짜를 허용하도록 배열 된 개별 블록 스트립을 할당한다. </li><li> 지구와 스트립을 커버. 컷 금속 메쉬 하드웨어 천에 묻혀 스트립을 통해 플롯과 장소보다 10cm 더 클 수 있습니다. 지구와 가장자리와 커버 천의 가장자리를 확보하기 위해 U 핀을 사용합니다. 참고 :이 덮개가내는 씨앗 포식자를 제외입니다. 또 다른 옵션으로, 머서 등. (13)는 건설 및 필드 삶을에 강한 고퍼 압력에 의한 종자 스트립을 포위 하드웨어 천 상자를 묻혀기.) </li><li> 스트립 위치 및 제거 날짜가 분명 서면 기록을 보완하기 위해 구분하는 색깔 측량의 플래그를 배치합니다. </li></ol> 4. 스트립을 발굴하고 종자를 평가 <ol><li> 주어진 제거 날짜에 할당 씨 스트립을 발굴. 그들은 시드 평가가 진행됩니다 실험실에 도달 할 때까지 서늘하고 습한 환경에서 스트립을 유지한다. 이것은 젖은 신문에 스트립 포장 및 운송 또는 특급 배송 쿨러에 배치하여 수행 할 수 있습니다. </li><li> 스트립 충분히 그 외부 이물질 것 모호하지 씨앗 깨끗해질 때까지 물에 스트립에서 진흙과 흙을 씻어. </li><li> 한 번에 오픈 한 구획을 잘라 가위를 사용합니다. 발아 씨앗을 계산하고이를 제거합니다. 분명히 죽은 씨앗 (예를 들어, 부패, 또는 부패 씨앗)를 계산합니다. 또한, 발아 휴면, 죽은 씨앗을 구별하기 위해 표시, 젖은 페트리 크기 블로터 종이에 발아 씨앗을 놓습니다. <ol><li> 발아와 배양 접시를 놓습니다25 ° C / 10 ° C 12 시간 주 / 야간 : 표준 발아 조건에 대한 성장 챔버 세트에 씨앗. 씨앗 일주가 발아 할 수 있습니다. , 가능한 이러한 계산하지만, 현장 조건에서 발아하지 않았기 때문에 발아 않는 모든. </li></ol></li><li> 성장 챔버의 처리 후, 검사는 테트라 졸륨 클로라이드 (TZ) (13)를 사용하여 생존력에 대해 발아 종자 남아. 이를 위해 AOSA 테트라 졸륨 테스트 핸드북 (14)를 사용하여 연구 종에 대한 TZ 적절한의 퍼센트 솔루션을 구성한다. 예를 들어, 1 % 용액이 사용된다. <ol><li> 반으로 발아 씨앗을 잘라 절반을 배치 배아와 배젖은 씨앗을 충당하기에 충분한 TZ 솔루션을 포함하는 배양 접시에서 볼 수 있었다 (씨앗이 괜찮 떠있다). </li><li> 30 ° C로 설정 인큐베이터에 TZ 배양 접시를 놓고 3 시간을 기다립니다. 원하는 경우 더 높은 온도, 빠른 반응 발생합니다,하지만 위험이 overstaining입니다 있습니다. </li></ol></li> &lt;리&gt;는 인큐베이터에서 배양 접시를 제거하고 평가합니다. 흠 씨가 죽은하면서 배아에 빨간 염색 한 씨앗, germinable 있습니다. 구별 한계 케이스 및 특정 종에 대한 세부 사항에 대한 AOSA 테트라 졸륨 테스트 안내서를 참조하십시오. </li></ol>

<ol><li>Walck, J. L., Baskin, J. M., Baskin, C. C., Hidayati, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+transient+and+persistent+seed+banks+in+species+with+pronounced+seasonal+dormancy+and+germination+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Seed+Sci+Res%22%5BJournal%5D)">Defining transient and persistent seed banks in species with pronounced seasonal dormancy and germination patterns.</a> Seed Sci Res. 15 (3), 189-196 (2005).</li>
<li>Alexander, H. A., Schrag, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+soil+seed+banks+and+newly+dispersed+seeds+in+population+dynamics+of+the+annual+sunflower.+Helianthus+annuus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ecol%22%5BJournal%5D)">Role of soil seed banks and newly dispersed seeds in population dynamics of the annual sunflower. Helianthus annuus.</a> J Ecol. 91, 987-998 (2003).</li>
<li>Burnside, O. C., Wilson, R. G., Weiseberg, S., Hubbard, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+longevity+of+41+weed+species+buried+17+years+in+eastern+and+western%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Sci%22%5BJournal%5D)">Seed longevity of 41 weed species buried 17 years in eastern and western.</a> Weed Sci. 44 (1), 74-86 (1996).</li>
<li>Baskin, C. C., Baskin, J. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaskin%2C+CC+%22Seeds%3A+Ecology%2C+biogeography%2C+and+evolution+of+dormancy+and+Germination%22">Seeds: Ecology, biogeography, and evolution of dormancy and Germination</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (2001).</li>
<li>Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+dormancy+and+the+control+of+germination%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Seed dormancy and the control of germination.</a> New Phytol. 171, 501-523 (2006).</li>
<li>Baskin, J. M., Baskin, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+classification+system+for+seed+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Seed+Sci+Res%22%5BJournal%5D)">A classification system for seed dormancy.</a> Seed Sci Res. 14 (1), 1-16 (2004).</li>
<li>Donohue, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+genetic+influences+on+the+germination+of+Arabidopsis+thaliana+in+the+field%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Environmental and genetic influences on the germination of Arabidopsis thaliana in the field.</a> Evolution. 54 (4), 740-757 (2005).</li>
<li>Roach, D. A., Wulff, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+effects+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Ecol+Syst%22%5BJournal%5D)">Maternal effects in plants.</a> Ann Rev Ecol Syst. 18, 209-235 (1987).</li>
<li>Pace, B. A., Alexander, H. M., Emry, J. D., Mercer, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+fates+in+crop-wild+hybrid+sunflower%3A+crop+allele+and+maternal+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Appl%22%5BJournal%5D)">Seed fates in crop-wild hybrid sunflower: crop allele and maternal effects.</a> Evol Appl. 8 (2), 121-132 (2015).</li>
<li>Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+maternal+effects+and+nuclear+genetic+composition+change+across+the+life+cycle+of+crop-wild+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Bot%22%5BJournal%5D)">Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids.</a> Am J Bot. 101 (7), 1176-1188 (2014).</li>
<li>Stewart, N. C., Matthew, J., Halfhill, D., Warwick, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgene+introgression+from+genetically+modified+crops+into+their+wild+relatives%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Transgene introgression from genetically modified crops into their wild relatives.</a> Genetics. 4, 806-817 (2003).</li>
<li>Mercer, K. L., Shaw, R. G., Wyse, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+germination+of+diverse+crop-wild+hybrid+sunflower+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Appl%22%5BJournal%5D)">Increased germination of diverse crop-wild hybrid sunflower seeds.</a> Ecol Appl. 16, 845-854 (2006).</li>
<li>Delouche, J. C., Still, T. W., Rapset, M., Lienhard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tetrazolium+test+for+seed+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Mississippi+Sta+Uni+Ag+Exp+Sta+Techn+Bull%22%5BJournal%5D)">The tetrazolium test for seed viability.</a> Mississippi Sta Uni Ag Exp Sta Techn Bull. 51, 1-63 (1962).</li>
<li>Association of Official Seed Analysts. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Tetrazolium+Testing+Handbook%22">Tetrazolium Testing Handbook</a>. , 653 Constitution Avenue NE, Washington, DC 20002, USA. (2010).</li>
<li>Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+maternal+effects+and+nuclear+genetic+composition+change+across+the+life+cycle+of+crop-wild+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Bot%22%5BJournal%5D)">Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids.</a> Am J Bot. 10 (7), 1176-1188 (2014).</li>
<li>Weiss, A. N., Primer, S. B., Pace, B. A., Mercer, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+effects+and+embryo+genetics%3A+germination+and+dormancy+of+crop-wild+sunflower+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Seed+Sci+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal effects and embryo genetics: germination and dormancy of crop-wild sunflower hybrids.</a> Seed Sci Res. 23, 241-255 (2013).</li>
</ol>

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여기에서 우리는 현장에서 미리 선택된 기간에 종자 발아, 휴면 및 다양한 종자 주식의 사망률을 관찰 시드 매장 스트립을 사용하는 방법을 제시한다. 각각의 패킷은 개별 패킷의 생성을 통해 스트립 실 구조 (1)의 속도에 놓여보다는 스트립을 사용하는 장점; 및 (2)를 용이하게하고, 패킷을 생략 또는 실수를 제거하는 위험이없이 하나의 동작으로 복수의 구획을 제거하는 속도. 토양이 어려운 현장 조건이 차가운 경우 여기에 제시된 예에서 제거 날짜 두 겨울 개월 동안 있었다,이 방법은 노동과 인적 오류의 가능성을 모두 줄일 수 있습니다. 시드 스트립은 연구자 분야에서 인간의 실수에 의해 변경 될 수없는 방식으로 실험실에서 구획되지 위치를 랜덤하게함으로써 실험 물류를 돕기. 제거 시간의 선택을 통해 그 우리가 있었던 예측 자연 발아 시간의 폭을 포위종자 은행에 대한 추론을 할 역학 - 우리의 예 잠재력을 하이브리드 종자는 종자 은행의 지속과 미래 인구에 공헌 할 수. 이 방법의 하나의 제한은 구획 사이 시드 일부 마이그레이션 씨앗의 크기...

이 방법의 전체 목표는 안정적으로 현장 조건 하에서 시간이 지남에 따라 시드 생존율을 평가하는 것이다. 토양 종자 은행은 일시적으로 또는 몇 년 1,2 지속 수도 있고 토양 표면에, 표면 쓰레기 내에서, 또는 토양 프로필 내에서 분산 분산, 가능한 아직 발아 씨앗의 예약입니다. 여기에 제시된 것과 유사한 씨의 매장 방법은 수십 종을 사용하여 17 년간의 연구에 적용되었을 때, 가능한 씨앗 3 시험 종의 다양한에서 발견되었다. 종자 휴면 생존을 모종의 조건의 적절한 조합 4 발생할 때까지 발아 종자하는 블록이다. 휴면 출시에 대한 외부 트리거가 발아 수 있습니다 때까지 대기 남은 씨앗이 낮은 겨울 온도, 양분 제한, 또는 계절 가뭄 등의 가혹한 조건을 살아남을 허용 할 수 있습니다. 휴면 출시에 대한 트리거는 f를 왼쪽으로 확장 감기, 화합물에 노출 다를 수 있습니다분노, 또는 동물 위산 5 마모 또는 연락처를 통해 종피의 물리적 공격. 발아 큐는 장군 또는 특정 종 수 종종 과거의 자연 선택의 결과 바와 같이, 부적응 종자 발아는 부적절한 시간에 발생하고, 씨앗이나 모종 사망 또는 불량 묘목의 성장을 초래할 수있는 것입니다. 휴면이 휴면 해제 (예를 들어, 물리적 휴면 생리적 휴면)의 메커니즘에 기초한 유형들로 분류되었지만, 6 종 휴면는 적어도 하나의 식물 생물학 주제 이해 남아있다. 따라서, 개별 씨앗 또는 관련 생태 학적 조건에서 씨앗의 그룹의 상태 평가를 허용 현장 연구는 단순히 실험실에서 표준 발아 검사에 의존하는 것보다 더 높은 설명력을 가지고있다. 알려진 종자의 특성을 악용 수면의 메커니즘에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 종자 휴면의 제어는 공동생리 학적 및 형태 학적 요인의 유전 적 제어를 포함 mplex. 휴면 메커니즘의 폭의 완벽한 이해는 아직 밝혀지지 하였지만, 일반적인 모델은 두 식물 호르몬 Gibberellic 산 (GA) 및 아브시 스산 (ABA) (7) 사이의 피드백 관계를 수반 나왔다. ABA는 휴면 상태를 유지하는 역할을하면서 수면에 대한 생리 학적 성분과 씨앗이 일반화 된 모델에서, GA는 휴면 릴리스에 대한 신호 역할을한다. 모성 유전 적 효과뿐만 아니라 모체 생성 조직과 발달 신호 (8)를 통해 휴면 및 크기와 같은 다른 종자 특성을, 영향을 미칠 수 모체 성장 환경을 제공합니다. 모계 생리 학적 단서와 함께 시간, 수면 상태를 유지할 수있다 외부 구조 (또는 종자 코팅)을 생성합니다. 모계 유래 된 종자 코팅은 어머니 식물의 유전자에 의해 제어되기 때문에, 그들은 씨의 실제 핵 유전 메이크업을 반영하지 않을 수 있습니다. 우리는 우리가에드 작물 야생 하이브리드의 배열에서 Helianthus의 annuus의 수과는 9,10. 따라서, 다양한 종, 크로스 타입, 또는 유전자형을 포함하는 연구 설계가에 대한 정보를 수집합니다 수 종자 특성에 이러한 산모 대 배아 유전 적 영향을 애타게 교차 생태와 종자 휴면, 발아과 생존의 유전학. 종자 발아 및 생존 표현형 인구 역학에 영향을 미칠 수있는 방법의 중요한 예는 작물 야생 하이브리드 영역에서 볼 수 있습니다. 재배 식물의 순화 동안 선택은 대부분의 휴면을 제거하고 성장시기 이외의 생존을 위해 시드의 능력을 감소시킨다. 그러나 작물 야생 하이브리드 영역에서의 재배와 야생 유형 간의 유전자 이동, 또는 하이브리드, 종자 은행 역학에 대한 잠재적 영향과, 야생 인구에 작물 대립 유전자 (또는 유전자 변형)을 재 도입 할 수 있습니다. 재배와 야생 친척 사이의 잡종은 잠재적으로 소유 할 수있다 작물 야생 하이브리드 영역에서 발견재배 (예를 들어, 겨울) (11)의 외부 조건을 살아남을 것으로 예상 몇 표현형과 중간 휴면 표현형의 다양한. 이 논문의 목적은 우리가 현장 조건 하에서 자연 변화를 조사하기 위해 상이한 시간 기간에서 발아 휴면 및 시드 유형의 범위의 생존을 평가할 수 시드 매장 스트립 방법을 사용하는 방법을 보여주고있다. 우리는 종자 특성에 산모와 태아 유전 적 영향에 관심이 있기 때문에 우리의 예에서 우리는 15 작물 야생 하이브리드 크로스 유형에서 해바라기 씨앗을 고용했다.

<table><tbody><tr><td>작은 동전 봉투</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>큰 동전 봉투</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>미세한 그물 폴리 에스테르 모기장 모든</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>고온 접착제 총</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>고온 접착제 스틱 리필</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>산업용 영구 마커</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 정원 라벨</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>삽</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>금속 메쉬 단단한 천</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>측량사의 깃발, 여러 색상</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>젖은 신문</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>쿨러</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>블로터 페이퍼</td>, <td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td>, <td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>온도, 제어 된 성장 챔버</td>, <td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>면도날</td>, <td></td> 모든 <td></td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>모든 테트라 졸륨 클로라이드</td>, <td></td> 모든 <td></td><td></td></tr><tr><td>물</td>, <td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>열 인큐베이터</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

이 필드 조건에서 종자 발아, 휴면 및 사망률을 평가하기위한 신뢰할 수있는 방법

Reliable Method for Assessing Seed Germination, Dormancy, and Mortality under Field Conditions

우리는 Helianthus annuus를 예시 연구 종으로 사용하여 시간 경과에 따른 종자 은행 역학을 근사화하는 기술을 설명합니다. 투과성 폴리에스터 직물과 접착제 스트립을 접고 접착하여 씨앗과 식별 정보를 수용하는 구획 스트립을 구성하는 동시에 토양 침출수, 물, 미생물 및 주변 온도와 접촉할 수 있습니다. 스트립은 다양한 구획 수와 크기로 구성될 수 있으며 연구자는 단일 종, 다른 종 또는 다른 처리를 경험한 종자 내에서 다양한 유전자형을 수용할 수 있습니다. 개별 종자 패킷과 달리 스트립은 하나의 단위로 더 쉽게 검색할 수 있습니다. 복제 패킷이 스트립 내에 포함될 수 있지만, 다른 스트립이 블록으로 작동하거나 시간 경과에 따른 시드 동작을 관찰하기 위해 다른 시간에 검색할 수 있습니다. 우리는 고온 글루건을 사용하여 구획을 묘사하고 블록 및 제거 시간을 식별하는 시드와 태그를 삽입한 후 스트립을 밀봉했습니다. 그런 다음 종자 스트립을 원하는 깊이의 들판에 묻고 나중에 제거할 위치를 표시했습니다. 굴을 파는 동물 포식자는 토양 표면에 금속 메쉬 하드웨어 천을 덮어 효과적으로 배제했습니다. 매장을 위해 선택된 시간 간격이 지난 후, 스트립을 파내고 씨앗의 발아, 휴면 및 폐사율을 평가했습니다. 분명히 죽은 씨앗은 종종 눈으로 발아되지 않은 살아있는 씨앗과 구별 할 수 있지만, 휴면 씨앗은 종자 생존력에 대한 표준 테트라 졸륨 클로라이드 비색 테스트를 사용하여 결정적으로 확인되었습니다.

다양한 어머니의 혈통과 작물 대립 유전자 비율 (표 1)와 크로스 유형 %가, 발아 발아에서 제거 날짜에 걸쳐 차이, 죽은 씨앗 (그림. 2, 3). 세 번째 제거 (봄)에 의해 발아 모든 씨앗이 진정으로 휴면 것으로 밝혀졌다 동안 발아 씨앗 TZ 테스트를 사용하여, 우리는 두 번째 제거 (이른 봄) (표 2)에서 일부 진정으로 휴면 씨앗을 발견했다. 일반적으로, 낮은 작물 대립 유전자의 비율은 늦은 (그림. 2)에 부적응 발아를 감소시켰다. 이른 봄 제거에서 모든 크로스 유형의 높은 발아을했지만, 그 비율 죽은 발아 (그림. 3)에서 달랐다. 산모 ...

여기에서 우리는 장사 표시 씨 스트립 및 테트라 졸륨 클로라이드 (TZ) 생존 능력 테스트를 사용하여 필드 조건에서 종자 생존, 발아 및 휴면을 평가하기위한 프로토콜을 제시한다.

We describe techniques for approximating seed bank dynamics over time using Helianthus annuus as an example study species. Strips of permeable polyester ...

이 실험 과정의 전반적인 목표는 야외 조건에서 시간에 따른 종자 발아, 사망률 및 휴면 상태를 직접 관찰하고 정량화하는 것입니다. 이 방법은 서로 다른 종이나 종의 생태형이 다음 세대의 개체군에 어떻게 개별 묘목을 기여하는지, 또는 토양 종자은행에 개별 종자가 어떻게 지속적으로 남게 되는지와 같이 종자 생태학 분야의 핵심 질문들에 대한 답을 찾는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 다양한 수의 실험 설계, 종, 처리 또는 회수 날짜를 현장에 쉽게 배치하고, 매립 후 수주에서 수개월 후에 완전한 반복구로 회수할 수 있다는 점입니다. 시작하려면, 각 종자 스트립을 위해 20 x 105 cm 크기의 천 조각을 자릅니다. 줄자를 사용하여 스트립 위에 구획을 표시합니다.천을 반으로 접고, 고온 글루건을 사용하여 짧은 쪽 끝단 한 곳에 접착제를 바릅니다. 접착제가 약간 식을 때까지 기다린 후, 두 면을 서로 눌러 밀봉합니다. 접힌 가장자리부터 열려 있는 짧은 끝단까지 각 구획 표시를 따라 접착제를 선 모양으로 바릅니다.구획 사이에 구멍이 생기지 않도록 접착선을 따라 두 면의 천을 서로 맞붙여 밀봉합니다. 각 스트립의 구획에 종자 교배 유형을 무작위로 배정합니다. 다음으로, 동일한 수의 종자를 세어 각 구획에 배치합니다.플라스틱 가든 다트를 사용하여 각 구획에 종자 종류를 표시하십시오. 글루건을 사용하여 구획을 단단히 밀봉하십시오. 스트립을 따라 이동하며 전체 스트립이 채워지고 밀봉될 때까지 종자 포켓을 하나씩 채우고, 표시하고, 밀봉하는 과정을 반복하십시오.진행하기 전에 구획 사이에 틈이 있는지 확인하고 필요한 곳에 접착제를 소량 도포하십시오. 매립 시험을 수행하려면, 먼저 실험 설계에 따라 스트립을 배치할 수 있도록 지정된 깊이로 플롯을 굴착하십시오. 씨앗 스트립을 땅에 놓고 흙으로 덮으십시오.다음으로, 매립된 종자 구획보다 각 측면이 10 cm 더 큰 패널 형태로 금속 망 하드웨어 클로스를 자릅니다. 망 클로스의 가장자리를 토양으로 밀봉합니다. 이 덮개는 종자를 파헤치는 포식자를 배제해야 합니다.마지막으로, 제거 날짜를 기재하고 서면 기록과 상보적으로 색상 구분을 한 유색 플라스틱 구획 라벨을 현장 위치에 배치합니다. 지정된 제거 날짜에 대상 종자를 굴취합니다. 습기를 유지하기 위해 신문지 젖은 것으로 스트립을 감싼 후, 운반을 위해 쿨러에 넣습니다.실험실에 도착하면, 구획 내의 종자가 보일 때까지 스트립을 물로 헹구어 외부의 오염물과 잔해물을 제거합니다. 가위를 사용하여 구획을 하나씩 절개합니다. 발아한 모든 종자의 수를 세고 이를 제거합니다.명백하게 죽은 씨앗의 수를 세고 제거하십시오. 마지막으로, 발아되지 않은 나머지 모든 씨앗을 수집하여 라벨이 붙은 페트리 접시 내의 젖은 여과지에 놓으십시오. 발아가 진행될 수 있도록 접시를 성장 챔버에 넣고 일주일 동안 보관하십시오.종자를 검사하여 발아한 종자를 확인하고 그 수를 세십시오. 이러한 종자들은 포장 조건에서 발아하지 않았으므로, 생존 가능하지만 발아하지 않은 것으로 기록하십시오. 나머지 종자는 테트라졸륨 클로라이드를 사용하여 생존력을 테스트하기 위해 절반으로 자릅니다.배아와 배유가 보이는 씨앗 절단면의 한쪽을 페트리 접시에 놓습니다. 씨앗 절단면이 충분히 잠기도록 테트라졸륨 클로라이드를 첨가합니다. 접시를 30 °C로 설정된 인큐베이터에 3시간 동안 둡니다.마지막으로, 분할된 종자를 평가합니다. 배가 붉게 염색된 종자는 발아 가능하며, 염색되지 않은 종자는 사멸한 것입니다. 이 그래프는 늦가을 매립 후 첫 번째 수거 날짜 기준, 해바라기 작물 야생 교배종의 발아율을 보여줍니다.교배 유형은 작물 대립유전자 백분율이 증가하는 순으로 배열되었으며, 각 교배에 대한 모본이 표시되었습니다. 일반적으로 작물 대립유전자 백분율이 낮을수록 늦가을의 부적응성 발아가 감소했습니다. 이른 봄 제거 시 모든 유전자형에서 높은 발아율을 보였으나, 발아하지 않았거나 죽은 종자의 수에서는 유의미한 차이가 있었습니다.특히, 재배종 모본을 가진 교잡종은 사망률이 더 높았던 반면, 야생종 모본의 교잡종은 발아하지 않은 상태로 남아있을 가능성이 더 높았습니다. 봄이 되자 일부 교잡종의 발아율이 감소했습니다. 이는 조기에 발아한 교잡종들이 매설 구역 내에서 종자 사망을 겪었기 때문인 것으로 보입니다.따라서 작물 모본에 의해 생성된 작물과 더 유사한 잡종 유형에서 사망률이 더 높았습니다. 일단 숙달되면, 설계에 따라 이 기술은 몇 시간 내에 조립될 수 있습니다. 스트립 평가에는 일반적으로 구획당 몇 분밖에 걸리지 않으며, 여기에 성장 챔버 내 시간과 TZ 배양 시간이 추가됩니다. 이 절차를 수행할 때, 성장 챔버를 거치고 이후 TZ 테스트를 통해 생존 가능하다고 판명된 종자만이 진정으로 휴면 상태인 것으로 간주될 수 있음을 기억하는 것이 중요합니다.생장실에서 발아한 종자는 미발아 상태로 간주합니다. 이 절차에 이어, 종자 생존이 종자 출현 및 생애 주기 완결로 이어지는지 여부와 같은 추가적인 의문을 해결하기 위해 묘목 연구와 같은 다른 방법들을 병행하여 수행할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 종자 발아, 치사율 및 휴면 상태에 대한 현장 평가를 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.테트라졸륨 클로라이드(tetrazolium chloride)는 자극성 물질이므로, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 장갑 착용과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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종자 - 감염 곰팡이에 의한 시리얼 작물의 참화 더 나은 식물 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 많은 연구 노력을하라는 메시지가있다. 실험실 환경에서 씨앗 - 곰팡이 상호 작용을 연구하기 위해, 우리는 곰팡이 복제, 바이오 매스, 그리고 커널 bioassays를 사용하여 진균 독소 오염의 부량위한 강력한 방법을 개발했다.

커널 Bioassays를 사용하여 곰팡이 콜로니, Sporogenesis 및 Mycotoxins 생산의 부량

이 비디오는 애기장대 탈리아나 식물의 묘목 성장 억제 분석을 보여줍니다. 면역 펩타이드 유도체의 농도 증가가 묘목 성장에 미치는 영향이 결정됩니다.

묘목 성장의 면역 유도 억제 측정

우리는 애기 장대 씨앗에서 씨앗 코트 침구 분석 (SCBA)를 조립하는 절차를 제시한다. SCBA는 유전자와 체외에서 탐색 할 수있는 강력한 도구가 될 수 있도록 표시 방식 휴면 종자의 빛 신호에 대한 응답으로 배유 컨트롤 종자 발아. SCBA는 배유가 배아의 성장에 영향을 미칠 것으로 의심되는 모든 상황에서 적용 할 수있는 원리입니다.

유전자 탐구하는 종피 침구 분석<em&gt; 체외</em&gt; 어떻게 배젖 컨트롤 종자 발아에<em&gt; 애기 장대</em

잡초 개체군에서 제초제 저항성을 확인하기 위한 강력하고 유연한 접근 방식이 제시됩니다. 이 프로토콜을 통해 제초제 저항성 수준을 추론하고 약간의 적응으로 광범위한 잡초 종 및 제초제에 적용할 수 있습니다.

다른 잡초 종의 강력한 제초제 저항 테스트를위한 프로토콜

이 연구의 목적은 메 마른 매체에 성장 범위의 애기 genotypes의 종자 발 아에 표 백제와 염소 가스 살 균의 효과 확인 했다. 최적화 된 살 균 프로토콜 제공 만족 스러운 씨 생존 하면서 오염 물질을 미생물의 성장을 방지 하기 위해 개발 되었습니다.

애기 씨의 높은 처리 살 균에 대 한 표준화 된 방법

Smut 버섯 많은 파괴적인 농업 질병을 일으킬. 그들은 환경 큐에 응답에 발 아 휴 teliospores로 분산 됩니다. 우리는 발 아 동안에 분자 변화를 조사 하기 위해 두 방법 개요: 호흡 증가 대사 활성화를 감지 측정 하 고 평가 고유한 형태소 단계에서 teliospores를 분리 하 여 분자 이벤트를 변경.

Microrespiration 분석 및 기정을 사용 하 여 Teliospore 발 아 조사

우리는 화합물 라이브러리의 대규모 스크리닝에 의한 엽간 증발의 변조기를 식별하는 방법을 제공한다.

헬리안투스 아누스의 대규모 열화상 스크리닝에 의한 새로운 식물 증발 규제 기관 식별

이 연구는 병아리콩의 근간을 연구하는 방법론과 분자 메커니즘을 제시합니다–Rhizoctonia 바타티콜라 상호 작용. 상기 블로팅 종이 방법은 병아리콩 유전자형 반응을 빠르게 연구하는 데 유용하며, 아픈 냄비 기반 방법은 가뭄과 R. 바타티콜라 감염 및 내성 유전자형을 위한 화면을 동시에 부과하는 데 사용될 수 있다.

병아리콩에서 건조 루트 썩은 질병 에세이 : 상세한 방법론

아라비도프스탈리아나(Arabidopsis) 종자의 표면 살균을 위한 고처리량 프로토콜이 제공되어 진공 펌프로 구성된 간단한 흡입 장치로 액체 처리 단계를 최적화합니다. 수백 개의 종자 시료는 하루에 표면 살균될 수 있습니다.

애기장염 씨앗의 표면 살균을 위한 높은 처리량, 견고하고 매우 시간 유연한 방법

이 프로토콜은 균근 진균으로 발아된 식물 조직 및 종자에서 진균 집락을 연구하기 위해 주사 및 투과 전자 현미경, 빛, 공초점 및 형광 현미경과 같은 다양한 현미경 기술을 적용하여 진균종속영양 식물 샘플을 수집, 고정 및 유지하기 위한 자세한 절차를 제공하는 것을 목표로 합니다.

균종속영양 식물 조직의 곰팡이 집락화 및 종자의 공생 발아를 해석하기 위한 현미경 기술

배우세요 종자 생존, 발아 및 휴면을 야외 조건에서 평가하는 방법을. 라벨링된 종자 스트립과 테트라졸륨 염화물(TZ) 활력 검정을 사용하여 종자 생태학 연구에 필수적인 정량적 데이터를 제공합니다.

이 필드 조건에서 종자 발아, 휴면 및 사망률을 평가하기위한 신뢰할 수있는 방법

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