Name: 측면 만성 두개골 창 준비 활성화 생체 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: 학습하세요 마우스 측면 두개골 창과 영구 중간 대뇌 동맥 폐색 기법을 통해 뇌졸중 후 급성 및 만성 변화를 실시간 생체 영상으로 관찰하는 방법을. 이 기술은 허혈성 변화의 종단 연구에 필수적입니다.

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VP는 Charité - Universitätsmedizin Berlin과 Berlin Institute of Health에서 자금을 지원하는 Charité Clinical Scientist Program의 참가자입니다. TB는 SNSF PostDoc Mobility 펠로우입니다. 저자는 EinsteinStiftung/A-2012-153에서 PV에 이르기까지 보조금 지원을 받습니다.

윤리 선언문 : 동물 과목을 포함하는 실험은 적용 가능한 Landesamt FUER 아퍼 싶게 Soziales, 베를린, 독일 (G0298 / 13) 및 도착 도착 기준에 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다. 12 주령의 수컷 C57BL / 6J 마우스에 대한 연구, 10을 사용 하였다. 1. 측면 만성 두개골 창 준비 <ol><li> 케타민 (90 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (/ kg 10 mg)의 피하 주사로 마취를 수행합니다. 통증 자극에 적절한 진정 작용에 대한 시험. </li><li> 70 % 에탄올로 수술 도구와 수술 부위를 소독. </li><li> 설치류 면도기를 사용하여 눈에 목 두피 머리를 제거합니다. </li><li> 정위 프레임에 머리를 고정합니다. </li><li> 탈수를 방지하기 위해 두 눈에 dexpanthenol 눈 연고를 사용합니다. </li><li> 모든 머리카락을 제거하고 74.1 %의 에탄올의 3 층과 10 % 2 프로프라놀롤로 소독 할 수있는 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 중간 선을 수행합니다메스를 사용하여 눈 목 절개. </li><li> 4 텐팅 (tenting) 봉합으로 피부 플랩에 걸쳐. </li><li> 시간적 근육이 시작되는 지점에 메스를 긁어하여 왼쪽 반구에 조심스럽게 골막을 제거합니다. 주 :이 제제는 상기 커버 유리를 해결 치과 용 접착제에 대한 양호한 접착 성 영역을 생성하는 역할을한다. </li><li> microdrill를 사용하여 뼈 플랩의 가장자리에 두개골을 얇게하여 4mm의 직경 전두 - 두정엽의 개두술을 수행합니다. 열 손상을 방지하기 위해 시추하는 동안 생리 식염수를 적용합니다. </li><li> 캐 뉼러에 뼈 플랩을 올리고 microforceps를 사용하여 제거합니다. </li><li> 식염수로 조심스럽게 광범위하게 관개. </li><li> 이 적절한 농도를 갖는 유체 아니다까지 치과 용 접착제를 혼합 (즉, 접착제가 더 이상 스레드를 생성 안된다). 개두술 주위의 뼈에 놓습니다. </li><li> 제조 된 접착제에 6 mm 직경 커버 글라스를 놓고 번째로 해결치과 용 접착제의 전자 휴식. 이 방수 있는지 확인합니다. 접착제가 집게로 검사하여 하드 건조하고 될 때까지 기다립니다. 주 : 추가 관개는 경화 과정을 가속화합니다. </li><li> 텐팅 (tenting)의 봉합사를 제거하고 피부 봉합에 상처를 닫습니다. </li><li> 마우스의 측면의 피부를 당겨. 바늘 피하에 삽입하고 부드럽게 유체 균형을 멸균 생리 식염수를 피하 0.5 ml를 대체합니다. </li><li> 수술 후, 90 분 동안 가열 복구 케이지에 동물을 유지합니다. 동물 무인을 떠나기 전에 완전히 깨어 때까지 기다립니다. 동물이 완전히 다른 동물 케이지에게 반환하기 전에 복구 될 때까지 기다립니다. </li><li> 단계 1.16에 기술 된 바와 같이, 약 12 ​​시간 후에 피하 식염수 볼륨 교체 반복한다. </li><li> 항상 수술 (예를 들어, 파라세타몰 (10 ㎎ / ㎖), 또는 다른 비 스테로이드 성 항염증제) 후 구강으로 삽입 위관을 통해 직접 진통제를 적용한다. </li><li> 확인<html> 매일 수술 후 동물의 상태, 항상은 페트리 접시 간단한 식사를 만들 및 수술 후 중요한 체중 감소를 방지하기 위해 바닥에 동물 음식을 으깬 제공합니다. 주 : 생체 내에 현미경 두개 창이 제조 후 첫 날에 수행 될 수있다. </li><li> 이소 플루 란 마취를 적용하고 헤드 홀더에 동물을 고정합니다. 피부 봉합을 열고 면봉과 멸균 식염수 창을 청소합니다. 24 시간 후, 두개골 창이 영상을 가능하게 그 시점에 의해 뇌척수액으로 가득해야합니다. 설립 현미경 프로토콜 18을 사용하여 이미지를 수행합니다. </li></ol> 2. 말초 MCAO 참고 : MCAO 절차는 CW 준비 후 약 5 D를 수행해야합니다. 이는 뇌졸중 유도 면역 반응과 CW 제제에 의한 면역 반응의 간섭을 최소화한다. &quot;SRC =&quot;/ 파일 / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg &quot;/&gt; 원위 MCAO 1. 개요도. A.이 연산 전에 선박에 대한 좋은 개요입니다. 첫 번째 바이폴라 접촉 후 B에 선박. 두 번째 바이폴라 접촉 후 C를 혈관. D. 완전히 지금은 폐쇄 된 선박에 대한 개요. 낮은 배율 E. 최종 개요. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54701/54701fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol><li> 수의학 직원 (과 협의에 마취 마스크와 적절한 마취 정권을 사용하여 마우스를 마취 예를 들어, 1.5 유도 - 2/3 N 2 O 1/3 O 2 1.5 % 이소 플루 란을 통해 - 2 % 이소 플루 란과 1.0 유지 보수 기화기). </li><li> (면도하고 머리를 제거하고 적절한 에이전트로 피부와 주변 모피 소독예를 들면, 70 % 에틸 알코올), 그 후이를 건조. </li><li> 36.5 ℃에서 쥐의 체온을 유지 수술 중에 0.5 ° C, ±. 마우스의 직장 온도에 따라 가열 피드백 제어 가열 패드는 매우 좋습니다. </li><li> 측면 위치에 동물을 배치합니다. 마취 마스크의 코를 수정하고 1.0에 이소 플루 란 농도를 조정 - 1.5 %. </li><li> 두 눈에 젖은 연고 (dexpanthenol)를 적용합니다. </li><li> CW 준비를 위해 만든 피부 절개를 사용합니다. </li><li> 부드럽게 피부를 분리하고 아래 시간 근육을 식별합니다. </li><li> 고주파 발전기의 에너지 조절 (5-7 W)를 바이폴라 모드를 사용한다. </li><li> electrocoagulation 집게를 사용하여 조심스럽게 완전히 근육을 제거하지 않고, 근육 플랩을 만드는 두개골에서 시간적 근육을 제거합니다. </li><li> , 시간 영역의 주동이의 부분에 투명 두개골 아래 MCA를 확인 레트로 ORBITA에 지느러미리터의 동. MCA 분기점을 식별 할 수없는 경우, 용기가 가장 입쪽 식별하려고. </li><li> 지속적으로 열 손상을 방지하기 위해 관개 동안 microdrill와 MCA 분기 위에 얇은 두개골. </li><li> 캐 뉼러에 뼈를 들어 올려 microforceps으로 제거합니다. </li><li> W. 5 - (3)에 고주파 발전기의 에너지를 감소 </li><li> 위에서 동맥에 접근 조심스럽게 용기를 해제하지 않고 양쪽에 바이폴라 집게으로 만지지. </li><li> 용기 분기점에 근위 및 원위 혈관 응고. </li><li> 30 초 동안 기다린 후 혈액의 흐름이 영구적으로 중단되도록 부드럽게 동맥을 터치합니다. 개통이 관찰되는 경우 electrocoagulation를 반복합니다. </li><li> 가능하면, 뼈의 결함을 커버하는 근육에 삽입 한 2 바늘 시간적 근육 수정. </li><li> 상처를 봉합하고, 가열 회수 상자에 동물을 배치합니다. 빨리 휘발성 ANEST 후 일반적으로, 동물 복구hesia. </li><li> 단계 1.16의 설명에 따라 볼륨 대체를 들어, 멸균 생리 식염수를 피하 0.5 ml에 적용됩니다. </li><li> 수술 후, 동물은 90 분 동안 가열 복구 케이지에 체류 할 수 있습니다. 동물 무인을 떠나기 전에 의식이 될 때까지 기다립니다. 그들이 완전히 회복되는 경우에만 다른 동물과 케이지로 돌아갑니다. </li><li> 12 시간 후, 단계 1.16에 설명 된대로 볼륨 대체를 반복합니다. </li><li> 마시는 물 (예를 들어, 파라세타몰 (10 ㎎ / ㎖), 또는 다른 비 스테로이드 성 항염증제)를 통해 수술 후 통증을 적용한다. </li><li> 수술 후 매일 동물의 건강 상태를 확인합니다. 식사를 단순화하고 수술 후 체중 감소를 최소화하기 위해 바닥에 페트리 접시에 으깬 동물 음식을 제공합니다. </li></ol> 3. 위장 치료 <ol><li> 위 포함한 CW가 노출 된 중간 대뇌 아칸소 응고하지 않는 준비을 제외한 설명 된 1 단계와 2 단계로 동일하게 모든 절차를 수행tery. </li></ol>

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스트로크 1 전 세계적으로 장기 장애와 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 급성 치료, 가속 및 뇌졸중 후 회복을 향상시키기 위해 새로운 접근 방식과 메커니즘을 조사 외에도 주요 의료 목표 7 남아있다. 실험 행정 연구원은 자주 국소 뇌허혈의 설치류 모델을 사용한다. 사실, 일시적 또는 영구적 유도 MCAO 모델은 환자 4 국소 뇌허혈의 가장 흔한 유형 중 하나를 모방. MCA 폐색의 근위 외에 원위 MCAO 수술 폐색 필라멘트 모델 실험 스트로크 연구 5,19에서 가장 자주 사용되는 모델은 아마도. 여기서는 영구 원위 MCAO의 기본 기술은 마우스에서 생체 내에 길이 현미경을위한 기회를 제공하고, 횡 CW와 함께 설명한다. 장기 연구 결과에 대하여 특히 병변 부피의 재현성뿐만 아니라 매우 낮은 사망률 아칸소이 쥐 모델의 주요 장점을 전자. 이 피질 뇌졸중 모델에서, 스트로크 영역 경색 주변 영역에서 혈관 만성 CW를 통해 가시화 될 수있다. 다중 표...

뇌졸중은 전 세계적으로 장기 장애 및 사망의 주요 원인 중 하나이며1 관상 동맥 심장 질환에 이어 두 번째입니다. 또한 뇌졸중은 장기 장애의 주요 원인이며, 이는 뇌졸중이 엄청난 사회경제적 영향을 미친다는 점을 강조한다6-8. 급성 치료를 넘어 뇌졸중 후 회복을 가속화하고 향상시키기 위한 새로운 접근법과 메커니즘을 연구하는 것이 여전히 주요 의학적 목표이다7. 
지난 수십 년 동안 뇌졸중 실험 연구의 데이터는 허혈에 의해 유발되는 복잡한 병태생리학적 연쇄 반응을 이해하는 데 크게 기여했습니다9,10. 발치 독성(Excitotoxicity), 세포사멸(apoptosis), 경색 주위 탈분극(peri-infarct depolarization) 및 염증(inflammation)은 국소 뇌허혈 후 세포 사멸의 가장 관련성이 높은 매개체로 확인되었습니다. 또한, 뇌허혈의 동물 모델을 사용하여 중요한 개념, 진단 방식 및 치료 접근법이 개발되고 검증되었습니다(예: "반음" 및 혈전용해술)11.
비침습적 영상 기법(예: 자기공명영상(MRI), 컴퓨터 단층 촬영 또는 레이저 스페클 대비 분석)과 결합된 실험적 뇌졸중 모델의 가용성으로 인해 연구자는 허혈성 모욕에 의해 유발된 초급성 및 만성 병태생리학적 변화를 종단적으로 조사할 수 있다12. 진화하는 병변의 시공간 프로파일을 연구하는 것과 함께 신경 가소성과 유사한 변화를 조사하고 기능적 결과 및 조직학적 발견과 상관시킬 수 있습니다. 지난 몇 년 동안 뇌허혈 모델과 두개골 창13을 통한 생체 내 현미경의 조합을 사용하여 추가적인 방법론적 발전이 이루어졌습니다. 이러한 새로운 기술을 통해 연구자는 국소 뇌허혈 후 급성, 아급성 및 만성 단계에서 뛰어난 분석력으로 세포 및 분자 수준에서 신경혈관 단위를 분석할 수 있습니다14. 또한, 미세순환 역학의 생체 내 현미경 이미징은 대뇌 미세혈관 구조 기능 및 혈관 건축의 새로운 측면을 밝혀냈으며, 이는 유의미한 병태생리학적 관련성을 가지고 있습니다15-17. 
이 프로토콜에서는 시상동 측면에 만성 CW 준비를 수행하는 방법과 창 아래에서 원위 뇌졸중을 외과적으로 유도하는 방법을 제시합니다. 이 마우스 모델은 epi-illuminating, confocal laser scanning 및 two-photon intravital microscopy를 통해 국소 뇌허혈 후 급성, 아급성 및 만성 변화의 순차 이미징에 적용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>양안 수술 현미경</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>현미경 용 광원</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 LED</td><td></td></tr><tr><td>직장 프로브가있는 가열 패드</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>정위 프레임</td><td>Kopf</td><td>모델 930</td><td></td></tr><tr><td>이소 플루란 용 Anaethesia 시스템</td><td>Draeger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont 펜치 #5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 펜치 #7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>바이폴라 펜치</td><td>에르베</td><td>20195-501</td><td></td></tr><tr><td>바이폴라 펜치 &nbsp;</td><td>에르베&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20195-022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로드릴</td><td>FST&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 18000-17년&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>5-0 실크 봉합</td>사 <td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 실크 봉합</td>사 <td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 실크 봉합사</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수의학 회복 챔버</td><td>Peco Services</td><td>V1200</td><td></td></tr></tbody></table>

측면 만성 두개골 창 준비 활성화 생체 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

초점 대뇌 허혈 (즉, 허혈성 뇌졸중)은 신경 기능의 심각한 손실을 결과적으로 모터 및인지 장애의 호스트로 이어지는 주요 뇌 손상의 원인이 될 수 있습니다. 스트로크 1 전 세계적으로 장기 장애와 사망의 주요 원인 중 하나입니다으로 높은 유병률은, 심각한 건강 부담을 포즈. 신경 기능의 회복은, 대부분의 경우, 단지 부분이다. 지금까지 치료 옵션은 매우 인해 혈전 용해 2,3의 좁은 시간 창에 특히 제한됩니다. 뇌졸중에서 회복을 가속화하는 방법을 결정하는 주요 의료 목표 남아있다; 그러나, 이는 복구 프로세스에 충분한 기계적 통계에 의해 방해되어왔다. 실험 행정 연구원은 자주 국소 뇌허혈의 설치류 모델을 사용한다. 급성기를 넘어, 뇌졸중 연구는 점점 뇌허혈 다음 서브 급성 및 만성 단계에 초점을 맞추고 있습니다. 대부분의 행정 연구원이 적용 영구 또는 트란마우스 또는 쥐의 MCA의 지어서 transient 폐색. 환자에서 MCA 폐색의 허혈성 뇌졸중 (4)의 가장 흔한 원인들이다. 필라멘트 모델을 사용하여, MCA 폐색의 근위 외에 원위 MCA 폐색 수술 실험 스트로크 연구 5에서 가장 자주 사용되는 모델은 아마도. MCA 분기합니다 (lenticulo - 선조체 동맥의 분지에) 원위의 폐색은 일반적으로 선조체 여분 주로 신피질에 영향을 미친다. 혈관 폐색은 영구적 또는 일시적 일 수있다. 장기적인 결과에 대해 병소 용적과 매우 낮은 사망률의 재현성이 모델의 주요 이점이다. 여기, 우리는 시상 동에 만성 두개골 창 (CW) 준비 측면을 수행하고, 이후에 어떻게 개두술 방법을 사용하여 창 아래에 말단 행정을 유도 외과 적 방법을 보여줍니다. 이러한 접근법을 통해 허혈성 급성 및 만성 변화 순차 촬상 적용될 수있다, 공 초점 레이저 스캐닝 및 이광자 현미경 생체 내에 에피 - 조명.

타임 라인 대표적인 결과는도 2 및도 3에 도시되어있다. 우수한 시상 동 (도 2 B, C, D) 숙련 된 의사에 의해 수행되는 매우 낮은 사망률과 질병률 레이트 결과 작은 두개 창 폭과 뇌 창 제제. 10 동물 모두 생존, 모든 만성 CW도 이십팔일 수술 후 고품질의 화상을 위해 사용될 수있다. 상처 감염 또는 다른 합병증 문제는 없었다. 때문에 휘발성 마취 만 작은 뇌 손상, 약 10 짧은 노출 - (15) 원위 MCAO 후 분, 가열 복구 케이지로 전송, 모든 동물은 자유롭게 복구 케이지 이동하고, 한배 새끼와 상호 작용, 깨어 있었다. 일반적으로, 말단 MCAO 모델의 치사율은 5 % 이하이며, 주로 혈관 I의 결과로서 발생njury 및 MCAO 수술시 이후의 출...

말단 중간 대뇌 동맥 분기 (MCAO)의 수술 폐색 실험 뇌졸중 연구에서 자주 사용하는 모델입니다. 이 논문은 마우스에서 생체 내에 길이 현미경을위한 기회를 제공하는 측의 두개 창에 삽입, 결합 영구 MCAO의 기본적인 기술을 설명한다.

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

이 절차의 전반적인 목표는 영구적인 중대뇌동맥 폐색과 결합된 측면 두개골 창을 준비하는 것입니다. 마우스에서 종방향 생체 내 현미경 검사를 용이하게 합니다. 이 방법은 소뇌 허혈 연구 분야의 주요 질문을 조사하고 답변하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 가장 큰 장점은 뇌졸중 후 급성 및 만성 변화에 대한 생체 내 이미징을 제공한다는 것입니다. 승인된 동물 프로토콜에 따라 마취를 투여하는 것으로 시작하십시오. 발가락 꼬집기와 같은 통증 자극을 가하고 반응이 없음을 기록하여 수술 마취 평면에 도달했는지 확인합니다.그런 다음 설치류 면도기를 사용하여 목에서 눈까지 털을 제거합니다. 마우스 머리를 Stereotaxic 프레임에 고정합니다. 그런 다음 탈수를 방지하기 위해 안과 연고로 눈을 덮습니다.면도 부위를 깨끗이 닦아 모든 털을 제거하고 74.1% 에탄올과 10% 튜브 프로프라놀롤을 3회 도포하여 두피를 살균합니다. 멸균 메스를 사용하여 목에서 눈까지 정중선을 절개합니다. 그런 다음 4개의 텐트 봉합사로 피부 피판에 걸쳐 있습니다.다음으로, 두개골 왼쪽의 골막을 조심스럽게 긁어냅니다. 그리고 측두근이 시작되는 지점까지 제거하십시오. 이제 마이크로 드릴을 사용하여 뼈 피판의 가장자리에 있는 두개골을 얇게 만듭니다.직경 4mm의 전두두엽 개두술을 만듭니다. 열 부상을 방지하기 위해 드릴링하는 동안 식염수를 바르십시오. 드릴이 뚫리면 캐뉼러로 뼈 피판을 들어 올리고 마이크로 집게를 사용하여 제거합니다.식염수로 해당 부위를 조심스럽고 광범위하게 관개하십시오. 적절한 농도가 될 때까지 치과 접착제를 섞습니다. 그런 다음 개두술 주위의 뼈에 바릅니다.준비된 접착제에 직경 6mm의 커버 유리를 놓습니다. 그리고 나머지 치과 접착제로 고정하십시오. 관개는 경화 과정을 가속화하고 씰이 방수되도록 합니다.집게로 치과 접착제를 조사하여 건조되고 단단한지 확인합니다. 접착제가 경화된 후 텐트 봉합사를 제거하고 피부 봉합사로 상처를 봉합합니다. 체액 균형을 위해 0.5ml의 멸균 식염수를 피하로 투여합니다.수술 후에는 마취에서 회복될 때까지 가열된 회복 케이지에서 동물을 모니터링합니다. 다른 동물과 함께 우리로 되돌리기 전에 동물을 완전히 회수했는지 확인하십시오. 수술 후에는 항상 진통제를 투여하십시오.여기서, 밀리리터 당 10 밀리그램의 아세트 아미노펜이 식수에 첨가됩니다. 항상 바닥에 놓인 페트리 접시에 으깬 동물 사료를 제공하여 간단하게 먹고 수술 후 심각한 체중 감소를 피하십시오. 생체 내 현미경 검사는 두개골 창 준비 후 첫날에 수행할 수 있습니다.승인된 프로토콜에 따라 이소플루란 마취를 적용합니다. 동물을 머리 홀더에 고정하고 노즈 콘이 제대로 맞는지 확인하십시오. 피부 봉합사를 열고 면봉과 멸균 식염수로 창문을 청소합니다.24시간 후에는 두개골 창에 뇌척수액을 채워야 영상 촬영이 가능합니다. 두개골 창 준비 5일 후 시술에 대한 면역 반응이 후퇴하면 중대뇌동맥 폐색 시술을 수행합니다. 여기에서는 MCAO 유도를 위한 개두술 후의 개요를 보여줍니다.수술 중 사진은 첫 번째와 두 번째 양극성 접촉 후의 혈관을 보여줍니다. 원위 MCA는 완전히 폐색된 것처럼 보입니다. 이 그림은 더 낮은 배율을 사용하여 최종 개요를 제공합니다.이전과 같이 이소플루란으로 외과적 마취를 유도한 후 눈과 귀 사이의 털을 깎고 양쪽 눈에 안과 연고를 바르고 지금과 같이 알코올 용액으로 피부와 주변 털을 소독합니다. 체온을 유지하기 위해 피드백 제어 가열 패드에 마우스를 올려 놓습니다. 동물을 옆으로 눕히고 마취 마스크에 코를 고정합니다.두개골 창 준비를 위해 절개 부위의 피부를 부드럽게 분리하고 그 아래의 측두 근육을 확인합니다. 다음으로 고주파 발생기의 에너지를 조정하고 바이폴라 모드를 사용합니다. 전기 응고 겸자를 사용하여 두개골에서 측두근을 조심스럽게 들어 올려 근육을 완전히 제거하지 않고도 근육 플랩을 만듭니다.그런 다음 측두 영역의 상부 부분에 있는 투명한 두개골 아래의 중대뇌 동맥을 확인합니다. retro-orbital sinus의 등쪽. 마이크로 드릴로 MCA 가지 위의 두개골을 얇게 만들고 열 손상을 방지하기 위해 지속적으로 관개합니다.그런 다음 뼈를 들어 올려 마이크로 집게로 제거합니다. 고주파 발전기의 에너지를 3-5와트로 줄이십시오. 그런 다음 위에서 동맥에 접근하여 혈관을 들어 올리지 않고 양쪽의 양극성 겸자로 부드럽게 만집니다.30초 동안 기다린 다음 양극성 겸자 끝으로 동맥을 부드럽게 터치하여 혈류가 영구적으로 중단되도록 합니다. MCA 폐색 후 뼈 결손을 덮기 위해 근육 삽입 부위에 한두 바늘로 측두근을 고정합니다. 그런 다음 상처를 봉합하고 회복될 때까지 동물을 가열된 우리에 넣습니다.이 MRI는 가짜 수술 후 24시간 후에 수행되었으며 병변이 있는 피질 조직은 보이지 않습니다. 허혈 후 24시간 후에 수행된 이 MRI는 만성 두개골 창 아래에 위치한 별표로 표시된 허혈성 병변을 명확하게 보여줍니다. 이 이미지는 미세순환의 변화를 모니터링하기 위해 피질 혈관 구조의 생체 내 epifluorescense 이미징 및 이광자 이미징을 보여줍니다.허혈 후 24시간 및 96시간에 MRI를 통해 평가한 경색량은 24시간에 13.16mm, 96시간에 12.2mm의 평균 병변 부피를 보여줍니다. 일단 숙달되면 두개골 창 준비는 약 30분 안에 완료할 수 있습니다. 그리고 약 15 분 안에 MCAO를 얻을 수 있습니다.이 절차에 따라 MRI 또는 이중 광자 현미경과 같은 다른 방법을 수행하여 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이러한 새로운 기술을 통해 연구자는 분자 및 세포 수준에서 신경 혈관 단위를 조사할 수 있습니다. 그리고 특히 살아있는 뇌에서 그렇습니다.

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