Name: 가역 디설파이드 가교 미셀 제조를위한 손쉬운 효율적인 접근법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: 학습하세요 과산화수소 매개 산화를 이용한 가역 디설파이드 가교 미셀 합성 방법을. 이 기술은 암 표적 약물 전달을 위한 대규모 나노 제형 생산에 활용됩니다.

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저자는 편집에 도움을 준 Alisha Knudson에게 감사를 표합니다. 그들은 또한 NIH/NCI(3R01CA115483, K.S.L.), DoD PRMRP Award(W81XWH-13-1-0490, K.S.L.), NIH/NCI(1R01CA199668, Y.L.) 및 NIH/NICHD(1R01HD086195, Y.L.)의 재정적 지원에 감사를 표합니다.

윤리 문 : 여성 무 흉선 누드 마우스 (민 / 뉴 주) 6-8 주령은 구입 후 AAALAC 지침에 따라 무균 상태에서 보관하고 실험하기 전에 적어도 4 일 동안 순응시켰다되었다. 모든 동물 실험은 기관의 지침에 따라 수행 캘리포니아 데이비스 대학의 동물 사용 및 관리 관리 자문위원회에 의해 승인 된 프로토콜 번호 07-13119 호 및 제 09-15584에 따라되었다. TD PEG 5K -Cys 1. 합성 4 -Ebes 8 -CA (8) <ol><li> 둥근 바닥 플라스크에, 얼음에 무수 디메틸 포름 아미드 (DMF) 및 냉기의 10 ~ 20 ml의 MEO-PEG 5K -NH 2 (2g, 0.4 밀리몰)을 녹인다. </li><li> 유리 비이커에 3 당량을 용해. 1- 히드 록시 -6- 클로로 - 벤조 트리아 졸, 벤조 트리아 졸 (HOBt), 3 당량의. N의 N &#39;이소 프로필 카보 다이이 미드 (DIC), 3 당량. 무수 D에서의 (FMOC) 2리스-OHMF (10-15 mL)을 첨가 하였다. 자기 볶음 접시에 15 ~ 20 분 동안 교반한다. </li><li> 메오 5K-PEG -NH 2. 얼음 욕을 제거하고 실온에서 밤새 반응 혼합물을 교반 함유하는 반응 플라스크에 혼합물을 추가한다. </li><li> 박막 크로마토 그래피 (TLC) 16 카이저 테스트 (17), 반응의 완료를 확인 (황색 무연 NH 2의 부재를 나타낸다). 반응 플라스크에 빙냉 에테르 약 200 ml에 첨가하여 중합체 생성물 1 (MEO 5K-PEG -Lys (NH-FMOC)를 2) 침전물. 원심 분리를 통해 침전 된 폴리머 (6 6,000 XG에 분, 4 ° C)를 분리합니다. <ol><li> TLC를 수행 실리카겔 코팅 TLC 플레이트 상에 시료를 발견. 디클로로 메탄 / 메탄올을 사용하여 (9 : 1)을 이동상으로서. TLC 판을 개발 한 후 UV 램프 아래 지점을 관찰한다. 하나는 핫 플레이트 아민 반점을 가시화 염색 시약을 닌히 드린 사용할 수있다. </li><li> 카이에 대한산이의 테스트는, 카이저의 시약을 포함하는 유리 튜브의 샘플을 조금 넣습니다. 5 분 동안 100 ℃에서 가열 한 상기 색상 변화 (용액의 색이 노란색 남아있는 경우, 다음 반응이 완료 될 때)을 찾는다. </li></ol></li><li> 무수 DMF (10-20 mL) 중의 생성물을 재용 해하고, 침전 및 원심 분리를한다 (단계 1.4 참조)를 반복한다. </li><li> 다음 반복 단계 1.5 및 빙냉 에테르 중합체 침전물을 세 번 세척 하였다. </li><li> 깨끗한 반응 플라스크에 폴리머 석출 한 전송 잔류 에테르를 제거 고진공 소스로 플라스크를 연결한다. </li><li> 준비하고 20 %의 약 20 ~ 30 ml에 추가 (v / v)의 DMF 4 메틸 피 1 중간을 중합체. 완전히 용해 될 때까지 저어. 3 시간 동안 반응을 실행합니다. </li><li> TLC 16 수행하고 황제의 시험 (청색 무료 NH 2의 존재를 확인) (17) (단계 1.4 참조) completio을 확인합니다반응 없음. 반응이 완료되면 제품 1 (1.4-1.6 단계)에 대해 언급 한 바와 같이, 에테르 침전를 진행합니다. </li><li> 고분자 제품 2 (MEO-PEG 5K -Lys (NH 2) 2) 진공에서 건조. </li><li> (1.1-1.7 단계) 제품 3을 생성하는 중간 2 상 (FMOC) 2리스-OH 결합 하나 더 라운드를 수행 (MEO-PEG 5K -Lys (리스 (NH-FMOC) 2) 2). (1.8-1.10 단계)를 FMOC 그룹 (4, MEO-PEG 5K -Lys (리스 (NH 2) 2) 2) 커플 (FMOC)리스 (BOC) (1.1-1.7 단계) -OH로 드 보호 3 세대 수지상 폴리 라이신 생성 (5, MEO-PEG 5K -Lys-리스 2 - ((FMOC)리스 (BOC)) 4) PEG 사슬의 한쪽 끝에서 네 BOC 및 FMOC 그룹이 종료되었습니다. </li><li> 반응 플라스크에 중간체 얻어진 중합체 5 옮긴다. 에서와 같이디클로로 메탄 (DCM)에서 1 (v / v)의 트리 플루오로 아세트산 (TFA) : eparate 반응 플라스크 1을 준비합니다. 폴리머 (5) 중간에 1 TFA / DCM (v / v)의 혼합물 : 1의 15 ~ 20 ML을 추가합니다. 중합체가 완전히 용해 될 때까지 혼합물을 교반한다. 추가로 3 시간 동안 교반한다. </li><li> TLC 16 카이저의 수행 및 시험 반응 종료를 확인하기 위해도 17의 (단계 1.4 참조) (청색 무연 NH (2)의 존재를 확인한다). 반응이 완료되면 점성 용액이 얻어 질 때까지 공기와 중합체 인 TFA / DCM 혼합물을 증발시켰다. 제품 1 (1.4-1.6 단계)에 대해 언급 한 바와 같이, 에테르 침전를 진행합니다. 진공에서 - (((FMOC)리스 (NH 2)) 4 -Lys-리스 2 MEO-PEG 5K) 고분자 제품 (6)을 건조. </li><li> 반응 플라스크에 6 중간 전사 중합체. 8 당량을 포함하는 무수 DMF의 약 40 ml를 사용합니다. N의 N의 -diisopropylethylami네브라스카 (DIEA)는 폴리머 (6) 중간을 용해한다. 유리 비이커에, 12 당량을 용해. 의 HOBt, 12 당량. DIC, 12 당량의. 무수 DMF의 20 ~ 25 ml의의의 (FMOC) 시스테인 (트리트) -OH. 10 ~ 15 분 동안 진탕 한 후 (6)을 함유하는 반응 플라스크에 반응 혼합물을 추가한다. 밤새 반응을 실행합니다. </li><li> TLC (16)와 카이저의 시험과 반응의 완료를 확인합니다 (단계 1.4 참조; 황색 무료 NH 2의 부재를 나타내는) 17. ((FMOC) 라이신 - - ((FMOC) Cys 또는 반응이 완료되면 제품 1 (단계 1.4-1.6)에 대해 언급 된 바와 같이, 제품 7 (MEO 5K-PEG -Lys-리스 2 분리, 에테르 침전 진행 (트리트))) 4. </li><li> 제품 8 얻기 위해, 단계 1.8에 설명 된대로, 7 FMOC 탈 보호를 수행합니다 (- (리스 (NH 2) - PEG 5K -Lys-리스 2 (시스테인 (NH 2) (트리트을))) 4). 커플 (FMOC) -PEG 2 -Suc-OH ( &quot;Ebes&quot;링커, 24 당량.)를의 HOBt에 대해 위에서 설명 된 절차를 사용하여 중간 고분자 / DIC 매개 커플 링에 중간 9 (MEO-PEG 5K -Lys-리스 2 -Lys 4 얻기 - (시스테인 (트리트을) ) 4 (Ebes (NH-FMOC)) 8). </li><li> 중간 10 얻을 수 FMOC 탈 보호 한 번 더 라운드 (1.6-1.8 단계) 수행 (MEO-PEG 5K -Lys-리스를 2 -Lys 4 - (시스테인 (트리트)) 4 (Ebes (NH 2)) 8). </li><li> 반응 플라스크에 폴리머 중간층 (10)을 전송하고 용해 무수 DMF (30-40 ml)로 추가한다. 또 다른 반응 플라스크에서 24 당량을 용해. 무수 DMF에 (이전에 게시 된 절차에 따라 제조) CAOSu (20 ~ 30 ㎖) 18. 48 당량을 추가합니다. 및 N, N- 디 이소 프로필 에틸 아민으로는 10 ~ 15 분 동안 교반 할 수 있습니다. 10을 함유하는 반응 플라스크에 콘텐츠를 전송하고, 반응 런 O하자vernight. </li><li> TLC 16 카이저의 테스트로 반응 종료를 확인하고 (단계 1.4 참조, 황색 무연 NH 2의 부재를 나타내는) 17. (Cys이고 (트리트)) 4 -Ebes - 반응이 완료되면 제품 1 (1.4-1.6 단계) 제품 (11)을 분리 (MEO 5K-PEG -Lys-리스 2 -Lys 4 바와 같이, 에테르 침전 진행 8 -CA 8). 탈 이온수를 투석하고, 백색 분말을 수득 샘플을 동결 건조. </li><li> 반응 플라스크에 중간 폴리머 (11)를 놓습니다. 준비하고 고분자 용액에 TFA / 1,2- 에탄 (EDT) / 트리 에틸 실란 (TIS)의 20 ㎖ / H 2 O (94 / 2.5 / 1 / 2.5, v / v)의 혼합물을 추가합니다. 완전히 용해 될 때까지 혼합물을 저어. 4 시간 동안 반응을 실행합니다. TLC (16)에 의해 반응 종료를 확인한다. </li><li> 흄 후드 아래에 공기를 불어 폴리머 TFA / EDT / TIS / H 2용액까지 O 혼합물의 점성이된다. 제품 1 (1.4-1.6 단계)에 대해 언급 한 바와 같이 최종 제품, 12 (PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8)를 분리, 에테르 침전를 진행합니다. 아세토 니트릴에 용해하고, 백색 분말을 수득하여 동결 건조. </li></ol> PTX로드 미셀 2. 준비 <ol><li> 표준 증착 방법을 사용하여 PTX로드 PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 미셀을 준비합니다. <ol><li> 클로로포름 1 ㎖ (클로로포름)에서 PTX의 다른 양 (1-9 mg)을 함께 TD 20 mg을 녹이고. 균질 건조한 중합체 필름을 수득하는 회전 증발기를 사용하여 용매를 제거한다. 필요한 경우 약물로드 미셀의 형성을 허용하도록, 40 kHz에서 30 분 동안 초음파 처리 하였다 와류에 의한 인산 완충 용액 (PBS) 1 ㎖로 필름을 재구성한다. </li><li> 3 %의 (w / w) H 2 O 2 (1 당량 6 μl를 추가합니다. 호텔 fr하기TD를에 티올기를 산화) 티올기를 EE. 엘만 (Ellman) 테스트 (19)에 의해 지시 된 바와 같이 유리 티올 그룹의 레벨이 일정하게 낮은 값으로 유지되면 추가 특성에 대한 미셀 솔루션을 사용합니다. </li><li> 샘플을 살균 할 수있는 0.22 μm의 필터 솔루션을 필터링합니다. 9 번 아세토 니트릴을 첨가하고, 초음파 처리를 10 분간 수행하여 미셀의 약물 방출 후 HPLC 시스템 (20)의 미셀에로드 된 약물의 양을 분석한다. 이동상으로 아세토 니트릴 / 물 HPLC의 C18 컬럼을 사용합니다. </li><li> HPLC로 면적 값과 11 표준 약물 농도의 검량선에 따라 약물 로딩을 계산한다. 주 : 적재 효율이 초기 약물 함량 미셀에로드 약물의 비율로 정의된다. </li></ol></li></ol> 미셀 3 요소 특성 분석 <ol><li> 제 m의 크기 및 크기 분포를 측정동적 광산란 (DLS) 악기 (29)와 icelles. 실온에서 측정을 수행하고 ㎖ / 1 밀리그램의 미셀 농도를 유지한다. 주 : 입자 크기 분석을 수행 빈으로 PBS를 사용하고 실제 샘플 입자 크기를 기록한다. 샘플에 대한 세중의 측정을하고 측정 값을 평균. </li><li> 이전에 13,21 바와 같이, 이전과 소수성 형광 프로브로 피렌와 가교 후 PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA (8)의 임계 미셀 농도 (CMC)을 측정하는 형광 스펙트럼을 사용합니다. 참고 : 일반적으로, 미셀 농도는 5 × 10-7 5 × 10 -4 M. 범위 </li></ol> 또는 환원제없이 SDS에서 미셀 4. 안정성 <ol><li> 소듐 도데 실 설페이트 스톡 용액 (SDS) 용액 (7.5 ㎎ / ㎖) 및 PBS에서 이황화 가교 미셀 (1.5 ㎎ / ㎖)을 준비한다. 다음, U를최종 SDS 농도로 된 혼합 용액을 상기 원액을 2.5 ㎖의 노래 밀리그램 / 및 미셀 농도가 1.0 ㎎ / ㎖이다. </li><li> 또는 10 mM의 글루타치온 (GSH)의 존재없이 소정의 시간 간격으로 미셀 용액 (단계 3.1에서 언급 한 바와 같이) 크기 및 크기 분포를 측정한다. </li></ol> 5. 용혈 분석 <ol><li> 로부터 수집 이전에 발행 절차 (11)와 누드 마우스에서 신선한 구연산 혈액을 사용하여 PTX-로드 가교 미셀 (PTX-된 DCM)에 따라 제조 PTX-로드, 비 가교 미셀 (PTX-NCMs)의 용혈성 잠재력을 평가 꼬리 베일. <ol><li> 2 %의 최종 농도로 PBS로 세포 펠렛을 다시 정지 후, 10 분간 1,000 XG에서 혈액 샘플 (1.0 mL)을 원심 분리하여 적혈구를 모아서 PBS로 세 번 세척하고. </li></ol></li><li> 서로 다른 농도 (0.2 및 1.0 적혈구 현탁액 200 μl를 혼합mg의 PTX-NCMs 및 PTX-된 DCM,의 / ㎖)을 각각 및 인큐베이터 통에 37 ° C에서 4 시간 동안 배양한다. </li><li> 5 분 동안 3,000 XG에서 미셀 적혈구 혼합물을 원심 분리기. 96 웰 플레이트의 모든 샘플의 상등액 100 ㎕를 옮긴다. 마이크로 플레이트 판독기를 사용하여 540 nm에서 상층 액의 헤모글로빈의 흡광도를 측정한다. 주 : 트리톤-100 (2 %) 및 PBS와 함께 배양 된 RBC를 각각 음성 및 양성 대조군으로 사용하여야한다. 적혈구의 퍼센트 용혈는 다음과 같은 공식으로 계산된다 적혈구 용혈 = (OD 샘플 - OD 대조군) / (OD 양성 대조군 - OD 대조군) × 100 %입니다. </li></ol>

<ol><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+medicine%3A+therapeutic+applications+and+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments.</a> Clin. Pharmacol. Ther. 83, 761-769 (2008).</li>
<li>Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+Delivery+of+Cancer+Drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle Delivery of Cancer Drugs.</a> Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).</li>
<li>Iyer, A. K., Khaled, G., Fang, J., Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+enhanced+permeability+and+retention+effect+for+tumor+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Disc.+Today+Targets%22%5BJournal%5D)">Exploiting the enhanced permeability and retention effect for tumor targeting.</a> Drug Disc. Today Targets. 11, 812-818 (2006).</li>
<li>Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+strategies+for+therapeutic+delivery+by+using+polymeric+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles.</a> Pharmacol. Rev. 64, 505-519 (2012).</li>
<li>Kamaly, N., Xiao, Z., Valencia, P. M., Radovic-Moreno, A. F., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+polymeric+therapeutic+nanoparticles%3A+design%2C+development+and+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeted polymeric therapeutic nanoparticles: design, development and clinical translation.</a> Chem. Soc. Rev. 41, 2971-3010 (2012).</li>
<li>Li, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversibly+stabilized+multifunctional+dextran+nanoparticles+efficiently+deliver+doxorubicin+into+the+nuclei+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Reversibly stabilized multifunctional dextran nanoparticles efficiently deliver doxorubicin into the nuclei of cancer cells.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48, 9914-9918 (2009).</li>
<li>Miyata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+catiomer+polyplexes+with+regulated+densities+of+charge+and+disulfide+cross-linking+directed+to+enhance+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression.</a> J. Am. Chem. Soc. 126, 2355-2361 (2004).</li>
<li>Chan, Y., Wong, T., Byrne, F., Kavallaris, M., Bulmus, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-labile+core+cross-linked+micelles+for+pH-triggered+release+of+antitumor+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Acid-labile core cross-linked micelles for pH-triggered release of antitumor drugs.</a> Biomacromolecules. 9, 1826-1836 (2008).</li>
<li>Rijcken, C. J., Snel, C. J., Schiffelers, R. M., van Nostrum, C. F., Hennink, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrolysable+core-crosslinked+thermosensitive+polymeric+micelles%3A+synthesis%2C+characterisation+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Hydrolysable core-crosslinked thermosensitive polymeric micelles: synthesis, characterisation and in vivo studies.</a> Biomaterials. 28, 5581-5593 (2007).</li>
<li>Talelli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core-crosslinked+polymeric+micelles+with+controlled+release+of+covalently+entrapped+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Core-crosslinked polymeric micelles with controlled release of covalently entrapped doxorubicin.</a> Biomaterials. 31, 7797-7804 (2010).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-assembling+nanoparticle+for+paclitaxel+delivery+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A self-assembling nanoparticle for paclitaxel delivery in ovarian cancer.</a> Biomaterials. 30, 6006-6016 (2009).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+size-tunable+nanocarrier+system+for+targeted+anticancer+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">A novel size-tunable nanocarrier system for targeted anticancer drug delivery.</a> J. Control. Release. 144, 314-323 (2010).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+disulfide+cross-linked+micelles+for+on-demand+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible disulfide cross-linked micelles for on-demand paclitaxel delivery.</a> Biomaterials. 32, 6633-6645 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+boronate+crosslinked+nanocarriers+for+targeted+drug+delivery+in+response+to+acidic+pH+values+and+cis-diols%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible boronate crosslinked nanocarriers for targeted drug delivery in response to acidic pH values and cis-diols.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51, 2864-2869 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+smart+and+versatile+theranostic+nanomedicine+platform+based+on+nanoporphyrin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">A smart and versatile theranostic nanomedicine platform based on nanoporphyrin.</a> Nat. Commun. 5, (2014).</li>
<li>Belenki, B. G., Gankina, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin-Layer+chromatography+of+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Thin-Layer chromatography of polymers.</a> J. Chromatogr. A. 141, 13-90 (1977).</li>
<li>Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+test+for+detection+of+free+terminal+amino+groups+in+the+solid-phase+synthesis+of+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides.</a> Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).</li>
<li>Pandey, P. S., Rai, R., Singh, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+cholic+acid-based+molecular+receptors%3A+head-to-head+cholaphanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Soc.%2C+Perkin+Trans+1%22%5BJournal%5D)">Synthesis of cholic acid-based molecular receptors: head-to-head cholaphanes.</a> J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. , 918-923 (2002).</li>
<li>Riddles, P. W., Blakeley, R. L., Zerner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassessment+of+Ellman%27s+reagent%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reassessment of Ellman's reagent.</a> Methods Enzymol. 91, 49-60 (1983).</li>
<li>Ahuja, S., Rasmussen, H. Overview of HPLC method development for pharmaceuticals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhuja%2C+S+%22HPLC+Method+Development+for+Pharmaceuticals%22">HPLC Method Development for Pharmaceuticals</a>. , Separation Science and Technology; 8. Elsevier Academic Press Inc. 1-11 (2007).</li>
<li>Li, Y., Pan, S., Zhang, W., Du, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+thermo-sensitive+core-shell+nanoparticles+for+targeted+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Novel thermo-sensitive core-shell nanoparticles for targeted paclitaxel delivery.</a> Nanotechnology. 20 (6), 065104(2009).</li>
<li>Kato, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+cross-linked+micelles+for+the+targeted+delivery+of+vincristine+to+B-cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Disulfide cross-linked micelles for the targeted delivery of vincristine to B-cell lymphoma.</a> Mol. Pharm. 9, 1727-1735 (2012).</li>
<li>Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+glutathione+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of glutathione synthesis.</a> Mol. Aspects Med. 30, 42-59 (2009).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22OA02%22+peptide+facilitates+the+precise+targeting+of+paclitaxel-loaded+micellar+nanoparticles+to+ovarian+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">"OA02" peptide facilitates the precise targeting of paclitaxel-loaded micellar nanoparticles to ovarian cancer in vivo.</a> Cancer Res. 72, 2100-2110 (2012).</li>
<li>Koo, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide-cross-linked+PEG-poly%28amino+acid%29s+copolymer+micelles+for+glutathione-mediated+intracellular+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Disulfide-cross-linked PEG-poly(amino acid)s copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery.</a> Chem. Commun. 28, 6570-6572 (2008).</li>
<li>McLellan, L. I., Wolf, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+and+glutathione-dependent+enzymes+in+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Drug.+Resist.+Update%22%5BJournal%5D)">Glutathione and glutathione-dependent enzymes in cancer drug resistance.</a> Drug. Resist. Update. 2, 153-164 (1999).</li>
<li>Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+peroxide-mediated+oxidative+refolding+of+a+protein+at+physiological+pH+and+implications+for+oxidative+folding+in+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid.+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum.</a> Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).</li>
<li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicines%3A+closing+the+translational+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicines: closing the translational gap.</a> Lancet. 384, 2175-2176 (2014).</li>
<li>Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf">http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf</a> (2006).</li>
</ol>

Y. Li와 KSL은 가역적 가교 미셀 시스템에 대한 출원 중인 특허(미국 특허 출원 61/485,774)의 발명가입니다. KSL은 원고에 설명된 나타페우틱스를 개발할 계획인 LamnoTherapeutics Inc.의 창립 과학자입니다. 나머지 저자는 경쟁하는 재정적 이해관계가 없음을 선언합니다.

여러 가지 나노 입자는 약물 전달에 잠재적 인 사용을 위해 조사되었다. 리포좀 독소루비신과 파클리탁셀 (PTX)는 인간 혈청 알부민 나노 집계가 암 치료에 대한 FDA의 승인을 nanotherapeutics 중입니다 -loaded. 임상 적 효과가 있지만, 그러나, 이러한 nanotherapeutics 모두는 상대적으로 크기가 &quot;큰&quot;이며, 그들은 간과 폐에 축적되는 경향이있다. 상대적으로 작은 입자 크기와 높은 약물 적재 용량 고분자 미셀 약물 전달을위한 nanocarriers을 부상하고있다. 고유 한 코어 - 쉘 구조의 &#39;용해&#39;물리적 캡슐화 수성 조건 하에서 소수성 약물 분자. 약물 봉입 긴 저장 수명 및 높은 효율을 갖는 연구실 형태 단 분산 나노 입자 제조 TDs를 잘 정의 된 (10 내지 50 nm의 입자 지름)으로 구성된 고분자 미셀. 강인한 TD 플랫폼의 많은 장점 중 하나는 고분자의 다양성이다.많은 약물, 형광 염료 및 타겟팅 리간드 용이 TD 13,15,24 플...

나노 기술은 생물 의학 분야 (1)의 수를 도움이되고 빠른 신흥 분야이다. 나노 입자는 기존 치료제의 다른 유형 가능하지 않은 특성을 설계 및 튜닝을위한 기회를 제공한다. 나노 담체는 약물 순환 시간을 연장, 생분해에 대한 약물의 안정성을 향상시키는 약물 용해도 문제를 극복하고, 미세 조정 표적 약물 전달 및 공동 전달 조영제 1.2이 될 수있다. 나노 입자 기반 배달 시스템은 암 이미징 및 치료에 약속을 개최합니다. 종양 vasculatures는 거대 분자에 누설하고 향상된 침투성 및 보존 (EPR) 효과 3를 통해 종양 부위에 나노 입자를 순환의 우선 축적으로 이어질 수 있습니다. 적극적으로 항암 약물 캐리어로 추진되고있는 여러 가지 나노 캐리어 (예를 들어, 리포좀, 하이드로 겔 및 고분자 미셀) 중 고분자 미셀은 일을 통해 폭 넓은 인기를 얻고있다전자 지난 십 4,5. 고분자 미셀은 정맥 내 투여에 잠재적으로 그들의 unimers 해리 선도의 임계 미셀 농도 (CMC) 미만으로 희석 할 수 있고, 열역학 시스템이다. 가교 전략에 unimers 미셀 해리를 최소화하기 위해 사용되어왔다. 그러나, 과도하게 미셀 안정화시켜 전체 치료 효과를 감소 대상 부위에서 방출로부터 약물을 방지 할 수있다. 여러 가지 화학적 방법은 수 있도록 탐구 된 가교 산화 환원에 대한 응답으로 또는 환원 이황화 결합 6,7 및 pH의 절단 (8) 또는 가수 분해 가능한 에스테르 결합 9,10와 같은 외부 자극에 분해. 우리는 이전에 telodendrimers (TD)이라고 설계 및 수지상 콜산 (CA) 및 블록 선형 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 공중 합체로 이루어진 미셀 나노 입자의 합성을보고 11-15 </&gt; SUP. 이 TDs를은 (N = 분자량 킬로 달톤 (K)에서, y는 콜산의 수 (CA) 단위 =) PEG NK -CAy로 표시됩니다. 그들은 이러한 소수성 코어 파클리탁셀 (PTX)과 독소루비신 (DOX)로 캡슐화 약물에 작은 크기, 긴 수명, 높은 효율을 특징으로한다. 이러한 PEG, 리신, 및 CA 등 TD의 빌딩 블록은 생체 적합성 및 PEG 코로나의 존재는 망상 내피 시스템에 의해 미셀 나노 입자의 비특이적 흡수를 방지하는 &quot;은폐&quot;나노 입자의 특성을 부여 할 수있다. 티올 선형 덴드리머 용이 우리 표준의 TDS 수지상 올리고 라이신 백본에 시스테인을 도입함으로써 생성 될 수있다. 이 문서의 TDS 소수성 코어에 이황 가교 (도 1)을 도입함으로써 가역적 가교 미셀 약물 전달체의 제조를위한 손쉬운 프로토콜을 제공한다.

<table><tbody><tr><td>MeO-PEG5K-NH2</td><td>Rapp Polymere</td><td>125000-2</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Fmoc)-OH</td><td>Aaptec</td><td>AFK107</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-OH</td><td>Anaspec</td><td>AS-20132</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Aapptec</td><td>AAC105</td><td></td></tr><tr><td>디메틸포름아미드</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td></td></tr><tr><td>에틸 에테르</td><td>Fisher Scientific</td><td>E134-20</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropylethylamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125806</td><td></td></tr><tr><td>Trifluoroacetic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td>부식성, 조심스럽게 다루십시오</td></tr><tr><td>4-methyl piperidine</td><td>Alfa-Aesar</td><td>L-02709</td><td></td></tr><tr><td>Ebes 링커</td><td>Anaspec</td><td>AS-61924</td><td></td></tr><tr><td>콜산</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1129</td><td></td></tr><tr><td>1,2-Ethanedithiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>02390</td><td>흄 후드 내부 손잡이. 사용 후 장갑을 표백하십시오.</td></tr><tr><td>트리 이소 프로필 실란</td><td>시그마 알드리치</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름 (무수)</td> <td>시그마 알드리치</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소 용액 30 %</td> <td>Aaron Industries</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HoBt-Cl</td><td>Aaptec</td><td>CXZ096</td><td></td></tr><tr><td>DIC</td><td>시그마 알드리치</td><td>D125407</td><td></td></tr><tr><td>여성 흉선 누드 마우스 (Nu / Nu 균주), 6&ndash; 8주 령</td><td>할란(캘리포니아주 리버모어)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

가역 디설파이드 가교 미셀 제조를위한 손쉬운 효율적인 접근법

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

나노 의학은 생물 의학 응용 프로그램에 대한 규모 나노 미터 입자의 고유 한 특성을 이용합니다 치료의 새로운 형태이다. 치료 결과를 극대화하고, 약물과 관련된 부작용을 감소시키는 약물 전달을 향상 오늘날 나노 의학의 초석 일부이다. 특히 나노 입자는 암 치료의 다양한 응용 프로그램을 발견했다. 디자인, 응용 프로그램 및 종양 미세 환경에 따라 생산에 높은 수준의 유연성을 제공 나노 입자는 임상 적으로 신속한 번역 더 효과적 일 것으로 예상된다. 고분자 미셀 나노 캐리어는 약물 전달 응용 프로그램에 대한 인기있는 선택입니다. 이 글에서, 우리는 잘 정의 된 양친 선형 수지상 공중 합체 (telodendrimer, TD)의 자기 조립 (self-assembly)에 따라 약물로드, 이황화 가교 미셀을 합성하는 간단하고 효과적인 프로토콜을 설명합니다. TD는 폴리에틸렌 GL 구성된다친수성 세그먼트 용액 계 펩티드 화학 제를 사용하여 아민 종결 된 PEG에 코어 형성 용 소수성 잔기에 부착 단계적 같은 티올 콜산 클러스터와 ycol (PEG). 파클리탁셀 (PTX)과 같은 화학 요법 약물은 표준 용매 증발 법을 사용하여로드 될 수있다. 오 2 - 매개 산화는 이전에 TDS 농도에 무료 티올 그룹에서 내 미셀 이황화 가교를 형성하기 위해 사용 하였다. 그러나 반응이 느리고 대규모 생산에 가능하지 않았다. 최근는 H 2 O 2 - 매개 산화법 더 가능하고 효율적인 방식으로 탐구하였으며, 이는 96 배 빠른 속도로 이전에보고 된 방법보다이었다. 이 방법을 사용 PTX로드, 이황화 가교 나노 입자 50g을 성공적으로 좁은 입자 크기 분포와 높은 약물 적재 효율로 생산되고있다. 얻어진 미셀 용액의 안정성은 그러한 w 공동 배양 같은 방해 조건을 이용하여 분석또는 환원제없이 세제, 도데 실 황산나트륨, 제 i. 이들 비 - 가교 상대 비교할 때 약물로드 디설파이드 가교 미셀 적은 용혈 활성을 보여 주었다.

약물로드, 이황화 가교 미셀의 제조 및 특성 양친 매성 고분자 5K PEG -Cys -Ebes 4 8 8 -CA 암 약물 전달 디설파이드 가교 미셀 시스템을 형성 할 수있는 수지상 중합체. 구조적으로, 이는 분지 된 폴리 (라이신 시스테인 Ebes) 백본을 통해 선형 PEG 분자 (친수성 도메인 분자량 5K)의 일단에 연결된 콜릭 산 (소수성 도메인)의 수지상 올리고머로서 정의된다. 다른보고 미셀 시스템을 통해 이러한 블록 공중 합체를 사용하여 여러 가지 이점이있다. 첫째, 용이 단계적 용액 상 축합 반응을 통해 합성 될 수있다. 둘째, 잘 확립 된 용액 상 펩티드 단계적 FMOC 화학을 통해 제조 된 몇몇 다른보고 된 양친 성 중합체, 티올 중합체 시스템에 비해, 잘 정의 된 구조물의 있습...

특이성이 높고 부작용이 적은 암 약물을 종양 부위에 전달하려면 나노 입자를 기반으로 하는 새로운 방법이 필요합니다. 여기에서는 과산화수소 매개 산화에 의해 쉽게 준비될 수 있고 종양이 감소하는 환경에서 효율적으로 해리되어 페이로드를 방출할 수 있는 이황화 가교 미셀에 대해 설명합니다.

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

이 절차의 전반적인 목표는 표적 약물 전달을 위해 약물이 로드된 이황화 가교 미셀을 합성하기 위한 간단하고 효과적인 프로토콜을 제공하는 것입니다. 이 방법은 나노 의학 분야의 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, 안정적인 나노 제형을 효과적으로 생산하는 방법.이 기술의 가장 큰 장점은 이황화 가교 미셀을 대규모로 쉽게 합성할 수 있다는 것이며, 이는 환자를 대상으로 한 임상 연구에 매우 바람직합니다. 이 절차를 시작하려면 둥근 바닥 플라스크에 2g의 모노메틸 말단 폴리에틸렌 글리콜 모노아민을 추가합니다. 무수 DMF 10ml를 첨가하여 용해시킵니다.얼음에 식히십시오. 둥근 바닥 플라스크에 당량의 하이드록시 벤조트리아졸 3개, DIC 당량의 3개, di-eth-moc 보호 라이신 3당량을 추가합니다. 다음으로, 10ml의 무수 DMF를 추가합니다.마그네틱 교반 플레이트에서 혼합물을 20분 동안 저어줍니다. 그런 다음 혼합물을 모노 메틸 말단 폴리에틸렌 글리콜을 함유 한 둥근 바닥 플라스크에 첨가합니다. 얼음 수조에서 둥근 바닥 플라스크를 제거한 다음 실온에서 밤새 저어줍니다.교반이 완료되면 텍스트 프로토콜에 자세히 설명된 대로 반응이 완료되었는지 확인합니다. 반응 플라스크에 200ml의 얼음처럼 차가운 에테르를 추가합니다. 6, 000 x g에 분리기 4 섭씨 온도에 6 분 동안 침전된 중합체를 분리하기 위하여.침전 및 원심분리 과정을 두 번 반복하고 매번 침전 전에 10ml의 DMF에 생성물을 재용해합니다. 그런 다음 얼음처럼 차가운 에테르로 폴리머를 세 번 씻습니다. 튜브를 고진공 소스에 연결하여 잔류 에테르를 제거합니다.그 후 DMF에 20 밀리리터의 20 % 4- 메틸 피페리딘을 폴리머에 첨가하십시오. 용해가 완료될 때까지 저어줍니다. 3시간 동안 재미에 대한 반응을 허용하십시오.반응의 완료를 확인한 후, 고분자 생성물을 건조시킨다. 이제 진공 상태에서 2번 고분자 중간체를 만든 다음 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 추가 고분자 합성 단계를 수행합니다. 고분자 중간 번호 10이 생성되면 이를 반응 플라스크로 옮깁니다.30ml의 무수 DMF를 추가합니다. 새 플라스크에 24 상당의 활성 콜산을 20 밀리리터의 DMF에 용해시킵니다. 그런 다음 N, N-Diisopropylethylamine의 48 당량을 추가합니다.10분 동안 저어줍니다. 교반이 완료된 후, 혼합물을 중합체 중간수 10을 함

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연구

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생화학

의 시스테인 잔류의 thiol 그룹의 용매 접근성을 분석하는...

시스테인 잔류 물을 용매 접근성에 대한 분석<em&gt; 옥수수 rayado fino 바이러스</em에서 생산&gt; 바이러스 같은 입자<em&gt; Nicotiana benthamiana</emVLPs에 펩티드의&gt; 식물과 교차 연결

막 임베디드 단백질 도메인 간 상호 작용의 Biophysical 및 생화학 연구는 적절한 학습 자료를 얻는 첫 번째있는 많은 기술적 도전을 직면하고 있습니다. 이 문서는 솔루션을 핵 자기 공명 (NMR) 및 기타 분석 응용 프로그램의 구조 분석에 적합 이황화 - 안정화의 transmembrane의 펩타이드 복합체를 생산하고 정화를위한 프로토콜을 설명합니다.

구조 연구 생산 이황화 - 안정화 Transmembrane의 펩타이드 단지

템플릿 무료 기판에 거시적 인 나노 입자 - 리간드 단층 영화를 기능화 및 자기 조립, 단순 강력하고 확장 성있는 기술은이 프로토콜에 설명되어 있습니다.

템플릿이없는 기판에 육안 나노 입자 - 리간드 단층 필름을 기능화 및 자기 조립 기술

이 기사에서는 가시광선 매개 분산 중합을 사용하여 고분자 자체 조립 나노 입자를 생산하는 공정에 대해 설명합니다. 저에너지 가시광선을 사용하여 중합을 제어하면 높은 고형분 함량에서 자체 조립된 웜 같은 미셀의 재현 가능한 형성이 가능합니다.

Photoredox 촉매를 사용하여 가시 광선 중재 분산 중합에 의해 웜 형상 미셀 손쉬운 합성

현재 작업 micellar 나노, nanobiomaterials의 신흥 주요 클래스를 조작 하는 방법을 설명 합니다. 이 방법은 자기 조립, 탑-다운 분무, 상향식을 결합 및 용 매 기반 구조 제어. 제조 방법은 크게 연속, 높은 품질의 제품을 생산할 수 있는 이며 구조 제어에의 한 저렴 한 수단을 보유 하 고.

구형 및 벌레 모양의 Micellar 나노 자기 조립, 분무, 결합 하 여 용 매 기반 구조 제어의 제조

여기 postfusion bilayer에이 막 단백질의 세제 무료 배달 대상 지질 bilayers와 fusogenic proteoliposomes에 막 단백질의 재구성 및 같은 proteoliposomes의 융합에 대 한 두 개의 초고속 프로토콜 선물이. 이러한 방법의 복잡 한 다중 구성 요소 막 시스템의 신속 하 고 쉽게 제어 조립이 있습니다.

세제 없는 보완 청구 Proteoliposomes Fusogenic를 사용 하 여 지질 Bilayers에 막 단백질의 초고속 재구성.

선물이 thioether/비닐의 건설에 대 한 프로토콜 황화 닿는 헬리컬 펩 티 드 사진 유도 thiol-ene/thiol-yne hydrothiolation를 사용 하 여.

헬리컬 펩 티 드를 통해 사진 유도 Thiol-ene 또는 yne Hydrothiolation Thioether/비닐 황 화물-곁에 건설

여기, 우리 thiols의 한 냄비, 전환-금속-무료 합성을 제시 하 고 향기로운 할로겐, 나트륨 thiomethoxide, 뒤에 thiol 종을 사용 하 여 금속 dithiolene 네트워크의 단일 결정의 준비에서 thioesters 생성 에서 해 라 더 안정적이 고 그러므로 thioester에서.

반도체 Gyroidal 금속-황 프레임 워크의 결정 화에 대 한 Thiol 빌딩 블록의 합성

이황화 물 결합은 오랫동안 많은 단백질의 구조를 안정화 시키는 것으로 알려져 왔다. 이러한 고리에 의해 안정화 된 다중 이성질체 복합체를 분석 하는 간단한 방법은 비 환 원 SDS-PAGE 분석을 통해 서 이다. 여기서,이 방법은 인간 뼈 골 육 종 세포의 dUTPase OS 로부터 핵이 소 형태를 분석 하 여 예시 된다.

비 환 원 SDS-PAGE 분석 및 화학적 가교 결합으로 포유류 세포에서 이황화 물 조합에 의해 안정화 된 다이 성체 복합체를 배양에 검출

이 프로토콜은 엇갈인된 헤링본 마이크로믹서 미세유체 장치를 사용하여 열감도 리포좀을 준비하기 위한 최적화된 파라미터를 제시합니다. 이것은 또한 리포솜으로 독소루비신과 인도시아닌 녹색의 공동 캡슐화와 통제/트리거된 약물 방출을 위한 독소루비신의 광열 트리거 방출을 허용합니다.

리소리피드 함유 온도 민감성 리포좀의 미세유체 생산

학습하세요 과산화수소 매개 산화를 이용한 가역 디설파이드 가교 미셀 합성 방법을. 이 기술은 암 표적 약물 전달을 위한 대규모 나노 제형 생산에 활용됩니다.

가역 디설파이드 가교 미셀 제조를위한 손쉬운 효율적인 접근법

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