Name: 오징어로부터 색소를 추출하는 방법 Doryteuthis의 pealeii (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 3 s
Description: 배우세요 Doryteuthis pealeii 오징어의 색소체 과립에서 색소를 추출하는 방법을. 이 기술은 두족류의 적응적 색 변화 메커니즘을 나노스케일에서 규명하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

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저자는 University Instrumentation Center를 포함한 University of New Hampshire의 시설을 사용한 것에 대해 감사하는 마음으로 인정합니다. 이 연구는 뉴햄프셔 대학교 화학과의 지원을 받았습니다.

미국에서 규제되지 않습니다 여기에 실시 무척추 동물 연구; 따라서 기관 동물 관리 및 사용위원회는 프로토콜의 검토에 대한 권한이 없습니다. 이러한 미국의 규제의 관할에 해당하지 않는 대신에, 저자는 이에이 연구는 진지한 윤리적 사용을 향해 노력, 관리, 및 동물의 치료, 개인의 수를 최소화하고, 이러한 노력으로 수행 하였다 상태 것을 바젤 선언과 실험 동물 과학을위한 국제위원회 (ICLAS) 윤리 지침과 일치한다. 1. Doryteuthis의 pealeii (D.의 pealeii) 해부 <ol><li> 구매 참수 오징어 D. 우즈 홀, MA에있는 해양 생물 연구소의 해양 자원학과 또는 신선한 생선 시장에서 pealeii. 필렛 또는 이전에이 절차를 적용하기 위해 변경 한 시료를 사용하지 마십시오. 구체적으로는, 크로마tophore 층은 여전히 ​​표본에 그대로 있어야합니다. <ol><li> 동물을 즉시 사용하지 않는 경우, 사용할 때까지 -20 ℃에서 보관. 시료를 해동하기 전에 절개 1 시간 동안 실온의 물에 넣습니다. </li></ol></li><li> 동물의 후방 측을 따라 절단 스테인레스 스틸 직선 미세 점 해부 가위를 사용. 복부 맨틀의 기지에서 시작하고, 핀 영역에서 끝난다. </li><li> 집게를 해부 및 해부 가위를 사용하여 결합 조직을 절단로 들어 올려 내부 장기 (위, 아가미, 잉크 선, 생식 기관, 전신 심장과 상완 마음)을 모두 제거합니다. 표본 가방에 장기를 폐기하십시오. </li><li> 표준 11-1 / 2 (지느러미 쪽까지) 맨틀을 핀 T 핀을 해부 사용 &quot;X 7-1 / 2&quot;X 1-1 / 2 &quot;유연한 해부 패드를 포함하는 알루미늄 해부 팬.에 조직을 잠수함 일회용 폴리스티렌 진공 여과 시스템을 통해 여과 된 해수 250 ml의0.2 ㎛의 세공 크기를 포함하는. </li><li> 조심스럽게 그대로 색소 포 포함하는 피부 층을 유지, 해부 포셉 표피 피부 층 (불투명 한 색상)을 제거합니다. 표피층을 제거한 후에 시료 봉투에 버린다. </li><li> 포셉 및 해부 가위로 색소 포 층의 작은 (1cm X 1cm) 섹션을 해부하다. 1.5 ml의 마이크로 원심 분리기 튜브에서 샘플을 수집 (해부 조직과 각 빈 튜브의 절반을 채우기). </li><li> 튜브를 포함하는 조직에 여과 해수의 500 μl를 추가합니다. 샘플을 4 ℃에서 하룻밤 동안 저장 될 수있다. </li></ol> 2. 분리 색소 포 안료 과립 <ol><li> 조직 소화 <ol><li> 파파인 / 콜라게나 제의 제조 <ol><li> 종이의 무게 콜라게나 제 30 mg을하고, 4 &quot;× 4&quot;낮은 질소를 사용하여 파파인 5 ㎎을 무게. 스크류 캡으로 50 ML의 폴리 프로필렌 원심 분리 관에 다음을 전송합니다. </li><li> deioniz 10 ㎖를 측정눈금 피펫을 사용하여 에드 물. 파파인 / 콜라게나 제를 포함하는 유리 병에 직접 추가 할 수 있습니다. 솔루션까지 가장 높은 설정에 소용돌이는 분명하다. </li></ol></li><li> 세포 외 조직을 제거 <ol><li> g X 14000에서 5 분 동안 단계 170에서 수집 된 색소 포 조직을 원심 분리기. 플라스틱 폐기물 통에 바닷물의 상단 층을 폐기하십시오. </li><li> P1000 가변 볼륨 단일 채널 마이크로 피펫을 사용하여 조직에 파파인 / 콜라겐 용액 500 μl를 추가합니다. 가장 높은 설정에 1-2 분 동안 각각의 샘플을 소용돌이. </li><li> 주변 조직으로부터 세포를 해리 40 kHz의 주파수에서 5 분 동안 샘플을 초음파 처리. </li><li> 14,000 × g에서 5 분 동안 원심 분리기. 플라스틱 폐기물 통에 상층 액을 버린다. </li><li> g X 14000에서 5 분 동안 수집 된 색소 포 조직을 원심 분리기. 플라스틱 폐기물 통에 바닷물의 상단 층을 폐기하십시오. 다시 한 번 반복합니다. </li><li> 수동으로 남아있는 큰 조직 초를 제거다음 단계로 진행하기 전에 포셉이 과정에서 소화되지 않은 TIONS. </li></ol></li></ol></li><li> 안료 과립을 분리 <ol><li> 균질화 버퍼의 준비 <ol><li> 2.38 g의 무게 (4- (2- 히드 록시 에틸) -1- 피페 라진 에탄 술폰산) (HEPES, 100 mM)을 염화 마그네슘 (10 mM)을, 칼륨 아스파 테이트의 0.856 g (50 mM)을 0.095 g, 0.015 g의 디티 오 트레이 톨 (1 mm)이다. 스크류 캡을 가진 150 ㎖ 폴리스티렌 용기에 옮긴다. 하나는 상용 미니 태블릿 프로테아제 억제제를 추가합니다. </li><li> 눈금 실린더를 사용하여 100 ml의 탈 이온수를 측정한다. 균질화 염을 함유하는 용기에 직접적으로 추가한다. 솔루션까지 소용돌이는 분명하다. </li></ol></li><li> 안료 과립의 균질화 <ol><li> 5 분 동안 14,000 XG에서 2.1 단계에서 각 샘플을 원심 분리기. 플라스틱 폐기물 통에 상층 액을 버린다. 이 샘플은 세포 조직의 무효합니다. </li><li> 추가 500# 181; 1-2 분마다 각각의 튜브와 소용돌이에 균질화 버퍼의 난 철저하게 샘플을 혼합합니다. 30 분 (~ 40 kHz에서)에 대한 샘플을 초음파 처리하고 14,000 × g에서 원심 분리의 5 분에 따릅니다. </li><li> 플라스틱 폐기물 통에 뜨는을 폐기하고, 색소 포의 sacculus 단백질 사슬의 완전한 소화를 보장하기 위해 이전 단계를 2 ~ 3 번 반복합니다. 남은 용액은 담황색 상청과 분리 된 안료 입자를 함유하는 붉은 색의 펠렛을 함유한다. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. 안료 추출 <ol><li> 산성 메탄올의 제조 (염산 - 메탄올) <ol><li> 조심스럽게 메탄올 5 ㎖ (메탄올)로 농축 (36.5-38 % (/ w) w) 염산 (HCL)의 25 μl를 추가합니다. 스크류 캡 유리 샘플 유리 병에 염산 - 메탄올 용액을 저장합니다. 균일 용액을 섞어 부드럽게 소용돌이. 주 : 더 산성 용액 더 안료는 인터넷 동안 추출한다첫 번째 추출. </li></ol></li><li> 안료의 추출 <ol><li> 14,000 XG에서 5 분 (2.2.2)에서 색소 과립 현탁액을 원심 분리기 및 플라스틱 쓰레기 통에 상층 액을 버린다. </li><li> HCL에 - 메탄올 용액 500 μl를 추가하고 3-4 분 ~ 각 샘플을 소용돌이. 10 분 (~ 40 kHz에서)를위한 샘플을 초음파 처리 한 후 14,000 × g에서 5 분간 원심 분리. </li><li> 전송 피펫을 사용하여, 1 DRAM 나사 최고 유리 병에 뜨는를 수집합니다. 상층 액은 색상 진한 빨간색이어야한다. </li><li> 더 색 (~ 4-5 세척) 추출되지 않을 때까지 추출 단계 3.2.2를 반복합니다. 참고 : 각 추출 ~ 안료의 1.5 ml를 얻을 것입니다. 남아있는 무색의 펠릿 안료 추출 과립이다. 주 : 무색 과립 추출 안료 모두 더 사용할 때까지 39 ° C의 물에 저장 될 수있다. </li></ol></li></ol> 추출 과정에서 4. 특성 <ol><li> 스캔 엘ectron 현미경 <ol><li> 추출 처리의 순도를 확인하기 위해 주사 전자 현미경 (SEM)을 사용한다 (단계 2.2.1 안료 추출 단계 3.2.3부터 미 반응 된) 이미지 과립. </li><li> 14,000 XG에서 5 분 동안 영상, 최초의 원심 분리기 모두 반응 과립 및 안료 추출 과립을위한 과립 샘플을 준비하고 플라스틱 폐기물 통에 뜨는을 취소합니다. 1 ml의 에탄올 및 예금 전송 피펫을 사용하여 알루미늄 SEM 스텁 상 과립 현탁액을 2 ~ 3 방울에이를 다시 일시 중지합니다. </li><li> 밤새 샘플을 건조시킨 후, 15 nm의 코팅을 얻기 위해 3 분 동안 금 - 백금 코팅 피막 스퍼터. </li><li> 쇼트 키 방출하고 2 차 전자 검출기와 SEM을 사용하여 이미지. 5-7 kV의 광 전압 및 이미지 8 9mm 이들 물질 사이의 작동 거리를 사용한다. </li></ol></li><li> 자외선 - 가시 광선 (UV-힘) 분광 측정 <ol><li> 흡광도 프로 모니터200-800 nm의에서 듀얼 빔 분광 광도계를 사용하여 3 조건 파일 (2.2.2에서 미 반응 과립, 3.2.3에서 추출 색소 및 3.2.4에서 색소를 추출 과립). </li><li> 미 반응 과립 및 안료 추출 과립 1 ml의 큐벳에 탈 이온수를 사용하여 빈 측정 값을 수집합니다. 두 샘플에 대한 UV-마주 흡수 스펙트럼을 수집합니다. </li><li> 추출 된 안료 1 mL를 큐벳에서 산성 메탄올 용액을 사용하여 블랭크 측정을 수집한다. 샘플에 대한 UV-마주 흡수 스펙트럼을 수집합니다. </li><li> 흡광도 피크의 최대 상대 높이에 도달하는 파장을 식별함으로써, 각 시료의 최대 파장을 결정한다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Bell, G. R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatophore+radial+muscle+fibers+anchor+in+flexible+squid+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr+Biol%22%5BJournal%5D)">Chromatophore radial muscle fibers anchor in flexible squid skin.</a> Invertebr Biol. 132 (2), 120-132 (2013).</li>
<li>Crookes, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflectins%3A+The+unusual+proteins+of+squid+reflective+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Reflectins: The unusual proteins of squid reflective tissues.</a> Science. 303 (5655), 235-238 (2004).</li>
<li>Deravi, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure-function+relationships+of+a+natural+nanoscale+photonic+device+in+cuttlefish+chromatophores%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">The structure-function relationships of a natural nanoscale photonic device in cuttlefish chromatophores.</a> J. R. Soc. Interface. 11 (93), 1-9 (2014).</li>
<li>Mäthger, L. M., Denton, E. J., Marshall, N. J., Hanlon, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+behavioural+functions+of+structural+coloration+in+cephalopods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and behavioural functions of structural coloration in cephalopods.</a> J. R. Soc. Interface. 6 (2), 149-163 (2009).</li>
<li>Mäthger, L. M., Hanlon, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+basis+for+camouflaged+polarized+light+communication+in+squid%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Anatomical basis for camouflaged polarized light communication in squid.</a> Biol. Lett. 2 (4), 494-496 (2006).</li>
<li>Mäthger, L. M., Hanlon, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malleable+skin+coloration+in+cephalopods%3A+selective+reflectance%2C+transmission+and+absorbance+of+light+by+chromatophores+and+iridophores%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Malleable skin coloration in cephalopods: selective reflectance, transmission and absorbance of light by chromatophores and iridophores.</a> Cell Tissue Res. 329 (1), 179-186 (2007).</li>
<li>Cloney, R. A., Brocco, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatophore+Organs%2C+Reflector+Cells%2C+Iridocytes+and+Leucophores+in+Cephalopods%5BTitle%5D)+AND+%22Amer.+Zool%22%5BJournal%5D)">Chromatophore Organs, Reflector Cells, Iridocytes and Leucophores in Cephalopods.</a> Amer. Zool. 23 (3), 581-592 (1983).</li>
<li>Hanlon, R. T., Messenger, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+coloration+in+young+cutttlefish+%28Sepia+officinalis+L%29-+The+morphology+and+development+of+body+patterns+and+their+relation+to+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive coloration in young cutttlefish (Sepia officinalis L)- The morphology and development of body patterns and their relation to behaviour.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 320 (1200), 437-487 (1988).</li>
<li>Sutherland, R. L., Mäthger, L. M., Hanlon, R. T., Urbas, A. M., Stone, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cephalopod+coloration+model.+II.+Multiple+layer+skin+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Opt.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Cephalopod coloration model. II. Multiple layer skin effects.</a> J. Opt. Soc. Am. 25 (8), 2044-2054 (2008).</li>
<li>Florey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+and+function+of+cephalopod+chromatophores%5BTitle%5D)+AND+%22Amer.+Zool%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure and function of cephalopod chromatophores.</a> Amer. Zool. 9 (2), 429-442 (1969).</li>
<li>Florey, E., Kriebel, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+chromatophore+muscle+fibers+of+squid%2C+Loligo+opalescens%2C+to+nerve+stimulation+and+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Z.+Vergl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of chromatophore muscle fibers of squid, Loligo opalescens, to nerve stimulation and drugs.</a> Z. Vergl. Physiol. 65 (1), 98-130 (1969).</li>
<li>Williams, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+Phenoxazone-Based+Pigments+to+the+Structure+and+Function+of+Nanostructured+Granules+in+Squid+Chromatophores%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Contributions of Phenoxazone-Based Pigments to the Structure and Function of Nanostructured Granules in Squid Chromatophores.</a> Langmuir. , (2016).</li>
<li>Nijhout, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ommochrome+pigmentation+of+the+linea+and+rosa+seasonal+forms+of+Precis+coenia+%28Lepidoptera%3A+Nymphalidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Insect.+Biochem.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ommochrome pigmentation of the linea and rosa seasonal forms of Precis coenia (Lepidoptera: Nymphalidae).</a> Arch. Insect. Biochem. Physiol. 36 (3), 215-222 (1997).</li>
<li>Van Den Branden, C., Decleir, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Study+of+the+Chromatophore+Pigments+in+the+Skin+of+the+Cephalopod+Sepia+Officinalis%5BTitle%5D)+AND+%22L.+Biol.+Jb.+Dodonaea%22%5BJournal%5D)">A Study of the Chromatophore Pigments in the Skin of the Cephalopod Sepia Officinalis.</a> L. Biol. Jb. Dodonaea. 44 (2), 345-352 (1976).</li>
<li>Aubourg, S., Torres-Arreola, W., Trigo, M., Ezquerra-Brauer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Jumbo+Squid+Skin+Pigment+Extract+and+its+Antioxidant+Potential+ina+Marine+Oil+System%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Lipid+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Characterization of Jumbo Squid Skin Pigment Extract and its Antioxidant Potential ina Marine Oil System.</a> Eur. J. Lipid Sci. Technol. 118 (0), (2016).</li>
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우리는 공개할 것이 없습니다.

우리는 오징어 색소 포 과립에서 색소를 추출하는 방법을 설명했다. 특히 과립을 대상으로, 우리의 목표는 적응 착색을 매개의 역할을 결정하는 것입니다. 이 방법은 대량 조직 샘플 (14) 또는 동결 건조 피부 (15)를 사용하여 두족류 안료의 특성을 설계 이전 보고서에서 다르다. 이 프로토콜은 색소 포 안료를 추출하는 데 효과적이지만, 이것은 작은 반응 규모로 제한된다. 한 오징어 수확량을 해부 ~ 정제 된 과립의 11 mg을. 약이 질량의 58 %는 염산 - 메탄올 용액을 사용하여 추출 된 수용성 안료를 포함한다. (12)을 시작 색소 포 조직의 순도는 직접 한 해부에서 제품 수율에 영향을 미친다. 샘플을 초과 표피 또는 해부 동안 수집 iridophore 조직에 의해 오염 나타날 경우, 샘플의 내용을 별도의 추가 버피에서 그들을 재현 탁하는 것이 가장 좋습니다FER, 그리고 균질화가 또 다시 단계를 시작합니다. 색소...

오징어, 오징어, 문어와 같은 두족류는 동적으로 위장 및 신호에 대한 자신의 모양을 변경할 수있는 기능을 가지고있다. 1-6이 기능은 색소로 알려진 착색 기관의 선택 면적 확장에 의해 부분적으로 지원됩니다. 4,7-9 색소는 이들이 작동되면 근섬유로 방사상 고정되는 cytoelastic sacculus 내에 한정 나노 안료 입자의 네트워크를 포함 소프트 액츄에이터. 1,3, 색소는 장기에 걸쳐 입자를 분산되게 표면적을 500 %로 확대. 3,7-을 이 작업은 색소 세포의 수 이상으로 행한 경우, 10, 11는, 동물의 전체 착색이 변경됩니다. 이 색소 과립이 색의 변화에 ​​기여하는 것으로 알려져 있지만, 이들 조성물은 알려지지 않았다. 우리는 분리 및 미래 연구를 조성하도록 구성 될 수있다 안료 색소 포를 정제하는 방법을 설명한다. 3,12 색소 포 함유 조직은 두족류에서 조심 근절을 통해 수거된다. 소화 균질화 과정은 다음 색소 포 세포 주변 조직을 해리와 구분하기 위해 사용된다. 나노 구조 과립 반복 초음파 처리 및 원심 분리를 이용하여 남아있는 색소로부터 단리하고 정제한다. 정제시, 안료, 산성 메탄올 용액을 사용하여 나비 날개에서 보이는 색상의 추출에서 적응하는 과정에서 입자로부터 추출된다. (13) 주사 전자 현미경 (SEM) 및 측정법은 색소 포 안료가 성공적으로 사용하여 추출하는 것을 확인하기 위해 사용 이 과정. 이 방법은 C의 분자 기여를 탐구하는 데 사용되는 색소 포 과립의 분리를 설명oloration 두족류에. 전체 동물의 12 작은 분자 추출은 종종 길고 지루한 과정이 될 수 있습니다. 여기에 목표는 두족류의 나노 입자의 안료의 취득을위한 효과적이고 손쉬운 프로토콜의 미래 연구원을 알려드립니다.

<table><tbody><tr><td>콜라겐 분해 효소</td><td>Alfa Aesar</td><td>9001-12-1</td><td>무해</td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3482-12-3</td><td>자극성, 급성 독성</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7365-45-9</td><td>가벼운 자극성</td></tr><tr><td>염산</td><td>EMD 화학 물질</td><td>7647-01-0</td><td>부식성</td></tr><tr><td>k-아스파르테이트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1115-63-5</td><td>반응 산화제로 격렬하게</td></tr><tr><td>마그네슘 염화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7786-30-3</td><td>약한 눈 자극제</td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>67-56-1</td><td>고인화성</td></tr><tr><td>미니 정제 prtoease 억제제</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>469315-90-01</td><td>금속과 피부에 부식성</td></tr><tr><td>Papain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9001-73-4</td><td>자극제&nbsp;</td></tr></tbody></table>

오징어로부터 색소를 추출하는 방법<em&gt; doryteuthis의 pealeii</em

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

두족류는 감지, 의사소통, 방어 및 번식 목적으로 피부 착색의 빠르고 적응적인 변화를 겪을 수 있습니다. 이러한 능력은 크로마토포어(chromatophores)로 알려진 색소 기관의 영역 확장 및 수축에 의해 부분적으로 지원됩니다. 크로마토포어(chromatophores)는 착색된 과립의 테더링된 네트워크를 포함하는 것으로 알려져 있지만, 그 구조-기능 특성은 완전히 상세하지 않습니다. 우리는 오징어 Doryteuthis pealeii chromatophores에서 나노 구조 과립을 분리하는 방법을 설명하고 관련 색소가 산성 용매에서 어떻게 추출될 수 있는지 보여줍니다. 이를 달성하기 위해 진피층을 포함하는 크로마토포어는 먼저 표재성 해부를 사용하여 수동으로 분리하고 초음파 처리, 원심분리 및 세척 주기를 사용하여 색소 과립을 제거합니다. 정제된 과립 내에 갇힌 안료는 산성 메탄올 용액을 통해 추출되어 눈에 보이는 색상이 없는 더 작은 직경의 나노 구조를 남깁니다. 이 추출 절차는 과립에서 분리된 58%의 용해성 색소 수율을 생성합니다. 이 방법을 사용하여 크로마토포어 색소의 조성을 측정하고 두족류의 적응 착색 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하는 데 사용할 수 있습니다.

색소는 D.에서 해부하는 pealeii 등의 맨틀 (그림 1A, 1B). 그들은이 제거되면 색소 세포가 용해 및 색소 과립 (도 2A, 2B)를 밖으로 분리하는 원심 분리 및 세척주기를 사용하여 정제한다. 산성 메탄올 용액 (염산 - 메탄올)는 수용성 색소 추출물과 불용성 무색 안료 추출 과립을 산출, 과립 (그림 2C)에서 색소를 추출하는 데 사용됩니다. 추출 공정은 입자의 평균 직경을 감소시킨다. 이 작업은 주사 전자 현미경 (SEM)을 사용하여 관찰된다. (도 3A N = 100, 에러 표준 편차) 과립 염산 - 메탄올에 노출되기 전에, 그들은...

오징어 Doryteuthis pealeii 색소의 나노 입자에서 색소의 추출을위한 프로토콜이 표시됩니다.

오징어로부터 색소를 추출하는 방법<em&gt; Doryteuthis의 pealeii</em

Cephalopods can undergo rapid and adaptive changes in dermal coloration for sensing, communication, defense, and reproduction purposes. These capabilities ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 갓 해부한 오징어, Doryteuthis pealeii의 색소포 내 나노 구조 과립에 위치한 색소를 추출하는 방법을 설명하는 것입니다. 두족류는 피부색을 빠르고 적응적으로 변화시키는 복잡한 해양 동물입니다.하지만 이러한 시스템이 어떻게 작동하는지에 대해서는 여전히 알려지지 않은 부분이 많습니다. 이 기술의 주요 장점은 색소포 기관 내의 나노 구조 과립을 특이적으로 표적으로 삼는다는 점입니다. 이를 통해 연구자들은 나노 스케일에서 시작되는 색 변화 메커니즘을 규명할 수 있을 것입니다.두족류 생물학에 대한 통찰뿐만 아니라, 이 방법은 미리 준비된 색소 나노 입자를 사용하여 두족류에서 나타나는 적응형 색상의 역동적인 범위를 모방하도록 설계된 합성 시스템의 설계에 정보를 제공할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법이 처음인 사용자는 색소포 조직이 주변 조직과 매우 가깝게 위치해 있어 순수한 색소포 조직을 수집하는 데 어려움을 겪습니다. 본 방법은 이러한 오염 물질을 줄이도록 최적화되었습니다.해부를 시작하려면, 먼저 여과된 해수를 약 250 milliliters 정도 해부 팬에 붓습니다. 표본을 팬에 넣고 스테인리스 스틸 직선 미세 포인트 가위를 사용하여 복측 외투막 기저부부터 동물의 후면을 따라 지느러미 부위까지 절개합니다. 해부용 핀셋으로 내부 장기를 조심스럽게 들어 올리고 가위로 결합 조직을 절단하여 모든 내부 장기를 제거합니다.기관들을 검체 봉투에 넣어 폐기합니다. 해부용 T-핀을 사용하여 외투막의 지느러미 쪽이 위로 향하도록 해부 패드에 고정합니다. 핀셋을 이용해 불투명한 표피층을 조심스럽게 제거하되, 색소포가 포함된 피부층은 손상되지 않게 유지합니다.표피층을 검체 봉투에 넣어 폐기하십시오. 다음으로, 색소포 층을 제거합니다. 색소포 조직을 1 cm × 1 cm 크기의 작은 구역으로 자릅니다.절단된 조직을 각 튜브의 절반 정도까지 채워 1.5 milliliter 마이크로 원심분리 튜브에 넣습니다. 마지막으로, 튜브에 500 microliters의 여과된 바닷물을 추가합니다. 색소 과립을 분리하기 위해, 먼저 색소포 조직 절편을 14,000 x g에서 5분 동안 원심분리합니다.해수의 상층액을 제거합니다. 샘플에 500 µL의 파파인 콜라게나제 용액을 첨가하고 가장 높은 설정으로 1~2분간 볼텍싱합니다. 다음으로, 주변 조직에서 세포를 분리하기 위해 40 kHz에서 5분 동안 샘플을 초

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이 동영상은 하와이 밥테일 오징어에서 hemocytes (혈액 세포)을 구하는 방법을 보여줍니다...

하와이 밥테일 오징어에서 Hemocytes 구하기 Euprymna scolopes와 공생이 아닌 공생 박테리아들의 준수를 관찰

이 비디오에서는 돼지의 눈에서 홍채 및 망막 색소 상피 세포를 분리하여 in vivo 및 ex vivo 연구를 위한 기본 배양을 얻는 기술에 대해 설명합니다. 이러한 색소 세포는 안구 질환을 치료하기 위한 재생 접근법을 연구하기 위해 유전적으로 변형될 수 있습니다.

IPE 및 RPE 세포의 분리: 분리된 돼지 눈에서 색소 상피 세포를 얻는 기술

이 프로토콜은 in vitro에서 광 수확 복합체의 재구성에 대해 자세히 설명합니다. 이러한 일체형 막 단백질은 엽록소와 카로티노이드를 조정하고 고등 식물과 녹조류에서 빛을 수확하는 역할을 합니다.

식물과 녹조류의 빛 수확 단지의 체외의 재구성에

이러한 생물학적 검정은 식품 영양 학적으로 유사한 매트릭스를 이용 농도 천연 해양 생물의 조직 유기 추출물로부터 병입 억지 대사의 존재를 평가하기위한 모델 육 물고기를 이용한다.

물고기 먹이 실험 생물 검정은 해양 생물의 조직에서 이차 대사 산물의 Antipredatory 활동을 평가하기 위해

이 논문은 유 중수 에멀젼에 기초 소수성 안료와 수용성 단백질을 조립하기위한 간단하고 높은 처리량 방법을 설명한다. 우리는 브라 E. 식물에서 발현 재조합 수용성 엽록소 4 변형 결합 단백질 (WSCPs) 네이티브 엽록소의 조립에있어서의 효과를 입증 대장균.

오일 유제에서 물 : 소수성 안료와 수용성 엽록소 결합 단백질을 조립하기위한 새로운 시스템

이 작품은 디지털 이미지 분석을 사용하여 Drosophila melanogaster의 복부 색소 침착 을 빠르고 정확하게 정량화하는 방법을 제시합니다. 이 방법은 표현형 획득과 데이터 분석 사이의 절차를 합리화하고 표본 장착, 이미지 수집, 픽셀 값 추출 및 특성 측정을 포함합니다.

복부 색소 침착 정량화<em&gt; Drosophila melanogaster</em

여기, 선물이 fucoxanthin 엽록소 a/c 바인딩 단백질 (FCP) 규조류에서 격리 하 여 이온 구성 변경 시 여기 에너지 전달 연구를 자연 지질 작곡과 리로 그들을 통합 하는 프로토콜.

분리 및 통합 규조류 Cyclotella Meneghiniana Thylakoid 지질으로 리에서에서 광 수확 안테나

돌리올리다 게겐바우리종을 포함한 돌리올리드는 전 세계적으로 생산적인 아대륙 선반 시스템에서 발견되는 생태학적 중요성의 작은 젤라틴 해양 동물플랑크톤이다. 이 섬세한 유기체를 배양하는 어려움은 그들의 조사를 제한합니다. 본 연구에서는 돌리올리야게겐바우리(doliolid Dolioletta gegenbauri)를수집, 사육 및 유지하기 위한 재배 접근법을 설명합니다.

실험 연구를 위한 해양 펠라기 투니케이트 돌리오레타 게겐바우리 재배 (울자닌 1884)

멜라닌 세포 기능의 조절제는 색소 침착 결과의 눈에 보이는 차이를 지배합니다. 후보 색소 침착 유전자의 분자 기능을 해독하는 것은 어려운 일입니다. 여기에서 우리는 제브라피쉬 모델 시스템을 사용하여 후보를 식별하고 멜라닌 함량과 멜라닌 세포 수의 조절자로 분류하는 방법을 보여줍니다.

Zebrafish를 사용하여 색소 침착 조절자를 식별하기 위한 역 유전적 접근

우리는 전기생리학적으로 이중 안정한 광안료를 특성화하기 위한 프로토콜을 제시한다: (i) 광자-흡수 및 광수용체에서의 그들의 엄청난 양에 뒤따르는 광안료 분자 내의 전하 변위를 이용하고, (ii) 로돕신과 메타로돕신 광안료 상태의 흡수-스펙트럼 차이를 이용한다. 이들 프로토콜은 이중-안정한 광안료 시스템에 영향을 미치는 돌연변이를 스크리닝하는데 유용하다.

초파리 광수용체에서 광안료 수준을 측정하기 위한 전기생리학적 방법

여기에서는 Gracilaria gracilis의 통합 가치 평가를 목표로 하는 몇 가지 프로토콜에 대해 설명합니다: 야생 종 수확, 자체 성장 및 생체 활성 성분 추출. 추출물의 항산화, 항균 및 세포 독성 효과와 함께 전체 해조류 바이오매스 및 색소가 풍부한 식품의 영양 및 안정성 평가가 평가됩니다.

Biorefinery 접근 방식을 통한 Red Seaweed Gracilaria gracilis 의 가치 평가

배우세요 Doryteuthis pealeii 오징어의 색소체 과립에서 색소를 추출하는 방법을. 이 기술은 두족류의 적응적 색 변화 메커니즘을 나노스케일에서 규명하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

오징어로부터 색소를 추출하는 방법

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