P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 모델

신생아 뇌졸중은 조기 뇌 손상의 중요한 원인으로, 연구를 위해 일관된 국소 손상 패턴과 높은 재현성을 가진 번역 모델이 필요합니다. 이 연구는 만삭 등가 설치류에서 비출혈성, 편측성 국소 허혈-재관류 손상을 생성하기 위한 자세한 수술 절차를 설명합니다.

신생아 쥐에서 일시적인 중대뇌동맥 폐색의 전반적인 목표는 만삭 신생아에서 뇌졸중의 번역 모델을 제공하는 것입니다. 이 방법은 발달 중인 뇌의 손상 및 복구 메커니즘을 이해하고 다양한 치료 전략으로 이를 수정할 수 있는 방법을 이해함으로써 신생아 허혈성 뇌 손상 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 신생아의 국소 동맥 허혈성 뇌졸중에 대한 생리학적으로 정확한 모델을 제공하고 인간 신생아의 부상 진행에 중요한 부분인 재관류 구성 요소도 포함한다는 것입니다.

이 수술의 단계는 배우기가 매우 어려울 수 있기 때문에 이 모델의 시각적 시연이 중요합니다. 동맥 해부학적 구조에 대한 2차원 표현이 쥐의 3차원 분기의 복잡한 특성을 항상 적절하게 보여주는 것은 아닙니다. 강아지의 무게를 측정하여 19g에서 21g 사이인지 확인하는 것으로 시작하십시오.

승인된 프로토콜에 따라 흡입된 이소플루란을 사용하여 강아지를 마취한 후 발 꼬집음에 대한 반응이 없는지 확인하십시오. 수술 단계에서 발열 패드를 사용하여 체표면 온도를 유지하십시오. 어깨 부위에 테이프를 붙여 동물을 누운 자세로 고정합니다.

멸균 면봉을 사용하여 70% 에탄올로 경추 앞쪽 부위를 면봉으로 닦은 다음 포비돈 요오드 용액을 면봉으로 닦습니다. 다음으로, 0.25%부피바카인을 계획된 절개 부위에 국소적으로 침투시킵니다. 그런 다음 입체경을 통해 작업하는 동안 5-7mm 전방 경추 절개 정중선을 만들어 총경동맥을 노출시킵니다.

2-4개의 견인기를 배치하여 캐비티를 열고 동맥을 노출시킵니다. 다음으로 내부 경동맥, 후두 동맥 및 외부 경동맥을 찾습니다. 동맥에서 결합 조직과 지방을 제거하여 명확하게 볼 수 있습니다.

6-0 실크 꼰 봉합사 1.5cm를 자른 후 봉합사를 풀어 한 가닥을 빼냅니다. 한 가닥이 깔끔하고 닳지 않았는지 확인하십시오. 봉합사 가닥을 45도 집게 이내로 유지하면서 팁이 ICA와 OA 사이에 나오도록 ICA 아래 호를 그리며 집게를 쓸어냅니다. 그런 다음 봉합사 가닥의 끝을 잡고 끝이 쉽게 접근할 수 있도록 당깁니다.

집게에서 가닥을 풀고 ICA 아래에서 집게를 뒤로 빼내어 이전 동작을 반대로 합니다. CCA와 분리되는 위치에서 가장 가까운 기저부에서 ICA 주위에 임시 합자를 묶습니다. ICA를 측면으로 조심스럽게 후퇴시킨 다음 클립을 사용하여 절개 부위 반대쪽의 겨드랑이 영역 근처의 여분의 피부에 후퇴하는 가닥을 고정합니다.

다음 단계로 진행하기 전에 수축 가닥이 혈류를 멈출 수 있을 만큼 팽팽한지 확인하십시오. 동맥은 평평하고 창백해야 합니다. 45도 집게를 사용하여 꼰 다른 봉합사 가닥을 잡고 이전과 같이 ICA 아래 및 주위에 고리를 만듭니다.

이 스트랜드를 수축 스트랜드의 측면으로 배치합니다. 그런 다음 묶인 합자와 묶이지 않은 합자 사이의 중간에서 0.2mm 동맥 절개술을 묶인 합자에 더 가깝게 자릅니다. 이제 미터법 눈금자를 사용하여 10mm의 실리콘 코팅된 나일론 봉합사를 폐색 봉합사로 측정합니다.

재관류 중 제거를 위해 2-3mm의 여유를 두고 봉합사를 절단합니다. 45도 집게로 폐색 봉합사를 잡고 직선 집게를 사용하여 구부리기를 만들어 전진의 정지 지점을 표시합니다. 폐색 봉합사를 동맥 절개술에 공급하여 ECA와 평행하게 머리를 향

구부러진 부분에 도달할 때까지 봉합사를 부드럽게 전진시킵니다. 그런 다음 수축 가닥의 측면에 위치한 가닥을 사용하여 임시 결찰을 묶어 폐색 봉합사를 고정합니다. 견인기 클립을 제거한 다음 두 임시 합자의 가닥을 자르고 매듭을 제거하는 데 사용할 가닥을 조이는 데 사용된 가닥보다 길게 남겨둡니다.

견인기를 제거하고 6-0 꼰 실크를 사용하여 캐비티를 닫아 3개 또는 4개의 단속 봉합사를 만듭니다. 강아지를 마취에서 제거하고 실내 공기가 있는 가열 패드에 놓습니다. 강아지가 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 모니터링하고, 댐으로 되돌리기 전에 완전히 회복되었는지 확인하십시오.

폐색 중에는 확산 가중 자기 공명 영상(diffusion-weighted magnetic resonance imaging)을 사용하여 적절한 부상 유도를 확인할 수 있습니다. 이 이미지는 일시적인 MCAO 동안 DW-MRI에 의해 감지된 화살표로 표시된 진행 중인 허혈성 손상을 보여줍니다. MCA의 폐색 후에 대략 2 시간 50 분, 외과 물자를 준비하고, 그 후에 전과 같이 마취에 의하여 재관류 절차를 시작하십시오.

중단된 봉합사를 제거하고 두 개의 합자와 폐색 봉합사의 꼬리 끝으로 표시된 접합부를 찾습니다. 더 긴 가닥을 당겨 임시 결속의 가장 측면 매듭을 조심스럽게 풀고 구멍에서 봉합사 가닥을 제거합니다. MCA 폐색 후 정확히 3시간 후에 폐색 봉합사를 동맥 밖으로 천천히 빼냅니다.

저항이 없어야 합니다. 겸자를 사용하여 동맥 절개술에 압력을 가한 다음 내측 매듭을 조심스럽게 풀어 혈류를 회복시킵니다. 몸에서 봉합사 가닥을 제거한 후 동맥 절개술에 지혈제를 바르면 출혈이 멈춥니다.

동맥의 원래 모양과 붉은색이 돌아온 것은 ICA 혈류가 회복되었음을 확인시켜줍니다. 견인기를 제거하고 6-0 꼰 실크를 사용하여 캐비티를 닫아 3개 또는 4개의 단속 봉합사를 만듭니다. 강아지를 마취에서 제거하고 집 케이지로 되돌리기 전에 이전과 같이 모니터링을 통해 회복하도록 합니다.

5일 동안 매일 새끼를 검사하십시오. 체중을 기록하고 절개 부위를 면밀히 검사하여 적절한 치유가 이루어지고 있는지 확인하십시오. P-38 동물에서 채취한 이 후방에서 전방까지의 50미크론 크레실 바이올렛 염색 관상 뇌 절편은 P-10에서 3시간 동안 TMCAO를 실시한 후 상당히 심각한 손상을 입었습니다.

화살표는 동측 낭종 형성과 피질 및 선조체 부피 감소를 나타냅니다. 왼쪽의 둥근 구멍은 반대쪽 반구 식별자를 나타냅니다. 이 절차를 시도하는 동안 이 절차는 개념적으로는 간단하지만 성공과 숙달에는 최적화와 연습에 몇 시간이 걸릴 수 있다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.

마스터하면 폐색은 10분 이내에 완료할 수 있으며 재관류는 5분 이내에 완료할 수 있습니다.