Name: 의 Cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련 클로스 트리 디움 디피 스트레인 R20291 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 학습하세요 세포페라존 마우스 모델을 활용한 Clostridium difficile 감염 연구 방법을. R20291 균주를 사용하여 임상 질병 진행, 세균 수량 분석, 독성 측정 및 조직병리학적 변화를 평가하는 실험 프로토콜을 익히세요.

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저자는 C. difficile R20291 포자에 대해 Wellcome Trust Sanger Institute의 Trevor Lawley와 이 원고에 사용된 Vero 세포에 대해 North Carolina State University College of Veterinary Medicine의 James S. Guy에게 감사를 표합니다. 동물 조직병리학은 트레이시 랄리(Traci Raley)와 아만다 브라운(Amanda Brown)의 특별한 도움을 받아 노스캐롤라이나 대학교 채플힐(University of North Carolina at Chapel Hill)의 LCCC 동물 조직병리학 핵심 시설(LCCC Animal Histopathology Core Facility)에서 수행되었습니다. LCCC Animal Histopathology Core는 UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center에 대한 NCI Center Core Support Grant(2P30CA016086-40)의 일부 지원을 받습니다. 또한 Vero 세포 독성 분석 프로토콜에 대한 유용한 토론을 해주신 Vincent Young, Anna Seekatz, Jhansi Leslie 및 Cassie Schumacher에게도 감사드립니다. JAW는 NIH가 T32OD011130한 Ruth L. Kirschstein National Research Service Award Research Training 보조금의 지원을 받습니다. CMT는 NIH의 NIGMS가 K01GM109236 대사체학 보조금의 경력 개발상(Career Development Award in metabolomics grant )에서 자금을 지원합니다.

<ol><li>Antibiotic Resistance Threats in the United States. , U.S.D.o.H.a.H. Services. Available from: 
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<li>Lessa, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+Infection+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile Infection in the United States.</a> New England Journal of Medicine. 372, 825-834 (2015).</li>
<li>Gerding, D. N., Lessa, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+Clostridium+difficile+infection+inside+and+outside+health+care+institutions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of Clostridium difficile infection inside and outside health care institutions.</a> Infect Dis Clin North Am. 29, 37-50 (2015).</li>
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<li>Clostridium difficile Toxin/Antitoxin Kit Cat No.T5000. , TECHLAB. Available from: 
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<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-induced+shifts+in+the+mouse+gut+microbiome+and+metabolome+increase+susceptibility+to+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-induced shifts in the mouse gut microbiome and metabolome increase susceptibility to Clostridium difficile infection.</a> Nat Commun. 5, 3114(2014).</li>
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<li>Leslie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+and+toxin+production+by+Clostridium+difficile+within+human+intestinal+organoids+result+in+disruption+of+epithelial+paracellular+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Persistence and toxin production by Clostridium difficile within human intestinal organoids result in disruption of epithelial paracellular barrier function.</a> Infect Immun. 83, 138-145 (2015).</li>
<li>Stabler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genome+and+phenotypic+analysis+of+Clostridium+difficile+027+strains+provides+insight+into+the+evolution+of+a+hypervirulent+bacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparative genome and phenotypic analysis of Clostridium difficile 027 strains provides insight into the evolution of a hypervirulent bacterium.</a> Genome Biol. 10, 102(2009).</li>
<li>Valiente, E., Dawson, L. F., Cairns, M. D., Stabler, R. A., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+new+PCR+ribotypes+from+the+hypervirulent+Clostridium+difficile+027+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emergence of new PCR ribotypes from the hypervirulent Clostridium difficile 027 lineage.</a> J Med Microbiol. 61, 49-56 (2012).</li>
</ol>

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이 프로토콜은 C. difficile R20291 포자로 도전된 항생제 치료 마우스의 체중 감소, 박테리아 집락화, 독소 세포 독성 및 위장관의 조직병리학적 변화를 포함한 임상 과정을 특성화합니다. 프로토콜에는 세부 사항에 대한 주의가 필수적인 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. C. difficile 포자 접종물의 정확한 계산이 중요합니다. 이 계산은 원래의 C. difficile 포자 스톡 열거를 기반으로 하며, 이 프로토콜을 시작하기 전에 여러 포자 열거에 걸쳐 일관되어야 합니다. 접종 계산이 잘못되면 마우스의 접종 용량이 부정확해집니다. 같은 맥락에서, 이러한 계산에 기초한 C. difficile 포자의 준비 및 희석은 주의해서 준비해야 합니다. 희석 오류가 있으면 부정확한 시작 포자 접종물이 발생합니다. 마지막으로, 항생제 치료를 받은 대조군 마우스( C. difficile 포자를 접종하지 않음)의 오염을 방지하기 위해 예방 조치를 취해야 합...

클로스 트리 디움 디피는 생명을 위협하는 설사 일이 발생 혐기성, 그람 양성, 포자 형성 간균이다. C. 디피 감염 (CDI)는 올해 1 ~ 4 당 의료 비용 이상의 $ 4.8 억 증가 인간의 이환율과 사망률 및 결과와 연결되어 있습니다. 2013 년 질병 통제 예방 센터 (CDC)는 공중 보건 1 긴급한 위협을 나타내는, 긴급 항생제 내성의 위험으로 C. 디피을 분류. 현재 항생제 반코마이신 치료 및 메트로니다졸은 CDI 5에 대한 치료의 표준으로 간주됩니다. 환자 2,5-7의 30 % - 불행하게도, 항생제 성공적인 치료 후 CDI의 재발은 20에서 발생하는 높은입니다. 따라서,이 장내 병원균에 대한 새로운 치료제의 발견이 필요하다. C. 디피 교류에서 인간의 질병에 근접 동물 모델에 대한 치료제를 평가하려면linically 관련 변형이 필요하다. 처음 코흐의 공리는 클린다마이신 처리 시리아 햄스터 모델 (8)을 사용하여 1977 년 C. 디피 위해 설립되었다. 이 모델은 아직 병인 9, 10에 C. 디피 독소의 영향을 조사하기 위해 오늘 사용된다. 그러나, CDI는 햄스터 모델에서 높은 사망률을 초래하고 CDI 10, 11와 인간에서 볼 수있는 만성 교활한 질병의 발현에 근접하지 않습니다. 연구 뮤린 플랫폼 접근성 시약 가용성에 따라, CDI의 마우스 모델에 적합하다. 2008 년 CDI의 강력한 마우스 모델은 클린다마이신 (12)의 복강 내 주사 한 다음 3 일간 항생제 물을 마시는 칵테일 (카나마이신, 겐타 마이신, 콜리 스틴, 메트로니다졸, 및 반코마이신)와 쥐를 처리하여 설립되었다. CDI 심각한 대장염에 감염이 렌더링 된 마우스. 따라투여 접종 용량에 보내고, 임상 증상 및 치사율의 범위는이 모델을 사용하여 관찰 할 수있다. 이 시간 이후, 다양한 항생제 요법은 C. 디피는 위장관 식민지 수있는 지점에 식민지 저항을 감소 쥐의 장내 미생물을 변경하는 조사되었다 (베스트 등 검토.을 Lawley &amp; 영) 13, 14. 최근 5 또는 10 일 동안 마시는 물에 주어진 광범위한 스펙트럼 세 팔로 스포린, cefoperazone는 재현성 CDI (15)에 민감한 쥐를 렌더링합니다. 3 세대 세 팔로 스포린의 투여는 인간에서 CDI의 위험 증가와 관련되어 있기 때문에, cefoperazone 모델의 사용은 더 정확하게 질병 16 자연 발생 반영한다. Cefoperazone 처리 C. 디피에 민감한 마우스는 C. 디피 포자 및 임상에 이르기까지 균주의 다양한 식물 세포 모두에 도전 한관련성 및 독성 17. 전염성 형태로 C. 디피 식물 세포를 이용하여 기존 연구의 일부에도 불구하고, C. 디피 포자 전송 (18)의 주요 모드 간주됩니다. 지난 10 년, C. 디피 R20291하는 NAP1 / BI / 027 균주는, CDI (19, 20)의 전염병을 일으키는 원인이 등장했다. 우리는 cefoperazone 처리 된 마우스는 임상 적으로 관련 및 유전자 다루기 쉬운 C. 디피 변형, R20291에 도전했을 때 질병의 임상 경과를 결정하기 위해 노력했다. 이 프로토콜은 체중 감소, 세균 식민지, 독소의 세포 독성 및 C. 디피 R20291 포자와 도전 마우스의 위장관에서의 조직 병리학 적 변화를 포함하여 임상 경과를 자세히 설명합니다. 전반적으로,이 마우스 모델은 CDI는 인간의 질병을 근사위한 유용한 실험 플랫폼으로 증명한다. 이 특징으로, 마우스 모델은 이에 영향을 평가하기 위해 사용될 수있다임상 질환의 경감에와 C. 디피에 대한 식민지 저항의 복원에 대한 새로운 치료제의.

<table><tbody><tr><td>#62 Perisept 포자 소독 클리너&nbsp;</td><td>SSS Navigator</td><td>48027</td><td>이 제품은 제조사가 권장하는 대로 희석이 필요할 것입니다</td></tr><tr><td>0.22 &mu; m 필터</td><td>Fisherbrand</td><td>09-720-3</td><td>Vero Cell Assay에서 테스트한 개별 샘플용 필터 플레이트의 대안</td></tr><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>37°C에서 수조에서 가열해야 합니다. C 사용 전</td></tr><tr><td>0.4% Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>1% 페니시일린/스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>10% 열 비활성화 FBS</td><td>Gibco</td><td>16140-071</td><td>37°C에서 수조에서 가열해야 합니다. C 사용 전</td></tr><tr><td>1ml 플라스틱 주사기&nbsp;</td><td>BD 의료 용품</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>2 ml 마이크로 원심 분리기 나사 캡</td><td>Corning</td><td>430917</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 세포 배양 플랫 바닥 플레이트</td><td>Costar Corning</td><td>CL3595</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 필터 플레이트</td><td>Millipore</td><td>MSGVS2210</td><td></td></tr><tr><td>접착 씰</td><td>ThermoScientific</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>Bacto Proteose Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211684</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>Cefoperazone</td><td>MP Bioworks</td><td>199695</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitine</td><td>Sigma</td><td>C47856</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Antitoxin Kit</td><td>Tech Labs</td><td>T5000</td><td>Vero 세포 분석</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Toxin A</td><td>List Biological Labs</td><td>152C</td><td>Vero 세포 분석에 대한 양성 대조군</td></tr><tr><td>D-cycloserine</td><td>Sigma</td><td>C6880</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr> <tr><td>증류수</td><td>Gibco</td><td>15230</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 1x Media</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>37°C의 수조에서 가열해야 합니다. C 사용 전</td></tr><tr><td>과당</td><td>Fisher</td><td>L95500</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>혈구계</td><td>Bright-Line, Sigma</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>P285-500</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>MgSO4 (무수)</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>밀렉스-GS 0.22 & m 필터</td><td>Millex-GS</td><td>SLGS033SS</td><td>TCCFA 플레이트용 필터&nbsp;</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S-0876</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S640-3</td><td>TCCFA 플레이트의 일부 (아래 참조)</td></tr><tr><td>Number 10 일회용 메스 블레이드</td><td>Miltex, Inc</td><td>4-410</td><td></td></tr><tr><td>PCR 플레이트</td><td>Fisherbrand</td><td>14230244</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 페트리 접시</td><td>Kord-Valmark 브랜드</td><td>2900</td><td></td></tr><tr><td>멸균 플라스틱 L자형 세포 살포기</td><td>Fisherbrand</td><td>14-665-230</td><td></td></tr><tr><td>주사기 스테퍼</td><td>Dymax Corporation</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>타우로콜레이트</td><td>시그마</td><td>T4009</td><td>TCCFA 플레이트의 일부(아래 참조)</td></tr><tr><td>초순수 증류수</td><td>Invitrogen</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td>생쥐는 생후 5-8주령이어야 합니다</td></tr>.<tr><td>올림푸스 BX43F 광학 현미경</td><td>올림푸스 생명 과학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DP27 카메라</td><td>올림푸스 생명 과학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cellSens Dimension 소프트웨어&nbsp;</td><td>Olympus 생명과학</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

의 cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련<em&gt; 클로스 트리 디움 디피</em&gt; 스트레인 r20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

클로스트리듐 디피실은 혐기성, 그람 양성, 포자 형성 장 병원체로 이환율 및 사망률 증가와 관련이 있어 결과적으로 공중 보건에 긴급한 위협이 되고 있습니다. 항생제의 성공적인 치료 후 C. 디피실 감염(CDI)의 재발률이 높으며 환자의 20-30%에서 발생하므로 이 병원체에 대한 새로운 치료법의 발견이 필요합니다. 현재의 CDI 동물 모델은 높은 폐사율을 초래하므로 CDI를 가진 인간에서 볼 수 있는 만성적이고 잠복적인 질병 징후와 유사하지 않습니다. C. difficile에 대한 치료제를 평가하기 위해서는 임상적으로 관련된 균주를 활용하여 인간 질병에 근접한 마우스 모델이 필요합니다. 이 프로토콜은 임상적으로 관련성이 있고 유전적으로 다루기 쉬운 균주 R20291을 사용하여 CDI의 cefoperazone 마우스 모델을 간략하게 설명합니다. 마우스 모델에서 CDI 전반에 걸친 임상 질병 모니터링, C. difficile 박테리아 계수, 독소 세포 독성 및 조직병리학적 변화에 대한 기술이 프로토콜에 자세히 설명되어 있습니다. CDI의 다른 마우스 모델과 비교했을 때, 이 모델은 투여된 용량에서 균일하게 치명적이지 않기 때문에 인간 질병에 따른 장기간의 감염 임상 경과를 관찰할 수 있습니다. 따라서 CDI의 이 cefoperazone 마우스 모델은 임상 질병의 개선 및 C. difficile에 대한 집락화 저항성 회복에 대한 새로운 치료법의 효과를 평가하기 위한 귀중한 실험 플랫폼임을 입증합니다.

대표 연구 기간 동안, 5 주령 C57BL / 6 WT 마우스는 5 일 자신의 식수 (0.5 ㎎ / ㎖)에 cefoperazone으로 전처리 및 2 박 정기적으로 마시는 물로 씻어시켰다. 마우스는 하루 0 (그림 1A)에 구강 투여를 통해 C. 디피 R20291 10 5 포자에 도전했다. 마우스는 14 일 동안 CDI의 체중 감소와 임상 증상 (혼수, 식욕 부진, 설사, 및 구부리고 자세)에 대해 모니터링 하였다. C. 디피 R20291 포자와 C57BL / 6 WT 마우스의 도전은 24 시간과 48 시간 포스트의 반칙으로 (그림 1B) 내에서 상당한 체중 감소에서 설사 발생했습니다. 이 실험에서 관찰되지 않았지만, C. 디피 R20291의 높은 복용량 도전 마우스는 심각하게 병이 될 수 있습니다 또는 48으로 20 % 이상 체중 감량이 - ...

이 프로토콜은 임상 적으로 관련 및 유전자 다루기 쉬운 변형, R20291를 사용 클로스 트리 디움 디피 감염 (CDI)의 cefoperazone 마우스 모델을 설명합니다. 임상 질병 모니터링, C. 디피 세균 열거, 독소의 세포 독성 및 마우스 모델에서 CDI에 걸쳐 조직 병리학 적 변화에 대한 강조는 프로토콜에 자세히 설명되어 있습니다.

의 Cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련<em&gt; 클로스 트리 디움 디피</em&gt; 스트레인 R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

본 프로토콜의 전체적인 목표는 임상 질환 모니터링, 세균 수 측정, 독소 세포독성 및 감염 후 조직병리학적 변화에 중점을 두어, cefoperazone을 이용한 Clostridium difficile 감염 마우스 모델을 구현하기 위한 단계별 가이드를 제공하는 것입니다. 이 상세 프로토콜은 연구자가 Clostridium difficile 감염 마우스 모델을 정확하게 수행할 수 있도록 도와주며, 이는 해당 박테리아의 병인 연구 및 새로운 치료법을 평가하는 데 필수적입니다. 이 마우스 모델의 주요 장점은 5일 동안 한 가지 항생제에 노출시키면 마우스가 C.difficile 군락 형성에 취약해지며, 인간의 질병과 유사하게 감염의 임상 경과가 장기간 지속된다는 점입니다.먼저, 사용할 C.difficile 보존 균주를 꺼내어 볼텍싱합니다. 층류 정화대(laminar flow hood) 내에서, 스크류 캡 튜브에 담긴 멸균수에 보존 균주를 희석하여 25 µL당 10⁵ spores 농도가 되도록 조절합니다. 해당 혼합물에 '포자 접종액(spore inoculum)'이라고 표시한 후, 튜브를 65 °C 항온수조에 20분 동안 둡니다.다음으로, 층류 정화대(laminar flow hood) 내에서 가열된 포자 접종액 50 µL를 멸균 마이크로원심분리 튜브에 피펫으로 옮긴 후, 추후 사용 시까지 혐기성 챔버로 이동시킵니다. 남은 포자 접종액을 멸균 벌브 팁 위장 존대 바늘(bulb tipped gastric gavage needle)이 장착된 1 mL 주사기에 충전합니다. 층류 정화대 내에서 실험 쥐를 준비하고, 동물의 목과 등 쪽의 느슨한 피부를 부드럽게 잡아 머리를 고정합니다.검지 손가락을 사용하여 동물이 소리를 내거나 고통스러운 징후를 보이지 않도록 주의하며 동물의 머리를 추가로 고정하고 식도를 늘려줍니다. 마우스를 수직으로 똑바로 세운 상태에서 가바지 바늘을 입 옆쪽으로 부드럽게 삽입합니다. 가바지 바늘을 입천장을 따라 유도하여 식도 내부로 천천히 진입시킵니다.바늘이 식도의 약 절반 정도까지 진입하면, 포자 접종액 25 µL를 주입한 후 바늘을 천천히 뽑습니다. 동물을 케이지로 돌려보내고, 의도치 않게 기관으로 투여되었음을 나타낼 수 있는 기침이나 호흡 곤란 징후가 있는지 관찰합니다. 다음으로, 이전에 혐기성 챔버에 보관해 두었던 포자 접종액 분취액과 남은 가바지(gavage) 포자 접종액을 사용하여 180 µL의 1x PBS에서 10배 연속 희석을 수행합니다.이 희석 과정을 4~5회 반복합니다. 무균 조작법을 사용하여 각 단계별 희석액 100 µL를 개별 TCCFA 플레이트에 옮깁니다. 매번 새로운 멸균 L자형 스프레더를 사용하여 각 플레이트에 희석된 접종액을 균일하게 도포합니다.플레이트를 37°C의 혐기성 조건에서 24시간 동안 배양합니다. 마지막으로, 각 희석 플레이트에서 C.difficile 콜로니 수를 측정하고 콜로니 형성 단위(CFU)를 계산하여 마우스에 투여된 감염 용량을 구합니다. 평가를 위해 마우스로부터 분변 샘플을 수집하려면, 먼저 마우스가 스트레스를 받지 않도록 주의하며 목과 등의 느슨한 피부를 가볍지만 단단하게 잡아 고정합니다.새끼손가락을 사용하여 동물의 꼬리를 부드럽게 들어 올려 항문을 노출시킵니다. 무게를 알고 있는 멸균 마이크로원심분리 튜브를 동물의 항문 바로 아래에 대고, 튜브가 마우스에 직접 닿지 않도록 주의합니다. 동물이 배변하면 튜브에 분변 펠릿을 수집합니다.필요한 모든 샘플을 수집할 때까지 튜브를 실온에서 보관하십시오. 분석 저울을 사용하여 분변이 담긴 튜브의 무게를 측정하고, 소수점 넷째 자리까지 질량을 기록하십시오. 튜브의 무게를 빼서 분변 펠릿의 무게를 계산하십시오.다음으로, 내용물을 1:10으로 희석하여 1x PBS에 재현탁합니다. 파이펫 팁을 사용하여 분변 물질을 용액 속으로 부드럽게 분쇄합니다. 샘플을 실온에서 30분 동안 배양하여 내용물이 가라앉도록 합니다.용액을 혐기성 상태로 유지하면서, 각 시료에 대해 1x PBS로 단계별 희석을 수행합니다. 각 단계별 희석액 100 µL를 TCCFA 플레이트에 옮깁니다. 멸균된 L자형 스프레더를 사용하여 배지에 고르게 도말합니다.플레이트를 혐기성 조건의 37 °C에서 24시간 동안 배양합니다. 마지막으로, C.difficile 콜로니 수를 측정하고 분변 함량 g당 콜로니 형성 단위(colony forming unit)를 계산합니다. 이 그림은 C.difficile R20291 감염 후 날짜별 마우스의 체중 변화를 나타냅니다.0일 차에 기저 체중을 100으로 설정하였다. 이후 14일 동안 매일 마우스의 평균 체중을 측정하였다. 챌린지 후 2일에서 7일 사이에 챌린지군 마우스에서 유의미한 체중 감소가 관찰되었다.이 시점 이후로 마우스들은 회복되어 체중이 다시 증가하는 것으로 보였습니다. 여기서는 감염 후 수일 동안 분변 내의 C.difficile 부하량이 표시되어 있습니다. 감염 후 24시간 시점에서 모든 마우스의 분변 1g당 10⁷ CFU가 군집을 형성하였습니다.이 균 부하는 7일째부터 감소했으나, C.difficile은 여전히 존재했습니다. 감염 경과에 따른 마우스의 조직병리학적 검사 결과, 맹장에서 가장 유의미한 병리학적 변화가 나타났습니다. 전체 맹장 조직학적 점수는 challenge 후 0일째와 2일 및 4일째 사이에 유의미한 차이를 보였습니다.일반적으로 이 마우스 모델을 처음 접하는 연구자들은 마우스에 감염을 유도하기 위해 사용되는 포자 접종액의 계산 및 조제와 분변 내 C.difficile 세균 부하량 계산에 어려움을 겪을 수 있습니다. 이 프로토콜을 수행할 때, 마우스에 투여하는 C.difficile 포자의 용량이나 균주를 변경하면 모델의 결과가 달라질 수 있다는 점을 유념하는 것이 중요합니다.

cefoperazone-treated-mouse-model-clinically-relevant-clostridium

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: 윈스턴, J. A. 외 임상적으로 중요한 Clostridium difficile 균주 R20291의 Cefoperazone 처리 마우스 모델.  J. Vis. 경험 (2016)이 영상은 항생제 사전 처리된 쥐에게 클로스트리듐 디피실 포자를 접종하여 병원 및 숙주 반응 연구를 위한 쥐 감염 모델을 구축하는 절차를 시연합니다.

클로스트리듐 디피실 감염의 마우스 모델 구축

출처: 윈스턴, J. A. 외 임상적으로 중요한 Clostridium difficile 균주 R20291의 Cefoperazone 처리 마우스 모델. J. Vis. 경험 (2016)이 영상은 감염된 마우스 모델의 대변 샘플에서 선택적 배양 기법을 사용하여 클 로스트리듐 디피실 을 정량화하는 과정을 보여줍니다. 샘플 수집, 혐기성 처리, 연속 희석, 군체 개체 수 절차를 개략적으로 제시하여 박테리아 정착과 숙주-병원체 상호작용을 평가합니다.

감염된 마우스 모델의 대변 샘플에서 클 로스트리듐 디피실 정량화

Citrobacter rodentium 감염이 장의 세균 감염을 공부뿐만 아니라 마우스의 면역 반응 및 대장염를 개최 할 수있는 중요한 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 장벽 무결성, 병원체 부하와 손쥐 전염성 대장염에 대한 병원체 및 호스트 공헌의 철저한 특성을 허용하는 조직 학적 손상의 측정을 설명합니다.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; 마우스 모델 : 감염성 대장염에 대한 공부 병원체 및 호스트 기부

멀티 양상 이미징 작은 동물 모델에서 세균성 식민지 공부를위한 유용한 방법입니다. 이 프로토콜은 생물 발광과 생쥐의 감염을...

의 4D 좌석 Multimodality 이미징<em&gt; Citrobacter rodentium</em마우스에서&gt; 감염

요로 감염(UTI)을 모델링하는 능력은 박테리아 발병 기전을 이해하고 새로운 치료법의 개발을 촉발할 수 있도록 하는 데 매우 중요합니다. 이 작업의 목표는 인간에서 관찰된 결과를 요약하고 예측하는 실험적 요로감염 및 카테터 관련 요로감염의 마우스 모델을 시연하는 것입니다.

마우스 모델의 설립 및 요로 감염 및 CAUTI의 특성

항생제 효능은 가장 일반적으로 사멸 역학 연구를 수행하고 집락 형성 단위(CFU)를 측정하여 결정됩니다. 주사전자현미경(SEM)을 이러한 표준 방법과 통합함으로써 다양한 항생제 간의 치료의 약리학적 효과를 구별할 수 있습니다.

형태 변화를 규명하기위한 프로토콜<em&gt; 클로스 트리 디움 디피 실</em&gt; 항생제 치료에 대한 반응

여기에 제시된 것은 미세 주입 및 비침습적 미세가브지에 의한 형광성 표지 혐기성 C. difficile로 얼룩말 유충을 감염하는 안전하고 효과적인 방법입니다.

클로스트리디오이드 디피실을 위한 애벌레 제브라피쉬 감염 모델 개발

재발성 UPEC UTI를 유도하기 위해 잠복성 세포내 방광 저장소와 G. 질리스에 대한 후속 방광 노출을 확립하는 비뇨병원성 대장균(UPEC) 경요도 접종의 마우스 모델이 입증된다. 또한 박테리아의 열거, 소변 세포학 및 주사 전자 현미경을위한 현장 방광 고정 및 처리가 입증되었습니다.

재발 성 에스케리치아 콜라 이 요로 감염 Gardnerella 질 방광 노출에 의해 유발 마우스에서

여기에서는 대장염에 대한 Bacillus cereus 의 긍정적인 효과를 조절하는 장내 미생물총(microbiota)의 역할을 조사하기 위해 항생제 유도 pseudo-germ-free dextran sulfate 나트륨 유발 대장염 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

장내 미생물군 조절을 통한 대장염에 대한 Bacillus cereus 투여의 완화 효과 조사

조산(37주 분만)은 최적이 아닌 예방 및 치료 옵션이 있는 긴급한 글로벌 건강 문제&lt; 있습니다. 우리는 상행 질 세균 감염으로 인한 조산의 마우스 모델을 제시하고 그 결과 신생아 이환율과 사망률을 분석하는 방법을 간략하게 설명합니다.

마우스의 상승하는 질 감염, 조산 및 신생아 이환율 모델링

이 프로토콜은 비염증 조건에서 pks+ 대장 균 쥐를 정착하는 데 필요한 절차와, 대변 내 pks+ 대장균 확장의 비침습적 확립 및 평가 방법을 설명합니다.

비염증 조건에서 마우스 pks+ 대장균에 의한 정착

학습하세요 세포페라존 마우스 모델을 활용한 Clostridium difficile 감염 연구 방법을. R20291 균주를 사용하여 임상 질병 진행, 세균 수량 분석, 독성 측정 및 조직병리학적 변화를 평가하는 실험 프로토콜을 익히세요.

의 Cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련

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