재조합 고세균 프로 테아과 비 변성 페이지로 프로 테아 조립 검사 : 케이스를 결합 접근에 대한

이 프로토콜은 서브 유닛의 동시 발현 재조합 프로 테아 좀 어셈블리의보다 철저한 검사를 위해 혼합 postlysis 서브 유닛을 모두 사용합니다.

이 실험의 전반적인 목표는 재조합 소단위체와 비변성 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE)을 사용하여 프로테아솜과 같은 다중 단백질 복합체의 조립을 분석하는 것입니다. 이 방법은 프로테아솜 분야의 주요 질문, 예를 들어 이 단백질 복합체의 조립 경로를 따라 어떤 중간 종이 발견되는지와 같은 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 두 가지 병렬 접근 방식으로 어셈블리를 신속하게 스크리닝할 수 있어 온/오프 경로 중간체를 검출할 수 있다는 것입니다. 이 절차는 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 박테리아 발현으로 시작합니다. 박테리아 용해를 수행하려면 원하는 프로테아솜 소단위 조합을 동시 발현하는 유도 세포 팔레트를 얼음 위에서 5분 동안 해동합니다. 해동되면 600 마이크로 리터의 Lysis Buffer에 팔레트를 다시 매달아 30에서 현탁액을 배양합니다.