A Protocol for Using F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

Paul T. Arsenovic; Kranthidhar Bathula; Daniel E. Conway

doi:10.3791/54902

포스터 공명 에너지 전달 (FRET) -force의 바이오 센서를 사용하는 프로토콜은 핵 LINC 단지에서 기계의...

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A Protocol for Using Förster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

포스터 공명 에너지 전달 (FRET) -force의 바이오 센서를 사용하는 프로토콜은 핵 LINC 단지에서 기계의 힘을 측정하는

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09:43 min

April 11, 2017

DOI: 10.3791/54902-v

Paul T. Arsenovic¹, Kranthidhar Bathula¹, Daniel E. Conway¹

¹Department of Biomedical Engineering,Virginia Commonwealth University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

최근 많은 FRET 기반 힘 바이오센서가 개발되어 세포 내 힘의 단백질 특이적 분해능을 가능하게 합니다. 이 프로토콜에서는 LINC(nucleoskeleton-cytoskeleton) 복합 단백질 Nesprin-2G의 링커용으로 설계된 이러한 센서 중 하나를 사용하여 핵 LINC 복합체에 대한 액토마이신 힘을 측정하는 방법을 보여줍니다.

이 절차의 전반적인 목표는 LINC 복합 단백질인 nesprin-2G용으로 설계된 바이오센서를 통해 살아있는 세포에서 FRET 현미경을 통해 핵골격 세포골격 또는 LINC 복합체의 링커에 가해지는 힘을 측정하는 것입니다. 이 방법은 살아있는 세포의 핵에 있는 단백질에 가해지는 힘과 이러한 힘이 변형 조건에서 어떻게 변하는지와 같은 메카노트랜스듀션(mechanotransduction) 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 단백질과 살아있는 세포에 가해지는 매우 작은 수준의 힘을 측정할 수 있다는 것입니다.

일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 이미지를 캡처하는 데 어려움을 겪을 것입니다. 모든 실험 그룹 간에 양호한 신호를 수신하기 위해 현미경 레이저 출력과 게인을 최적화하는 것은 어렵습니다. 먼저 온도 및 CO2 조절이 가능한 표준 세포 배양 인큐베이터의 6웰 세포 배양 접시에서 NIH 3T3 파이버 블라스트 셀을 70%에서 90% 사이의 합류점으로 성장시킵니다.

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