Name: 사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법 노랑 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster를 이용한 보상 상태 변화 측정 방법입니다. 자발적 에탄올 섭취를 통해 동기 부여와 행동 변화를 연구하는 간단한 신경과학 실험 기법을 확인하세요.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 오래 지속 토론 및 기술 자문을 위해 미국 Heberlein 및 A. Devineni 감사합니다. 우리는 또한 방법을 보여주는으로 도움을, A. Benzur, L. Kazaz 및 O. 샬롬을 Shohat - 오빌 실험실 구성원 감사합니다. 특별 감사는 실험실에서 비행 시스템을 구축하기위한 엘리에셀 Costi로 이동합니다. 이 작품은 이스라엘 과학 재단 (14분의 384)와 마리 퀴리 경력 통합 보조금 (CIG 631127)에 의해 지원되었다.

참고 : 실험 설계의 일반 개요 : 실험 디자인은 남성 파리가 4 (d)의 과정을 통해 3 연속 훈련에 보람과 nonrewarding 경험에 노출되는 구애 억제 7-9에 대한 적응 프로토콜을 포함한다. 4 D - 경험 단계의 끝에서, 파리 3 두 선택 자발적 에탄올 소비량 분석에서 시험된다. 다른 실험 (표 1)의 시작 이전에 적시에 이루어져야하는 동안 프로토콜은 본원에서 하나 이상의 실험에 사용되는 사전에 수행 할 수있는 몇 몇 가지 준비 단계를 포함한다. 1. 준비 단계 <ol><li> 모세관 공급 시스템 준비 <ol><li> 27 G 바늘을 가열하고 유리 병 (그림 1)를 따라 작은 구멍을 천공하는 데 사용합니다. </li><li> 면도날을 사용하여 반 (가로)의 유리 병 플러그를 잘라. squar를 마크를 생성하는 플러그의 표면에 네 개의 포인트E 형상 모세관 홀더에 위치한다. 플러그 (그림 1b)를 통해 4 구멍을 만들기 위해 18 G 바늘을 사용합니다. </li><li> 그들은 단단히 어댑터 역할을 5 μL 유리 모세관을 보유 할 수 있도록 micropipets를 잘라 면도날을 사용합니다. </li><li> 제조 된 플러그에 4 모세관 어댑터를 삽입합니다. </li><li> 플러그에 2 에탄올 - 두 nonethanol 함유 모세 혈관의 위치를 ​​표시합니다. 주 : 모든 병 일관성 모세 혈관의 2 종류의 위치를 ​​유지하는 것이 좋습니다. 큰 구멍은 튜브에서 파리의 탈출을 허용하는, 구멍의 크기에 주목. 또한,이 플러그를 절단하는 것은 파리에 얽힌 얻을 수있는 몇 가지 작은 느슨한 섬유를 생성로서, 유리 병에 삽입 할 때 아래로 향하게 옆으로 (일반적으로 절단 측 맞은 편) 플러그의 부드러운면을 사용하는 것이 좋습니다 . </li><li> 튜브 및 어댑터 다수 모세관 공급 시스템에 사용될 준비 (카페)단계 2.3에서 설명한 실험. </li></ol></li><li> 작은 유리 식품 유리 병을 준비 <ol><li> 하루 파리 (단계 1.4)를 수집하기 전에, microcentrifuge 관 랙에 200 유리 병을 준비. 용융은 (는 옥수수 가루 당밀 레시피에 따라 재료의 표 참조) 음식을 비행 전자 레인지를 사용. 유리 병에 플라이 음식이 용액을 붓고 (유리 병 벽에 음식을 얼룩하지 않으려 고). 식품 경화하자, 플라스틱 포장으로 유리 병을 커버한다. 주 : 식품을 함유하는 유리 바이알을 몇 주 동안 4 ℃에서 유지 될 수있다. </li><li> 파리 컬렉션의 날, 냉장고에서 유리 병을 가지고 그들이 파리를 집에 사용하기 전에 RT에 도달 할 수 있습니다. 참고 : 식품 유리 병이 몇 주 된 경우, 파리는 음식과 유리 사이의 균열에 갇혀 될 수있는 음식은, 그대로 및 유리 병에서 분리하지 있는지 확인하십시오. </li></ol></li><li> 모세관 피더 분석 용 식품 메이커 스톡 용액 <ol><li> 사전재고 음식 용액 (5 % 수 크로스, 5 % 효모 추출물) 깎다, 효모 추출물 5.88 g, 증류수 100ml에 수크로오스 5.88 g을 용해. 주 : 원액 오염에 매우 경향이있다. 따라서,이를 오토 클레이브 추천 (121 ° C, 30 분, 및 건조 사이클없이) 분취 작업 850 μL로 나누어지는 것이 더 사용할 때까지 4 ℃에서 보관한다. 원액의 성분의 농도는 5.88 %이고, 단지 단계 230에서 그것의 사용 전에 15 %의 에탄올 또는 물 (이미 만들어진 식품 용액 850 μL에 150 μL)을 첨가 한 후 5 %의 최종 농도에 도달 할 것이다. </li></ol></li><li> 실험 파리를 수집 <ol><li> 공동 2 패드를 사용하여 200 순진한 남성 파리를 수집합니다. 주 : 실험적인 질문에 대한 관련 모든 실험실 균주를 사용합니다. 250 파리는 쉽게 우화의 선택 단계에서 파리의 다섯 병에서 수집 할 수 있습니다. 파리를 수집 할 때, 내지 컬럼에주의를 지불최근 eclosed있다 [선택] 파리 (처녀 보이는 파리 : 자신의 복부에 태변 자리를 함께 밝은 파리). 실험에 사용하기 전에 4 D 이전 - 파리 실험 3에 음식물 숙성을 포함하는 작은 유리 바이알에 단독으로 유지되어야한다. </li><li> 유리 병을 닫습니다 부드러운 플러그를 사용합니다. 참고 : 경험의 단계에와 유리 병 밖으로 여성을 삽입 입 포부를 사용할 때 같은 부드러운 플러그 트레이닝 단계에 매우 유용 할 것이다. </li></ol></li><li> 트레이너 파리를 수집 참고 : 모든 수집 파리 25 ° C 및 70 % 상대 습도 (RH)에서 12 시간 / 12 시간 빛 / 어둠 인큐베이터에 보관해야합니다. 12 시간 / 12 시간의 광 / 암주기 편리 시작 시간에 변경 될 수있다. <ol><li> 버진 여성 트레이너 파리 <ol><li> 500 처녀 여성 트레이너가 WT의 주식 또는 처녀 받아 여성으로 사용하기 위해 virginator의 재고에서 날아 수집합니다. 일반 크기의 식품 유리 병 당 25의 그룹에서 여성의 파리를 유지하고, 모든실험에 사용하기 전에 4 D 세 - 3 세에게 오우. </li></ol></li><li> 성관계 여성 트레이너 파리 <ol><li> 훈련 단계 (단계 1.6.1) 전에 짝짓기를 받아야하는 WT의 재고 또는 virginator의 재고 (300) 처녀 여성 파리를 수집합니다. 참고 : 여성 파리는 일반 크기의 식품 유리 병 당 10 여성 그룹에 보관하고 3 세 있습니다 - 실험에 사용하기 전에 4 D 오래. </li></ol></li><li> 남성 파리 메이트 여성 트레이너 파리를 생성하는 데 사용 <ol><li> (150) 남성 파리 (반드시 처녀)를 수집합니다. 주 : 파리 3으로 일반 크기의 식품 유리 병 및 세 당 15 남성의 그룹에 보관 - 처녀 여자와 결합되기 전에 4 D 오래하면 결합 트레이너 여성을 만들 날아갑니다. </li></ol></li></ol></li><li> 성관계 여성 트레이너 파리를 생성 <ol><li> (15) 남성이 여성-접점에 한 남성 함유 유리 병으로 젖혀 날아와 메이트 여성을 생성하려면 트레이너로 사용되는 파리, 10 처녀 여성의 쌍 그룹은 파리(2.1 단계) 10 훈련 단계 전에 18 시간 - 유리 병 (16) ining. 참고 :이 일반적으로 훈련 전에 저녁을 배치해야한다. 1.5 : 남자 사이 1 비율은 모든 여성이 성관계 될 것이라고 확신 여성 파리 (으)로 운항하는 항공사. </li><li> 실험하는 날에, 입 흡입기를 사용하여 바이알로부터 수컷 흡입하여 수컷에서 암컷 짝을 분리한다. 각 훈련 일의 시작 전에이 권리를 수행합니다. </li></ol></li></ol> 2. 실험 단계 <ol><li> 경험의 위상을 설정 <ol><li> 인큐베이터에서의 광 위상의 시작에 가능한 한 가까이 실험을 시작한다. 동작 챔버 (처녀와 성관계를 모두) 트레이너 여성을 놓습니다. 참고 :이 동작 챔버의 실험, 또는 조용하고 25 ° C, 60로 설정되어있는 한적한 환경 수행하는 것이 좋습니다 - 65 % RH합니다. 50 % 이상의 습도를 유지하는 것은 구애와 짝짓기 행동하기 때문에 매우 중요하다S가 습기에 민감한 것으로 알려져있다 페로몬 검출에 의존한다. </li></ol></li><li> 보람 nonrewarding 경험에 남성 파리를 노출 <ol><li> 랙의 가장자리를 따라 튜브를 배치, 마이크로 원심 랙에 단일 남성 파리를 포함하는 유리 튜브를 정렬합니다. 참고 :이 배열은 실험자 쉽게 랙 밖으로 튜브를 복용하지 않고 교미를 받아야 파리의 쌍을 관찰 할 수 있습니다. </li><li> 보람 nonrewarding 짝짓기 경험을받은 남성에 대한 별도의 랙 (즉, 거부 결합)에 파리 (단계 2.2.1에 설명 된대로) 단일 남성을 포함하는 100 유리 튜브의 두 그룹을 준비합니다. </li><li> 기음 트레이너 여성과 남성 파리를 포함하는 각 유리 병에 추가합니다. 1 시간 동안 타이머를 설정합니다. 거부 된 그룹을 시작으로, 각 유리 병에 어울리게 여성을 추가합니다. 그런 다음, 결합 할 수있는 남자로 이동하고 각 바이알에 처녀 여성을 추가합니다. </li><li> 밀접하게 결합 만남보기처녀 암컷과 상호 작용하는 남성이 첫 번째 시간 내에서 이전에 성관계 여성과 상호 작용 수컷이 짝짓기를하지 않는 것이 성공적으로 짝짓기되었는지 확인합니다. 1 시간에 걸쳐 거부 코호트 모니터링 15 분간 초 타이머를 설정하고, 남성에게 15 분마다를 시청할. </li><li> 첫 번째 훈련의 말에 상대를 종료하지 않은 성관계 일대에서 거부 짝짓기를 관리 코호트과 남성의 남성 방전. </li><li> 일반 즉석 식품 바이알에 이전에 정합 여성 트레이너를 흡입하여 제 1 트레이닝 세션을 종료하고, 다음의 컨디셔닝 세션을 유지한다. 부드럽게 결합 남성 그룹에서 여성을 흡입하여이 단계를 수행하십시오. </li><li> 파리 1 시간 동안 휴식을 보자. </li><li> 두 번 2.2.7 - 반복 2.2.3 단계를 반복합니다. </li><li> 단계 2.2.3에서 훈련을 반복 - 2.2.8 세 이상의 D에 대한 매일. </li></ol></li><li> 녹음 소비 (CAFE) <ol><li> 마지막 - 컨디셔너의 끝에g 세션 (네째 날), 모세관 공급 튜브에 하나의 남성과 그룹을 대기음. 파리를 삽입하는 동안 모세관 피더 유리 병을 커버하는 부드러운 플러그를 사용하여 모든 파리를 삽입 한 후 기성 모세관 공급 플러그로 신속하게 교체합니다. 그룹 6 - 조건에 따라 더 이상 8 튜브를 생성하지 않는 유리 병에 실험 그룹 각각 8 파리. </li><li> 부드럽게 플러그의 위쪽에 물 5 mL를 추가하여 플러그 젖은. 물을 첨가하면 유리 병에 유출을 방지하는 동안주의해야합니다. 각 유리 병에 물을 같은 양을 추가합니다. 주 :이 단계는 모세관으로부터 증발을 감소하기 위해 수행된다. 따라서, 실험의 나머지 동안 매일 반복된다. 상대 습도에 따라, 다음과 같은 일이 플러그에 추가되도록 적은 양의 물을 필요로 할 수있다. </li><li> 15 %의 최종 농도를 생성 할 스톡 음식 분취 물에 에탄올을 첨가하여 두 가지 별개의 음식 용액을 준비한다. </li><li> capill을 작성하려면두 음식 솔루션 양자리는, 액체 식품 실험실 필름 스트립에 상품 5 μL를 만들고이 5 μL 마크에 도달 할 때까지 용액이 모세관을 채울 수 있습니다. 5 μL 블랙 마크 라인에 가까운 모세 혈관의 명확한 끝을 사용하십시오. 주 - 함께 8 모세관 어댑터 및 모세 혈관을 잡고 삽입으로 사용할 한번에 여러 개의 모세관을 입력하고, 그것을 6 접속할 수있다. </li><li> 검은 색 마크에 정확히 음식 솔루션을 배치 파라핀 스트립에 부드럽게 모세 혈관을 누릅니다. 광유의 작은 방울로 각 모세관의 끝을 담가 모세관 인감. 이 단계는 음식 용액 전위 증발을 최소화한다. </li><li> 모세 혈관의 노출 된 측면이 거의 유리 병 (플러그 표면에서 1mm 이하)의 내부에서 들여다 때까지 플러그의 4 어댑터 / 홀더를 통해 두 에탄올 함유 모세 혈관과 두 nonethanol 포함 된 모세 혈관을 삽입합니다. 노트:파리는 일반적으로 플러그에 앉아서 먹이 노출 된 모세관을 아래로 상승으로 젖은 플러그에 가까운 모세 혈관의 개통을 유지하는 것은, 증발을 줄이고 음식에 쉽게 액세스 할 수 있습니다. </li><li> 실험 파리를 포함하는 유리 병뿐만 아니라, 파리없이 모의 유리 병을 준비합니다. 이 컨트롤은 자연 증발을 평가하는 역할을한다. 참고 : 차이가 변수 증발과 소비 데이터를 오해의 소지가 발생할 수 있으므로, 플러그에 비해 모세관 개방의 상대적으로 동일한 위치를 유지하려고합니다. 실험 기간 동안 적절한 습도를 유지하고 젖은 플러그에서 낮은 습도와 큰 거리로, 젖은 플러그에 최대한 가깝게 모세관 구멍의 위치를 ​​조절되지 않는 증발에서 모두 발생할 수 있습니다. </li><li> 자를 사용 mm의 흑색 표시 라인에 대하여 각각의 모세관 내의 액체의 상대 위치를 기록하고,이 값을 기록해. 주 : 용액 블랙 L 정확히 놓인 경우오프라인이 값은 0과 동일해야하고,이 위 또는 아래 인 경우에는 각각 양 또는 음의 값이되어야한다. 액의 초기 농도는 최종 O / N 소비 값의 참조 점을 설정한다. </li><li> 24 시간 동안 인큐베이터에서 튜브를 설정합니다. 전체 실험에 ​​걸쳐 일정한 시간에 모세 혈관을 교체합니다. </li><li> 바이알로부터 조심스럽게 제거 모세관 흑색 표시 라인에 대하여, 액체의 레벨을 측정한다. </li><li> 조심스럽게 모의 유리 병의 액체 레벨을 확인합니다. 참고 수준 이상 2mm 떨어진 경우 증발 높고 소모량 신뢰할 수없는 것으로, 그것은 나타낸다. </li><li> 물 2 mL로 부드럽게 플러그를 적신 단계 2.3.3에 나타낸 바와 같이, 모세 혈관의 새로운 세트를 삽입 - 2.3.10. 24 시간 동안 인큐베이터에서 튜브를 설정합니다. </li></ol></li><li> 확인 환경 설정 <ol><li> 제 i에서 최종 레벨을 감산함으로써, 각 모세관의 총 소비량을 계산시작점 nitial 레벨. </li><li> (에탄올 함유 모세 혈관 별도로 즉 nonethanol 모세 혈관) 같은 음식을 모두 모세 혈관의 값을 결합합니다. </li><li> 에탄올 - 함유 모세관에서 소비되는 양에서 비 모세관 에탄올에서 소비 된 양을 뺀 에탄올 선호도를 계산하고 동일한 바이알 모든 모세관으로부터 총 소비량 값으로 값을 나눈다. </li><li> 같은 실험 그룹의 모든 병의 기본 인덱스를 평균. <img alt="Equation1" src="/files/ftp_upload/54910/54910equation1.jpg" /> 참고 : Nonethanol 1 (NE1), Nonethanol 2 (NE2), 에탄올 1 (E1), 에탄올 2 (E2), 총 nonethanol (총 NE) = NE1 + NE2, 총 에탄올 (총 E)가 E1 + E2를 =, 총 합 소비 (총 합계) = 총 NE + 총 E, 및 에탄올 선호 지수 (PI) </li></ol></li></ol>

<ol><li>Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+social+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genes and social behavior.</a> Science. 322, 896-900 (2008).</li>
<li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiological+substrates+for+the+dark+side+of+compulsivity+in+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacol%22%5BJournal%5D)">Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction.</a> Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).</li>
<li>Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+to+study+drug+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model to study drug addiction.</a> Hum Genet. 131, 959-975 (2012).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction-like+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Commun Integr Biol. 3, 357-359 (2010).</li>
<li>Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+deprivation+increases+ethanol+intake+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila.</a> Science. 335, 1351-1355 (2012).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol+%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Curr Biol : CB. 19, 2126-2132 (2009).</li>
<li>McBride, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+ablation+impairs+short-term+memory+and+long-term+memory+of+courtship+conditioning+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Mushroom body ablation impairs short-term memory and long-term memory of courtship conditioning in Drosophila melanogaster.</a> Neuron. 24, 967-977 (1999).</li>
<li>Ejima, A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+learning+of+pheromonal+cues+modulates+memory+consolidation+in+trainer-specific+associative+courtship+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Sequential learning of pheromonal cues modulates memory consolidation in trainer-specific associative courtship conditioning.</a> Curr Biol. 15, 194-206 (2005).</li>
<li>Ejima, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generalization+of+courtship+learning+in+Drosophila+is+mediated+by+cis-vaccenyl+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Generalization of courtship learning in Drosophila is mediated by cis-vaccenyl acetate.</a> Curr Biol. 17, 599-605 (2007).</li>
<li>Keleman, K., Kruttner, S., Alenius, M., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+Drosophila+CPEB+protein+Orb2+in+long-term+courtship+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Function of the Drosophila CPEB protein Orb2 in long-term courtship memory.</a> Nat Neurosci. 10, 1587-1593 (2007).</li>
<li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+for+alcohol+reward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+propensity+for+consuming+ethanol+in+Drosophila+requires+rutabaga+adenylyl+cyclase+expression+within+mushroom+body+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">The propensity for consuming ethanol in Drosophila requires rutabaga adenylyl cyclase expression within mushroom body neurons.</a> Genes Brain Behav. 11, 727-739 (2012).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+alcohol+research%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The evolution of Drosophila melanogaster as a model for alcohol research.</a> Annu Rev Neurosci. 36, 121-138 (2013).</li>
<li>Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLIC%3A+high-throughput%2C+continuous+analysis+of+feeding+behaviors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila.</a> PloS one. 9, 101107(2014).</li>
<li>Itskov, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+monitoring+and+quantitative+analysis+of+feeding+behaviour+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila.</a> Nat Commun. 5, 4560(2014).</li>
<li>Yapici, N., Cohn, R., Schusterreiter, C., Ruta, V., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Taste+Circuit+that+Regulates+Ingestion+by+Integrating+Food+and+Hunger+Signals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Taste Circuit that Regulates Ingestion by Integrating Food and Hunger Signals.</a> Cell. 165, 715-729 (2016).</li>
<li>Peru, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting%2C+experience-dependent+alcohol+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Addict+Biol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting, experience-dependent alcohol preference in Drosophila.</a> Addict Biol. 19, 392-401 (2014).</li>
<li>Dus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+Sensor+in+the+Brain+Directs+the+Action+of+the+Brain-Gut+Axis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Nutrient Sensor in the Brain Directs the Action of the Brain-Gut Axis in Drosophila.</a> Neuron. 87, 139-151 (2015).</li>
<li>Anderson, D. J., Adolphs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+studying+emotions+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A framework for studying emotions across species.</a> Cell. 157, 187-200 (2014).</li>
<li>Gibson, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+to+a+repetitive+visual+threat+stimulus+express+a+persistent+state+of+defensive+arousal+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses to a repetitive visual threat stimulus express a persistent state of defensive arousal in Drosophila.</a> Curr Biol. 25, 1401-1415 (2015).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

여기에서는 Devineni 등이 설명한 이전 작업을 기반으로 보상 추구 행동의 변화를 측정하기 위한 통합 접근 방식의 세부 사항을 설명합니다.6 및 Shohat-Ophir et al 5. 프로토콜의 첫 번째 섹션에서는 다양한 유형의 성적 상호 작용을 경험 입력으로 사용하고, 두 번째 섹션에서는 2가지 선택 수유 분석을 사용하여 에탄올 소비 선호도에 대한 경험의 영향을 평가합니다.
Devineni et al.6, 파리의 에탄올 자가 투여는 강력한 행동으로, 처음에는 시간이 지남에 따라 증가하고 더 일관되게 되는 낮고 가변적인 선호도를 특징으로 합니다. 발달하는 선호도는 파리가 에탄올의 불쾌한 맛6 및 에탄올 증기에 대한 초기 노출 동안 발생하는 것으로 알려진 혐오 반응에도 불구하고 에탄올의 약리학적 효과를 그 위치와 연관시키는 방법을 배우는 과정을 반영할 ...

경험의 질문에 답변 행동의 수정은 동물들이 환경 (1)의 변화에 자신의 행동을 조정할 수 있습니다. 이 과정에서, 동물은 외부 환경의 변화하는 조건에 내부 생리 학적 상태를 통합하고 이후 생존과 재생의 그들의 기회를 높이기 위해 다른 통해 하나의 동작을 선택합니다. 보상 시스템은 식사 또는 음주, 또는 자손이에 대한 성적 행동이나 배려 장기 생존을 보장하는 것과 같은 즉각적인 생존을 향상시키는 행동을 강화하여 개인과 종의 생존을 위해 필요한 행동 동기를 부여하기 위해 진화. 이러한 약물 남용 등의 인공 화합물은 자연 보상 (2)을 매개 공동 말인가 신경 경로에 의해 보상 시스템에 영향을 미칩니다. 지난 20 년 동안, 과일 molec을 공부 초파리 melanogaster의이 유망한 모델로 설립되었습니다 비행울라 행동 3,4-에서 에탄올의 효과를 형성하고 신경 메커니즘. 이전에, 우리는 약물 보상 (5)를 얻는 동기로, 파리에서 peptidergic 뉴런의 부분 집합 (NPF / NPF 수용체 (R) 뉴런) 등의 성적 경험으로 그 몇 자연 보상을 확인했다. NPF 표현은 모두 성적 경험과 에탄올 중독과 같은 약물 보상에 민감합니다. NPF 발현 수준의 변화는 높은 NPF는 줄이고 낮은 NPF 에탄올을 소비 할 수있는 환경을 증가 에탄올 자기 관리 5에 변경으로 변환됩니다. 그들은 또한 감소 에탄올 소비에 의해 반사되어 활성화,와 결합 냄새에 대한 강한 선호를 표시로 NPF 뉴런을 활성화하면, 파리에 대한 보람입니다. 더 중요한 것은, NPF 신경 세포의 활성화는 에탄올 중독과 냄새 큐 사이에 긍정적 인 관계를 형성하기 위해 파리의 기능을 방해한다. NPF / R 사이의 인과 관계시스템 보상 메모리 및 에탄올 소비 한 보상 5 상태의 변화에 대한 척도로서 에탄올자가 투여를 사용할 수 있음을 시사한다. 이 책에서 우리는 보상 지역에서의 비행 자연 보상 시스템과 시금 변경을 활용에 대한 통합 된 접근 방식을 보여줍니다. 접근 방식은 보상 상태의 변화에 ​​대한 추정치로 에탄올 자기 관리를 평가하기 위해 두 개의 선택 모세관 공급 분석 (CAFE) 다음에 두 개의 개별 부품, 천연 보상 관련 경험을 조작하기위한 훈련 프로토콜로 구성되어 있습니다. 카페 분석은 약물 자기 관리를위한 설치류 연구에 사용 된 두 병 선택 분석 유사과 파리 6 중독 같은 행동의 특정 속성을 반영하는 것으로 나타났다.

<table><tbody><tr><td>폴리스티렌 25 x 95 mm 바이알</td><td>FlyStuff</td><td>32-109</td><td></td></tr><tr><td>좁은 플라스틱 바이알 flugs</td><td>FlyStuff</td><td>42-102</td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 바늘 18 g 및 27 g&nbsp;</td>모든 회사에서 <td></td><td>인수 할 수 있습니다</td><td>1.20 X 38 mm (18 G x 1 1/2 "), 0.40 X 13 mm (27 G x 1/2 ")</td></tr> <tr><td>10 x 75 mm 붕규산 유리 일회용 배양 튜브</td><td>kimble chase</td><td>73500-1075</td><td></td></tr><tr><td>보정 된 피펫 5 &# 956; L</td><td>VWR</td><td>53432-706</td><td>색상 코드 흰색은 5 &#956을 포함합니다. L</td></tr><tr><td>미네랄 오일&nbsp;</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>설탕, 분자 생물학 등급</td><td>CALBIOCHEM</td><td>573113</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물 미생물학용 분말</td><td>은 어떤 회사</td><td></td><td></td>에서도 획득할 수</tr> 있습니다<tr>.<td>에탄올</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>32221</td><td></td></tr><tr><td>표준 피펫 팁(마이크로 피펫)</td><td>ThermScientific</td><td>T114R-Q</td><td>용량: 0.1 - 20 &#956; L (초극세)</td></tr><tr><td>IDENTI-PLUGS (폼 튜브 플러그)</td><td>Jaece</td><td>L800-A</td><td>는 6 - 13 mm의 개구부에 맞습니다</td></tr><tr><td>. IDENTI-PLUGS (폼 튜브 플러그)</td><td>Jaece</td><td>L800-D</td><td>는 35 - 45 mm</td></tr><tr><td>버진네이터 플라이 스톡에 맞습니다&nbsp;</td><td>블루밍턴 초파리 재고 센터</td><td>#24638</td><td></td></tr><tr><td>좁은 바이알, 트레이 팩(PS)</td><td>Genesee Scientific Corporation</td><td>&nbsp;# 32-109BR</td><td></td></tr><tr><td>초파리 미디어 조리법 및 방법</td><td>블루밍턴 초파리 재고 센터</td><td>http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm</td><td></td></tr><tr><td>프로피온산</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>P5561</td><td></td></tr><tr><td>인산</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td></td><td></td>W290017</tr><tr><td>메틀 4-하이드록시벤조에이</td><td>트 시그마-알드리치&nbsp;</td><td>H3647</td><td></td></tr><tr><td>한천 한천</td>은 <td>모든 회사에서</td><td></td><td></td>구입할 수</tr> 있습니다 <tr><td>옥수수 가루</td><td>는 모든 회사에서</td><td></td><td></td>구입할 수</tr> 있습니다 <tr><td>할머니의 당밀</td><td>B & G Foods, Inc</td><td>는</td> 인스턴트 건조 효모를 모든 회사에서 인수할 수 있다고 표시하지 <td></td>않았습니다</tr><tr><td></td><td></td>.<td></td><td></td></tr></tbody></table>

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법<em&gt; 노랑 초파리</em

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

우리는 보상 상태의 변화에 대한 프록시로 초파리에서 에탄올 자기 관리 (초파리)를 측정하기위한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 파리의 보상 시스템을 활용 자연 보상에 관한 경험을 수정하고 보상 상태의 변화에 ​​대한 조치로 자발적인 에탄올 소비를 사용하는 간단한 방법을 보여줍니다. 접근 방식은 내부 상태의 경험을 매개 변화에 중요한 역할을 신경 세포와 유전자를 연구하는 중요한 도구 역할을한다. 이 프로토콜은 두 개의 분리 된 부분으로 구성된다 보람 nonrewarding 경험 파리 노출 및 약물 보상을 얻기 위해 동기 척도로서 자주 에탄올 소비량을 분석. 두 부분은 각각 하류 분석을위한 초기 단계로 또는 독립적 인 두 선택 먹이 검정으로 환경의 조절을 유도하는 데 독립적으로 사용될 수있다. 프로토콜은 복잡한 설정이 필요하지 않으며, 따라서 모든 실험 실용으로 적용될 수있다기본적인 비행 문화 도구와 y를.

FPreviously, Devineni 등은. 초파리는 에탄올 함유 식품을 소비 할 수있는 선택권을 부여 할 때, 그들은 음식 (6)을 포함 nonethanol 이상 에탄올 함유 식품에 대한 강한 선호를 표시하는 것으로 나타났다. 여기에 표시된 훈련 프로토콜을받지 않은 순진한 남성 파리의 타고난 에탄올 환경을 분석 할 때 우리가 얻은 몇 가지 대표적인 결과입니다. 순진 광저우 S 남성 파리는 4 일짜리까지 세, 우화에 수집하고, 4 D (그림 2)의 과정을 통해 에탄올을 소비하는 그들의 타고난 기본 설정에 대해 분석 하였다. nonethanol 음식을 통해 15 %의 에탄올 식품 소비에 대한 전시에게 강력한 환경 설정을 날아 에탄올 - 및 nonethanol 함유 솔루션 쇼에서 소비되는 양 <s...

우리는 보람 유도 및 보상 상태의 변화에 대한 조치로 자발적인 에탄올 소비를 사용하여 초파리 (Drosophila의 melanogaster의) 경험을 nonrewarding위한 프로토콜을 설명합니다.

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

이 절차의 전반적인 목표는 보상 상태 변화의 대리 지표로서 초파리의 에탄올 자가 투여량을 측정하는 것입니다. 이 방법은 경험이 뇌에 어떻게 부호화되고 행동의 수정으로 이어지는지와 같은 신경과학의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비교적 간단하며 복잡한 설정이 필요하지 않다는 점입니다.본 프로토콜은 두 개의 독립적인 부분으로 구성되어 있습니다. 첫 번째 단계는 초파리를 보상 및 비보상 경험에 노출시키는 것이며, 두 번째 단계는 약물 보상을 얻으려는 동기의 척도로서 자발적 에탄올 섭취량을 측정하는 것입니다. 프로토콜의 이 두 부분은 각각 독립적으로 사용될 수 있습니다.추후 진행될 하위 분석의 초기 단계로서 경험의 조절을 유도하거나, 독립적인 두 가지 선택 식이 분석을 수행하기 위함입니다. 이 절차의 시연은 저희 연구실의 석사 과정생인 Shir Zer와 대학원생 Julia Ryvkin이 맡아 진행하겠습니다. 모세관 급이기를 제작하기 위해, 먼저 측면에 작은 구멍들이 뚫려 있는 표준 초파리 바이알을 준비하십시오.면도날을 사용하여 바이알의 마개를 가로 방향으로 절반을 자릅니다. 모세관 홀더를 배치할 수 있도록 마개 표면에 정사각형 모양이 되게끔 네 지점을 표시합니다. 18-gauge 바늘을 사용하여 표시된 위치에 마개를 관통하는 네 개의 구멍을 뚫습니다.마이크로피펫을 사용하여 구멍을 더 넓게 만듭니다. 면도날을 사용하여 5 µL 유리 모세관을 단단히 고정할 수 있도록 마이크로피펫 4개를 자릅니다. 이를 준비된 플러그의 구멍에 삽입합니다.에탄올이 들어갈 두 개의 모세관이 꽂힐 위치를 플러그에 표시하십시오. 다음으로, 마이크로원심분리기 랙에 유리 바이알을 배치하십시오. 초파리 배지를 녹인 후, 각 바이알에 2 mL씩 붓습니다.먹이가 굳을 때까지 기다린 후, 바이알을 플라스틱 랩으로 덮습니다. 우선 작은 바이알에 격리하여 개별적으로 사육한 수컷 파리를 준비합니다. 이들을 무작위로 두 그룹으로 나눕니다.보상 기반 교배 경험 그룹과 비보상 기반 교배 경험 그룹으로 나눕니다. 먼저 비보상 그룹의 경우, 각 바이알에 이전에 교배 경험이 있는 암컷을 추가합니다. 다음으로 보상 그룹의 경우, 각 바이알에 처녀 암컷을 추가합니다.교배 과정을 관찰하여 처녀 암컷과 상호작용하는 수컷이 첫 1시간 이내에 성공적으로 교배하는지 확인하십시오. 또한, 이전에 교배 경험이 있는 암컷과 상호작용하는 수컷은 교배하지 않는지 확인해야 합니다. 교배군이 실제로 교배를 수행하고, 거부군이 교배에 성공하지 못하도록 주의 깊게 관찰하는 것이 필수적입니다.1시간 후, 거부된 코호트에서 교미에 성공한 수컷과 교미한 코호트에서 첫 번째 훈련 세션 종료 시까지 교미하지 못한 수컷을 실험에서 제거합니다. 비보상 조건의 이전에 교미했던 암컷들을 흡입하여 제거함으로써 조건화 세션을 종료하며, 이 개체들은 이후의 시험을 위해 보관합니다. 마지막으로, 교미한 수컷 그룹의 암컷들을 제거하여 폐기합니다.초파리를 1시간 동안 휴식시킨 후, 1시간 간격으로 1시간 동안의 조건화 분석을 두 번 더 반복합니다. 이러한 훈련 세션을 이후 3일 동안 매일 반복해야 합니다. 4일 차의 마지막 조건화 세션이 끝난 후, 단독 수컷들을 흡입하여 동일한 보상 그룹의 파리들이 함께 있도록 6~8마리씩 모아 모세관 급이병에 넣습니다.이동하는 동안 수컷들이 제자리에 있도록 소프트 플러그를 사용하십시오. 모든 초파리를 넣은 후, 소프트 플러그를 모세관 피더 플러그로 교체하십시오. 바이알 내부로 물이 쏟아지지 않도록 주의하며, 각 플러그 상단에 5 mL의 물을 조심스럽게 추가하여 플러그를 적셔주십시오.에탄올 및 물 식품 용액을 준비한 다음, 실험용 필름 스트립 위에 이 용액들을 5 µL씩 떨어뜨립니다. 용액이 모세관을 따라 5 µL 표시선까지 채워지도록 둡니다. 그 후 스트립을 가볍게 두드려 용액이 미리 표시된 선에 정확히 위치하도록 조정합니다.모세관의 끝부분을 미네랄 오일의 작은 방울에 담가 밀봉합니다. 마지막으로, 에탄올이 함유된 모세관과 에탄올이 함유되지 않은 모세관 두 개를 플러그의 어댑터에 삽입합니다. 노출된 측면은 플러그 표면으로부터 1 mm 이하로 돌출되어야 합니다.모세관의 입구를 젖은 플러그에 가깝게 유지하면 증발을 줄일 수 있으며, 초파리가 보통 플러그 위에 앉아 노출된 모세관을 타고 내려가 먹이를 먹으므로 먹이에 쉽게 접근할 수 있게 됩니다. 또한, 자연 증발량을 평가하기 위한 대조군으로 초파리가 없는 모의 바이알을 하나 준비하십시오. 마지막으로, 초파리가 들어 있는 바이알 내 각 모세관의 액체 상대 위치를 검은 선을 기준으로 밀리미터(mm) 단위로 기록하십시오.바이알을 실험용 배양기에 넣고 24시간 동안 배양합니다. 제거한 각 모세관의 액체 높이를 검은색 선을 기준으로 측정하고 기록합니다. 실험이 진행되는 동안 매일 정해진 시간에 모세관을 교체하십시오.플러그에 2 mL의 물을 다시 적신 후, 바이알을 인큐베이터에 다시 넣습니다. 우화 직후 수집하여 4일령까지 성장시킨 야생형 Canton S 계통 수컷 초파리를 대상으로 4일 동안 알코올 섭취에 대한 선천적 선호도를 분석하였습니다. 에탄올 함유 용액과 비함유 용액의 섭취량을 분석한 결과, 초파리는 15% 에탄올 먹이에 대해 유의미한 선호도를 보였습니다.교미에 성공한 수컷과 거부당한 수컷을 대상으로 CAFE 실험을 반복하였습니다. 두 그룹 모두 이전에 단독 사육되었으며, 교미를 수락하거나 거부한 암컷에게 노출되었습니다. CAFE 바이알에 그룹별로 도입했을 때, 거부당한 그룹이 에탄올 모세관에서 더 많은 양을 섭취하였습니다.이는 보상 부족에 대한 인식이 보상 추구 행동의 증가로 이어졌음을 시사합니다. 반대로, 성공적인 교배는 내부 보상 수준을 높이며, 이는 결과적으로 에탄올 섭취량을 감소시킵니다. 이 절차를 수행할 때는 실험 전 과정에 걸쳐 습도가 잘 유지되는 환경을 조성하는 것이 중요하며, 특히 섭취 단계에서 매일 플러그에 물을 주고 모세관 끝부분을 젖은 플러그에 가깝게 유지하는 것에 각별히 유의해야 합니다.

a-simple-way-to-measure-alterations-reward-seeking-behavior-using

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Drosophila melanogaster은 한 세기 이상에서 많은 중요한 생물 학적 과정의 분자 및 세포 기초를 이해하기 위해 사용되었습니다 유전자와 behaviorally 다루기 쉬운 모델 시스템이다. Drosophila 잘 플라이 행동의 유전적 기초에 대한 통찰력을 얻기 위해 악용되었습니다.

분석의 방법 Drosophila 행동

Drosophila의 애벌레는 gustatory 보상과 냄새 자극을 연결 할 수 있습니다. 여기 appetitive 연관 후각 학습의 분석을 할 수있는 간단한 행동 패러다임을 설명합니다.

에 Appetitive 연관 강한 학습<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

이 비디오는 착색된 사료를 사용하여 먹이를 모니터링하고 첨가된 화합물이 먹이 활동에 미칠 수 있는 영향을 모니터링하는 초파리에 대한 먹이 분석을 설명합니다. 예시 프로토콜은 여러 내분비 교란 화학물질(EDC)의 효과를 테스트합니다.

수유 테스트: Drosophila melanogaster의 수유 선호도 평가

이 비디오는 선호 물질을 섭취한 후 파리의 복부 착색을 평가하여 맛이 다른 착색 용액에 대한 매력 또는 회피를 측정하는 데 사용되는 행동 방법인 미각 선호도 분석에 대해 설명합니다. 주요 프로토콜은 다양한 자당 농도의 용액에 대한 파리의 선호도를 측정하는 데 사용되는 절차를 보여줍니다.

Taste Preference Assay: 초파리의 섭식 행동을 측정하는 방법

이 비디오 문서에서는, 우리는 초파리 비행 성인 과일의 후각에 의존 식품 검색 행동에 대한 배고픔이나 포만감의 효과를 측정 할 수있는 자동화 된 분석을 설명합니다.

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에 초파리

여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석 초파리

이 프로토콜은 단일 동물 해상도에서 Drosophila melanogaster의 산란 선호도를 테스트하기 위한 고처리량 분석을 설명합니다.  이 분석은 간단한 의사 결정 과정을 제어하는 유전자 및 회로 구성 요소를 식별할 수 있는 간단하고 효율적이며 확장 가능한 플랫폼을 제공합니다.

높은 처리량 분석은 개인의 알을 낳는 환경 설정을 검사합니다<em&gt; 노랑 초파리</em

여기에서는 최대 100마리의 식초파리(Drosophila melanogaster)의 후각 반응을 분석하기 위한 행동 설정 및 데이터 분석 방법을 설명합니다. 이 시스템은 단일 또는 다중 후각 자극과 함께 사용할 수 있으며 신경 세포 하위 집합의 광유전학적 활성화 또는 침묵에 적응할 수 있습니다.

의 컴퓨터 추적하여있는 분석 후각 행동<em&gt; 초파리</em&gt; 네 사분면의 후각에

이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다.

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em&gt; 노랑 초파리</em

우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

이 프로토콜은 Drosophila melanogaster를 사용하여 설탕 유도 검색 행동을 기록하기 위한 행동 분석을 설명합니다. 이 분석은 먹이 및 먹이 찾기 관련 행동뿐만 아니라 기본 신경 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

초파리에서 설탕 유도 국소 검색 행동 추적

학습하세요 Drosophila melanogaster를 이용한 보상 상태 변화 측정 방법입니다. 자발적 에탄올 섭취를 통해 동기 부여와 행동 변화를 연구하는 간단한 신경과학 실험 기법을 확인하세요.

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법

더 많은 동영상 탐색