Name: Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: 배우세요 대비 향상 초음파와 생체 현미경을 결합하여 마우스 후지 혈관과 근육 관류를 동시에 관찰하는 방법을. 이 기술은 제2형 당뇨와 비만에서 인슐린 감수성 및 혈관 기능을 연구하는 데 활용됩니다.

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우리 Ing을 감사합니다. 이 연구에 사용 된 이미지 분석 소프트웨어 (ImageGrabber) 프로그래밍에 대 한 던컨 반 녹색. 이 연구는 제공에 대 한 자금 과학 연구 (grant 016.136.372)를 위한 네덜란드 조직에서 VIDI 그랜트에 의해.

모든 동물 실험 지역 동물 보호 및 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고. 전체 프로토콜 hyperinsulinemic euglycemic 클램프의 끝까지 마우스 마 취의 유도에서 약 2 시간 걸립니다.
1. microsurgical 준비
<ol><li>함께 남성 마우스 14 h 후 20-25 g를 무게에서 무 통 마 취를 유도 또는 펜타닐 (0.31 밀리 그램/kg), Midazolam (6.25 mg/kg) 및 Acepromazine (6.25 mg/kg) (FMA 마 취)의 복 주사와 금식 밤새 고에 직장 온도 제어 homeothermic 난방 패드를 37 ° c.에 온도 유지</li>
	<li>작업 테이블과 여러 번 알코올 기반 솔루션을 사용 하 여 장비를 소독.</li>
	<li>10 cm 긴 폴 리 에틸렌 관 (PE-20)에 27g 바늘을 연결 하 고 4-방법은 커넥터에 튜브를 연결. 꼬리 정 맥에 바늘을 삽입 하 고 조직 접착제 젤을 사용 하 여 그것을 흥분 시키는. 이 정 맥 마 취, 포도 당, 인슐린, microbubbles의 주입에 사용 됩니다. 참고: 추가 헤 파 린 (5 U/mL)는 cannulation 동안 멸 균 식 염 수에 꼬리 정 맥 (약 10 µ L)를 프로세스 막힌된 뉼의 가능성을 줄여줍니다.</li>
	<li>수술 절차 및 실험 프로토콜을 통해 FMA 33.75 µ L/kg/min의 속도로 꼬리 정 맥 캐 뉼 러를 통해 마 취의 지속적인 정 맥 주입 하 여 마 취를 유지 합니다.</li>
	<li>복 부 쪽으로 마우스를 놓고 발 위쪽 허벅지 영역을 노출 하는 내 테이프를 사용 하 여 수정 합니다. 무릎 관절에서 고관절 (hindlimb 발 위로 향하도록)과 40-60 ° 각도의 약간의 exorotation를 사용 하 여 표준화는 허벅지의 내 전근 구획에서 근육의 스트레칭.</li>
	<li>사 타 구니와 위쪽 허벅지 영역 depilatory 크림을 사용 하 여 양측에 머리를 제거 합니다. 습 한 면봉으로 모든 느슨한 머리를 수집 합니다.</li>
	<li>아래는 stereomicroscope 마우스 놓고 10 X 16 X 확대를 사용 하 여 다음 수술 단계를 수행 합니다.</li>
	<li>피부 위 사 타 구니 인 대, 복 곡률 (그림 1) 그냥 옆에 병렬 실행을 사용 하 여 2 cm 절 개를 확인 합니다. Distally 불독 클램프 (그림 1D)를 사용 하 여 절 개의 원심 측에 견인을 적용 합니다. 이것은 필요에 따라 윈도우를 조정 하 여 파라핀 오일 (1.12에서 설명)를 개최 하는 데 도움이 도움이 됩니다.</li>
	<li>복 벽에서 지방 조직 해 부. 출혈을 방지 하려면 부드럽게 패드를 통해 직접 해 부 대신 벽에서 지방 패드를 분리 합니다. 원심 방향에서 지방 패드에 부드러운 견인 과정 (그림 1C)을 촉진 한다.</li>
	<li>대 퇴 동맥을 확인 하 고 첫 번째 주요 지점 (상 복 부 동맥 및 gracilis 동맥) 아래로 따르십시오 (그림 2). Gracilis 동맥 내 전근 매 그 너 스 근육에서 실행 되는 대 퇴 동맥의 첫 번째 주요 지점 이며 다음 gracilis 근육에 깊은 실행 됩니다. IVM gracilis 동맥 사용 될 것입니다.</li>
	<li>투명 한 깊은 근 막 근육 및 혈관을 식별 합니다. 날카로운 집게를 사용 하 여 근 막 위쪽으로 끌어 하 고는 microscissor를 사용 하 여 그것을 잘라.</li>
	<li>약 액체 파라핀의 방울 (200 µ L)로 노출된 근육을 커버 온도, 룸 (37 ° C에 미리 데워) 준비 조직 밖으로 건조 하지 않도록. 기름 방울 떨어져 누설 하지 않는 다는 것을 확인 하십시오. 불독 클램프 혈관 목욕 파라핀 기름을 보유 하는 작은 구멍을 사용 하 여 절 개의 피부 주름을 조정 합니다.</li>
	<li>Gracilis 동맥은 컴퓨터 화면에 수직 하는 방식에서 (16 배 광학 확대) 이전 보정 현미경 마우스를 놓습니다. 카메라와 컴퓨터에 현미경을 첨부 이미지 데이터 집합에서 혈관의 직경을 추출할 수 있는 분석 시스템을 기반으로. 선박의 luminal 양측 사이의 거리입니다. 지속적인 모니터링 및 동맥 직경의 측정 하는 것이 바람직합니다.</li>
	<li>줄이기 위해 빛에서 머리 전도 hindlimb에서 충분 한 거리 (최소 20 cm)에 광원을 배치 합니다.</li>
	<li>Prewarmed 초음파 변환 젤 상단 contralateral hindlimb에 적용 됩니다. 대 퇴 골 뼈의 긴 축에 수직인 초음파 프로브를 놓습니다.</li>
	<li>조심 스럽게 내 전근 근육 그룹의 횡단면 뷰를 초음파 프로브의 방향과 각도 조정 합니다. 마우스를 기준 초음파 프로브 위치 기준 및 hyperinsulinemic 측정 같은 영상 평면을 유지 안정 유지 처리.</li>
	<li>30 분 동안 안정화 마우스를 하자. Gracilis 동맥의 직경 기준 직경을 문서화 하기 전에 10 분 동안 안정 해야한다.</li>
</ol>2. 기준선 및 Hyperinsulinemic 측정
<ol><li>기준선 gracilis 동맥 직경은 IVM에 사용 되는 컴퓨터 프로그램에 의해 저장 되는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>Coulter 2.5 x 실험 직전 109 거품/mL의 농도에 카운터와 설명된35 및 카운트 microbubbles 사전에 준비 합니다.</li>
	<li>
으로 microbubbles 초음파 기계의 대비 모드 에서만 볼 수 있습니다, 이미지에 영향을 미치는 매개 변수를 제어 대비 데이터 수집 (에서 설명된 2.3.1)와 사용 중 지속적으로.
	<ol>
<li>초음파 기계에 다음 설정 사용: 35 데시벨;에 대비 이득 시간 이득 OFF;로 보상 선 밀도 높은; 넓은;에 초점 영역 수 전송 전원 4%; 표준; 빔 폭 송신 SV 게이트 4; 감도 1; OFF로 지 속성입니다. 관심의 영역 중심에 초점 영역의 위치 레벨.</li>
	</ol>
</li>
	<li>짧은 저장 (5 s) 클립. 이 배경 신호를 계산 하기 위해 사용 됩니다.</li>
	<li>균일 한 현 탁 액을 손으로 microbubbles 들어 있는 유리병을 흔들어. 5 µ L/min 속도로 꼬리 정 맥 캐 뉼 러를 사용 하 여 microbubbles를 일으키는 시작 합니다. Microbubbles의 균일 한 현 탁 액을 유지 하기 위해 진동 소용돌이 (분 당 200 x)에 주입 튜브를 놓습니다.</li>
	<li>정상 수준에 도달할 수 있도록 microbubbles의 지속적인 주입의 5 분을 허용 합니다. Microbubbles 주입 (그림 3A)의 시작 후 5 분 및 10 분에서 초음파 기계에 microbubble 폭 기능 (MBD)를 사용 하 여 거품의 시간-강도 곡선을 얻기와 진행. 이 두 측정의 평균 신호 초기 관류 데이터를 가져가 라.</li>
	<li>
취득 후 초기 계획 데이터 설명된34로 hyperinsulinemic euglycemic 클램프를 시작 합니다. (1.3에 배치) 꼬리 정 맥을 사용 하 여 인슐린과 포도 당 (과 마 취).
	<ol>
<li>즉, hyperinsulinemic 국가 20%의 변수 주입 60 분 사용에 대 한 지속적인 인슐린 주입 (7.5 뮤/kg/min)에 의해 따라 200kg 뮤 인슐린 bolus를 도입 하 여 유도 euglycemia 유지 하기 위해 D-포도 당.</li>
		<li>포도 당 모니터링 장치, 5 분 마다 꼬리 정 맥에서 혈액 포도 당을 평가 하 고 5 m m 가변 포도 당 주입 비율을 조정 하 여 유지. 지난 30 분 동안 평균 포도 당 주입 율을 평균 하 여 인슐린 감도 결정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gracilis 동맥의 직경은 컴퓨터 프로그램과 hyperinsulinemic euglycemic 클램프의 시작 (예: 10, 30, 60 분)에 원하는 시간 기간에서 문서화 되어 있는지 확인 합니다.</li>
	<li>25 분 후 또는 인슐린 클램프의 55 분 각각 30 / 60 분 MBV를 두 번째 (hyperinsulinemic) CEUS 측정을 시작 합니다. 2.4와 2.5에 설명 된 동일한 단계를 따릅니다. 분리 하 고 4-방법은 커넥터의 마 취 포트를 사용 하 여는 microbubbles 달 이다. Microbubbles 주입의 끝 후에 마 취 튜브를 다시 연결 합니다.</li>
	<li>IVM와 인슐린 주입의 CEUS 측정 시작 후 60 분 후, 나중에 분석 마음 빵 꾸 절차 사용 마우스에서 혈액을 철회. 이 마우스를 안락사 또한 것 이다. 조심 스럽게 gracilis 및 대 퇴 동맥 해 부 고 추가 원하는 실험에 대 한 그들을 저장 (대 한 예를 들면, 서쪽 오 점, Immunohistochemistry, 비보 전 압력 myography 실험36,37, 38).</li>
</ol>3. 오프 라인 분석

참고: IVM 및 CEUS 측정 분석 멀게 탐정에 의해 오프 라인으로 수행 되어야 한다. CEUS는 microbubbles MBD 함수를 사용 하 여 강도 높은 초음파 파도 의해 일시적으로 파괴에 의해 큰 혈관에서 미세 혈관을 구별 하는 가능성을 제공 합니다. (임의의 단위 (호주산) 측정) 더 큰 혈관에 신호 때문에 해당 선박에 microbubbles 속도 미세 혈관에 비해 빨리 복원 됩니다.
<ol><li>분석을 할 초음파 기계에는 오프 라인 워크스테이션 또는 소프트웨어를 사용 합니다.</li>
	<li>이익 (ROI)는 미세를 포함 하도록 영역을 그립니다. 더 큰 대 퇴 혈관 (그림 3A)를 포함 하는 별도 투자 수익을 그립니다.</li>
	<li>소프트웨어에 내장 된 ROI 복사 기능을 사용 하 여 배경, 기준선 및 hyperinsulinemic 측정에 대 한 큰 혈관 및 미세 혈관의 ROIs를 중복.</li>
	<li>기준선에서 배경 측정과 hyperinsulinemic 측정의 강도 신호를 뺍니다.</li>
	<li>대 퇴 혈관의 강도 신호에 의해 microcirculation의 강도 신호를 나눕니다. 기준선과 hyperinsulinemic MBVs 이제 비교할 수 있습니다.</li>
</ol>

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반면 구조와 기사의 내용이 남아 작가의 전적인 책임 비주얼 Sonics Inc. 오픈 액세스 요금 적용.

우리는 동시에 인슐린의 혈관 작업 (IVM 사용) 하는 큰 동맥에 골격 근육 미세 (CEUS 사용)를 추정 하는 기법을 개발 했습니다. 성공 하 고 안정적인 측정을 위한 중요 한 단계는: 1) 올바르게 gracilis 동맥 출혈; 없이 노출 2) 동맥; 입욕 파라핀 오일의 누설 방지 3) 데 vasoactive 화합물 (인슐린) 및 대비 에이전트 (microbubbles)의 주입에 대 한 특허 정 맥 접근 (꼬리 정 맥 정 맥).
근육에 microvascular 역 기능 연구 비만 인슐린 저항14,25,,3940의 맥락에서 관심을 얻고 있다. 비만 인슐린 저항 혈관 기능에 부정적인 영향을 포함 혈관 나무의 다른 수준에 명시 됩니다. 이제부터, 다른 접근 이러한 변화를 평가 하기 위해 필요 합니다. IVM 및 CEUS 같은 마우스 기술 사용 하는 맥 관 구조의 서로 다른 수준에서 인슐린의 효과 계량 강력한 도구를 제공 합니다. IVM 직접 시각화 및 저항 동맥의 정량 분석을 허용 하 고 CEUS 근육 관류의 인슐린 유도 된 변화에 대 한 평가 대 한 있습니다.
내 전근 근육 격실을 공부 하 고 몇 가지 장점이 있습니다. 동맥 쉽게 접근할 수 있으며 절 개의 표면 특성 실험 완료 후 5.0 흡수 멸 균 봉합 사를 피부 절 개를 닫으려면 가능 하 게. 동물 주사 피하 buprenorphine 실험 후 0.1 mg/kg의 복용량에 진통제로 되었고 따뜻한 환경에서 복구할 수 있습니다. 쥐 절차를 아주 잘 용납 하 고 우리는 동물의 손실 없이 35 개 이상의 동물 공부 hindlimb의 감염을 경험. 이 후속을 가능 하 게 하거나 경도 패션에 동물을 공부 합니다. 그러나이 실험에 사용 된 동물, 1.8% 흡입 isoflurane 마 취 마스크 하지만 0.4 L/min에서 흐르는 산소와 균형을 사용 하 여 취 했다. 달리 isoflurane 마 취41,42, FMA 마 취는 주변 인슐린 감도 방해 하지 않습니다. 미래의 계획은 쥐 FMA 마 취에서 회복 하는 얼마나 잘 공부 이다.
내 전근 근육 구획 또한 유용한 다양 한 vasoactive 화합물 로컬 중재 이후 이며 다운스트림 혈관 효과 평가할 수 있다. 예를 들어 대상 조직에 이러한 화합물의 국 소 응용 프로그램은 가능한 superfusion 기법28 또는 수술 조작 및 약물 방출 수 갑을 둘러싼 혈관43의 주입을 사용 하 여. 또한, gracilis 동맥 격리 하 고 압력 myograph에서 공부 될 수 있습니다. 우리의 그룹 및 다른 압력 myograph를 사용 하 여이 동맥 비보 전36,,3738. 에 인슐린과 다른 vasoactive 화합물의 효과 문서화 하는 실질적인 실험 증거 수집
IVM 기술의 사용에 제한 근육의 수술 박람회 및 혈관을 안정화 하기 위해 파라핀 오일의 응용 프로그램입니다. 그것은 이러한 작업 동맥의 네이티브 환경 영향 여부를 명확 하지입니다. 그러나, 그림 3A gracilis 동맥 파라핀 기름에서 목욕의 초기 직경 상당히 변경 되지 않습니다 보여 줍니다. 그것은 또한 보였다 미네랄 오일 hyperoxic 조건44에서 조직을 보호 하는 산소의 확산을 성공적으로 억제 한다. 또한, 기름 동맥의 초기 직경에서 변화를 줄일 수 있습니다. 이 때문에 우리는 파라핀 오일을 사용 하 여 적어도 30 분 동안 준비 나머지 옹호. 노트의 오일-또는 석유 대신 버퍼링 된 염 분의 사용-결과 높은 변수 지름과 선박 (데이터 표시 되지 않음)의 수축. 또한, 실험의 끝에, 우리 절연 gracilis 동맥-파라핀 오일-목욕 그리고 압력 myograph에 그들의 반응성을 테스트 비보 전. 파라핀 오일 목욕 동맥 동맥 때 인슐린과 아 세 틸 콜린 (vasodilator) 자극을 제어 마찬가지로 반응 (데이터 표시 되지 않음). 일관 된 인슐린 유도 된 혈관은 명확 하 게이 연구에서 설명 IVM 프로토콜 신뢰할 수 있는 결과 생성 보여줍니다.
같은 마우스 기술을 모두 적용의 장점은 다른 하나의 기술의 본질적인 제한 중 일부를 극복: CEUS에 그대로 근육 vivo에서, MBV 추정 하지만 개별 혈관을 볼 수 없습니다; IVM 수 있습니다 개별 선박 볼 이라도 MBV를 예측할 수 없습니다. 미래의 계획은 CEUS contralateral 편이 내 전근 근육의와 조합에 cremaster 근육의 IVM 현미경 검사 법을 활용 하는 것 이다. 이 수정 (CEUS 사용) MBV (IVM 사용) 하는 모세 혈관에 직접 광 액세스의 견적을 제공할 수 있습니다. 프로토콜 추가 수정할 수 있습니다; 4-방법은 커넥터 꼬리 정 맥에 사용 되는 5-방법은 커넥터를 전환할 수 있습니다. 이것, 우리는 두 번째 CEUS 측정 (포인트 2.9에서에서 설명)을 수행 하는 동안 마 취 튜브를 분리 피할 수 있다. 우리의 경험에서 쥐 잘 현재 프로토콜을 용납. 이 프로토콜을 만들 수 있는 또 다른 수정 사용 인슐린 클램프 속도입니다. 우리는 위에 생리 여겨지는 7.5 뮤/kg/min 클램프 속도 사용 합니다. 연구에 따라 더 낮은 인슐린 클램프 비율 (예를 들어 3 무/kg/min)를 사용할 수 있습니다.
발견 설명된 프로토콜 신뢰할 수 있는 하는 동안 주의 필요로 하는 특정 제한이 있습니다. 동맥 직경의 측정은 최적의 상황이 있습니다. 준비 단계를 실행 모델과 함께 몇 가지 경험을 요구 한다. 그것은 중요 한 선박을 교란 하 고 동맥 나머지 다른 30 분 동안 하는 데 필요한 만들기 지름을 변경할 것 이다 새로운 오일으로 보충 파라핀 오일 선박 환경에서 누설 하지 않습니다. 또한, 파라핀 오일의 표면에 (1.14 프로토콜의 단계에서 설명) 빛의 반사 너무 밝고, 동맥을 볼 수 어렵습니다 가끔 했다. 이 광원 빛 파라핀 오일 표면과 동맥에 평행 하 게 각도에서 폭포를 지시에 의해 counteracted 수 있습니다.
결론적으로,이 연구에서 설명 IVM 및 CEUS 기술 조합은 맥 관 구조의 서로 다른 수준에서 인슐린의 다양 한 효과 계량 수 있습니다. IVM gracilis 동맥의 다운스트림 microvascular 관류 CEUS를 사용 하 여 측정에 기여 업스트림 혈관 변화에 대 한 통찰력을 제공 합니다. 우리는 혈관 기능을 평가 하는 더 나은 동일한 마우스에서 여러 실험적인 기술의 조합을 옹호.

혈액 포도 당 수준에 있는 상승에 대응, 췌 어디 그것은 신속 하 게 저항 동맥과 모세 혈관을 통해 골격 근 등의 대상 조직에 배포 하는 혈 류로 인슐린을 은닉 한다. 골격 근육은 식 후 포도 당 통풍 관1~ 80%에 대 한 책임. 골격 근육 interstitium에 인슐린의 배달 될 단계 인슐린의 포도 당 처리2,,34홍보 대사 행동에 대 한 제한 속도를 보였다. 10-15 분 이내 인슐린 모 세관 혈액 볼륨 (microvascular 모집) 총 혈액 흐름 증가5,6하기 전에 발생 하는 효과 증가 시킵니다. Microvascular 모집 영양분 (과 인슐린)의 교환7,8에 사용할 수 있는 내 피 표면 영역을 확장합니다. Microvascular 모집 인슐린 중재 앞 이며 변화 골격 근육의 포도 당 통풍 관8,9에 독립적으로 연결 됩니다. 맥 관 구조에 인슐린의 효과 '혈관 인슐린 감도' 되 나 되었습니다.
그것은 인슐린 중재 microvascular 모집 및 인슐린 유도 혈관 비만 주 커 쥐10,11손상 표시 되었습니다. 또한, 감소 모 세관 밀도와 마른 쥐 근육 인슐린 저항12표시합니다. 그들의 영향력 있는 작품에서 구보타 외. 장애인된 인슐린 내 피 세포에서 신호 인슐린 유도 microvascular 채용, 약 4013골격 근육에서 포도 당 통풍 관을 감소 감소 발생 보여주었다. Microvascular 기능에서이 이상이 발생 하지 않습니다만 다른 여러 조직 및 심장 등 장기에도 근육에서 망막 및 신장14,,1516. 이 예제와 다른 연구17,18,,1920 건의 인슐린의 혈관 효과 인슐린 저항 (patho) 생리학에서 중요 한 메커니즘의 합병증입니다.
인슐린 microvascular 혈액 볼륨 (MBV) 골격 근육5,6에 증가 하는 실질적인 증거는는 이런 메커니즘은 완전히 이해9하지. 피-종속 혈관 혈관 인슐린 감도21,,2223 는 맥 관 구조의 서로 다른 수준에서의 여러 측면에서 필수적 이다. 혈관 인슐린 감도 수 매니 페스트 자체 저항 동맥의 인슐린 유도 된 이완 및 사전 모 세관 arterioles 끼얹는다 microvascular 교환 표면적7,24, 증가 휴식 25.
Intravital 현미경 검사 법 (IVM) 조직 준비 마우스28 햄스터 뺨 파우치 마우스 등26,27마우스와 쥐 mesentery, 사지 허 혈의 모델의 피부 집계로 챔버 등의 다양 한 사용 되었습니다. 29. 대비 향상 된 초음파 (CEUS)은 심장30 골격 근육31에 미세 혈관의 평가 허용 하는 또 다른 이미징 기술. Rheologically 붉은 혈액 세포로 작동 하 고 혈관 루멘 내에서 유지 하는 불활성 가스 가득 microbubbles를 사용 합니다. 이러한 microbubbles 안정적인 상태를 달성 하기 위해 일정 한 속도로 정 맥 주입 됩니다. 높은 에너지 초음파 파도 다음, 파괴는 microbubbles를 사용할 수 있습니다. 관심 (ROI)의 지역에서 microbubbles' 보급 속도 흐름 속도를 (MFV)를 나타냅니다. 대비 이미지의 총 신호 강도 MBV를 나타냅니다. CEUS (인간)에 반복 해 서 수행할 수 있습니다 그리고 그것은 (바 렛 외. 에서 설명 하는 인슐린 저항 상태에서 발생 하는 혈관 장애의 이해를 전진 했다 32)입니다.
현재 연구에서 우리는 IVM와 CEUS의 동시 사용을 통해 근육 관류의 공부에 대 한 새로운 기술을 설명 합니다. 여기 우리는 마우스 hindlimb의 내 전근 구획에서 인슐린의 혈관 작업에 초점. 이 구획 지역 포도 당 통풍 관 대표 근육에서의 연구 활성화 마우스, 큰 골격 근육 그룹 중 하나입니다. 이 구획은 IVM 준비 및 동맥의 시각화는 표준화 된 수술28에 의해 쉽게 액세스할 수 합니다. 또한, 우리 자신의 그룹과 다른 나타났습니다 CEUS이 구획33,34에서 사용할 수 있습니다.
결합된 IVM CEUS 기술 하는 장점은 큰 arterioles (피드 또는 저항 동맥)와 같은 근육 그룹에 미세 (모 세관 침대)의 수준에서 인슐린의 효과 평가 하는 가능성. 또한, 두 가지 방법 동시 적용 인슐린 저항 동맥 미세 혈관의 수준에서의 임시 작업에 대 한 통찰력을 제공합니다. 와이 결합 IVM CEUS 기술은 다른 혈관 생물학 분야에서 구현할 수도 있습니다. 예를 들어 다양 한 단백질 및 endothelium에 영향을 미치는 특정 병 태 생리 조건 역할 녹아웃 모델을 사용 하 여 공부 될 수 있다. 또한, 두 기법 연구의 비용과 시간을 줄이고 여러 시간 점에서 한 마우스에서 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 마우스</td><td>찰스 리버</td><td></td> 마우스는 Vevo 2100 고해상도 초음파 시스템 VisualSonics inc.<td>에서 사육 된</td></tr> 것입니다<tr><td></td><td>.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MS250 비선형 트랜스듀서</td><td>VisualSonics inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 소프트웨어</td><td>VisualSonics inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>초음파 젤 (Aquasonic 100, 무색)</td><td>CSP Medical</td><td>133-1009</td><td>초음파 젤은 초음파를 전송하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR international</td><td>58815-234</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드&nbsp;</td><td>Pantlab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>프리스타일 프리시전 Xceed&nbsp;</td><td>Abbott</td><td></td><td>고인슐린-유혈당 클램프 동안 혈당 수준을 측정하기 위해</td></tr><tr><td>Insulin Novorapid</td><td>Novo Nordisk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>포도당 단수화물&nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>1083421000</td><td></td></tr><tr><td>완충 식염수 B</td><td>. Braun</td><td>152118062</td><td></td></tr><tr><td>PE-20 의료 튜빙</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427405</td><td></td></tr><tr><td>Needle, 27 게이지&nbsp;</td><td>벡턴-디킨슨 & Co</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>의료 테이프</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>초음파 프로브 홀더</td><td></td><td></td><td>내장 사내</td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td>다중 등가</td></tr><tr><td>크림 제모기</td><td></td><td></td><td>다중 등가</td></tr><tr><td>젤 조직 접착제</td><td>Derma+flex</td><td>GA30005-2222</td><td></td></tr><tr><td>주입 펌프</td><td>하버드 장치</td><td>Harvard Apparatus PHD 2000</td><td></td></tr><tr><td>Small fine straight scissors</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>파인 팁이 있는 스트레이트 펜치</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Olympus</td><td>SZX12</td><td></td></tr><tr><td>Camera</td><td>Basler</td><td>scA1390-17gc</td><td></td></tr><tr><td>이미지 그래버 프로그램</td><td>내장 사내</td><td></td><td>이미지 수집 시스템</td></tr><tr><td>타이머</td><td>VWR</td><td>33501-418</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 1mL</td><td>Fisher</td><td>14-817-25</td><td></td></tr><tr><td>광원, 광섬유</td><td>Schott</td><td>KL1500</td><td>이상적으로 조정 가능한 팔이 있음</td></tr><tr><td>파라핀 오일</td><td></td><td></td><td>다중 등가</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Microbubbles</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine&nbsp;</td><td>Avanti 극성 지질</td><td>850365C</td><td></td></tr><tr><td>폴리옥시에틸렌 스테아레이트&nbsp;</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>p3440</td><td></td></tr><tr><td>퍼플루오로부탄 가스&nbsp;</td><td>F2 화학</td><td>C4F10(g)</td><td></td></tr><tr><td>Decon FS200 초음파 수조&nbsp;</td><td>Decon Ultrasonics Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>바이알믹스&nbsp;</td><td>Lantheus 의료 이미징</td><td>515370-0810</td><td></td></tr><tr><td>멀티사이저 쿨터 카운터</td><td>Beckman Coulter Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

그것은 인슐린의 혈관 작업 인슐린 감도 기여할 증명 되었습니다. 근육 관류에 인슐린의 효과 조절 인슐린에 민감한 조직에 영양분과 호르몬의 식 후 배달 합니다. 우리는 여기 intravital 현미경 검사 법 (IVM) 및 대비 향상 된 초음파 (CEUS) 마우스 hindlimb 동시에 시각화 근육 저항 동맥의 내 전근 구획 및 관류의의 결합에 대 한 기술을 설명 합니다 미세 vivo에서. 동시에 혈관 트리의 여러 수준에서 인슐린의 효과 평가 하는 것은 인슐린의 여러 vasoactive 효과 근육 관류 사이 관계를 공부 하는 것이 중요. 이 연구에서는 실험 쥐에서 수행 했다. 첫째, 꼬리 정 맥 정 맥 마 취, vasoactive 화합물 및 초음파 대비 에이전트 (지질 캡슐화 microbubbles)의 주입에 삽입 됩니다. 둘째, 작은 절 개를 내 전근 근육 격실의 동맥 트리를 노출 하는 사 타 구니 지역에서 이루어집니다. 초음파 프로브 횡단면에서 근육을 보려면 contralateral 상단 hindlimb에 배치 됩니다. 동맥 직경 평가 기준 매개 변수를 평가 하 고 microbubbles 근육 혈액 흐름 및 microvascular 혈액 볼륨 (MBV) 추정을 일정 한 비율로 연속적으로 들어갈 수 있습니다. 적용 전과 hyperinsulinemic euglycemic 클램프 중, 결합 IVM 및 CEUS 간선 직경, microvascular 근육 관류 및 전신 인슐린 감도의 인슐린 유도 된 변화에 대 한 평가 허용 한다. 또한, 일시적인 관계는 미세 혈관의 반응 및 인슐린 저항 동맥 측정할 수 있습니다. 그것은 또한 후속 수 쥐 경도 시간, 혈관과 전신 인슐린 감도 있는 변화를 공부 하는 귀중 한 도구를 만드는.

포도 당 주입 율 hyperinsulinemic euglycemic 클램프 (인슐린 감도) 동안은 180.21 ± 19.81 µ / k g/분 배를 안정 시키기 위해 내 전근 근육 격실에 파라핀 오일의 로컬 응용 프로그램 평균 기준 직경을 변경 하지 않은 동맥 (73.6 29.0 ± µ m 68.8 ± 17.9 µ m; 대의 p = 0.58) 하지만 변화를 줄이기 위해 도움이 동물 테스트 (그림 4A). 인슐린 일관 gracilis 동맥 직경 (14.58 ± 6.2% 증가 60 분; N = 9)는 크게 달랐다 (p &lt; 0.0001) 식 염 수 주입으로 인 한 직경 변화에서 (-6.3 ± 4.9%; N = 6). 10 분 (10.09 ± 5.1%; 후 인슐린 유도 된 혈관은 감지할 수 p = 0.002) 30 분 후 최대 완만 용량의 약 95%를 도달 했다.
CEUS에 사용 하 여, 인슐린 일관 되 게 증가 근육 MBV (그림 5A) 33.5% (± 31.04%, N = 7; p = 0.0009) 식 염 수 주입에 비교 될 때 (-10.63 ± 27.87%, N = 6) (그림 5B). 제공 된 데이터는 근육 대 퇴 혈관을 나눈 MBV의 신호 강도. 다른 쥐 (데이터 표시 되지 않음) 그리고 다른 측정 사이 실험 변형을 줄어듭니다. 대 퇴 혈관에서 신호 강도 선형 microbubbles 순환 (그림 3C)의 농도와 일치합니다. 이론적으로 대 퇴 혈관 신호에 대 한 수정 microbubbles 사용 (그림 3D)의 농도 차이 해결 합니다. 데이터는 ± 표준 편차를 의미 하기 때문에이 섹션에 표시 됩니다.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig1.jpg"> 그림 1: 는 Hindlimb의 내 전근 구획의 외과 박람회. (A) 절 개는에서 만든 사 타 구니, 사 타 구니 인 대의 방향에 평행 하 게. (B) 부드러운 견인 원심 방향 (검은 화살표)에서 지방 패드에서 지방 패드와 복 벽 사이의 결합 조직 (*)를 발표할 예정 이다. (C)는 피부 주름 절 개의 혈관 목욕 파라핀 기름을 보유 하는 작은 구멍을 만들 불독 클램프를 사용 하 여 조정할 수 있습니다. (D) 초음파 프로브 보정된 현미경을 사용 하 여 준비 gracilis 동맥을 본 이후 contralateral 위 hindlimb에 배치 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig2.jpg"> 그림 2: 마우스 Hindlimb intravital 현미경. 대 퇴 동맥 (A) (B) 상 복 부 동맥 및 내 전근 근육 그룹 (D) 실행 gracilis 동맥 (C) 상승을 제공 합니다. Gracilis 동맥 IVM 보정된 현미경을 사용 하 여 사용 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig3.jpg"> 그림 3: 대비 향상 된 근육 Microvascular 혈액 볼륨 및 대 퇴 혈관 초음파의 강도 신호. (A) 비선형 대비 남성 마우스 상단 hindlimb에 microbubbles 지속적인 주입 하는 동안 디지털 이미징 플랫폼의 모드 영상 보기 오른쪽 패널: 두 ROIs MBV 근육과 대 퇴 혈관을 나타내기 위해 그려집니다. 내 전근 근육 구획의 표면 부분은 포함만 신호도 투자 수익에 깊이와 강도 감소. 왼쪽된 패널: 근육 MBV 투자 수익에서에서 시간-강도 곡선. 세로줄 높은 에너지 파 microbubbles (MBD)의 파괴를 나타냅니다. MBD, 직후 아무 대비 에이전트는 microbubbles 점차적으로 채우기 위해 시작 영상 평면에 존재. 10-15 s 후 대비 향상의 피크에 도달 했습니다. (B-D) 2.5 x 109 거품/mL의 주입 속도 두 배로 후 정상 상태 신호 도달 되었다, (5, 10, 20 µ L/min). 신호 강도에서 근육 MBV (B)와 (C) 대 퇴 혈관 paralleled 순환에서 microbubble 농도의 2 배. (D) 수정 근육 MBV 대 퇴 혈관 신호 제거 다양성 다른 microbubble 농도 의해 발생 하는 신호 강도에 대 한 (N = 9; 표준 편차 나타내는 오류 막대). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig4.jpg"> 그림 4: Gracilis 동맥의 intravital 현미경 측정. (A) 파라핀 오일 평균 기준 직경 안정 (73.6 µ m 68.8 µ m; 대를 유지 하면서 (이 석유를 적용 한 후 파라핀 vs 17.9 µ m 없이 29.0 µ m) 다른 동물의 gracilis 동맥의 변화를 감소 p = 0.58). (B) 간선 직경 인슐린 또는 염 분 약 60 분 전후 기준에서. 인슐린 후 60 분 주입 지속적으로 열려진 gracilis 동맥 (p &lt; 0.0001) 식 염 수 주입에 비교 될 때. (C) 인슐린 유도 된 혈관 주입 시작 후 10 분에 발생 (p = 0.002) 30 분 오류 바 대표 표준 편차;에서 최대의 95%에 도달 짝이 없는 학생의 T-검정 통계에 사용 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig5.jpg"> 그림 5: 대비 향상 된 마우스 Hindlimb의 내 전근 근육 구획의 초음파를 사용 하 여 microvascular 혈액 볼륨 측정. (A) 인슐린 인슐린 주입 시작 후 MBV 30 분에 일관 된 증가 있는 결과. (B)는 hyperinsulinemic 및 기준선 측정 (MBV 변경)의 차이 인슐린 중재 microvascular 모집으로 표시 됩니다. 인슐린 유도 33.5% (± 31.04%, p = 0.016; N = 7) 식 염 수 주입에 비해 microvascular 모집 (-10.63 ± 27.87%, N = 6). 오차 막대를 나타내는 표준 편차; 짝이 없는 학생의 T-검정 통계에 사용 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

인슐린 유도 혈관 근육 관류를 조절 하 고 증가 microvascular 표면적 (microvascular 모집) 용 질 exchange에 사용할 수 있는 혈액과 조직 interstitium 사이. 결합된 intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 동시에 큰 배와는 미세 혈관에서 인슐린의 활동을 평가 하 여 vivo에서.

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

이 결합된 조영제 강화 초음파와 생체 내 현미경 기술의 전반적인 목표는 근육 저항성 동맥을 동시에 시각화하고 생체 내에서 골격근 미세 순환 관류를 연구하는 것입니다. 이 방법은 인슐린 민감성 및 장기 혈류 조절에 대한 제2형 당뇨병 및 비만 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 시술 당일, 알코올 기반 용액으로 수술 부위 및 장비를 소독한 후 10cm 길이의 PE20 튜브에 27게이지 바늘을 장착하고 튜브를 4방향 커넥터에 부착합니다.마취된 CD57 BL6 수컷 마우스에서 금식한 20-25g의 꼬리 정맥에 바늘을 삽입합니다. 그리고 조직 접착 젤을 사용하여 바늘을 피부 조직에 고정합니다. 마우스를 누운 자세로 놓고 열 안정 테이프를 사용하여 발을 고정하여 허벅지 위쪽 부분을 노출시킵니다.고관절을 약간 외회전시키면서 뒷다리 발을 무릎과 함께 40-60도 각도로 향하게 하여 허벅지 내전근 부분에서 근육의 스트레칭을 표준화합니다. 제모 크림을 사용하여 사타구니와 허벅지 위쪽 부위의 털을 양측으로 제거하고 촉촉한 면봉으로 느슨한 털을 모두 모읍니다. 그런 다음 마우스를 10-16X 배율의 실체 현미경 아래에 놓고 복부 곡률 바로 옆쪽에 서혜부 인대와 평행하게 2cm 절개를 만듭니다.피부 절개 부위는 대퇴 주위가 새어 나오지 않을 정도로 작게 절단해야 하지만 혈관 구조를 볼 수 있을 만큼 크게 절단해야 합니다. 불독 클램프를 사용하여 절개 부위의 원위부에 견인력을 가한 다음 지방 조직을 복벽에서 멀리 절개하고 출혈을 방지하기 위해 패드를 통해 직접 절개하는 대신 원위 방향으로 지방 패드를 벽에서 부드럽게 분리합니다. 대퇴 동맥을 확인하고 혈관을 따라 상복부 동맥과 용막 동맥과 근육과 혈관을 덮고 있는 투명한 깊은 근막까지 이동합니다.날카로운 집게를 사용하여 근막을 위로 당기고 마이크로 가위로 조직을 자릅니다. 그런 다음 조직이 건조해지는 것을 방지하기 위해 노출된 근육을 200마이크로리터의 파라핀 오일 한 방울로 덮고 불독 클램프를 사용하여 절개 부위의 피부 주름을 배열하여 혈관을 목욕시키는 오일을 담을 수 있는 작은 구멍을 만듭니다. 이제 gracilis 동맥이 16X 배율로 컴퓨터 화면에서 수직이 되도록 마우스를 조정하고 뒷다리에서 최소 20cm 떨어진 곳에 광원을 배치하여 빛의 열전도를 줄입니다.상부 반대쪽 뒷다리에 예열 초음파 전달 젤을 바르고 초음파 프로브를 대퇴골의 긴 축에 수직으로 놓습니다. 초음파 프로브의 각도와 방향을 조심스럽게 조정하여 내전근 그룹의 단면을 확인하고 기준선 및 고인슐린혈증 측정을 위해 동일한 이미징 평면을 유지하기 위해 프로브의 위치를 안정적으로 유지하도록 주의하십시오. 초음파 프로브의 배치는 기저 및 고인슐린혈증 측정을 위해 프로브가 동일한 위치에 있는 모든 마우스에서 상부 뒷다리의 동일한 부분을 연구할 수 있도록 표준화되어야 합니다.초음파 프로브를 적절하게 배치하고 측정을 위해 gracilis 동맥을 성공적으로 준비한 후 마우스를 30분 동안 안정화시킵니다. 30분의 안정화 기간 후 기준선 측정을 진행하십시오. gracilis 동맥의 기준선 직경을 측정하고 저장합니다.미세 기포는 초음파 기계의 대비 모드에서만 볼 수 있으므로 미세 기포 평가를 위해 이미징 시스템에서 적절한 매개변수를 설정하십시오. 초점 영역의 위치를 관심 영역의 중앙으로 수평을 맞추고 배경 신호 계산을 위해 5초 클립을 저장합니다. 밀리리터 농도 당 9개의 거품에 2.5 곱하기 10에 microbubbles를 주소하고, 획일한 현탁액을 얻기 위하여 microbubbles를 포함하는 작은 유리병을 수동으로 동요합니다.꼬리 정맥 캐뉼러를 통해 분당 5마이크로리터의 속도로 미세 기포를 주입하기 시작하여 미세 기포의 균일한 현탁액을 유지하기 위해 진동 소용돌이에 주입 튜브를 유지합니다. 5분 연속 주입 후 마이크로 버블 디스디스 디스템 기능을 사용하여 마이크로 버블 주입 시작 시 5분 및 10분에서 기포의 시간 강도 곡선을 생성합니다. 5분마다 꼬리 정맥의 혈당을 평가합니다.기준선 데이터를 얻은 후 꼬리 캐뉼라를 사용하여 고인슐린 혈당 클램프를 시작하여 인슐린 볼루스 1kg당 200밀리단위를 투여합니다. 60분 동안 분당 킬로그램당 7.5밀리단위의 인슐린 주입을 지속적으로 유지합니다. 앞서 보여준 것처럼 꼬리 끝에서 얻은 혈당에서 채취한 혈당에서 연속 혈당 수치 모니터링을 수행해야 합니다.진혈당을 유지하기 위해 20%DE 포도당을 다양하게 주입하십시오. 이미징 소프트웨어를 사용하여 고인슐린혈당 유혈당 클램프가 시작된 후 원하는 시점에 그라실리스 동맥의 직경을 측정합니다. 25분 및/또는 55분 후, 두 번째 고인슐린혈 조영제 강화 초음파 측정을 시작하여 마취구를 사용하여 미세기포를 주입하는 것을 시연한 것처럼 각각 30분 및/또는 60분에 미세혈관 혈액량을 모니터링합니다.이러한 데이터에서 입증된 바와 같이, 내전근 구획에 파라핀 오일을 국부적으로 바르면 동맥의 평균 기준선 직경을 변경하지 않고 혈관을 안정화하고 실험한 동물 간의 편차를 줄이는 데 도움이 됩니다. 인슐린 주입은 식염수 주입에 의해 유도된 직경 변화에 비해 그라실리스 동맥 직경을 지속적으로 증가시키며, 10분 후에 인슐린 유도 혈관 확장이 분명하고 30분 후에는 약 95%의 최대 확장 능력이 나타납니다. 인슐린은 조영제 강화 초음파를 사용하여 식염수 주입에 비해 근육 미세혈관 혈액량을 지속적으로 증가시킵니다.대퇴 혈관의 신호 강도는 대퇴 혈관 신호의 조정과 함께 순환의 미세 기포의 농도와 선형으로 일치하며, 이론적으로 사용되는 미세 기포의 농도 차이를 보정합니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 두 시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 새로 준비된 시약과 마이크로 버블을 사용하고 실험 측정을 수행하기 전에 연속 마취로 마우스가 30분 동안 안정화되도록 하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 새로운 혈관 활성 성분이 혈관 조직에 미치는 영향과 같은 추가 질문에 답하기 위해 신약을 테스트할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 혈관 생물학 분야의 과학자들이 노르코 마우스에 대한 새로운 치료법의 효과와 관심 변화를 평가할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 생체 내 현미경 검사와 조영제 강화 초음파를 사용하여 근육 저항 동맥의 직경을 동시에 연구하고 생체 내에서 쥐 뒷다리의 관류를 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

combined-intravital-microscopy-contrast-enhanced-ultrasonography

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

엑기스의 관찰을위한 새로운 다양한 방법을 제시합니다. 이것은 장기 관찰에 적합 간주하고, pharmacophysiological 또는 분자 생물 학적 중재와 함께입니다.

내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정

일방적 hindlimb의 국소 빈혈의 유도에 대한 수술은 레이저 도플러 재관류 이미징에 의해 국소 빈혈의 확인과 증명합니다.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

이 비디오에서는 세포 역학의 장기적인 시각화를 위해 안정화된 창을 통해 쥐 췌장의 생체 내 이미징에 대해 설명합니다.

Intravital Imaging: 안정화된 이미징 창을 통해 마우스 췌장의 세포 수준을 관찰하는 방법

우리는 생분해 성 고분자 나노 입자를 사용하여 혈관 신생을위한 치료 인자를 과발현 프로그래밍 줄기 세포의 제조 방법을 설명한다. 설명 과정은 체외에서 지방 유래 줄기 세포를 형질 전환하고, 쥐의 뒷다리 허혈 모델에서 혈관 신생을 촉진하기 위해 프로그램 된 줄기 세포의 효능을 검증 고분자 합성 (가) 있습니다.

생분해 성 고분자 나노 입자를 사용하여 치료 혈관 신생에 대한 프로그래밍 줄기 세포

마우스에서 뒷다리 허혈의 외과적 유도는 혈관 신생을 검사하는 데 유용하지만, 현저한 허혈 유발 조직 괴사를 나타내는 특정 근친 마우스 균주에서는 손상됩니다. 점진적인 동맥 폐색의 유도를 통해 이 문제를 회피하기 위해 아메로이드 수축기를 사용하여 아급성 사지 허혈을 유도하는 방법이 설명되어 있습니다.

급성 및 아 급성 쥐 뒷다리 국소 빈혈하는 방법

이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

여기에 제시된 것은 혈관 동맥이 수납 및 가압되기 때문에, 모세관 침대 및 백혈구를 포함하는 혈관 나무 구성 요소뿐만 아니라 압력을 유지하는 동맥 관류 압력 및 흐름의 전 생체 모니터링에 의해 살아있는 뮤린 심장 조직에서 관상 동맥 미세 순환을 연구하는 프로토콜이다.

마우스 심장의 모세혈관, 동맥 및 페리사이클의 동적 측정 및 이미징

여기에서, 우리는 마우스 뒷다리에 있는 혈류를 측정하기 위하여 레이저 도플러 관류 화상 진찰을 위한 기술 그리고 필요한 통제를 보여주는 프로토콜을 제시합니다.

마우스 힌드림에 있는 레이저 도플러 관류 화상 진찰

췌장의 생체 내 고해상도 이미징은 췌장 내 생체 내 이미징 창으로 촉진되었다.

췌장 인트라바이탈 이미징 창이 있는 뮤린 모델에서 췌장의 생체 내 세포 수준 시각화안정화

백혈구와 혈소판의 모집은 동맥 형성 동안 측부 동맥의 효과적인 성장에 필요한 필수 구성 요소를 구성합니다. 다광자 현미경은 동맥 형성 중 백혈구 모집 및 유출을 연구하기 위해 생체 내에서 높은 시공간 분해능과 더 적은 광독성으로 세포 역학을 추적하는 효율적인 도구입니다.

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징

본 프로토콜은 FVB 마우스에서 뒷다리 괴저(hindlimb gangrene)를 유도하기 위해 대퇴골 동맥 및 정맥 전기응고와 산화질소 합성효소 억제제의 투여를 결합한 말초 동맥 질환의 독특하고 임상적으로 관련된 모델을 기술한다. 심장 내 DiI 관류는 풋패드 혈관 구조의 고해상도, 입체 영상화에 사용됩니다.

Murine Hindlimb Gangrene 모델에서 발판 혈관 구조의 고해상도 입체 이미징

배우세요 대비 향상 초음파와 생체 현미경을 결합하여 마우스 후지 혈관과 근육 관류를 동시에 관찰하는 방법을. 이 기술은 제2형 당뇨와 비만에서 인슐린 감수성 및 혈관 기능을 연구하는 데 활용됩니다.

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

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