Name: 단일 분자 힘 분광학을 사용하여 무기 재료와 아미노산 및 펩타이드의 상호 작용에 대한 통찰력 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: 배우세요 단일 분자 힘 분광학을 사용하여 아미노산 및 펩타이드와 무기 재료 표면 간의 접착력을 측정하는 방법을. AFM을 활용한 이 기술은 표면 화학 및 신소재 개발 연구에 필수적인 분자 수준 상호작용 정보를 제공합니다.

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이 작업은 Marie Curie International Reintegration Grant (EP7)의 지원을 받았습니다. P. D.는 이스라엘 고등 교육 위원회의 지원을 인정합니다.

1. 팁 수정 <ol><li> 구매 질화 규소 (Si3N4), 실리콘 팁 AFM 캔틸레버 (~ 2 nm 인 캔틸레버 공칭 반경). </li><li> 20 분 동안 무수 에탄올에 침지하여 각 AFM 캔틸레버를 청소합니다. 실온에서 건조. 그런 다음 5 분 동안 O 2 플라즈마에 노출시킴으로써, 캔틸레버를 처리한다. </li><li> (15)의 비율 (3cm) 용액을 함유하는 메틸 트리에 톡시 실란 및 3- (아미노 프로필) 트리에 톡시 실란을 상기 클린 팁 일시 : 1 (V / V)를 불활성 분위기 (질소 또는 아르곤 중)하에 데시 케이 터에서하고 데시 케이 터에 연결 진공 펌프. 2 시간 동안 진공 혼합 실란 화합물의 두 종류의 단층을 형성한다. </li><li> 핫 플레이트에 팁을 배치 (이 과정에 대한 제작) 금속 팁 홀더를 사용합니다. 이어서 대기압 조건에서 70 ° C에서 10 분 동안 팁을 건조. 사용하기 전에 에탄올을 사용하여 핫 플레이트, 금속 홀더와 핀셋을 청소합니다. </li><li> 객실 t의 팁 쿨럼 온하고 1 시간 동안 0.5 % (v / v)의 트라이 에틸 아민을 함유하는 클로로포름 5mm의 농도 플루 오레-PEG-N 히드 록시 숙신이 미드의 용액 (FMOC-PEG-NHS, MW 5,000 다)시에 끝 몰입 실온. </li><li> 5 분 동안 클로로포름의 팁을 찍어 후 추가로 5 분 디메틸 포름 아미드 (DMF)에 찍어. 부착 된 PEG 분자의 FMOC기를 탈 보호하기 위해 30 분 동안 DMF 중의 20 % 피 페리 딘 (V / V)의 팁을 담근다. 4 분 후, 추가로 4 분 동안 N- 메틸 -2- 피 롤리 돈 (NMP)에 DMF에 팁을 찍어. 세 번 찍기 순차를 반복합니다. </li><li> 아미노산의 커플 링, 보호 N 말단 아미노산 (AA) / 디 이소 프로필 에틸 아민 (DIPEA) / 2- (1H- 벤조 트리아 졸 -1- 일) -1,1,3,3- 테트라 메틸 hexafluophosphate을 함유하는 용액으로 끝 몰입 1.5 시간 동안 5 ㎖ NMP 30 mm의 총 농도에서 1 : 1 : 1의 몰비 (HBTU). </li><li> 펩티드 결합의 경우, 5 ㎖의 용액으로 계속 팁을 찍어보호 된 펩타이드의 40 mg의 aining (N 단자와 사이드 체인, 예를 FMOC-Gln의 (트리트) -Pro-의 Ala-빼앗아 (tBu 중에서) -Ser (tBu 중에서) -Arg에 대한 (PBF) -Tyr (tBu 중에서) -COOH.) 15 mg의 2- (1H- 벤조 트리아 졸 -1- 일) -1,1,3,3- 테트라 메틸 우로 늄 헥사 플루오로 포스페이트 (HBTU), 및 2 시간 동안 NMP에 DIPEA 5 ㎖. </li><li> 4 분 동안 NMP의 팁을 찍어. 이어서, 아세틸기로 리밍 무료 / 미 NH 2 보호 몰비 4에 무수 아세트산 / DIPEA의 혼합물을 30 분 동안 팁을 찍어 : 1 NMP에서 0.65 M의 합계 농도. </li><li> 펩타이드 결합의 경우, 두 개의 추가 단계를 수행합니다. <ol><li> 펩티드의 측쇄 탈 보호 1 시간 동안 95 % TFA, 2.5 % 트라이 아이소 프로필 실란 및 2.5 %의 물을 함유하는 용액으로 끝 몰입하고 클로로포름, DMF로 세척하기 위해. </li><li> 30 분 동안 DMF 중의 20 % 피 페리 딘 (V / V)로 팁을 펩티드의 FMOC기를 제거 몰입하기 위해. </li></ol></li><li> 순차적으로 펩타이드 / 아미노산 기능화를 찍어클로로포름, 50 % 에탄올 및 물 (아미노산) (펩티드) DMF 또는 NMP에서 네 분마다 D 팁. 마지막으로 공기의 팁을 건조. </li></ol> 2. 표면 준비 <ol><li> 운모를 준비합니다. 스카치 테이프를 이용하여 각각의 사용 전에 기판 (9.9 mm 직경)을 절단. 그런 다음, 트리플 증류수 (TDW)로 표면을 세척한다. </li><li> 산화 티타늄이 코팅 된 실리콘을 준비합니다. <ol><li> 다이아몬드 펜을 사용 2cm 사각형으로 실리콘 웨이퍼 (100)를 잘라. </li><li> 아세톤으로 채워 15 ㎖의 시험관에 상기 기판을 위치시키고 초음파 조에서 5 분 동안 초음파 처리하여. 이어서, 이소프로판올로 채워진 15ml의 시험관이 배치면을 5 분 동안 초음파 처리하여. 질소를 이용하여 기판을 건조. </li><li> 5 % (중량 / 부피) 용액을 제조하기 위해 에탄올에 계면 활성제 (예하여, Byk-348)를 녹인다. 그 후, 2 ㎖의 30 %의 이산화 티탄 분산액에 계면 활성제 용액 0.02 mL를 첨가. </li><li> 생성 된 용액에서 0 캐스트 놓습니다.깨끗한 Si 기판에 2 mL를. </li><li> 공기에서 2 시간 동안 250 ° C에서 이러한 드롭 주조 표면을 어닐링. (41) </li></ol></li></ol> 3. 단일 분자 힘 분광학 측정 <ol><li> 시중에서 판매하는 두 구성 요소 접착제와 AFM의 금속 홀더에 원하는 표면을 연결합니다. 작은 페트리 접시 모양 된 AFM의 유리 홀더 금속 홀더를 배치합니다. 트리스 완충액 (50 mM의 pH는 7.4) 또는 원하는 매체와이 홀더를 입력합니다. 그런 다음, 팁 홀더 아래 AFM 무대에 홀더를 배치합니다. </li><li> 약 10 %의 절대 불확실성과 함께합니다 (AFM 소프트웨어에 포함 된) 열 변동 방법 (26)를 사용하여 10 ~ 30 PN / 나노 미터에 이르는 스프링 상수와 AFM의 캔틸레버를 보정합니다. </li><li> 이 압축에 의해 기판과 접촉 할 때까지 기판에 아미노산 또는 펩티드 - 작용 팁에 근접하여 상호 작용하는 힘을 측정~ 200 PN의 힘과 즉시 ~ 200 nm의 거리를 0.1 ~ 0.8 μm의 / s의에서, 다양한 속도로 끝을 철회. </li></ol> 4. 데이터 분석 <ol><li> 포토 다이오드 감도 (V / m)을 승산하고, 실험적으로 결정된 스프링 정수를 사용하여 (V)을 강제로 변위 값을 변환한다. (42)이 AFM 소프트웨어에 의해 자동으로 수행된다. <ol><li> 곡선의 단일 분자 이벤트, 기록 수백 (800-1,500)와 FD 곡선을 구하십시오. 단일 분자 곡선의 두 피크를 얻었다 : 첫 번째 피크는 팁과 표면과 표면 분자의 특이 적 상호 작용에 대한 두 번째 피크 사이의 대응 비특이적 상호 작용을 나타낸다. 상기 FD 곡선이 두 피크 이상을 함유하는 경우, 가장 가능한 힘의 계산에서 그들을 버린다. 참고 : 하나의 접착 이벤트가 (10에서 곡선의 30 %)을 고려됩니다. (43) </li></ol></li><l난&gt; 다음의 히스토그램의 제조에 사용되는 부하율의 세트를 획득하기 직전 파열 겉보기 충전율 웜 형상 쇄 (WLC) 모델 (44)과의 거리 커브 대 맞는 적어도 50 힘을 계산하는데 명백한 로딩 속도. 기판으로부터 캔틸레버를 분리 한 후에 시행 점프의 펩타이드 / 아미노산과 표면 사이의 결합 해제 력을 유도. </li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

프로토콜에서 1.3, 1.4 및 1.7의 광범위한 치료에 매우 부드러운 방식으로 수행되어야 단계. 단계 130에서, 팁 실란 혼합물 실란 화 과정이 불활성 대기 (수분이 없음)에서 수행되어야 접촉이어야한다. (45) 이것은 적층 형성을 방지하기 위하여 실란 분자가 쉽게 수분의 존재하에 가수 분해를 받아야하기 때문에 수행된다. (45) 단계 140에서, 온도 및 시간을 적절하게 유지되어야한다. 단계 1.5을 시작하기 전에, 팁은 실온으로 냉각한다; 그렇지 않으면이 손상됩니다. 결합 단계 (170)에서, HBTU 및 검사 아미노산 또는 펩티드 완전히 혼합물에 용해한다. 결합 후, 다른 용매와 팁을 세척하는 팁에 대한 손상을 방지하기 위해 매우 부드러운 방식으로 수행해야합니다. 보고 된 기술은 APPL 될 수 있습니다어떤 펩타이드 나 아미노산에 ...

단백질과 무기 미네랄 간의 상호 작용은 특유의 특성을 가진 복합 재료의 구성을 이끈다. 이것은 높은 기계적 강도 또는 고유 광학 특성을 갖는 물질을 포함한다. 예를 들어 1, 2, 미네랄 하이드 록시 아파타이트와 단백질 콜라겐의 조합은 서로 다른 기능을위한 연질 또는 경질의 뼈를 생성한다. 3 짧은 펩티드는 높은 특이성과 무기 물질을 바인딩 할 수 있습니다. 도 4를 참조하면, 이러한 펩티드 5, 6 특이성이 결정 9는 나노 물질의 제조, 8, 7, 새로운 자기 및 전자 재료를 설계 성장에 사용 된 (10)와 합성 나노 입자. 11 그러므로 우리가 개선 된 흡착 특성을 가진 새로운 복합 재료를 설계 할 수 펩타이드 또는 단백질과 무기 물질 사이의 상호 작용을 기본 메커니즘을 이해. 면역 반응과 임플란트의 계면이 단백질에 의해 매개되기 때문에 또한, 더 나은 무기 물질과 단백질의 상호 작용을 이해하는 것이 임플란트를 설계 할 수있는 능력이 향상됩니다. 무기 표면과 상호 작용하는 단백질을 포함하는 또 다른 중요한 영역 방오 재료의 제조이다. 12, 13, 14, 15은 생 오손 생물이 표면에 부착 한 바람직하지 않은 방법이다. 그것은 우리의 삶에 많은 부정적인 의미를 가지고있다. 예를 들어, 의료 기기에 대한 세균의 생물 연료는 병원 획득 감염으로 이어집니다. 보트와 대형 선박에 해양 생물의 생 오손은 증가<html> 연료의 소비. 12, 16, 17, 18 단일 분자 힘 분광법 (SMFS)는 원자 현미경을 사용하여, 직접, 아미노산 또는 펩티드와 기판 사이의 상호 작용을 측정 할 수있다. 이러한 파아지 디스플레이, 27 (28) 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 다른 방법 석영 크리스탈 마이크로 저울 (QCM) (29) 표면 플라스 몬 공명 (SPR) 29, 30, 31, 32,심판 &quot;&gt; (33) 측정 대량의 무기 표면에 펩타이드와 단백질의 상호 작용. 34, 35, 36 그러면 이러한 방법에 의해 얻어진 결과는 분자 또는 응집체의 앙상블에 관한 것을 의미한다. SMFS에서 하나 또는 소수의 분자는 AFM 팁에 고정되고, 원하는 기판과의 상호 작용을 측정한다. 이 방법은 표면으로부터 단백질을 당겨 단백질 접힘 학습하도록 확장 될 수있다. 또한, 세포와 단백질과 그 리간드에 대한 항체의 결합 상호 작용을 측정하는데 사용될 수있다. 37, 38, 39, 40이 논문은 실라 화학 제를 사용하여 AFM 팁에 펩티드 또는 아미노산 중 하나를 부착하는 방법을 상세히 설명한다. 또한, 종이는 힘의 측정을 수행하는 방법 및 분석 방법을 설명결과.

<table><tbody><tr><td>실리콘 나이트라이드 (Si3N4) 실리콘 팁이 있는 AFM 캔틸레버</td><td>Bruker (Camarilo, CA, USA)</td><td></td><td>MSNL10, 공칭 캔틸레버 반경 ~2 nm&nbsp;</td></tr><tr><td>메틸트리에톡시실란&nbsp;</td><td>Acros Organics (New Jersey, USA)</td><td></td><td>AFM 팁의 실라일화용&nbsp;</td></tr><tr><td>3-(Aminopropyl) triethoxysilane</td><td>Sigma-Aldrich (이스라엘 예루살렘)</td><td></td><td>AFM 팁의 실라일화용</td></tr><tr><td>Triisopropylsilane</td><td>Sigma-Aldrich (이스라엘 예루살렘)</td><td></td><td>펩타이드 탈보호에 사용</td></tr><tr><td>N-Ethyldiisopropylamine</td><td>Alfa-Aesar (영국 랭커셔)</td><td></td><td>팁 개질에 사용</td></tr><tr><td>Triethylamine</td><td>Alfa-Aesar (영국 랭커셔)</td><td></td><td>팁에 사용 수정</td></tr><tr><td>Piperidine</td><td>Alfa-Aesar (Lancashire, UK)</td><td></td> <td>팁 Fmoc 탈보호에 사용</td></tr><tr><td>Fluorenylmethyloxycarbonyl-PEG-N-hydroxysoxynimide&nbsp; (FMOC-PEG-NHS)</td><td>Iris Biotech GmbH (Deutschland, Germany)</td><td></td><td>공유 유연한 링커로 사용&nbsp; (MW = 5,000 Da)</td></tr><tr><td>2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3,-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU)</td><td>알파 아세르(영국 헤이샴)</td><td></td><td>커플링 시약으로 사용됩니다.</td></tr><tr><td>N-methyl-2-pyrrolidone (NMP)</td><td>Acros Organics (New Jersey, USA)</td><td></td><td>Tip 변형 절차에서 용매로 사용</td></tr><tr><td>DMF (dimethylformamide)</td><td>Merck (Darmstadt, Germany)</td><td></td><td>팁 변형 절차에서 용매로 사용</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Bio-Lab (이스라엘 예루살렘)</td><td></td><td>팁 변형 절차에서 용매로 사용</td></tr><tr><td>에탄올 (무수)</td><td>Gadot (이스라엘 네타니아)</td><td></td><td>팁 개질 절차에서 용매로 사용</td></tr><tr><td>Trifluoro acetic acid (TFA)</td><td>Merck (Darmstadt, Germany)Acetic</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>anhydride</td><td>Merck (Darmstadt, Germany)Peptides</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>GL Biochem (Shanghai, China).</td><td></td><td></td></tr><tr><td>페닐알라닌 및 티로신&nbsp;</td><td>Biochem (독일 다름슈타트)&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>용매 2- (2- 메 톡시 에톡시) 에탄올 (DEGME) 및 에틸 3- 에톡시 프로피오 네이트 (EEP) Applied Vision Laboratories (예루살렘, 이스라엘)의 혼합물에서 30 % TiO < 서브 > 2 < / >서브</td><td></td> (2) 분산액 (DEGME) 및 에틸 3- 에톡시 프로피오 네이트 (EEP)의 혼합물.<td></td><td> TiO2 기판 준비에 사용</td></tr><tr><td>운모 기판</td><td>TED PELLA, INC. (미국 캘리포니아주 레딩)</td><td></td><td>9.9mm 직경</td></tr></tbody></table>

단일 분자 힘 분광학을 사용하여 무기 재료와 아미노산 및 펩타이드의 상호 작용에 대한 통찰력

Insights into the Interactions of Amino Acids and Peptides with Inorganic Materials Using Single-Molecule Force Spectroscopy

단백질이나 펩티드 및 무기 물질 사이의 상호 작용은 몇 가지 흥미로운 프로세스로 이어집니다. 예를 들어, 미네랄 단백질을 결합하는 독특한 성질을 갖는 복합 재료의 형성을 이끈다. 또한,의 생물 연료의 바람직하지 못한 프로세스는 표면에 생체 분자를 주로 단백질의 흡착에 의해 개시된다. 유기층은 박테리아 접착층이고 이들 표면과 상호 작용할 수있다. 유기 - 무기 계면에서의 상호 작용을 지배하는 근본적인 힘을 이해하는 것은 연구의 많은 지역을위한 것이 중요하고, 광학 기계 및 생명 의학 애플리케이션을위한 새로운 재료의 설계가 발생할 수 있습니다. 이 논문은 펩타이드 또는 아미노산 및 잘 정의 된 무기 표면 중 하나 사이의 접착력을 측정하기 위해 AFM을 이용하는 단일 분자 힘 분광 기법을 보여준다. 이 기술은 AFM에 생체 분자를 부착하기위한 프로토콜을 포함원자력 현미경에 의해 공유가요 성 링커 및 단일 분자 힘 스펙트럼 측정을 통한 팁. 또한, 이러한 측정 분석이 포함된다.

도 1은 선단부 수정 방법을 나타낸다. 첫 번째 단계에서, 플라즈마 처리는, 질화 실리콘 팁의 표면을 변화시킨다. 끝은 OH 그룹을 제공합니다. 이러한 그룹은 실란과 반응한다. 이 단계의 마지막에, 팁의 표면 자유 -NH 2 그룹에 포함된다. 이러한 유리 아민은 FMOC -PEG-NHS, 공유 링커와 반응 할 것이다. 페그 링커 FMOC 그룹 pipyridine, 탈 보호 시약을 제거한다. 마지막으로, 검토 된 아미노산 또는 펩티드 분자는 결합 시약 HBTU를 사용하여 PEG의 유리 아민 그룹을 통해 결합된다. 수정 된 AFM 팁과 표면 (도 2)와 아미노산 또는 펩티드의 상호 작용을 조사 할 수있다. 페그 분자는 끝에서 펩타이드 나 아미노산을 분리하고 자유롭게 동양에 있습니다. ...

여기서 우리는 원 자간 력 현미경 (AFM)을 사용하여 단일 분자 힘 분광법 측정에 의해 잘 정의 된 무기 표면 중 펩티드 또는 아미노산의 상호 작용의 힘을 측정하기위한 프로토콜을 제시한다. 측정으로부터 얻어진 정보는 더 펩타이드 무기물 계면을 이해하는 것이 중요하다.

The interactions between proteins or peptides and inorganic materials lead to several interesting processes. For example, combining proteins with minerals ...

단일 분자 힘 분광법 기술의 전반적인 목표는 표면이 다른 아미노산 또는 펩타이드 간의 상호 작용의 접착력과 특성을 결정하는 것입니다. 이 문제는 표면 화학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며 새로운 복합 재료 및 척삭 현상의 개발에 사용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 단일 분자 수준에서 원하는 분자와 표면 사이의 상호 작용에 대한 정보를 제공한다는 것입니다.시작하려면 공칭 캔틸레버 반경이 2나노미터인 실리콘 팁이 장착된 질화규소 AFM 캔틸레버를 구입하십시오. 홀더에 팁을 장착합니다. 각 AFM 캔틸레버를 에탄올에 20분 동안 담궈 청소한 다음 실온에서 건조시킵니다.다음으로, 팁을 플라즈마 챔버에 넣고 캔틸레버를 5분 동안 산소 플라즈마에 노출시켜 처리합니다. 메틸트리에톡시실란 15부와 아미노 프로필트리에톡시실란 1부를 포함하는 용액을 준비하고 불활성 분위기 아래에서 용액 위로 3cm 위에 캐니틀레버를 매달아 놓습니다. 팁과 홀더가 실란 혼합물에 닿지 않는 것이 중요합니다.또한 실란은 수분에 매우 민감하므로 이러한 팁은 불활성 분위기에서 수행해야 합니다. 밀봉이 완료되면 데시케이터를 진공 펌프에 연결하고 2시간 동안 진공 청소기를 적용하여 캔틸레버 표면에 두 가지 유형의 혼합 실란 화합물의 단층을 형성합니다. 팁을 조심스럽게 제거하고 섭씨 70도로 예열된 핫 플레이트에 놓습니다.팁을 10분 동안 말리십시오. 팁을 실온에서 1시간 동안 Fmoc-PEG-NHS 용액에 담그기 전에 실온에서 식히십시오. 그런 다음 팁을 클로로포름에 5분 동안 담근 다음 DMF에 5분 더 담그십시오.DMF에서 배양 후 팁을 DMF의 20% 피페리딘 용액에 30분 동안 담궈 부착된 PEG 분자의 Fmoc 그룹을 보호합니다. 다시 말하지만, 팁을 DMF에 4분 동안 담근 다음 N-메틸-2-피롤리돈에 4분 더 담그십시오. 아미노산을 팁에 결합하려면 총 농도 30 밀리몰과 5 밀리리터의 N-메틸-2-피롤리돈 아미노산 결합 용액에 1시간 30분 동안 담그십시오.아세틸 그룹에 의해 남아 있는 유리 또는 무반응 PEG 잔류물을 보호하려면 무수아세트산 4부와 디이소프로필에틸아민 1부와 N-메틸-2-피롤리돈의 0.65몰 혼합물에 팁을 30분 동안 담그십시오. 그런 다음 펩타이드 아미노산 기능화 팁을 NMP, 클로로포름, 50% 에탄올 및 물에 각각 4분 동안 순차적으로 담그고 최종적으로 팁을 공기 중에서 건조시킵니다. 시중에서 판매되는 에폭시가 있는 AFM의 금속 홀더에 원하는 테스트 표면을 부착합니다.그런 다음 금속 홀더를 작은 페트리 접시 모양의 AFM의 유리 홀더에 넣습니다. 유리 홀더에 TRIS 버퍼를 채웁니다. 그런 다음 금속 홀더를 팁 홀더 아래의 AFM 스테이지에 놓습니다.그런 다음 AFM의 광학 유리에 AFM 팁을 장착합니다. 광학 유리 블록을 AFM 헤드에 놓습니다. 그리고 AFM 헤드를 무대에 올려놓으세요.다음으로, 나노미터당 10에서 30피코네톤의 스프링 상수로 AFM 캔틸레버를 보정합니다. 일반적인 힘 측정은 여기에 표시된 것과 같은 힘 거리 곡선을 생성합니다. 첫 번째 엿보기는 팁과 표면 사이의 비특이적 상호 작용을 나타내고 두 번째 엿보기는 특정 접착 이벤트를 나타냅니다.수백 개의 힘 거리 곡선에서 힘에 대한 접착 이벤트의 수를 표시하여 히스토그램을 구성할 수 있습니다. 이러한 히스토그램에 가우스 피팅을 적용하면 가장 가능성이 높은 힘이 결정됩니다. 이 동영상을 시청한 후에는 아미노산 또는 펩타이드로 AFM 팁을 화학적으로 변형하는 방법과 AFM을 사용하여 단일분자 힘 분광법을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

이 문서에서 우리는 높은 parallelizable 방식으로 단일 분자 수준에서 효소 proteolysis에 대한 힘의 효과를 공부하는 자기 족집게의 사용을 설명합니다.

마그네틱 족집게를 사용하여 다중 단일 분자 강제 Proteolysis 측정

셀룰로솜은 셀룰로오스를 소화하도록 설계된 다효소 복합체입니다. AFM 기반 SMFS는 셀룰로솜 관련 단백질 어셈블리의 기계적 특성과 접힘 구성을 연구하는 데 사용되었습니다. 우리는 셀룰로솜 조립에 관여하는 개별 수용체-리간드 복합체의 상호 작용을 연구하기 위해 단백질 고정화, 데이터 수집 및 데이터 분석을 위한 완전한 워크플로우를 제시합니다.

AFM 기반 Single-molecule Force Spectroscopy를 사용한 셀룰로솜의 수용체-리간드 시스템 조사

다양한 단일 분자를 AFM 팁에 공유 결합하는 프로토콜이 제시됩니다. 고체 지지체 및 생체 계면에서 이러한 분자의 접착력과 자유 에너지를 결정하기 위한 절차와 예가 제공됩니다.

원자 힘 분광학에 의해 단일 ​​분자 접착 조사

우리는 상세한 절차 및 전략 기계적 특성 및 기계적 전개 경로 원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자의 측정을 설명 합니다. 우리는 또한 선택과 좋은 단일 단백질 분자 기록의 정당성에 대 한 참조로 대표적인 결과 보여줍니다.

원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자 힘 분광학

이 프로토콜에 설명 합니다 heterobifunctional 실 란 커플링 에이전트와 원자 힘 현미경 검사 법 기반 단일 분자 힘 분광학을 위한 실리콘 산화물 표면에 의해 궁 행 되는 단백질의 화학식 동원 정지는 RrgA의 상호 작용 (pilus-1 팁 adhesin의 S. 균) fibronectin 함께.

단일 분자 힘 분광학에 대 한 단백질의 화학식 동원 정지

우리는 개시 및 발달과 밀접하게 연관되는 올리고머 응집체 및 아밀로이드 섬유로 단백질 자기 조립의 과정을 구상하기 위하여 적외선 나노 스펙트로스카 및 고해상도 원자력 현미경 검사법의 응용을 기술합니다 인간의 신경 퇴행성 질환의 넓은 범위의.

적외선 나노 스펙트로펙트 및 원자력 현미경으로 개별 단백질 응집체 특성화

여기에서, 우리는 통제된 순서로 단백질 중합체를 형성하는 효소에 의해 단백질 단량체를 융합하고 단 분자 힘 분광법 연구를 위한 표면에 그것을 고정화하는 프로토콜을 제시합니다.

단일 분자 힘 분광학을 위한 OaAEP1 중재된 효소 합성 및 중합단백질의 고정화

원자력 현미경 검사법 (AFM) 캔틸레버 팁에 프로브 분자의 공유 부착은 물리적 특성의 조사를위한 필수적인 기술입니다. 이를 통해 높은 재현성을 가진 AFM 기반 단일 분자 힘 분광학을 통해 연신력, 탈착력 및 폴리머 길이를 결정할 수 있습니다.

AFM 기반 힘 분광학을 위한 단일 분자의 공유 부착

앙상블 힘 분광법(EFS)은 생물물리학 및 생물감지 분야에서 생체 분자 구조의 앙상블 세트의 기계적 풀림 및 실시간 감지를 위한 강력한 기술입니다.

전단력에 의한 앙상블 힘 분광법

플라즈몬 나노핀셋은 금 나노 구조에서 국부적인 표면 플라즈몬 공명을 사용하여 나노미터 규모의 광학 필드 내에서 단백질을 포함한 단일 나노 입자를 가둡니다. 산란 신호의 변화는 단백질의 존재와 구조적 역학을 드러내므로 형광단 변형이나 표면 테더링 없이 모니터링할 수 있습니다.

플라즈모닉 나노핀셋을 사용한 단일 비변형 단백질의 구조적 역학 모니터링

배우세요 단일 분자 힘 분광학을 사용하여 아미노산 및 펩타이드와 무기 재료 표면 간의 접착력을 측정하는 방법을. AFM을 활용한 이 기술은 표면 화학 및 신소재 개발 연구에 필수적인 분자 수준 상호작용 정보를 제공합니다.

단일 분자 힘 분광학을 사용하여 무기 재료와 아미노산 및 펩타이드의 상호 작용에 대한 통찰력

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