당뇨병 쥐의 부고환 지방 세포에 이식 된 지지체 지지대 지지대

여러분 안녕하세요, 저는 북경대학교 의생명공학과 Dr.Lowe 연구실의 Kai Wang입니다. 현재 제1형 당뇨병 환자는 주로 인슐린 주사로 치료를 받고 있는데, 이는 섬에서 분비되는 인슐린 분비를 완벽하게 시뮬레이션하지 못합니다. 잃어버린 섬을 섬 운송으로 대체하면 심한 변동 없이 안정적인 혈당 조절을 보여줄 수 있습니다.

그러나 많은 수의 고품질 섬을 생산해야 하는 요구 사항과 낮은 생착 효율성으로 인해 광범위한 임상 사용이 위태로워졌습니다. 오늘은 섬 격리 과정과 당뇨병 마우스의 부고환 지방 패드에 골격이 지지되는 섬을 이식하는 과정을 보여 드리겠습니다. 이러한 단계를 수행하려면 조직 구조에 대한 충분한 지식과 수술을 수행할 수 있는 숙련된 손이 필요합니다.

전신에 에탄올을 뿌린다. 생식기 부위부터 V자형 절개를 합니다. 마우스의 오른쪽을 통해 장을 제거합니다.

문맥과 담관을 지혈 클램프로 고정합니다. 집게로 십이지장을 조심스럽게 잡고 담관이 가르칠 때까지 십이지장을 당깁니다. 앰풀라를 통해 총담관에 정맥 주사 바늘을 삽입합니다.

초지혈 클램프를 사용하여 바늘이 포함된 덕트 세그먼트를 고정합니다. 콜라겐 용액을 느리고 일정한 속도로 분배하십시오. 췌장을 완전히 팽창시킨 후 마우스의 왼쪽을 통해 장을 밀어 넣습니다.

췌관이 완전히 팽창된 것을 볼 수 있습니다. 하강하는 결장의 끝을 시작하여 췌장을 제거합니다. 집게를 사용하여 장을 들어 올리고 다른 집게로 췌장에서 분리합니다.

췌장이 위 상단에서 분리될 때까지 췌장을 계속 제거합니다. 마지막으로 복부에서 췌장을 들어 올려 나머지 비장에서 잘라냅니다. 원뿔형 튜브에 췌장을 넣고 얼음으로 분만합니다.

관류된 췌장을 배양합니다. 중화 용액을 첨가하여 소화를 종료합니다. 튜브를 세게 흔들어 두 수프를 분리하십시오.

와이어 메쉬를 통해 소화 조직 샘플을 필터링합니다. 섬 현탁액을 새로운 원뿔형 튜브에 모으십시오. 튜브를 원심분리하십시오.

조직 팔레트를 방해하지 않고 상층액을 조심스럽게 붓습니다. Histopaque로 현탁액을 몇 번 위아래로 피펫팅하여 팔레트를 다시 현탁시킵니다. HBSS를 튜브 측면에서 Histopaque 용액의 상단까지 천천히 피펫팅합니다.

두 솔루션은 날카로운 인터페이스로 잘 분리된 레이어여야 합니다. 서스펜션을 20분 동안 원심분리합니다. 대부분의 섬은 Histopaque 및 HBSS 층의 인터페이스로 이동합니다.

전체 상등액을 제거하고 용액을 거꾸로 된 스트레이너에 통과시킵니다. 섬은 여과기에 의해 유지됩니다. 섬을 유지하는 표면을 용액에 담그고 부드럽게 흔들어 섬을 풀어줍니다.

현미경으로 고립된 섬을 직접 선택하십시오. 작은 섬을 모아 새로운 문화 접시에 담으세요. 담관을 둘러싼 조직이 팽창하기 시작하면 바늘이 담관 벽을 통과한다는 의미입니다.

바늘의 위치를 조정하고 담관을 다시 캐뉼레이트해야 합니다. 용액이 췌장을 채우면 십이지장 근처의 조직이 먼저 팽창하고 췌장 꼬리 근처의 영역이 다음으로 팽창합니다. 여기에 파란색 얼룩이 있는 것처럼 십이지장이 팽창하기 시작하면 동맥 클램프를 조정하고 담관을 다시 고정합니다.

마우스를 누운 위치에 놓습니다. 복부를 면도하십시오. 그런 다음 요오드포로 면봉을 사용하여 피부를 살균합니다.

멸균 드레이프로 마우스를 덮습니다. 생식기 부위에 가까운 중앙의 복막벽을 통해 작게 절개합니다. 복강에서 부고환 지방 패드를 부드럽게 잡아 당겨 빼냅니다.

젖은 거즈에 지방 패드를 펴 바릅니다. 뚱뚱한 패드 위에 작은 섬이 들어있는 골격을 놓고 뚱뚱한 패드를 접어 이식을 감쌉니다. 뚱뚱한 패드에 캡슐화된 섬을 고정하기 위해 뚱뚱한 패드를 봉합합니다.

지방 패드를 복강에 부드럽게 다시 놓습니다. 복막벽을 봉합하여 마우스를 닫습니다. 상처 클립으로 진피층을 고정합니다.

적당량의 진통제와 항생제를 피하로 주사합니다. 새로 고립된 섬들은 전형적으로 광학 현미경 하에서 거친 주변부를 가지고 있었다. 일단 섬들이 격리 과정에서 회복되자, 그것들은 밝고 단단해 보였으며 매끄러운 표면을 얻었다.

계산된 평균 섬 지름은 약 130마이크로미터였다. 감속된 스캐폴드는 핀셋으로 처리할 수 있을 만큼 기계적으로 견고합니다. 그런 다음 다공성 골격으로 지지된 섬을 스프레드 지방 패드의 표면으로 옮긴 다음 지방 패드에 의해 캡슐화했습니다.

syngeneic 이식 모델에서는 일반적으로 500개의 섬이 10일 이내에 저혈당증을 역전시킵니다. 이식편을 채취하기 전까지 약 100일 이전에 정상 혈당이 유지되었습니다. 조직학적 연구에 따르면 섬은 혈관화되어 지방 패드 조직과 골격으로 둘러싸여 있습니다.

이 비디오를 시청한 후 연습을 통해 섬의 격리 및 운송과 관련된 주요 단계를 배워야 합니다. 첫째, 총담관을 캐뉼러링하고 췌장을 확장하는 것이 이 프로토콜에서 가장 어려운 부분입니다. 둘째, 불완전한 캡슐화로 인해 이식이 실패할 수 있으므로 섬이 있는 골격을 지방 패드로 완전히 캡슐화합니다.