Name: 접종 아노 펠 레스 gambiae 모기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: 배우세요 모기 면역 반응을 자극하고 멜라닌화 반응을 정량적으로 측정하는 기법을 Anopheles gambiae에서. 이 방법은 생태면역학 연구와 무척추동물 면역 체계 이해에 활용됩니다.

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이 연구는 뉴샤텔 대학의 자금 지원을 통해 가능했습니다. 이 기술을 개선하는 데 도움을 주신 모든 학생들, 즉 동료 Kevin Thievent에게 감사드립니다. 또한 실험실을 사용할 수 있도록 해주신 Thomas Lab 구성원들께도 감사드립니다. 모기 사육에 도움을 주신 Janet Teeple에게 감사드립니다. 또한 마이크로 모세관 유리관 준비에 도움을 주신 Tom Baker 교수의 실험실에 있는 Loyal Hall에게도 감사드립니다.

사출 및 해부 1. 생리 식염수 <ol><li> pH는 6.8에서 1.3 밀리미터의 NaCl, 0.5 mM의 KCl을, 0.2 mM의 CaCl2를 얻기를 증류수에 염화나트륨, KCl을하고, CaCl2를 첨가하여 염 용액을 제조 하였다. </li><li> 투명 구슬 색으로 식염수 99 ㎖의 0.1 % 메틸 그린 용액 1 ㎖를 추가한다. 이는 0.001 % 메틸 그린 &quot;주사액&quot;이다. </li><li> 이어서, 생리 식염수 45 ㎖의 0.1 % 메틸 그린 용액 5 mL를 추가한다. 이 0.01 % 메틸 그린 &quot;해부 솔루션은&quot;해부 동안 구슬의 착색과 관찰을 용이하게하기 위해 10 배 더 집중 메틸 녹색이다. 주 : 필요한 경우, 필터 버퍼 살균. </li></ol> 2. 모세관 준비 <ol><li> 열 풀 마이크로 캐 필러 유리 튜브는 작은 구슬 (φ = 40 μm의) (42)보다 약간 더 큰 아주 좋은 팁을 얻을 수있다. </li><li> 열기와핀셋 팁을 파괴하거나 팁을 절단하여 각 모세관을 djust. </li></ol> 3. 모기 양육 <ol><li> 26 ± 1 ° C에서 후면 A.의 gambiae, 70 ± 5 %의 상대 습도 및 12시 12분 시간 등 : 어두운주기. 성인 여성을 유지하고 그들에게 10 % 설탕 용액에 액세스 할 수 있습니다. </li></ol> 모세관 4. 비드 선택 <ol><li> 5cm의 페트리 접시에 음전하 구슬 (직경 40 ~ 120 μm의)의 0.009 g을 붓고 미리 주사액 30 분 5 ㎖를 추가합니다. 주 : 목표 염료 쉽게 주입 비드 선택을 위해 비드를 색칠하게한다. 그들은 무균 항아리에 오지 않는 경우 구슬을 압력솥. </li><li> 모세관 피펫 벌브에 장착 된 모세관을 사용하여 시각적으로 쌍안 현미경 식염수 용액 0.1 μL의 작은 비드를 선택한다. 참고 : 동시에 여러 구슬을 접종하면, 0.1 μL의 총 볼륨에서 세 개의 구슬을 선택합니다.</li></ol> 5. 모기 취급 및 예방 접종 <ol><li> 곤충 흡입기를 사용하여, 50 ML 튜브 각 모기를 놓습니다. </li><li> 분쇄 된 얼음 (2-5 분)에 튜브를 배치하여 간단히 각 모기를 진정. </li><li> 양안 현미경으로 우측으로 모기를 놓습니다. </li><li> 실체 현미경 하에서 단단히 흉강 표피의 좌측을 관통하고 액체와 비드 주입 모세관과 모기 접종. 참고 : 가능한 한 모기에 같이 수직으로 모세관을 잡고 비행 근육이 손상되지 않도록주의하십시오. </li><li> 모세관을 제거합니다. </li><li> 페더급 곤충학의 집게를 사용하여, 개별적으로 모기 그물로 덮여 180 ml의 플라스틱 컵에 각각의 여성을 배치; 그들에게 10 % 설탕 용액에 액세스 할 수 있습니다. 참고 : 모기가 설탕 용액 상품에 붙어받을 수 있으므로주의, 설탕 솔루션이 필요합니다. </li></ol> 6. 모기해부 및 구슬 사진 <ol><li> 모기가 24 시간 접종 후 살아 있는지 확인합니다. 그렇다면, 자신의 상태를 확인하고 비행 할 수 있습니다 만 모기를 유지합니다. </li><li> -20 ° C에서 이러한 모기를 고정. 참고 : 필요한 경우 그들은 해부하기 전에 달에 며칠을 유지할 수있다. </li><li> 32X 배율 쌍안 현미경 핀셋을 사용하여 모기 날개를 제거합니다. 투명 테이프와 유리 슬라이드에 날개를 고정합니다. 각 개별 모기에 사용되는 코드를 기록합니다. </li><li> 스캐너에서 유리 슬라이드를 넣고 1,200 dpi로를 검사합니다. 참고 : 코드는 각 개별 모기에 대한 읽을 수 있는지 확인합니다. </li><li> 유리 현미경 슬라이드와 해부 용액에, 머리와 복부에서 흉부를 분리하는 집게를 사용합니다. </li><li> 구슬을 검색하기 위해 집게와 흉부를 엽니 다. 주 : 비즈 복부로 이동하지 않는, 서로 접촉하지 않으며 대부분은 t 자유롭게 떠그는 체액. 비 흑화 구슬을 찾기 힘들 수 있으므로, 포셉으로 구슬을 깰하지 않도록주의하십시오. 비즈 색상을 얻기 위해 1 ~ 5 분 동안 기다립니다. </li><li> 사진을 촬영하기 전에, 유리 현미경 슬라이드에 해부 솔루션의 방울에 구슬을 전송합니다. 참고 : 구슬을 세척 할 필요가 없습니다. </li><li> 카메라가 장착 된 현미경을 사용하여, 표준 조명 세팅 및 400X 배율로 각 입자의 디지털 이미지를 촬영. 참고 : 자신의 비교를 가능하게하기 위해 다른 사진 사이의 조명을 변경하지 마십시오. </li></ol> 7. 사진 분석 : 구슬 Melanization <ol><li> 이미지 분석 소프트웨어를 엽니 다. &quot;파일&quot;을 클릭 한 후 &quot;열기&quot;에 구슬 이미지를 찾을 수 있습니다. </li><li> 를 클릭 &quot;분석 할 수 있습니다.&quot; 를 클릭 &quot;설정 측정.&quot; 은 &quot;세트 측정&quot;창에서 &quot;회색 값을 의미한다&quot;상자을 선택합니다. </li><li> 원형 선택 도구 아이콘을 클릭합니다. 비드 둘레를 선택; 유지비드를 좌우하고 주변의 빛나는 후광을 피하십시오. </li><li> 은 &quot;분석&quot;메뉴를 클릭합니다. 를 클릭 &quot;측정.&quot; 비드의 단면적의 평균 그레이 값과 크기를 얻었다. <ol><li> &quot;- 그레이 평균값 256.&quot;각 비드 melanization 값을 얻기 위해, 계산기 또는 계산 소프트웨어를 사용하여 다음과 같은 동작을 수행 melanization 측정 값 0은 완전히 흰색 이미지로 나타내는 0 ~ 256 사이의 값이다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Dong, Y., Aguilar, R., Xi, Z., Warr, E., Mongin, E., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anopheles+gambiae+immune+responses+to+human+and+rodent+Plasmodium+parasite+species%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathog%22%5BJournal%5D)">Anopheles gambiae immune responses to human and rodent Plasmodium parasite species.</a> PLoS pathog. 2 (6), e52(2006).</li>
<li>Sadd, B. M., Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PERSPECTIVE%3A+Principles+of+ecological+immunology%5BTitle%5D)+AND+%22Evolutionary+Appl%22%5BJournal%5D)">PERSPECTIVE: Principles of ecological immunology.</a> Evolutionary Appl. 2 (1), 113-121 (2008).</li>
<li>Crompton, P. D., Moebius, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malaria+Immunity+in+Man+and+Mosquito%3A+Insights+into+Unsolved+Mysteries+of+a+Deadly+Infectious+Disease%2A%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immuno%22%5BJournal%5D)">Malaria Immunity in Man and Mosquito: Insights into Unsolved Mysteries of a Deadly Infectious Disease*.</a> Annu Rev Immuno. 32 (1), 157-187 (2014).</li>
<li>Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EVOLUTIONARY+ECOLOGY+OF+INSECT+IMMUNE+DEFENSES%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Entomol%22%5BJournal%5D)">EVOLUTIONARY ECOLOGY OF INSECT IMMUNE DEFENSES.</a> Annu Rev Entomol. 50 (1), 529-551 (2005).</li>
<li>Hillyer, J. F., Schmidt, S. L., Christensen, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+phagocytosis+and+melanization+of+bacteria+and+Plasmodium+sporozoites+by+hemocytes+of+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22J+parasito%22%5BJournal%5D)">Rapid phagocytosis and melanization of bacteria and Plasmodium sporozoites by hemocytes of the mosquito Aedes aegypti.</a> J parasito. 89 (1), 62-69 (2003).</li>
<li>Carissimo, G., Pondeville, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+immunity+of+Anopheles+gambiae+is+highly+compartmentalized%2C+with+distinct+roles+for+RNA+interference+and+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Antiviral immunity of Anopheles gambiae is highly compartmentalized, with distinct roles for RNA interference and gut microbiota.</a> PNAS. 112 (2), E176-E185 (2015).</li>
<li>Christensen, B. M., Li, J., Chen, C. -C., Nappi, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanization+immune+responses+in+mosquito+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+parasito%22%5BJournal%5D)">Melanization immune responses in mosquito vectors.</a> Trends parasito. 21 (4), 192-199 (2005).</li>
<li>Collins, F., Sakai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+selection+of+a+Plasmodium-refractory+strain+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genetic selection of a Plasmodium-refractory strain of the malaria vector Anopheles gambiae.</a> Science. 234 (4776), 607-610 (1986).</li>
<li>Warr, E., Lambrechts, L., Koella, J. C., Bourgouin, C., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anopheles+gambiae+immune+responses+to+Sephadex+beads%3A+Involvement+of+anti-Plasmodium+factors+in+regulating+melanization%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">Anopheles gambiae immune responses to Sephadex beads: Involvement of anti-Plasmodium factors in regulating melanization.</a> Insect Biochem Molec. 36 (10), 769-778 (2006).</li>
<li>Fuchs, S., Behrends, V., Bundy, J. G., Crisanti, A., Nolan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenylalanine+metabolism+regulates+reproduction+and+parasite+melanization+in+the+malaria+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Phenylalanine metabolism regulates reproduction and parasite melanization in the malaria mosquito.</a> PloS one. 9 (1), e84865(2014).</li>
<li>Cerenius, L., Söderhäll, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prophenoloxidase-activating+system+in+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Immuno+Rev%22%5BJournal%5D)">The prophenoloxidase-activating system in invertebrates.</a> Immuno Rev. 198, 116-126 (2004).</li>
<li>Cerenius, L., Lee, B. L., Söderhäll, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+proPO-system%3A+pros+and+cons+for+its+role+in+invertebrate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Immuno%22%5BJournal%5D)">The proPO-system: pros and cons for its role in invertebrate immunity.</a> Trend Immuno. 29 (6), 263-271 (2008).</li>
<li>Moret, Y., Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMoret%2C+Y+%22Survival+for+immunity%3A+the+price+of+immune+system+activation+for+bumblebee+workers%22">Survival for immunity: the price of immune system activation for bumblebee workers</a>. , Science. New York, N.Y. 1166-1168 (2000).</li>
<li>Suwanchaichinda, C., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Larval+Nutrition%2C+Adult+Body+Size%2C+and+Adult+Temperature+on+the+Ability+of+Anopheles+gambiae%28Diptera%3A+Culicidae%29+to+Melanize+Sephadex+Beads%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Effects of Larval Nutrition, Adult Body Size, and Adult Temperature on the Ability of Anopheles gambiae(Diptera: Culicidae) to Melanize Sephadex Beads.</a> J Med Entomol. 35 (2), 157-161 (1998).</li>
<li>Chun, J., Riehle, M., Paskewitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Mosquito+Age+and+Reproductive+Status+on+Melanization+of+Sephadex+Beads+in+Plasmodium-Refractory+and+-Susceptible+Strains+of+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Effect of Mosquito Age and Reproductive Status on Melanization of Sephadex Beads in Plasmodium-Refractory and -Susceptible Strains of Anopheles gambiae.</a> J Invertebr Pathol. 66 (1), 11-17 (1995).</li>
<li>Schwartz, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanization+of+Plasmodium+falciparum+and+C-25+Sephadex+Beads+by+Field-Caught+Anopheles+gambiae+%28Diptera%3A+Culicidae%29+from+Southern+Tanzania%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Melanization of Plasmodium falciparum and C-25 Sephadex Beads by Field-Caught Anopheles gambiae (Diptera: Culicidae) from Southern Tanzania.</a> J Med Entomol. 39 (1), 84-88 (2002).</li>
<li>Zahedi, M., Denham, D. A., Ham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+and+melanization+responses+of+Armigeres+subalbatus+against+inoculated+Sephadex+beads%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Encapsulation and melanization responses of Armigeres subalbatus against inoculated Sephadex beads.</a> J Invertebr Pathol. 59 (3), 258-263 (1992).</li>
<li>Laughton, A. M., Garcia, J. R., Altincicek, B., Strand, M. R., Gerardo, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+immune+responses+in+the+pea+aphid%2C+Acyrthosiphon+pisum%5BTitle%5D)+AND+%22J+insect+physiol%22%5BJournal%5D)">Characterisation of immune responses in the pea aphid, Acyrthosiphon pisum.</a> J insect physiol. 57 (6), 830-839 (2011).</li>
<li>Barreaux, A. M. G., Barreaux, P., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overloading+the+immunity+of+the+mosquito+Anopheles+gambiae+with+multiple+immune+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite+Vector%22%5BJournal%5D)">Overloading the immunity of the mosquito Anopheles gambiae with multiple immune challenges.</a> Parasite Vector. 9 (1), 210(2016).</li>
<li>Lazzaro, B. P., Rolff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danger%2C+Microbes%2C+and+Homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Danger, Microbes, and Homeostasis.</a> Science. 332 (6025), 43-44 (2011).</li>
<li>Arrighi, R. B. G., Faye, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+GPI+toxin%3A+a+common+foe+for+man+and+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+trop%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum GPI toxin: a common foe for man and mosquito.</a> Acta trop. 114 (3), 162-165 (2010).</li>
<li>Michel, K., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+immunity+against+Plasmodium%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">Mosquito immunity against Plasmodium.</a> Insect Biochem Molec. 35 (7), 677-689 (2005).</li>
<li>Osta, M. A., Christophides, G. K., Vlachou, D., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+in+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%3A+comparative+and+functional+genomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Innate immunity in the malaria vector Anopheles gambiae: comparative and functional genomics.</a> J Exp Biol. 207 (15), 2551-2563 (2004).</li>
<li>Christophides, G. K., Vlachou, D., Kafatos, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+and+functional+genomics+of+the+innate+immune+system+in+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Comparative and functional genomics of the innate immune system in the malaria vector Anopheles gambiae.</a> Immunol Rev. 198 (1), 127-148 (2004).</li>
<li>Blair, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+RNAi+is+the+major+innate+immune+pathway+controlling+arbovirus+infection+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Future+microbiol%22%5BJournal%5D)">Mosquito RNAi is the major innate immune pathway controlling arbovirus infection and transmission.</a> Future microbiol. 6 (3), 265-277 (2011).</li>
<li>Fragkoudis, R., Attarzadeh-Yazdi, G., Nash, A. A., Fazakerley, J. K., Kohl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+dissecting+mosquito+innate+immune+responses+to+arbovirus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Advances in dissecting mosquito innate immune responses to arbovirus infection.</a> J Gen Virol. , (2009).</li>
<li>Schwartz, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cost+of+immunity+in+the+yellow+fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti+depends+on+immune+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+evol+biol%22%5BJournal%5D)">The cost of immunity in the yellow fever mosquito, Aedes aegypti depends on immune activation.</a> J evol biol. 17 (4), 834-840 (2004).</li>
<li>Lambrechts, L., Vulule, J. M., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+correlation+between+melanization+and+antibaterial+immune+responses+in+a+natural+population+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Genetic correlation between melanization and antibaterial immune responses in a natural population of the malaria vector Anopheles gambiae.</a> Evolution. 58 (10), 2377(2004).</li>
<li>Boete, C., Paul, R. E. L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+immunosuppression+by+a+malaria+parasite+in+its+mosquito+vector%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect immunosuppression by a malaria parasite in its mosquito vector.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 271 (1548), 1611-1615 (2004).</li>
<li>Sacks, D., Sher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evasion+of+innate+immunity+by+parasitic+protozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+immunol%22%5BJournal%5D)">Evasion of innate immunity by parasitic protozoa.</a> Nat immunol. 3 (11), 1041-1047 (2002).</li>
<li>Zambrano-Villa, S., Rosales-Borjas, D., Carrero, J. C., Ortiz-Ortiz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+protozoan+parasites+evade+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Parasito%22%5BJournal%5D)">How protozoan parasites evade the immune response.</a> Trend Parasito. 18 (6), 272-278 (2002).</li>
<li>Damian, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasite+immune+evasion+and+exploitation%3A+reflections+and+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology%22%5BJournal%5D)">Parasite immune evasion and exploitation: reflections and projections.</a> Parasitology. 115, S169-S175 (1997).</li>
<li>Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasite+immune+evasion%3A+a+momentous+molecular+war%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+ecol+evol%22%5BJournal%5D)">Parasite immune evasion: a momentous molecular war.</a> Trend ecol evol. 23 (6), 318-326 (2008).</li>
<li>Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+defence%2C+parasite+evasion+strategies+and+their+relevance+for+%26%2334%3Bmacroscopic+phenomena%26%2334%3B+such+as+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Immune defence, parasite evasion strategies and their relevance for &#34;macroscopic phenomena&#34; such as virulence.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 364 (1513), 85-98 (2009).</li>
<li>Stearns, S. C., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+phenotypic+plasticity+in+life+history+traits-+predictions+of+reaction+norms+for+age+and+size+at+maturity%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">The evolution of phenotypic plasticity in life history traits- predictions of reaction norms for age and size at maturity.</a> Evolution. 40 (5), 893-913 (1986).</li>
<li>Stearns, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life-history+tactics%3A+a+review+of+the+ideas%5BTitle%5D)+AND+%22Q+rev+biol%22%5BJournal%5D)">Life-history tactics: a review of the ideas.</a> Q rev biol. 51 (1), 3-47 (1976).</li>
<li>Valtonen, T. M., Kleino, A., Ramet, M., Rantala, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Starvation+Reveals+Maintenance+Cost+of+Humoral+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Biol%22%5BJournal%5D)">Starvation Reveals Maintenance Cost of Humoral Immunity.</a> Evol Biol. 37 (1), 49-57 (2010).</li>
<li>Sheldon, B. C., Verhulst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+immunology%3A+costly+parasite+defences+and+trade-offs+in+evolutionary+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Ecol+Evo%22%5BJournal%5D)">Ecological immunology: costly parasite defences and trade-offs in evolutionary ecology.</a> Trend Ecol Evo. 11 (8), 317-321 (1996).</li>
<li>Graham, A. L., Allen, J. E., Read, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+causes+and+consequences+of+immunopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Ecol+Evol+S%22%5BJournal%5D)">Evolutionary causes and consequences of immunopathology.</a> Annu Rev Ecol Evol S. 36, 373-397 (2005).</li>
<li>Best, A., Long, G., White, A., Boots, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+implications+of+immunopathology+for+parasite+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The implications of immunopathology for parasite evolution.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 279 (1741), 3234-3240 (2012).</li>
<li>Cator, L. J., George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((34%3BManipulation%26%2334%3B+without+the+parasite%3A+altered+feeding+behaviour+of+mosquitoes+is+not+dependent+on+infection+with+malaria+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">34;Manipulation&#34; without the parasite: altered feeding behaviour of mosquitoes is not dependent on infection with malaria parasites.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 280 (1763), 20130711(2013).</li>
<li>Voordouw, M. J., Lambrechts, L., Koella, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+maternal+effects+after+stimulation+of+the+melanization+response+in+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Oikos%22%5BJournal%5D)">No maternal effects after stimulation of the melanization response in the yellow fever mosquito Aedes aegypti.</a> Oikos. 117 (8), 1269-1279 (2008).</li>
<li>Paskewitz, S., Riehle, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+Plasmodium+refractory+and+susceptible+strains+of+Anopheles+gambiae+to+inoculated+Sephadex+beads%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+comp+immunol%22%5BJournal%5D)">Response of Plasmodium refractory and susceptible strains of Anopheles gambiae to inoculated Sephadex beads.</a> Dev comp immunol. 18 (5), 369-375 (1994).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

이 주입 기술은 자극하고 모기에 melanization 응답을 연구하는 데 유용합니다. 예를 들어, 우리가 면역 자극 부하의 효과를 연구 하였다. 이 절차의 중요한 단계가 제대로 모기을 접종하는 것입니다. 비행 근육 또는 모기 자체에 과도한 손상 공급에서 모기를 방지하거나 절개 전에 죽일 수 있습니다. 두 번째 중요한 단계 그들을 죽이지 않고 그들을 제압 할만큼 오래 얼음에 모기를 유지하는 것입니다. 작은 용기는 용이하고 얼음과 가까이 접촉 가능 같은 과정을 빠르게한다. 핀셋 그렇지 않으면 구슬을 깰 수 있습니다 마지막으로, 특별한주의가 해부하는 동안 필요합니다. 더 많은 시간이 걸릴 수 있습니다 모기 조직에 포함 된 구슬은 해부 솔루션에 의해 착색된다. 그들은 해요로 (같은 중립적, 긍정적으로 또는 부정적으로 충전 구슬, 유리 구슬), 다른 결과로 이어질 것입니다 구슬의 여러 종류를 사용하여바깥 모두 같은 정도 2...

자신의 표피 또는 중장 상피 (4)를 통해 위반 3 - 곤충 기생충과 병원균 일에 대해 자신을 보호하는 면역 반응에 의존한다. 모기, 이러한 반응은 박테리아 5, 바이러스 6, filarial 선충 (7), 말라리아 기생충 1,8,9에 대한 효율적입니다. 12 - 모기에서 중요한 면역 반응 멜라닌 10 이물질이 밀봉된다. (12) -이 캡슐은 중장 또는 시스템 (10)을 순환 체액에 발생할 수 있습니다. 이 melanization 응답 친 phenoloxidase 결과 10 캐스케이드 - (12), 그리고 기생충의 사망 또는 식세포 작용을 초래할 수있다. 혈구 세포의 수를 제한 성인 모기에 melanization은 말라리아 기생충 또는 filarial 선충 7에 대해 같은 체액 성 반응이다.다른 곤충에서는 직접 7 melanize하는 기생충의 주위에 모이는 혈구 세포입니다. 또한, 멜라닌은 계란 생산 및 표피의 상처는 7 치유와 같은 여러 가지 다른 생리 학적 과정에 필수적이다. 18 - 면역 반응의 자극은 여러 농업과 공중 보건 모델 시스템 (13)에 곤충 내성을 연구하는 도구로 사용된다. 16, 19 -이 호스트 기생충 상호 작용 (14)를 공부 아노 펠 레스의 gambiae 모기, 아프리카에서 말라리아의 주요 벡터를 사용한다. 이러한 기술들은 패턴 인식 수용체 (PRR) 2 기생충을 검출하는 곤충의 용량에 기초한다. 모기는 또한 병원균 관련 분자 패턴 (PAMPs가) 그들의 생물학을 방해하는 다른 분자를 검출하거나, 콜라겐과 핵산의 출시로 인해 자신의 손상된 세포를 검출 할 수있다. 모기 면역 세포23 - 등의 혈구 세포 등의 검출 (20)에 사용됩니다. 주요 면역 신호 전달 경로는 IMD, 수신자, JAK / STAT (24)과 리보 핵산 간섭 (RNAi의) 25, 26. 유료 및 IMD 경로 모두 melanization 응답에 영향을 미치는와 프로 phenoloxidase와 상호 작용하는 10 계단식 - 12. melanization 반응을 촉진하는 데 사용되는 표준 도구 흉강의 체액에 작은 비드 모기 접종이다. 멜라닌 캡슐화도는 모기의 절개를 통해 검색 한 후 비드 (19)를 측정 할 수있다. 대부분의 연구에서, 하나의 비드 모기 15,16,27 당 주입하지만, 더 비드를 주입하면 melanization 응답 (19)의 한계를 연구하기 위해 가능하다. 이러한 비드 모기 생리 방해를 제한하기 위해 주입 용액 (생리적 혈청)를 사용하여 주입되고모기 15,16,27의 탈수. 염료는 비드 선택을 쉽게하기 위해이 용액에 첨가된다. 이 비드 15,16,27을 검색하는 데 사용되는 박리 액에 대해 동일하다. 비병원성 자극 곤충 접종의 장점은 면역 반응에 대한 직접적인 효과에 집중하는 능력이다. 31, 또는 면역 회피 - 31 - 34 인해 기생충 병원성 (28), 면역 억제 (29)을 더 복잡하게 효과가 없습니다. 또한, 이러한 수명이나 생식력과 같은 다른 생활 역사 특성,에 자극의 결과도 연구 할 수있다. 따라서, 진화 생태학을 공부하는 연구자들은 이러한 도구 2,35,36이 필요할 수 있습니다. 예를 들어, 면역 도전 땅벌은 기아에서 단축 된 수명을 가지고있다. 면역 자극 및 배포 유사 부정적인 영향은 종종 짧은 결과, 다른 무척추 동물 모델에서 관찰되었다어 수명 이하 생식 성공 13,27,37. 이러한 연구는 다양한 환경 2,4,38에서 수행 될 수있다. 면역을 자극하면 면역 병리 (39, 40)에 직접 초점을 맞추고 그 관심이다. 이 프로토콜은 melanization 반응을 자극하고 직접 멜라닌의 양을 측정하는 모기 비드의 접종에 기초한다. 이것은 다른 실험 설정에서 melanization 응답의 양적 및 질적 연구를 할 수 있습니다. 이러한 도구는 예하는 항균 응답 등의 다른 면역 반응의 자극을 연장 할 수있는 박테리아 (41)를 가열 킬드. 또한 많은 생태 설정에서 수행 될 수있다.

<table><tbody><tr><td>마이크로 모세관 유리관 GB120TF-10</td><td>science-products.com</td><td>GB120TF-10</td><td>http://www.science-products.com/Products/CatalogG/Glass/Glass.html</td></tr><tr><td>마이크로 커패시터 모세관 피펫 전구</td><td>Drumond</td><td>1-000-9000</td><td></td></tr><tr><td>음전하 Sephadex CM C-25 비드</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany</td><td>C25120 SIGMA</td><td>는 메틸 그린</td></tr><tr><td></td><td>을 시작하는 데 몇 가량이 필요합니다.Sigma-Aldrich</td><td>323829 ALDRICH</td>는 Software ImageJ opensource <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>버전 1.47f7 이상을</td></tr> 시작하는 데 거의 필요하지 않습니다</tbody></table>.

접종<em&gt; 아노 펠 레스 gambiae</emmelanization 면역 반응을 유도하고 측정하는 비즈&gt; 모기

Inoculating Anopheles gambiae Mosquitoes with Beads to Induce and Measure the Melanization Immune Response

면역 반응의 자극 효과와 면역 메커니즘을 조사하기 무척추 동물 연구에서 일반적인 도구입니다. 입자는 면역 시스템에 의해 감지되고 면역 이펙터의 생산을 유도하므로 본 자극, 곤충에 비병원성 입자의 주사에 기초한다. 우리는 모기 아노 펠 레스 gambiae에서 melanization 반응의 자극에 여기에 초점을 맞추고있다. 멜라닌의 어두운 층 이물질과 기생충의 캡슐화의 melanization 응답 결과. 이 반응을 자극하기 위해, 모기 유리 마이크로 모세관 튜브를 사용 흉강 구슬로 접종된다. 그 후, 24 시간 후, 모기 비드를 검색하는 해부된다. 비드 melanization의 정도는 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 비즈의 병원성 기생충 효과가 없거나 능력이 회피 또는 면역 반응을 억제. 이러한 주사 measu하는 방법면역 효능 및 생산력이나 장수 등의 생활사 특성에 면역 자극의 영향을 다시. 정확히 직접 호스트 기생충 상호 작용을 연구와 같은 것은 아니지만 면역 및 생태 진화 연구 흥미로운 도구이다.

<html> 일부 비드보다 작은 다른 멜라닌 (도 1)으로 피복 된 모기로 동일한 방식으로 비드 melanize 모든 않았다. 실제로, 일부 구슬 (그림 1) 다른 사람이 완전히 어두운했다 반면 때문에 melanization의 부족으로 푸른 남아 있었다. melanization 값 (파란색과 unmelanized 비드에 해당) 0-100 (어둡고 무겁게 흑화 비드에 상당) (도 2A 및 2B) 사이의 값을 선형 보간법에 의해 표준화되었다. 이 값들은, 따라서 비드 melanization 정도 및 면역 반응의 강도를 나타낸다. 우리는 melanization 값을 비교하여 서로 비드를 비교할 수있다. melanization 반응은 일반적 ANOV...

구슬 접종을 통해 설명된 기술은 혈림프 순환계에서 모기 멜라닌화 반응을 자극할 수 있습니다. 구슬을 덮고 있는 멜라닌의 양은 면역 반응의 척도로 해부 후 측정할 수 있습니다.

접종<em&gt; 아노 펠 레스 gambiae</emMelanization 면역 반응을 유도하고 측정하는 비즈&gt; 모기

The stimulation of immune responses is a common tool in invertebrate studies to examine the efficacy and the mechanisms of immunity. This stimulation is ...

이 접종 기법의 전반적인 목표는 모기의 면역 반응을 자극하고 멜라닌화 반응을 측정하는 것입니다. 이 방법은 인간의 반응 비용에 대한 유전적 근거와 환경 요인의 영향을 포함하여 생태 면역학 분야의 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 면역 반응에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 다른 무척추 동물 시스템의 항바이러스 또는 항균 반응과 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 주사로 인해 발생할 수 있는 곤충 피해로 인해 어려움을 겪을 것입니다. 99ml의 식염수에 0.1% 메틸 그린 용액 1ml를 첨가하여 투명한 구슬을 착색합니다. 이것은 0.001% 메틸 그린 주입 용액입니다.그런 다음 식염수 45ml에 0.1% 메틸 그린 용액 5ml를 추가합니다. 이 0.01% 메틸 그린 해부 용액은 메틸 그린에 10배 더 농축되어 있어 해부 중 비드의 착색과 관찰을 용이하게 합니다. 용액을 섭씨 110도에서 25분 동안 오토클레이브합니다.모세관을 준비하기 위해 마이크로 모세관 유리관을 열로 당겨 가장 작은 구슬보다 약간 큰 매우 미세한 팁을 얻습니다. 핀셋으로 팁을 끊거나 팁을 톱질하여 각 모세관을 열고 조정합니다. 모세관이 있는 비드를 선택하려면 5cm 페트리 접시에 0.009g의 음전하를 띤 비드를 붓습니다.그런 다음 30분 전에 5밀리리터의 주입 용액을 추가합니다. 이렇게 하면 주입을 위한 비드 선택이 용이하도록 비드에 색상이 지정됩니다. 모세관 피펫 전구에 장착된 모세관을 사용하여 양안 현미경으로 0.1마이크로리터의 식염수 용액에서 가장 작은 비드를 시각적으로 선택합니다.Rear Anopheles gambiae는 섭씨 26도 이상 및 영하 5도 및 상대 습도 70도 이상에서 12시간 밝음, 12시간 어둡게 주기로 합니다. 성인 여성을 유지하고 10% 설탕 용액을 사용할 수 있도록 하십시오. 곤충 흡입기를 사용하여 각 모기를 50ml 튜브에 넣습니다.튜브를 으깬 얼음에 넣어 각 모기를 잠시 식히십시오. 쌍안 현미경 아래 오른쪽에 모기를 놓습니다. 모기를 적절하게 만드는 것은 중요하며 약간의 훈련이 필요합니다.곤충의 표피를 뚫는 방법을 배우고 구슬이 주입되었다고 믿는 것은 매우 어렵습니다. 흉강 큐티클의 왼쪽을 단단히 뚫고 액체와 구슬을 주입하여 모세 혈관을 모기에 접종합니다. 모세혈관을 모기에 가능한 한 수직으로 잡고 비행 근육이 손상되지 않도록 주의하십시오.주입

inoculating-anopheles-gambiae-mosquitoes-with-beads-to-induce-measure

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

아노 펠 레스 stephensi 모기가 말라리아 거주 인도 및 아시아 벡터입니다. 이 동영상은 모기에 말라리아에 대한 저항력을 부여합니다 transgenes이 종 microinjections을 수행하는 기법을 보여줍니다. 대부분이 동영상에서 보여주는 방법의 다른 모기 종의 microinjection 기술에 적용됩니다.

의 사출. stephensi의 태아는 말라리아 방지 모기를 생성하는

이 비디오에서는 배아 미세주입 기술을 통해 Anopheles gambiae 모기의 배아에 유전자 드라이브 구조를 전달하는 방법을 보여줍니다. 이 절차를 통해 상동 재조합을 통해 전달된 DNA 구조를 생식세포 세포에 통합하여 형질전환된 모기 개체군을 생성할 수 있습니다.

모기 배아 미세주입: 생식세포 돌연변이를 생성하기 위해 Anopheles gambiae의 배아 난황에 외인성 DNA를 전달하는 기술

이 비디오는 생쥐 모델에 살아있는 약독화 포자형성물을 면역시키기 위한 분석을 보여줍니다. 방사선 감쇠된 Plasmodium sporozoites는 쥐 귀의 등쪽에 주입됩니다. 양쪽 귀의 여러 위치에 주사를 맞은 후 마우스가 회복할 수 있습니다.

마우스 모델에서 약독화 포자조산을 이용한 피내 면역

인간 동시 감염은 체외에서 복제하기 어렵습니다. 그러나 인간 말라리아 기생충은 HIV에 자연적으로 감염된 갓 분리된 인간 말초 혈액 단핵 세포와 마찬가지로 체외에서 쉽게 배양할 수 있습니다. 이는 HIV 동시 감염의 맥락에서 말라리아 기생충에 대한 조기 면역 반응을 연구하기 위한 훌륭한 모델을 제공합니다.

<em&gt; 체외</em&gt; HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

RNA interference (RNAi)는 유전자 기능을 밝히는 데 매우 유용한 도구입니다. 그러나 성체 이전 단계에서 RNAi를 사용하여 유전자를 표적으로 하는 능력은 주요 인간 말라리아 매개체인 Anopheles gambiae에서 제한됩니다. 번데기 발달 중 직접 주입을 통해 유전자 기능을 감소시키는 RNAi 프로토콜에 대해 설명합니다.

에 RNAi의 트리거 배달<em&gt; 아노 펠 레스 gambiae</em&gt; 번데기

여기에서는 Plasmodium sporozoites의 피내 주사 후 마우스 피부에서 골수성 세포를 분리하고 림프절을 배출하는 프로토콜을 설명합니다. 수집된 세포의 유세포 분석은 기생충에 대한 피부 및 배액 림프절 염증 반응을 특성화하기 위한 신뢰할 수 있는 분석을 제공합니다.

약독 화와 피내 접종에 따라 마우스의 피부와 배수 림프절에서 골수 세포 분리<em&gt; 변형체</em&gt; 포자 소체

우리는 실험용 뇌 말라리아의 마우스 모델을 설명하고 자기 공명 영상을 사용하여 생체 내에서 염증 및 미세 혈관 병리학을 추적할 수 있는 방법을 보여줍니다.

자기 공명 영상을 이용한 실험용 뇌 말라리아 모델에서의 부종 발달 및 미세 혈관 병리학 적 추적

이 프로토콜은 φC31 시스템을 사용하여 Anopheles 말라리아 모기의 게놈에서 사이트 지향적 인 수정을 달성하는 방법을 설명합니다. 설명된 수정은 attP 베어링 도킹 라인의 게놈에 있는 형질전환 카세트의 통합 그리고 교환둘 다 포함됩니다.

말라리아의 아노필스 벡터에서 사이트 지향 φC31 중재 통합 및 카세트 교환

미세 주입 기술은 모기의 게놈에 외인성 유전자를 소개하는 데 필수적입니다. 이 프로토콜은 제임스 실험실에서 DNA 구조를 Anopheles 감비아아에 미세 주입하여 변형된 모기를 생성하는 방법을 설명합니다.

아노펠레 감비아에 배아를 위한 미세 주입 방법

세균에 의해 생산된 dsRNA의 경구 투여는, 예쁜꼬 마선충에서 일상적으로 사용되는 RNA 간섭(RNAi)에 대한 전달 방법으로서, 성인 모기에 성공적으로 적용되었다. 우리의 방법은 주사를 사용하지 않고도 강력한 역 유전학 연구 및 전송 차단 벡터 연구를 가능하게합니다.

성인 Anopheles 감비아 모기에 효과적인 경구 RNA 간섭 (RNAi) 투여

표준 막 공급 분석(SMFA)은 잠재적인 항말라리아 화합물의 평가 및 식별을 위한 황금 표준으로 간주됩니다. 이 인공 먹이 시스템은 Plasmodium falciparum 기생충의 강도와 유병률에 대한 이러한 화합물의 영향을 추가로 평가하기 위해 모기를 감염시키는 데 사용됩니다.

Anopheles 모기 벡터에서 플라스모듐 팔시파룸 감염 검출을 위한 표준 막 공급 분석

배우세요 모기 면역 반응을 자극하고 멜라닌화 반응을 정량적으로 측정하는 기법을 Anopheles gambiae에서. 이 방법은 생태면역학 연구와 무척추동물 면역 체계 이해에 활용됩니다.

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