Name: 출생 후의 쥐의 청각 수포의 해부 : 중이의 뼈와 조직 학적 분석의 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: 학습하세요 출생 후 쥐의 청각 수포와 중이뼈를 분리하는 해부법으로 전체 장착 및 조직학적 분석을 수행하는 방법입니다. 이 기술은 상처 생물학 및 골 형성 메커니즘 연구에 필수적입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 원고를 비판적으로 읽어준 요다 마사키와 엘리스 라마에게, 조직학에 도움을 준 타케노우치 카즈마사에게, 현미경에 도움을 준 후지와라 마리에게, 인간과 쥐의 청이소골 사진을 촬영하는 데 도움을 준 모리카와 마코토에게 감사를 표했다.

본 연구에서 수행되는 모든 동물의 절차는 게이오 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 (IACUC - 승인 번호 : 09221) 연구에서 동물의 사용을 게이오 대학의 동물 실험에서 기관 지침을 따르십시오. 인간의 표본은 해부학, 의학의 게이오 대학의학과에 기증 사체에서 분리하고, 기관의 규정에 따라 사용되었다. 청각 수포 및 캡슐 1. 분리 <ol><li> 호흡 환기가 분 이상 중단 될 때까지 이소 플루 란 또는 세보에 적신 종이 타월 위에 플랫폼을 포함하는 항아리에 쥐를 안락사 후 자궁 전위를 수행합니다. 불린 종이 수건 마우스의 직접 접촉하지 않도록주의하십시오. </li><li> 목의 등쪽에 작은 가로 절개를하고 머리를 향해 떨어져 피부를 당겨 양손을 사용하여 꼬리는 기본 목 무 노출scle 조직. </li><li> 14cm에게 날카로운 외과 가위를 사용하여 자궁 경부 영역에서 마우스 목을 벨. </li><li> 완전히 코를 향해 껍질 피부. 주둥이와 앞니와 함께 모든 피부를 잘라. </li><li> 입에 가위를 삽입하고 양쪽 턱 근육을 잘라. </li><li> 신중하게 턱을 열고 함께 혀와 아래턱을 제거합니다. </li><li> midsagittal 평면 (그림 1A, B)을 따라 두 개의 반으로 날카로운 가위, 분할 두개골과 두개골베이스를 사용. </li><li> 집게를 사용하여, 대뇌와 소뇌 반구와 뇌간을 제거합니다. 청각 수포 및 캡슐은 소뇌와 뇌간에 측면에 있습니다. 청각 수포가 청각 캡슐 (그림 1C, D)에 더 좌우되어 있습니다. </li><li> 주변의 두개골 뼈 (그림 1E)으로 수포 및 캡슐을 해부하다. </li><li> RT에서 인산 완충 용액 (PBS) pH가 7.4을 함유하는 접시에 시료를 옮긴다. </li><li> 유쌍안 해부 현미경 파인더의 수포 및 캡슐 (그림 1 층)의 주위에 느슨하게 경계를 잘라 주변의 뼈와 가위를 따로 뽑아 집게를 사용합니다. 제거 된 주위의 뼈는 basioccipital (복부 경계), exoccipital (ventro-후방 경계), supraoccipital (후방 경계), interparietal, 정수리 (지느러미 테두리)는 squamosal (배측 - 전방 경계), alisphenoid (전방 경계), 및 basisphenoid 있습니다 (안테 - 복부 테두리) 뼈. 유스타키오 관 (41)의 고막 개방을 지원하는 styliform 프로세스 (SP)가, 측두골의 경상 돌기 과정 구별되어 있습니다. </li></ol> 추골, 침골 등골 : 청각 이소골 2. 분리 <ol><li> 추골 <ol><li> 고막 볼 수 있도록 작은 가위 집게를 모두 사용하여 (도 2A, B를 고랑 tympanicus에 외이도의 외측의 일부를 제거). </li><li> 복부 (점선)과 후방 (#) 벽 (그림 2C)에서 malleal이 과정이 브레비스 (공 모양의 융기, 토론 참조), 모두 근처의 고막과 고막 뼈의 일부를 제거합니다. 추골과 텐서 팀파니 근육은 이제 (그림 2D, E)에 노출되어야한다. </li><li> 추골 (그림 2 층)를 들어 올려 27 G 바늘 (그림 2G)의 경 사진 가장자리로 텐서 고실 근육을 잘라. 다른 포유 동물에서 볼로 malleal 흉골 단단히, 고막에 연결합니다. </li><li> 깨지기 인 흉골에서 신중하게 고막을 분리합니다. 세 청각 이소골을 나타 내기 위해 고막 뼈를 제거합니다. </li><li> ossicular 공동 (그림 2H)에서 침골에서 추골를 탈구. </li><li> goniale에서 전방 프로세스를 파쇄하여 추골을 분리합니다. </li></ol></li><li> 침골과 등골 <ol><li> t을 격리짧은 하퇴 (그림 3A)에서 침골의 후방 인대를 절단하여 그는 침골. </li><li> 27 G 바늘 (그림 3B, C)의 경 사진 가장자리 등골 근처 stapedial 동맥을 차단하여 등골을 분리합니다. 필요한 경우, 바늘 등골의 근육 과정에서 stapedial 근육의 힘줄을 잘라. </li><li> 등골의 폐색 난원에 재봉 바늘 (또는 마킹 핀)를 삽입하고 등골을 올립니다. 등골을 제거한 후, 타원형 창 개방이 명확하게 보이는 (그림 3D)해야한다. </li></ol></li></ol> 청각 수포와 캡슐의 3 퍼가기 <ol><li> 파라핀 블록에 삽입을위한 준비 <ol><li> 제 1과 수포 캡슐을 분리. </li><li> , 가위로 떨어져 수포합니다 (styliform 과정)의 앞쪽 끝을 잘라 4 ℃에서 PBS에서 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)의 수포와 캡슐을 담그지C, 그리고 정착이 수포로 입력 할 수 있습니다. 공기가 수포에 갇혀 될 경우, 바늘과 주사기를 제거합니다. 튜브 회전에서 4 ° CO / N의 정착에 수포 및 캡슐을 둡니다. 주의 : PFA는 독성이 조심스럽게 취급되어야한다. </li><li> PBS로 한번 씻어. </li><li> 10 % 에틸렌 디아민 테트라 아세트산이 나트륨 염 수화물 4 ° C에서 일주일 동안 석회 수포 및 캡슐 (EDTA-2Na를), 2 ㎖의 튜브에 100 mM 트리스베이스, pH가 7.0. 매일 버퍼를 변경합니다. </li><li> PBS로 한번 씻어. 시료를 4 ℃의 물에 70 % 에탄올에 저장 될 수있다. 임의로, 경사 알코올 시리즈 (30 %, 50 %, 물 70 %)을 70 % 에탄올로 전송. </li><li> 티슈 프로세서 (4 배, 40 ℃에서 각각 1 시간) 크실렌 맑은 에탄올 용액의 등급 시리즈 시험편 (70 %, 2 × 95 %, 3X 100 %, 각 1 시간) 탈수 및 시편 침투 녹은 파라핀 왁스 42. 선택적으로, 상업 조직 clearin와 대체 자일 렌g 용액 (예를 들어, 히스 - 지우기). </li><li> 프로세서에서 표본을 언로드, 그들의 카세트에서 제거. </li><li> 조직 포함 콘솔 시스템에서, 장소는 녹은 파라핀 왁스로 가득 주형에 표본. (4 절)를 포함하기로 넘어갑니다. </li></ol></li><li> (카와 모토의 영화 법) 냉동 블록에 삽입을위한 준비 (43) <ol><li> 제 1과 수포 캡슐을 분리. </li><li> 가위로 떨어져 수포합니다 (styliform 과정)의 앞쪽 끝을 잘라, 4 ° C에서 (항원 성을 유지하기 위해 2 % 또는 1 % PFA보다는 PBS에 4 %) 정착액의 수포와 캡슐을 빠져들게. 공기가 수포에 갇혀 경우, 바늘과 주사기를 사용하여 제거합니다. 튜브 회전에서 4 ° CO / N의 정착에 수포 및 캡슐을 둡니다. </li><li> PBS에 신속하게 수포 및 캡슐을 세척하고 즉시 4 ℃에서 액체 극저온 포함 화합물에 몰입. </li><li> 중요 : 기포를 제거하면 중간에 어떤그리고 바늘에 의해, 그리고 집게로 포함 화합물을 첨가하여 흡입을 통해 외부 귀. (4 절)를 포함하기로 넘어갑니다. </li></ol></li></ol> 4. 샘플 동향 및 포함 참고 : 전체 수포 및 캡슐은 원하는 부분을 잘라 포함하는 동안 특정 방향으로 배치해야합니다. 아래에 설명 된 절차는 절을 다양한 방향에서 추골 사용된다. <ol><li> 추골의 종 (시상) 절편 <ol><li> 따뜻한 파라핀 (또는 극저온 포함 화합물)에서 아래로 수포 또는 외부 청각의 (外耳道)의 측면을 넣습니다. 추골의 목 횡단 라미가 삽입 접시 (- C도 4a)의 수평 바닥과 평행이되도록 방향을 조정합니다. 고막은 마우스 헤드 (도 4a에 수직으로 약 30 °의 각도로 경사져 유의도 59를 캄펜에서 <suP&gt; 44). </li></ol></li><li> 추골의 수평 절편 <ol><li> 따뜻한 파라핀 (또는 극저온 포함 화합물)에 수평 지느러미 무늬를 배치합니다. 추골의 목 횡 박판이 매립 접시 (- F도 4d)의 하부에 수직이되도록 수포 캡슐의 방향을 조정한다. </li></ol></li><li> 흉골 및 고막 5의 정면 절편 (단면) <ol><li> 가 포함 접시의 바닥에 수직이되도록 따뜻한 파라핀 (또는 극저온 포함 화합물)의 malleal 흉골를 놓습니다. </li></ol></li><li> 조직 매립 콘솔 시스템에 파라핀 왁스를 경화하는 적절한 온도로 냉각 블록 (또는, 드라이 아이스 / 헥산 욕에서 극저온 매립 화합물 사용). </li><li> 프로세스 조직 블록 루틴 절차를 사용하여 절단 섹션. 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; #와 예를 들어, 얼룩 파라핀 섹션38, E), safranin O (연골) 또는 파골 세포에 대한 주석 산염 내성 산성 포스파타제 (TRAP) 활동 () 3, 또는 면역 조직 화학에 의해. Undecalcified 저온부 뼈 형광 색소 (14)를 사용하여 라벨, 칼슘 알리자린 레드 염색 및 면역 (42)에 적합하다. </li></ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

여기, 우리는 출생 후의 쥐의 청각 수포 및 캡슐을 분리하는 유용한 방법을 제시한다. P12에 앞서, 조직은 연약하고 격리하는 동안 손상 될 수 있습니다. P12 후, 청각 수포 및 캡슐은 쉽게 주변 조직으로부터 분리 할 수있다. 절편 전에 머리에서 수포를 해부하는 것은 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 출생 캐비테이션 및 청각 수포의 성장이 가장 활발 이후 P6에서 발생 P14 (50)에 의해 완료됩니다. 고막과 달팽이관 벽 사이의 중간 엽 조직은 캐비테이션 과정을 통해 공기로 대체됩니다. 중간 귀 구멍에 생성 된 공기는 고정, 탈회 및 삽입하는 동안 조직과 액체 사이의 접촉을 방해 할 수 있습니다. 앞쪽 끝 (styliform 프로세스)를 차단보다는 unisolated 수포에서 그렇게 노력에 의해 분리 된 청각 수포에서 공기를 제거하는 것이 더 쉽습니다. 둘째, 추골 (그리고 고막)의 방향이 수직 아니다머리있다. 그것은 주어진 방향으로 고립 된 청각 수포 및 캡슐을 삽입하여 원하는 평면의 추골을 섹션에 따라서 용이하다. 고립되면, 청각 수포 및 캡슐은 수많은 분석에 유용하다. 예를 들어, 고해상도 X 선 마이크로 CT는 추골 (14)의 골 형성 모세 혈관으로 뼈의 미세 구조 형태를 공개 할 수 있습니다. stereofluorescence 해부 현미경은 중간 또는 내이 (33)에 형광 단백질을 발현하는 기자 마우스를 평가하는 구조를 시각화하는 강력한 도구입니다. 또한, 생체 내 또는 생체 형광 표시 방법과 전체 마운트 면역 형광 검출의 다양한이 수행 될 수있다. 가벼운 시트 형광 현미경은 입체 분석 (51)에 유용합니다. 여기에 설명되지 않았지만, 다양한 해부학 적 구조는 말초 신경, 혈관 등의 청각 수포 및 캡슐과 연관중간 귀의 고막의이 프로토콜을 이용하여 평가 될 수있다. 그 파라핀 절편이 광물의 분석을 허용하지 않습니다 때문에 삽입하기 전에 뼈 조직의 탈회를 요구하고 있습니다. 대조적으로, 동결 절편을 제조하는 데 사용되는 막 모토 방법 43 탈회없이 수행 및 알리자린 염색 등의 생체 골 분류 기술 또는 특수 염색에 사용 광물 연구에 적합 할 수있다. 극저온 절편 조건은 마우스 연령에 따라 따라 최적화되어야한다. 예를 들어, 저온 유지 챔버 내부의 적은 시원한 온도는 부분의 손상을 최소화하기 위해 이전 마우스 표본을 권장합니다. 마우스에서, 추골의 눈에 띄는 반구형 돌기에 대한 올바른 용어는 &quot;공 모양의 융기&quot;입니다. 그럼에도 불구하고, 용어 &quot;이 과정이 브레비스&quot;는 더 널리 번째위한 공 모양의 융기를 나타내는 데 사용 된특히 마우스 발달 생물 학자 16,20,22-25들 사이에서 이십년. &quot;이 과정이 브레비스&quot;원래 공 모양의 융기와 다른 측면 과정 (이 과정이이 lateralis), 함. 인간에서 약간의 원추형 돌기를 닮은 측면 과정 (안 그림 6B, 중간에서 볼)에 흉골로부터 연장, 고막에 부착의 일반 라인을 형성한다. 마우스에서, 횡 프로세스는 umbo 48 반대쪽의 흉골의 투영이다. 고막의 유리체의 flaccida은 추골의 측면 과정 이상입니다. 공 모양의 융기는 인간의 추골에서 알 수 없습니다.

중이의 세 청각 이소골, 즉 추골, 침골 및 등골은 고막 안쪽 귀에 막, 또는 달팽이관 1, 2에서 사운드를 전달하는 포유 동물의 특정 청각 체인을 형성한다. 청각 기능이 청성 뇌간 반응 (ABR) 3-6, 및 레이저 도플러 Vibrometry (LDV) 7을 사용하여 모니터링 할 수있는 고막 뒤에있는 추골의 진동을 임계 값을 측정하여 마우스에서 평가 될 수있다. ABR, LDV 및 왜곡 제품 Otoacoustic 방출 (DPOAE) 측정을 결합함으로써, 전도성 난청은 감각 신경성 장애 8 구별 할 수 있습니다. 귀 조건의 동물 모델은 모든 연령의 환자의 복지를 듣고 귀 건강의 중요성을 고려할 필요가있다. 예를 들어, 중이염은 인간의 유아와 어린이, 심한 급성 중이염에서 볼 매우 일반적인 귀 감염과 합병증은 CONDI 경우에 발생할 수 있습니다기 적절한 항균제 (9)으로 처리되지 않습니다. 중이염의 마우스 모델은 발병 기전을 이해하고 치료 10,11 개발에 유용 할 수 있습니다. (추골의 goniale 부분 제외) 연골 골화 (12, 13)에 의해 형성된다 쥐 이소골은 뼈 대사 및 형태 형성의 연구에 매우 적합하다. 첫째, 작은 크기는 X 선 또는 형광 현미경을 이용하여 14 온전한 골막과 뼈 고해상도 분석을 허용한다. 둘째, 골 세포 중 15 과부족 뼈 흡수 또는 손상 작용 등 비정상적 골 대사, 손실 3,4,7 청각에 잠재적 참여자로 분석 될 수있다. 셋째, 이상 골편의 형태 형성은 이러한 Hoxa2 16 ~ 19, 20 ~ 22 Msx1, Prrx1 23 Goosecoid가없는 동물 등 여러 가지 유전자 결핍 마우스에보고(GSC) 24, 25, Bapx1 13 Tshz1 26 Dusp6 (Mkp3) (27)는, 소량 (노그) 28 FGFR1 (29)는 마우스에서 갑상선 호르몬 수용체 (치환술, Thrb) 5에서 Bcl2 (30) 등 1,31은, 또는 과발현 Hoxa2 32. 마지막으로, 작은 크기에도 불구하고, 구조는 근육 (33)과 관절 (34, 35) 등의 이소골과 관련된 액세스 할 수 있습니다. 마우스 골편 인간 골편보다 작은하지만 마우스 중이는 인간 상대의 소형 버전이 아님을 주목할 필요가있다. 인간의 배아 stapedial 동맥이 임신 중에 사라 반면, 예를 들어, 마우스에, 등골의 고리를 통과하는 stapedial 동맥, 삶 (36)에 걸쳐 지속. 또한, 마우스 추골의 형태가 일의 상이즉 인간의 골 (도 6 참조). 인간은 측두골의 소주 골 이루어지는 유양동 공기 전지는 수포 37보다는 골편을 수용하는 반면 쥐에서는, 청각 (고막) 수포는 공기 충전 중이 캐비티를 둘러싼 다. 두 종으로, 청각 캡슐 (귀 캡슐, 뼈 미로)는 달팽이관 및 내이의 반원형 운하를 둘러싼 다. 중이의 비교 및 진화 생물학은 광범위 38-40을 검토하고있다. 먼저 아래의 프로토콜은 각각, 주로 중이 및 내이 구성 청각 수포 및 캡슐을 해부하는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 또한 청각 수포에서 추골, 침골과 등골을 분리하는 방법을 보여줍니다. 마지막으로, 청각 이소골의 조직 절편에 대비하여 내장의 청각 수포 및 캡슐 방향을하는 방법을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>Tools/Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paper Towel</td><td>Daio Paper Corporation</td><td>703347</td>는 <td>다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다</td></tr><tr><td>Glass Jar</td><td>Diversable</td><td></td><td>은 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다</td></tr><tr><td>14cm 수술용 가위</td><td>Fine Science Tools(F.S.T.)</td><td>91400-14</td><td>는 다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다</td></tr>.<tr><td>Extra fine scissors-straight</td><td>Fine Science Tools (F.S.T.)</td><td>14084-08</td>은 <td>다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. Fine Forceps Angled 45&deg; </td><td>Fine Science Tools (F.S.T.)</td><td>11063-07</td>은 <td>다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>해부 현미경</td><td>Nikon</td><td>SMZ800N</td><td>일상적인 해부</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Nikon</td><td>SMZ18</td><td>영화&nbsp;</td></tr><tr><td>주사 바늘 27G</td><td>TERUMO</td><td>NN-2719S</td><td></td></tr><tr><td>주사기 (1mL)</td> <td>TERUMO</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>마킹 핀</td><td>각종</td><td></td><td></td></tr><tr><td>튜브 로테이터 RT-50</td><td>TAITEC</td><td>0000165-000</td>은 <td>다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다</td></tr> 저<tr><td>온 유지 장치</td><td>라이카</td><td>CM3050S</td><td>http://www.leicabiosystems.com/histology-equipment/cryostats/details/product/leica-cm3050-s/</td></tr> <tr><td>TC-65 텅스텐 블레이드</td><td>라이카</td><td>14021626379</td><td>카와모토 확고법</td></tr><tr><td>스테인레스 용기</td><td>라이카</td><td></td><td>카와모토 확고법</td></tr><tr><td>IIC</td><td>라이카</td><td></td><td>카와모토 확고법</td></tr><tr><td>실란 코팅 슬라이드 (New Silane II)</td><td>무토 Pure Chemicals</td><td>511617</td>은 <td>다른 공급업체에서 구매할 수</td></tr> 있습니다. <tr><td>커버 글라스</td><td>Matsunami</td><td></td><td>는 다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 티슈 프로세서</td><td>Sakura Finetek</td><td>VIP-5</td><td>는 다른 공급업체에서 구매할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 티슈 임베딩 콘솔 시스템</td><td>Sakura Finetek</td><td>Tissue-Tek TEC 5&nbsp;</td><td>다른 공급 업체에서 구입할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>파라핀용 슬라이딩 마이크로톰</td><td>Yamato Kohki Industrial</td><td>REM-710</td><td>은 다른 공급업체에서 구입할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>경조직용 Path Blade+pro</td><td>파라핀 섹션용</td><td>Matsunami</td><td>PB3503C</td></tr><tr><td>Micro-CT</td><td>RIGAKU</td><td>R_mCT2</td><td>http://www.rigaku.com/en</td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td></td></tr><tr><td>Name </td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</strong</td></tr><tr><td>>시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Maruishi pharmaceutical Co. Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS용 NaCl</td><td>wako</td><td>191-01665</td><td>PBS용</td></tr><tr><td>KCl</td><td>wako</td><td>285-14</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 12H2O</td><td>wako</td><td>196-02835</td><td>PBS</td></tr><tr><td>KH2PO4<</td><td>/sub>wako</td><td>287-21</td><td>PBS</td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA, EM 등급)</td><td>TAAB</td><td>P001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA-2Na</td><td>wako</td><td>15111-45</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1503-1KG</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼 크라이오엠베딩 미디엄</td><td>카와모토 확고한 방법용</td>라이<td>카</td><td></td></tr><tr><td>드라이 아이스</td><td>다양한</td><td></td><td>카와모토 확고한 방법용</td></tr><tr><td>헥산</td><td>와코</td><td>080-03423</td> 카와<td>모토 확고한 방법용</td></tr><tr><td>슈퍼 크라이오마우팅 미디엄 타입 R2</td><td>라이카</td><td></td> 카와<td>모토 확고한 방법</td></tr><tr><td>파라핀</td><td>사쿠라 Finetek</td><td>781001A0107</td><td></td></tr><tr><td>Histo-Clear</td><td>NDS</td><td>HS-200</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>DOJINDO</td><td>340-00433</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin&nbsp;</td><td>와코</td><td>131-09665</td><td></td></tr><tr><td>에오신</td><td>와코</td><td>051-06515</td><td></td></tr></tbody></table>

출생 후의 쥐의 청각 수포의 해부 : 중이의 뼈와 조직 학적 분석의 분리

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

대부분의 포유 동물에서, 추골, 침골과 등골을 포함한 중간 귀에 청각 소골은 작은 뼈이다. 마우스에서, 뼈 구조는 청각 캡슐은 내이, 즉 달팽이관과 반원형 운하를 둘러싼 반면 청각 수포가, 이소골을 수용했다. 쥐 이소골은 이비인후과 분야의 연구자들에게 큰 관심 때문에 청각에 필수적인, 그러나 그들의 대사, 개발 및 발전은 다른 분야에 매우 적합하다. 변경된 뼈 대사는 성인 쥐에서 청각 기능에 영향을 미칠 수 있으며, 다양한 유전자가 결핍 된 마우스는 자궁에서 청각 이소골의 형태 형성의 변화를 보여줍니다. 쥐의 청각 이소골이 작은 있지만 하나가 자신의 해부학 적 방향 및 3D 구조를 이해하면, 자신의 조작이 가능하다. 여기, 우리는 청각 수포 및 출생 후의 마우스의 캡슐을 해부 한 후 수포의 일부를 제거하여 개별 이소골을 분리하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 또한 토론 방법을 그들에게다른 방향에서 침대 수포와 캡슐은 추골의 길이 방향 수평, 또는 정면 부분의 준비를위한 파라핀 또는 동결 절편에 적합 생성합니다. 마지막으로, 우리는 마우스와 인간의 청각 이소골 사이의 해부학 적 차이점을 열거. 이러한 방법은 청각 이소골의, 병리학 적 발달과 진화 적 측면과 생쥐의 중이 분석에 유용 할 것이다.

이 프로토콜은 마우스 청각 수포로부터 골편을 분리하는 방법을 제시한다. 첫째, 수포 및 캡슐은 두개골 (그림 1)에서 하나의 조각으로 밖으로 해부한다. 해부 수포는 다음 추골 (그림 2)과 침골과 등골 (그림 3)를 제조하는 데 사용됩니다. 청각 수포와 캡슐의 랜드 마크는 수포, 지느러미 크레스트, 전방 반원의 운하와 subarcuate 포사 (그림 1 층)의 앞쪽 끝에서 styliform 과정입니다. Microcomputed 단층 촬영 (CT) 영상은 청각 수포에서 이소골뿐만 아니라 그 이소골의 종 방향 및 수평 절편 (그림 4)에 대한 최적의 방향을 알 수있다. 추골의 길이 파라핀 절편의 경우, 수포 및 캡슐은 파에 포함, 일주일 동안 4 ° C에서 EDTA에 탈회 하였다그림 4 (A)에 표시된 방향에서 RAFFIN 블록 - C는 4 μm의에서 절단 한 다음 H &amp; E를 사용하여 염색. 청각 수포에서 고막에 부착 된 추골은 P14 (그림 5A)에서 진행중인 연골 골화를 한 것으로 밝혀졌습니다. 새로운 뼈 형성을 가시화하기 위해, 칼 세인 (30 μg의 / g의 체중)를 복강 P20 마우스에 주입하고, 수포 및 캡슐은 P21에서 24 시간 후에 단리 하였다. 탈회없는 샘플은 냉동 포함하고 모토 (43)의 방법에 따른 접착 필름을 이용하여 6㎛의에 저온 절단되었다. DAPI로 핵 염색 (4 &#39;, 6-diamidino -2- 페닐 인돌) 후 단면은, 형광 현미경으로 관찰 하였다. 칼 세인 신호 (녹색)는 추골 (m)의 새로운 골 형성, 수포 및 캡슐 (그림 5B)를 밝혔다. 추골의 수평 절편를 들어, 5 주령의 마우스에서 분리 청각 수포는 대한 (탈회하지 않고 냉동 내장 된방향이도 4d - 더 모토 방법을 이용하여 6㎛의 저온 절단시 F)를, 및 H &amp; E 염색을 사용. malleal의이 과정이 브레비스 (MPB)의 수평 절편은 달팽이관 (그림 5C)를 보여줍니다. P31 마우스에서 분리 오른쪽 청각 이소골의 내측보기 마우스 추골의 전형적인 특징을 보여줍니다, 즉, &quot;활공 - 갈매기 날개처럼&quot;(또는 페르시아어 칼 같은 45) 흉골, 눈에 띄는이 과정이 브레비스 (공 모양의 융기 ) (그림 6) 토론을보고, 횡단 얇은. 전방 과정 (이 과정이 앞쪽)가 goniale 주변의 해부 과정에서 골절되고 (ectotympanic)가 고막 링에서 분리합니다. incudostapedial 관절이 탈구되는 반면이 대표 샘플은 추골과 침골 사이에 그대로 incudomalleolar 관절을 나타낸다. malleal에 건의 삽입과stapedial 근육 프로세스가 검출 (도 6A, 별표)입니다. 도 6b는 동일한 배율로 마우스와 인간의 청각 이소골을 비교합니다. 크기보다 다른 종 (種)의 차이는 다음과 같습니다. malleal 흉골은 날개 같은 쥐하지만 인간의 클럽과 같은 것입니다. 해부학 적 축 (또는 회전축의 추골과 침골의 짧은 공정의 전방 과정을 통해 선)과 흉골 사이의 각도는 쥐에서 훨씬 더 작은 거의 수직 반대로 두 거의 평행 인간 6,46-48있다. 인간의 이소골에서 vibrometric 연구는 incudo-malleolar 관절이 기능적으로 49을 고정하기보다는 모바일 있음을 알 수있다. 마우스 추골 인간 47 명백하지 않는 넓은 얇은 평면 횡단 얇은 판을 나타낸다. 마우스에서,이 과정이 앞쪽은 막질 뼈, 즉 goniale와 팀파니에 퓨즈C 링, 인간에이 과정이 앞쪽 뼈 (41)의 작은 spicule로 감소된다. 마우스와 인간의 등골도 다릅니다 쥐에서, 전방의 CRU는 곡선과 후방 CRU는 더 직선 반면 인간이다, 전방의 CRU는 바로 후방의 CRU보다 더 많은입니다. 그것은 몸의 크기로 추골 헤드 상대가 다량으로 &quot;작은&quot;뼈 (48)의 상대 성장 관계에 상당한 변화를 보여, 같은 황금 몰 같은 종에서 확대되는 것을 주목할 필요가있다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig1.jpg" /> 그림 청각 수포 및 캡슐 1. 해부. P31 마우스 두개골 (A)의 좌우 절반으로 분할된다. A, 전방; P, 후방; L, 왼쪽; R, 맞다. (B)를 타개, 피부가 헤드의 우측 절반의 내측 표면. CX, 대뇌 피질; CB, 소뇌; 조식, 꼰 로프 코nstem. D, 지느러미; V, 복부. 집게로 뇌의 (C) 제거. (D) 오른쪽 두개골의 청각 캡슐의 내측 볼 수 있습니다. 지느러미 크레스트 (화살촉)는 중간 두개골 포사 (MCF) 및 후방 두개골 포사 (PCF) 사이에 위치 및 배측 - 전방 및 청각 캡슐의 ventro - 후방 표면을 분리한다. 스케일 바, 2mm. (E) 청각 수포 및 캡슐 (중간보기)의 높은 배율. 공동 달팽이관; VII, 안면 신경; VIII, 신경 vestibulocochlear; AC, 전방 (우수) 반원형 운하; 소뇌 paraflocculus 주택 SF, subarcuate 포사. 스케일 바, 1mm. 격리 된 청각 수포 및 캡슐 (중간보기)의 (F) 현미경 사진. SP, styliform 과정. 스케일 바, 1mm. (A - E), P31 마우스. (F), P33 마우스. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig2.jpg" /> 추골 2. 해부 그림. (A) 권리 청각 수포와 캡슐의 Ventrolateral 볼 수 있습니다. 고랑의 tympanicus (ST, 점선 화살표) 고막의 부착 사이트입니다. 명세서에 뼈 측면은 외이의 일부이며, ST의 뼈 내측 중간 귀 캐비티의 바닥을 형성한다. A, 전방; P, 후방; D, 지느러미; V, 복부. 외부 청각 운하의 제거 후 (B)보기는 갈 거예요 flaccida (PF)과 tensa을 갈 거예요 (PT)을 포함하여 고막 (TM)를 공개합니다. 고실 뼈 malleal이 과정이 브레비스 (MPB) 근처 (점선 및 #)의 부분 (C) 제거. m, 추골; 밀리미터, malleal 흉골. 고막을 통해 본 중이 공동으로, 공기 방울 화살표. (D) 노출 추골. 추골 헤드가 표시됩니다. 점이 찍힌라인은 침골의 관절면을 나타냅니다. 텐서 고실 근육의 (E) 힘줄이 (TT) 추골에 연결합니다. 추골이 해제 될 때 (F) 텐서 고실이 당겨진다. * 근육 과정. (G) 텐서 고실은 바늘을 사용하여 절단한다. 세 청각 이소골 고막의 제거 후 (H). incudo-malleolar 관절 탈구된다. m, 추골; 난, 침골; 의, 등골; , goniale (추골과 고막 링, TR에 융합)으로 이동합니다. 모든 규모의 바, 0.5 mm. (A, H), P33 마우스. (B - G), P31 마우스. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig3.jpg" /> 그림 침골과 등골 3. 해부. (A) 침골추골의 제거 후 등골. stapedial 동맥 (SA)는 등골 (들)을 통과한다. 점선은 침골의 관절면을 나타냅니다. 짧은 CRU의 침골 (I)의 (ICB, 하퇴 브레 베)가 후방 인대에 의해 고정되어 있습니다 (도시하지 않음). 별표, 등골의 근육 과정. (B)는 모루 제거한 후 등골. 바늘 끝은 stapedial 동맥 (SA)를 절단하는 데 사용됩니다. 혈액 유동 방향을 화살표. 점선은 등골의 관절면을 나타냅니다. (다) stapedial 동맥은 등골에서 제거됩니다. X는 stapedial 동맥 (SA)의 절단 끝을 나타냅니다. (D) 타원형 창 (아야, FENESTRA ovalis 또는 FENESTRA vestibuli)는 등골의 제거 후 볼 수 있습니다. RW, 둥근 창 (FENESTRA 원형 홀 또는 FENESTRA cochleae). 스케일 바, 0.5 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig3large.jpg" target="_blank">이의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오</a>그림. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig4.jpg" /> (- C 시상, A) 및 수평 (D - E) 추골의 단면 종에 대한 임베딩하는 동안 청각 수포 및 캡슐을 정위 그림 4. (A - C) 추골의 목 횡단 라미는 접시를 삽입의 바닥에 평행하게 배치됩니다. (A) 측면보기 : 마이크로 CT 이미지 (파란색 모조 착색)이 수포의 우측 추골의 삽입을 표시합니다. 추골과 침골은 녹색 모조 착색된다. 점선, 원하는 절단 평면. 실선, 접시를 삽입의 바닥. m, 추골; 화살촉, 등의 문장. M, 중간; L, 측면; D, 지느러미; V, 복부. (B) 상위 뷰 : 마이크로 CT 이미지를. 수포 (styliform 과정)의 앞쪽 끝 제거합니다. 난, 침골. (C) 상위 뷰하십시오로 촬영 한 현미경 사진을 (컬러 필터). AC, 전방 (우수) 반원형 운하; SF, subarcuate 포사; SP, styliform 과정. A, 전방; P, 후방; D, 지느러미; V, 복부. (D - F) 추골의이 과정이 브레비스는 접시를 삽입의 바닥에 수직으로 배치됩니다. (D) 측면보기 : 마이크로 CT 이미지는 우측 추골의 삽입을 표시합니다. 점선, 원하는 절단 평면. 실선, 접시를 삽입의 바닥. (E) 상위 뷰 : 마이크로 CT 이미지를. 밀리미터, malleal 흉골. (F) 상위 뷰 (컬러 필터와 함께 찍은 사진) 현미경 사진. 스케일 바, 1mm. 이전 7 바와 같이 마이크로 CT 이미지는 5 ㎛의 복셀 해상도 얻었다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig5.jpg" /> 에프igure 5. 조직학. (A) H &amp; E 염색. P14의 청각 수포 (점선)의 파라핀 포함 된 권리 추골 (m)의 종 (시상) 섹션을 참조하십시오. TM, 고막. (B) 칼 세인 뼈 라벨. P21의 청각 수포에서 냉동, undecalcified 좌측 추골 (m)의 종단면. Counterstain과, DAPI. (C) H &amp; E 염색. 청각 수포 및 캡슐 (5 주령 마우스)에서 냉동, 왼쪽 undecalcified malleal이 과정이 브레비스 (MPB)의 수평 부. 공동 달팽이관. 스케일 바, 1mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/55054/55054fig6.jpg" /> 그림 6. 청각 이소골의 내측보기. (A) P의 오른쪽 청각 이소골31 마우스입니다. A, 전방; P, 후방; D, 지느러미; V, 복부. 스케일 바, 1mm. 추골 머리 (Caput mallei, 두상화 mallei); 목 (Collum mallei); 얇은 판 (횡단 얇은 판) 밀리미터 (흉골 mallei); 검은 색 별표 (추골의 근육 과정) MPA (이 과정이 앞쪽에,이 과정이 박근); MPB (이 과정이 브레비스); 침골 본체 (코퍼스 incudis); ICB (크뤼의 브레 베, 짧은 CRU의 짧은 과정); ICL (크뤼의 longum의 긴 CRU에, 긴 과정); IPL (이 과정이의 lenticularis, 렌즈 처리, 실비의 융기); 등골 머리 (Caput가 stapedis); 흰색 별표 (등골의 근육 과정) SCA (크뤼의 anterius, 전방의 CRU); SCP (크뤼의 posterius, 후방의 CRU); 기본 (기초의 stapedis, 발판); SOF (폐색 난원, intercrural 난원). (B) 76 세의 인간 여성의 오른쪽 청각 이소골 (해부학 교실 의학의 게이오 대학의 의례). 즉 인간의 이소골을 위해 사용 된 P31 마우스의 이소골은 (오른쪽 아래) 같은 배율로 몇 군데 있습니다. CURV에드 화살표는 해부학 적 축과 흉골 (점선) 사이의 각도를 나타냅니다. 스케일 바, 2mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55054/55054fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

우리는 전체 마운트 및 조직학적 분석을 위해 산후 마우스에서 청각용 수포, 캡슐 및 이소골을 분리하는 프로토콜을 제시합니다.

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

해부 절차의 전반적인 목표는 이치포와 캡슐을 분리한 다음, 다양한 전체 마운트 및 조직학적 분석을 위해 출생 후 마우스의 개별 청각 이소를 분리하는 것입니다. 이 방법은 형태 형성 불량, 연골내 골화 또는 미네랄 대사 불량의 메커니즘과 같은 상처 생물학 분야의 주요 질문을 해결하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 해부학적 세부 사항에 대한 심층적인 지식을 기반으로 합니다.일반적으로 생물학적 시스템으로서 마우스에 익숙하지 않은 개인은 인간 중이에 대한 지식이 마우스에 적용되지 않을 수 있기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 기술자인 Ayako Sakamoto가 맡을 것입니다. 먼저 수포와 캡슐을 주변 두개골 뼈와 함께 실온에서 pH 7.4의 인산염 완충 식염수가 들어 있는 표본 접시에 넣습니다.양안 해부 현미경으로 다음과 같이 청각 캡슐을 둘러싼 두개골 뼈를 식별합니다. 한 세트의 집게를 사용하여 주변 두개골을 잡고 두 번째 세트를 사용하여 기저 페노이드와 후두골을 잡아당깁니다. 그런 다음 집게를 사용하여 두정골과 두정골을 캡슐에서 부드럽게 당겨 빼내고 완전히 풀리면 제거합니다.다음으로, 수포와 캡슐에서 편평 세포를 당겨 뼈와 연조직을 부드럽게 떼어냅니다. 다음으로, 바깥쪽 귀를 잡고 표본을 뒤집어 내측을 드러냅니다. 다음으로, 표본을 180도 돌리고 캡슐을 잡고 남은 연조직을 당겨 빼냅니다.이제 등쪽 볏이 보입니다. 이 각도에서는 내이도(internal auditory canal), 아치하와(subarcuate fossa) 및 전방 반고리관(anterior semicircular canal)의 안면 및 전정-달팽이관 신경이 명확하게 보입니다. 등쪽 볏이 해부 접시의 아래쪽으로 기울어지면 청각 수포가 명확하게 보입니다.제제가 약간 기울어져 있으면 수포(bulla) 내에서 추골(malleus)이 보입니다. 집게를 사용하여 추 위의 외이도를 골절하고 고막고막의 측면으로 골절하는 것으로 시작합니다. 첫 번째 팩처보다 앞에 두 번째 팩처를 만듭니다.그런 다음 고막이 보이도록 외이도 조각을 제거합니다. 다음으로, 복벽과 후벽 모두에서 malleal processus brevis 근처의 고막과 고막의 일부를 제거합니다. 이제 malleus, incus, stapes 및 tensor tympani muscle이 노출되어야 합니다.추골을 들어 올리고 27 게이지 바늘의 비스듬한 가장자리로 텐서 고막 근육을 자릅니다. malleal manubrium은 다른 포유류에서 볼 수 있는 것처럼 고막에 단단히 부착되어 있습니다. goniale에서 malleus의 전방 돌기를 골절하여 ossicular joint의 incus에서 malleus를 탈구합니다.겸자를 사용하여 추골(malleus)을 청각수포(audiry bulla)에서 분리합니다. 수포의 주요 부분을 제거하여 incus와 stapes를 노출시킵니다. 그런 다음 27 게이지 바늘의 비스듬한 가장자리를 사용하여 짧은 능선에서 incus의 후방 인대를 자릅니다.겸자를 사용하여 incus를 분리합니다. 27 게이지 바늘의 비스듬한 가장자리로 등골 근처의 등골 동맥을 잘라냅니다. 둥근 창이 바닥에 위치하도록 샘플을 회전합니다.그런 다음 등골의 폐쇄기 구멍에 재봉 바늘을 삽입하고 등골을 들어 올립니다. 등골을 제거한 후 타원형 창 개구부가 명확하게 보여야 합니다. 27 게이지 바늘을 사용하여 재봉 바늘에서 등골을 밀어냅니다.조직 포매를 시작하려면 먼저 가위를 사용하여 수포의 앞쪽 끝에서 스타일리폼 프로세스를 잘라냅니다. malleus와 dorsal crest는 절단 부분을 통해 볼 수 있습니다. bulla와 캡슐을 PBS의 1-2% 파라포름알데히드에 담그십시오.수포에 공기가 갇힌 경우 바늘과 주사기를 사용하여 제거합니다. 수포와 캡슐을 튜브 회전기에서 밤새 섭씨 4도의 고정제에 그대로 두십시오. 다음날 PBS에서 수포와 캡슐을 빠르게 세척하십시오.그런 다음 즉시 섭씨 4도의 액체 극저온 임베딩 화합물에 담그십시오. 기포는 중이와 외이 수준에서 cryo-embedding 화합물에 형성되는 것이 일반적입니다. 바늘로 흡인을 통해 중이에서 기포를 제거합니다.외이의 기포에 대해서도 동일한 기술을 사용하십시오. 모든 기포가 제거되면 얻을 단면 유형에 따라 조직의 방향을 지정합니다. 그런 다음 절편 전에 조직을 동결 블록에 삽입할 수 있습니다.이 이미지는 문자 M으로 표시된 석회질화된 추골의 세로 파라핀 부분과 P14 마우스의 청각 수포 및 캡슐의 H 및 E 염색을 보여줍니다. 고막은 문자 TM으로 표시됩니다. 이 이미지는 문자 M으로 표시된 동결된 석회질화되지 않은 축골의 세로 부분과 P21 마우스의 청각 수포의 칼슘 뼈 표지를 보여줍니다. 칼슘 녹색 신호는 추골(malleus), 수포(bulla) 및 캡슐(capsule)에 새로운 뼈 형성을 나타냅니다.이 기법을 숙달하면 절차가 제대로 수행되면 10분 안에 수포와 캡슐을 분리할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 본문에 설명된 마우스의 청각 이소골과 수포의 해부학적 방향을 잘 이해하게 될 것입니다.

dissection-auditory-bulla-postnatal-mice-isolation-middle-ear-bones

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

동물 모델의 달팽이관에 이독성 물질을 도입하는 다양한 방법이 있습니다. 제시된 것은 이독성 물질을 둥근 창 틈새에 전달하기 위한 수술 프로토콜입니다. 이 절차는 신뢰할 수 있고, 표적화된 달팽이관 내 병변을 생성하며, 마이크로아키텍처에 대한 기계적 손상을 방지합니다. 달팽이관 자가 수리/재생에 대한 검사가 가능합니다.

인공 와우 세포 변성을 유도하기위한 신속하고 신뢰할 수있는 기술 : Ototoxic 에이전트 배달을 위해 마우스 라운드 창 접근

일차 섬모는 다양한 신호 경로에 영향을 미칩니다. 포유류 달팽이관은 평면 세포 극성(PCP) 신호 전달을 검사하는 데 이상적입니다. 섬모 기능 장애는 달팽이관 성장, 세포 패터닝 및 유모 세포 방향, PCP 판독에 영향을 미칩니다. 우리의 목표는 표현형 분석, 면역조직화학 및 주사 전자 현미경을 통해 마우스 달팽이관의 PCP 신호 전달을 분석하는 것입니다.

Ciliopathy 마우스 돌연변이 달팽이관의 평면 셀 극성 표현형의 평가

우리는 세 가지 그대로 인공 회전 (정점, 중,베이스)로 코르티 성인 기관을 분리하는 방법을 제시한다. 또한 형광 태그 항체 면역 염색을위한 절차를 보여준다. 함께 이들 기술은 달팽이관 검색된 유모 세포,지지 세포 및 다른 세포 유형의 연구를 허용한다.

전체 마운트 해부 및 성인 마우스 달팽이관의 면역 형광

내이로의 국소 약물 전달을 위한 두 가지 미세수술 접근법이 여기에 설명되어 있으며 청력 매개변수, 달팽이관 세포 구조 및 염증 마커 발현에 미치는 영향 측면에서 비교됩니다.

마우스 내부 귀를 대상으로 약물 전달 방법의 비교 연구 : Bullostomy 대 Transtympanic 주입

이 프로토콜의 목표 decellularize 알려줍니다 마우스 cochleae 조직 공학 응용 프로그램에 대 한 공중 발판으로 이용 하는 효과적인 방법 설명 하는 것입니다.

내가 조직 공학에 대 한 마우스 Cochleae Decellularizing에 대 한 프로토콜

달팽이 관 임 플 란 트의 동물 모델 영구 난청 전기 자극 치료의 기술 기반 지식을 사전 수 있습니다. 이 연구는 급성 굉음을 쥐 청각 brainstem 응답 기능 평가 있는 전극 배열 인공 와우 이식 수술 프로토콜을 제공합니다.

인공 와우 수술 및 C57BL/6 마우스에 전기 evoked 청각 Brainstem 응답 기록

이 원고는 정상 마우스에서 리본 시냅스의 형태학적 특성 및 기능 상태를 평가하기 위한 실험 프로토콜을 설명합니다. 본 모델은 또한 소음 유발 및 노화 관련 달팽이관 시냅토병 제한 모델에 적합합니다. 이전 마우스 연구의 상관 결과 또한 논의.

마우스 달팽이관의 특정 주파수 영역에서 리본 시냅스의 형태학적 및 기능적 평가

본 문서는 성인 마우스 달팽이관에서 면역 조직 화학을 위한 10 mm 둥근 커버 전표에 달팽이관 상피의 조각을 부착하기 위하여 세포 및 조직 접착제의 decalcification 및 사용을 요구하는 변형된 달팽이관 표면 준비 방법을 제시합니다.

성인 마우스의 달팽이관 표면 준비

선조체 혈관은 달팽이관 내 전위 생성에 필수적입니다. 여기에서 우리는 단일 핵 시퀀싱 또는 면역 염색을 위한 성인 마우스 stria vascularis의 해부를 제시합니다.

단일 핵 시퀀싱 또는 면역염색을 위한 성인 마우스 줄무늬 혈관의 해부

여기에서, 우리는 마우스에서 일차 달팽이관 유모 세포를 분리하고 배양하기 위한 상세한 프로토콜을 제시합니다. 처음에는 Corti의 장기를 현미경으로 신생아(3-5일령) 쥐 달팽이관에서 절개했습니다. 이어서, 세포를 효소에 의해 단일세포 현탁액으로 절단하고, 배양에서 며칠 후에 면역형광을 이용하여 확인하였다.

신생아 마우스의 일차 달팽이관 유모 세포의 분리 및 배양

여기서는 마우스 혈관선상에서 원발 주변 세포를 분리, 정제, 배양하는 프로토콜을 제시하며, 달팽이 측벽 질환을 연구하기 위한 산화 스트레스 및 세포 노화의 시험관 내 모델을 구축하는 방법을 제시합니다.

신생아 마우스에서 혈관선상균의 1차 경계 세포 분리 및 배양

학습하세요 출생 후 쥐의 청각 수포와 중이뼈를 분리하는 해부법으로 전체 장착 및 조직학적 분석을 수행하는 방법입니다. 이 기술은 상처 생물학 및 골 형성 메커니즘 연구에 필수적입니다.

출생 후의 쥐의 청각 수포의 해부 : 중이의 뼈와 조직 학적 분석의 분리

더 많은 동영상 탐색