Name: 흐름 유도 된 폐동맥 고혈압에 대한 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 학습하세요 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측을 이용한 흐름 유도 폐동맥 고혈압 연구 방법. 이 기술은 혈역학 변화와 혈관 재형성을 분석하여 새로운 치료 전략 개발에 기여합니다.

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이 연구는 네덜란드 심혈관 연구 이니셔티브, 네덜란드 심장 재단, 네덜란드 대학 의료 센터 연맹, 네덜란드 보건 연구 개발 기구 및 네덜란드 왕립 과학 아카데미(CVON nr. 2012-08, PHAEDRA, The Sebald fund, Stichting Hartekind)의 지원을 받았습니다.

동물 주제와 관련된 절차는 동물 실험에 대한 네덜란드 중앙위원회와 대학 의료 센터 흐로 닝언에서 동물 관리위원회 (NL)에 의해 승인되었습니다. 180 300g 사이의 무게 모두의 Wistar 루이스 래트를 사용 하였다. 1. 주택과 순응 <ol><li> 케이지 당 5 그룹의 중앙 동물 시설, 집 쥐에 도착 후. 7 일간의 적응 기간 동안 인간 취급 쥐를 익숙하지만, 모든 실험 절차를 수행하지 않는다. </li></ol> 2. 준비 및 멸균 Monocrotalin 사출 <ol><li> 60 ㎎ / ㎖의 monocrotalin (MCT) 용액 1 ㎖를 들어, 2-㎖의 튜브에 monocrotalin 60 mg의 무게. 0.9 % NaCl을 700 μL를 추가합니다. 1 M 염산 200 μL를 추가합니다. 뜨거운 실행 수돗물과 소용돌이 그 아래 튜브에서 솔루션을 따뜻하게. 7.0으로 pH를 가지고 6 N의 NaOH를 사용합니다. 설치류에 주입을위한 MCT의 준비를 위해 무균 기술을 사용합니다. </리&gt; <li> (300 g 쥐는 60 ㎎ / ㎖ MCT 0.3 ㎖) 목 kg 피하 당 멸균 60 ㎎ / ㎖가 MCT 용액 1 ㎖을 주입한다. 참고 : 우리는 인해 주사 투여가 적절하지 않을 것이라는 큰 기회로 작은 볼륨을 사용 안함. </li></ol> 3. 대동맥 - 대정맥 션트 수술 <ol><li> 마취. <ol><li> (흐름 : / 분 1 L) 5 % 이소 플루 란 / 100 % O 2 유도 챔버를 입력하고 챔버에서 쥐를 놓습니다. 뒷 발가락 핀치를 수행하여 마취의 적절한 깊이를 확인합니다. 쥐의 무게를. </li><li> 면도 약 8cm 길이 3cm 넓은 지역에 걸쳐 복부를 청소하십시오. 멸균 매트에 의해 덮여 열 매트 (37 ° C)에 그 뒷면에있는 쥐를 놓습니다. </li><li> 3 % 이소 플루 란 / 100 % O 2 (: / 분 1 L 흐름) - 2 환기 마스크 / 후드에서 주둥이를 놓습니다. 뒷 발가락 핀치를 수행하여 마취의 깊이를 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li></ol></li><li> 션트 수르GERY. <ol><li> 소독 용 염화 hexidine로 피부를 문질러. kg 프레 노르 핀 피하 수술 후 통증에 대한 0.01 mg의 / 주입한다. </li><li> 수술 멸균 악기를 사용합니다. 바로 성기 위 아래로 연장 격막 아래에 1cm를 시작, 중간 선에 복부에서 # 10 메스 블레이드와 절개를합니다. </li><li> 멸균, 젖은 거즈 (0.9 % 염화나트륨)의 장을 포함, 면봉으로 장을 들어 올리고 동물의 왼쪽에 놓습니다. </li><li> 복부 대동맥 및 주변 조직에 열등한 대정맥을 첨부 멤브레인을 분리하기 위해 면봉을 사용합니다. 참고 : 대동맥과 대정맥 사이의 세포막을 해부하지 마십시오. </li><li> 가시 집게를 사용하여 만 대동맥의 오른쪽에 만 바늘이 삽입되는 사이트에 바로 분기점 위의 혈관 주위 대동맥의 지방을 제거합니다. </li><li> 2mm의 공중으로부터 대동맥과 대정맥을 분리하기 위해 면봉을 사용하여바늘이 Biemer 클램프를위한 공간을 만들기 위해 삽입되는 위치에 대한 뛰어난. </li><li> 이 지역에서 먼저 대동맥 주위 느슨한 합자 (5-0 봉합사)를 배치합니다. 절개 (그림 1A)에 KOCHER 우수한 배치 한 다음에 KOCHER 클램프를 배치하여 합자에 긴장을 만들고. Biemer이 합자 (Figur 전자의 1A)에 불과 우수한 고정 배치합니다. </li><li> 면봉을 사용하여, 플로우 (도 1a)을 방해하기 위해 원심 가능한 대정맥 압축. 벤드 외부 (그림 1A)을 향해 구멍을 가리키는 45도 각도로 바늘 (이 프로토콜에서 18 G). </li><li> 90 도의 각도로 왼쪽 (도 1a)에 바늘 포인팅의 오리피스 바로 분기 위에 대동맥에서 바늘을 삽입한다. 왼쪽에있는 바늘의 끝을 조작하고 대정맥에 삽입합니다. 참고 : 바늘 끝이 지금해야 VISI대정맥 (그림 1B)에 BLE. </li><li> 혈전증을 방지하기 위해 삽입 부위에서 대동맥의 나머지 혈액을 밀어 제 면봉을 사용한다. 접착제가 충분히 충실하기 위해서는 멸균 거즈와 션트 주위를 닦아냅니다. </li><li> 대동맥에서 전체 바늘을 당겨 즉시 대동맥의 천자 사이트에 조직 접착제 한 방울을 적용합니다. 조직에 면봉을 접착제하지 않도록합니다. 대동맥을 언 클램프. </li><li> 에 당기고 션트에 대동맥 근위부의 합자를 해제하여 수동으로 션트를 확인합니다. 해리는 밝은 빨간색 션트에 대정맥의 말단 색상 및 션트 사이트에서 난류를 생성해야합니다. 참고 : 조임 다시 어두운 빨간색으로 대정맥의 혈액을 켜집니다. </li><li> 다시 동물의 창자를 놓습니다. 흡수성 4-0 봉합과 근육 층과 피부를 닫습니다. 마취에서 회복하기 위해 100 % O 2 동물을 환기. 참고 : 애니를 두지 마십시오이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 말은 무인. </li></ol></li><li> 위장 수술. <ol><li> 대동맥 내로 바늘의 삽입을 제외한 상기 모든 절차를 수행한다. </li></ol></li><li> 수술 후 관리. <ol><li> 단일 케이지와 다음날 아침까지 37 ° C에서 인큐베이터에 쥐를 놓습니다. </li><li> 수술 후 6 시간의 주위에, 수술 후 통증에 대해 kg 프레 노르 핀 피하 / 0.01 mg의 주입. 쥐가 불편의 흔적을 보여줍니다 경우 다음 날 아침을 반복합니다. 참고 : 수술 후 첫 3 일, 쥐 (우 또는 마시는 물이 약물과 혼합 할 때이 특히 중요합니다) 먹고 적게 마시는 경향이있다. 대부분의 쥐 3 일 수술 후 정상적인 동작을 보여줍니다. 그렇지 않은 경우, 긴밀하게 모니터링 할 수 있습니다. 일주 15 %를 초과하는 체중 감소, 비정상적인 것으로 간주되고, 이러한 래트 마취 동안 순환 혈액량의 추출에 의해 안락사한다. </li></ol></li></ol> 주 :이 프로토콜에서, 동물은 마취 동안 순환 혈액량의 추출에 의해 안락사된다. <ol><li> 증가 폐 혈액의 흐름에 초기 세포 및 기능 반응 (예, 유전자 업 규정 또는 초기 전사 인자)에 대한 수술 (MF8) 후 일일를 희생. </li><li> 초기 단계 PAH의 혈관 표현형 (신생 내막 병변없이 중간 비대)에 대한 수술 (MF14) 후 일주를 희생. </li><li> RVP와 mPAP에 가벼운 상승과 고급 단계 PAH의 혈관 표현형에 대한 수술 (MF21) (표시 내측 비대 및 신생 내막 형성) 후 2 주 희생. </li><li> RVP와 mPAP의 최종 단계 PAH의 혈관 표현형 수술 (MF28) (표시 신생 내막 폐쇄) 강한 상승 이후 3 주 희생. 우심실 장애의 임상 증상이 단계에서 일반적이다. </li><li> 28 일 (MF-RVF 후 희생) 임상 호흡 곤란, 심한 혼수, 체중 감소 (&lt;일주 10 %)으로 정의 PAH 관련 우심실 실패 (RVF)합니다. 이러한 징후 중 하나가 존재할 때 래트 종료. 자주, 쥐 일 (28)과 35 사이의 이러한 증상을 개발, 부주의 한 방치하면,이 시간 간격 동안 자발적으로 사망한다. </li></ol> 5. 오른쪽 심장 도관 <ol><li> 마취. <ol><li> (흐름 : / 분 1 L) 5 % 이소 플루 란 / 100 % O 2 유도 챔버를 입력하고 상자에 쥐를 놓습니다. 뒷 발가락 핀치를 수행하여 마취의 적절한 깊이를 확인합니다. 쥐의 무게를. </li><li> 심 초음파 프로토콜, 흉부 및 상복부를 들어, 면도와 쥐의 오른쪽 복부 측면에 목을 청소하고. </li><li> 열 매트 (37 ° C)에 그 뒷면에있는 쥐를 놓고 2 환기 마스크 / 후드에서 주둥이를 배치 - 3 % 이소 플루 란 / 100 % O 2 (흐름 : / 분 1 L). 주둥이는 연구원으로 직면해야한다. </li><li&gt; 마취의 깊이를 확인합니다. 심한 PH와 쥐에주의하십시오. 심박수가 감소하는 경우, 마취 깊이를 감소시킨다. 바람직하게, 20 분 이내에 모든 측정을 수행한다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li></ol></li><li> 심 초음파 프로토콜입니다. <ol><li> 브리 등의 알에 의해 기술 된 프로토콜에 따라 심장 초음파 검사를 수행합니다. 주피터 십삼인치 </li></ol></li><li> 도관 프로토콜입니다. 주 :이 프로토콜은 미리 형성된 팁 단단한 캐 뉼러 선단으로부터 볼 2mm로 15 cm 실리콘 카테터를 안내하는 20도 절곡 이용한다. 내부에 약간 구부러진의 오리피스와 20-G 바늘이 오른쪽 경정맥에 캐 뉼러를 삽입하는 데 사용됩니다 (물질의 목록 참조). PAH 진행 및 제어의 어떤 단계에서 래트 프로토콜이 사용될 수있다. <ol><li> 염화 hexidine와 목을 소독. 오른쪽 복부 측면에서 # 10 메스 블레이드와 1.5 cm의 절개를합니다목의 오른쪽 쇄골에서 하악 뼈. </li><li> 가위를 사용하여 조직을 확산. 경정맥이 나타날 때까지 핀셋을 사용하여 부드럽게 떨어져 조직을 당깁니다. 가시 집게를 사용하여 정 맥 경정맥 주위의 세포막을 해부하다. </li><li> 선박 주위에 느슨한 합자 (5-0 봉합사)를 배치하여 경정맥에 긴장을 넣습니다. 긴장을 높이고 환기 마스크 (그림 2A)에 합자를 테이프. </li><li> 삽입 부위의 하류에, 캐뉼라 누설 및 압력 손실을 방지하기 위해 제자리 후 조여 용기 주위 느슨한 결찰 장소. </li><li> 겸자의 손잡이를 약간 카테터 캐뉼라를 수행하는 내부에 구멍이있는 20-G 바늘 끝을 구부리. </li><li> 정맥 내로 20-G 바늘의 선단을 소개하고 신속하게 용기의 내부 도관을 포함하는 캐 뉼러를 배치했다. 바늘을 당긴 다음 합자을 닫습니다그 단계 5.3.4 제조 하였다. </li><li> 경정맥에 카테터를 포함하는 캐 뉼러를 실시한다. 정맥의 끝은 20도 곡선에있다 (단계 5.3.5 참조). 쇄골 아래 정맥을 기동과 우심방 (그림 2C)을 입력 조금 진행합니다. </li><li> 우심실을 입력하려면, 마음 (그림 2D)으로 왼쪽에있는 정맥의 끝을 가리 킵니다. 침대 옆 모니터에서 캠핑카 압력 곡선은 그림 2D를 일치 나타납니다. </li><li> RV의 압력 커브가 일정 할 때, 수축기 및 확장기 우심실 압력 1을 기록 (sRVP1 / dRVP1). </li><li> 왼쪽 및 위쪽에 캐뉼라의 선단을 조작. 캐 뉼러 (그림 2E) 내에서 카테터를 진행합니다. </li><li> 주 폐동맥 (PA)에 카테터를 진행합니다. 폐 밸브를 통과 할 때 어떤 저항을 느끼지해야합니다. 주 : 카테터 주요 폐동맥을 입력하면 D를iastolic 압력이 상승 할 것이다. 침대 옆 모니터에, PA 압력 곡선은 그림 2E를 일치 나타납니다. </li><li> 펜실바니아 압력 커브가 일정 할 때, 수축기, 이완기를 기록하고, PA 압력 1 (sPAP1, dPAP1, mPAP1)을 의미한다. </li><li> 카테터의 끝에서 볼이 폐 동맥 쐐기 도착 때까지 또한 정맥 내 카테터를 진행합니다. 침대 옆 모니터 드롭 압력 곡선을 관찰하고 그림 2 층에 쐐기 압력 곡선을 일치합니다. </li><li> 웨지 압력 곡선이 일정 할 때, 수축기, 확장기를 적어 쐐기 압력을 의미한다. </li><li> 천천히 그리고 이후에 카테터를 뒤로 당겨 측정하고 침대 옆 모니터에 표시되는, sPAP2, dPAP2, mPAP2, sRVP2 및 dRVP2에 대한 값을 적어 둡니다. </li><li> RV를에 약간 측정하는 정맥 및 카테터를 철수 할 때 오른쪽 심방 압력 (RAP)을 의미한다. 곡선은 그림 2A의 RAP 곡선과 일치해야합니다. 아니TE :이 프로토콜에서, 래트를 마취 동안 순환 혈액량의 추출에 의해 카테터 프로토콜 후에 안락사시켰다. </li></ol></li></ol> 6. 형태학 평가 및 형태 계측 주 :이 프로토콜에서, 동물은 마취 동안 순환 혈액량의 추출에 의해 안락사된다. PAH 진행 및 제어의 어떤 단계에서 래트 프로토콜이 사용될 수있다. <ol><li> 희생 후, 5 기관지 분기 위의 mm와 심장에 폐를 연결하는 선박에 대한 기관을 절단하여 폐를 꺼내. 차가운 식염수에 폐를 넣습니다. 왼쪽 폐를 해부하다. 분기점에서 좌측 주기관지를 잘라. </li><li> 4 % 파라 포름 알데히드로 50 ML의 주사기를 채우기 주사기로 정맥에 튜브를 연결하고, 작업 테이블 위에 미터에 대해 주사기를 끊습니다. 수동적으로 파라 포름 알데히드와 폐를 채우기 위해 좌측 주기관지의 캐 뉼러를 장착한다.주의 파라 포름 알데히드를 처리합니다. </li><li> 48 시간 동안 파라 포름 알데히드의 왼쪽 폐를 품어. </li><li> (70 % 에탄올 (1 시간) 80 % 에탄올 (1 시간) 90 % 에탄올 (1 시간), 100 % 에탄올 (3 H), 크 실롤 (2H), 파라핀에 연속적으로 배양하여 왼쪽 폐 탈수 2 H). </li><li> 카세트 대향 폐의 폐문에 파라핀 왼쪽 폐를 포함. </li><li> 제조업체의 지침 29 당 등의 Verhoeff 또는 엘라 밴 Gieson 염색을 이용하여 파라핀 포함, 4 μm의 폐 섹션을 얼룩. 확인 탄성 라미 잘 (그림 3과) 차별화된다. 40X 배율로 스테인드 섹션을 검색합니다. </li><li> 4 사분면으로 폐를 나눈다. 각 사분면에서 &lt;외경 50㎛의 (인트라 선포) 10 용기&gt; 외부 직경 10 μm의 용기 (50) (프리 선방)를 찾는. 사진 (폐 당 2 × 40 사진)를 가져 가라. 무작위로 모든 선박 20 배 배율과 사진까지 확대볼이 필드에 선택 바이어스를 최소화합니다. </li><li> &gt; (2)의 긴 / 짧은 직경의 비, 불완전한 원형 또는 혈관벽 이상의 분기 붕괴가 혈관을 제외. 참고 : 제외 된 선박의 예는 같은 배율 (40 배)에 각각의 사진을 확인하고 스케일 바 등 3b는 그림에 표시됩니다. </li><li> 오픈 ImageJ에 첫 번째 사진. &quot;분석한다&quot;를 통해 규모를 설정하는 그림과 스케일 바의 직선을 그립니다 와 &quot;규모를 설정합니다.&quot; 내용은 &quot;알려진 거리&quot;그림의 스케일 바의 값을 사용합니다. 길이의 단위로 마이크로 미터 (μm의)를 사용합니다. 세계적으로 규모를 설정합니다. </li><li> &quot;자유 선택&quot;을 사용하여 내강 영역 (그림 3)의 내부 경계에 선을 그립니다, 와 &quot;측정&quot;을 사용 (CRTL의 m)이 면적을 측정한다. 그런 다음, 외부 ELAST 주위에 선을 그립니다IC의 라미 나 (도 3)은 전체 용기 면적을 측정한다. </li><li> (내강 외경을 계산 <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq1.jpg" /> )를 사용하여 <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq2.jpg" /> . </li><li> 사용하여 두께를 계산 <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq3.jpg" /> . </li><li> 사용 벽 / 루멘 비율을 계산 <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq4.jpg" /> . </li><li> 사용 폐색 점수를 계산 <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq5.jpg" /> . </li><li> muscularization에 용기를 점수 (아니, 부분 또는 전체 muscularization) (그림 3B). 참고 : 완전히 muscularized로 절반 이상 원주에 대한 이중 탄성 얇은 판과 선박이 정의되어 있습니다. 부분적으로 muscularized로 이중 탄성 얇은 절반 이하 둘레 선박이 정의되어 있습니다. </li><li> neoi의 존재 용기 점수ntima 없습니다 (예 또는 아니오) (그림 3C). 참고 : (자주 편심) 내강 폐쇄와 함께 명확하게 정의 된 내부 탄성 얇은없이 선박은 신생 내막 병변으로 정의됩니다. </li></ol>

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</ol>

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이 방법은 래트 원리 혈역학 및 PAH이 모델의 특징 병리학 끝점을 평가하는 유동 유발 PAH와 기술을 만들 MCT로 전처리에서 대동맥 대정맥 션트의 수술 과정을 설명한다. 프로토콜 및 문제 해결에서 중요한 단계 수술 및 수술 후. 대동맥 - 대정맥 션트 수술 중 가장 중요한 단계는 대동맥과 대정맥의 해부입니다. 대동맥과 대정맥이 충분히 해부한다 둘러싸는 막은 바늘이 삽입됩니다 대동맥 영역의 1) 좋은 시야를 작성하고 삽입 후 대정맥에 바늘의 위치와 2) 충분한 공간의 삽입 부위 상기 대동맥 클램프. 동일한 막 그러나, 또한 두 용기 (도 1)의 천공 위치를 통해서 대동맥 혈액을 수행하는데 사용된다. 너무 많은 막을 것이다 해부션트가 누출 원인이된다. 조직 접착제 누설을 해결할 수 있지만, 다음과 같은 크기를 손상 션트 스며있다. 접착제가 용기의 션트를 통과하거나 또는 제한되면, 접착제가 부드럽게 제...

이 방법의 목적은 래트에서 심한 흐름 유도 폐동맥 고혈압 재현 모델을 작성하고 그 원리 혈역학 적 및 조직 병리학 종료점을 측정하는 방법이다. 폐동맥 고혈압 (PAH)는 우심실 실패와 죽음으로 이어지는 폐 혈관 저항의 점진적 증가를 포괄하는 임상 증후군이다. 폐 고혈압 질환 (PH)의 상위 질병 스펙트럼 내에서 PAH는 치료 1 않고 남아있는 가장 심각한 형태입니다. PAH의 기본 arteriopathy은 혈관 내강을 폐색 혈관 재 형성의 전형적인 양식을 특징으로한다. 정상이 아닌 muscularized 선박과 내측 용기 층의 비대의 Muscularization가 PAH 초기 질병 현상으로 간주되며, 또한 PH 2의 다른 형태로 볼 수 있으며, 3 가역 것으로 생각된다. PAH A와dvances, 내막 층은 결국 특성 신생 내막 병변 (2)을 형성, 개조하기 시작합니다. 신생 내막 형 폐 혈관 리모델링은 PAH에 배타적이며, 현재 4 돌이킬 수없는 것으로 간주된다. PAH는 드문 질환으로 그 병인 학적 이해의 발전과 새로운 치료법의 개발은 동물 모델에 크게 의존하고있다. 쥐의 monocrotalin (MCT) 모델이있다 간단한 하나의 히트 모델이며, 여전히 자주 사용됩니다. MCT는 폐 세동맥과 지역 염증 5 부상을 유발하는 독소이다. / kg의 MCT 60 mg의 평균 폐동맥압 (mPAP), 폐 혈관 저항 (PVR)의 증가를 초래하고, (3) 후 우측 심실 비대 (RVH) - 4 6 주. histomorphology는 신생 내막 병변 (5)없이 고립 된 내측 비대 특징으로한다. 건교부그것은 일반적으로 후자로 제시되지만 쥐 모델에 따라서, 적당한 PH의 형태로, 그리고 PAH를 나타낸다. 선천성 좌우 션트 (PAH-CHD)과 연관된 PAH 소아에서 폐 혈류가 내막 병변 7, 8, 9의 발전을위한 핵심 트리거로 간주 증가. 래트에서 증가 된 폐 혈류가 복부 대동맥과 대정맥, 제 10 1990에 기재된 방법들 사이의 단락의 생성에 의해 유도 될 수있다. 증가 된 폐 흐름을 만들 수있는 대안은 일방적 인 전폐 절제술이나 폐 동맥 문합 (11)에 쇄골에 의해입니다. 이러한 모델의 단점은 개념적 또는 의한 폐 맥관계의 인성 부상 절제술에 의해 유도 된 잔여 폐 적응 통로 활성화의 잠재적 보상 성장 이루어져폐 동맥 문합을 모두 증가 폐 혈류의 영향을 교란. 대동맥 대정맥 션트 만들고 MCT 투여군에서 초 히트로 유도되는 폐 혈류가 증가 될 때, 특성 내막 병변이 발생하고, 증가 된 후 PAH의 심각한 형태와 관련된 우심실 실패 (RVF)는 3주 개발 12 흐른다. 이 모델에서 PAH의 혈역학 적 진행은 심 초음파 및 오른쪽 심장 카테터에 의해 생체 내에서 평가 될 수있다. 우심실 실패의 혈관 histomorphology, 혈관 벽의 두께, 동맥 폐색의 정도 및 매개 변수는 PAH의 생체 특성의 기둥을 형성한다. 이 방법은 대동맥 - 대정맥 션트 (AC-션트) 수술에 대한 자세한 프로토콜, 우측 심장 카테터, 혈관 histomorphology의 정성 및 정량 평가에 대해 설명합니다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Shunt Surgery</td></tr><tr><td>Sterile 수술용 장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Duratears Eye ointment</td><td>Alcon</td><td>10380</td><td></td></tr><tr><td>Chloride-Hexidine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Histoacryllic 조직 접착제</td><td>B. Braun Medical</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Silkam 5-0 봉합사 검은 비 흡수성</td><td>B. Braun Medical</td><td>F1134027</td><td></td></tr><tr><td>Safil 4-0 봉합사 바이올렛 흡수성</td><td>B. Braun Medical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>18 G 바늘</td><td>Luer</td><td>NN1838R BD</td><td>팁 45도 구부</td></tr>리에서 바깥쪽 <tr><td>거즈 10 x 10 cm</td><td>Paul Hartmann</td><td>407825</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic Buprenorphine</td><td>RB Pharmaceuticals</td><td>5429</td><td>피하 주입</td></tr><tr><td>염화나트륨 0.9%</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>환기 마스크 쥐</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>두피 블레이드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biemer 클램프 18mm, 5mm 개구부&nbsp;</td><td><a href="https://www.google.nl/url?sa=i&amp; rct=j& q=& esrc=s& 출처=이미지& cd=& cad=rja& uact=8& ved=0ahUKEwitqICpkITNAhWiL8AKHe6iCC8QjhwIBQ& url=http%3A%2F%2Fwww.agnthos.se%2Fquote%2Fquote%2Fcaturl%2Fid%2F242%2FBiemer& psig=AFQjCNEnfRXuMQ6Doi4_-2KMYu3qeRovMA& ust=1464777707579746">AgnTho</a></td><td>64-562</td><td></td></tr><tr><td>히트 매트</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kocher 클램프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>면도기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Right Heart Catheterization</td></tr><tr><td>Sterile 수술용 장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>눈 연고</td><td>Duratears</td><td></td><td></td></tr><tr><td>염화물 헥시 딘</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>거 즈 10 × 10cm</td><td>Paul Hartmann</td><td>407825</td><td></td></tr><tr><td>Silkam 5-0 봉합사 블랙 비 흡수성</td><td>B. Braun Medical</td><td>F1134027</td><td></td></tr><tr><td>Needle 20G</td><td>Luer</td><td></td><td>Tip 안쪽으로 약간 구부러</td>짐</tr><tr><td>캐뉼라 20G</td><td>루어</td><td></td><td>카테터 도입, 팁 20도</td></tr><tr><td>실라스틱 카테터 15cm 길이</td><td></td><td></td><td>0.5mm 볼 2mm 팁 압력</td></tr><tr><td>변환기</td><td>Ailtech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>침대 옆 모니터 Cardiocap/5</td><td>Datex-Ohmeda</td><td></td><td></td></tr><tr><td>면도 기계</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10mL 주사기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 0.9 %</td><td></td><td></td> <td>플러싱</td></tr><tr> 용<td colspan = "4">Vascular Morphology< / strong</td></tr><tr><td>>50 mL 주사기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 % 포름 알데히드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>18 G 캐뉼러 (튜브</td><td></td><td></td><td></td>포함</tr>) <tr><td>Verhoef 염색 키트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&amp; region=NL">HT254</a></td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>디지털 슬라이드 스캐너</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elastic (결합 조직 염색제)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab150667</td><td>http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html 
http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(웹사이트).pdf</td></tr></tbody></table>

흐름 유도 된 폐동맥 고혈압에 대한 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

이 프로토콜에서 PAH는 60mg/kg 모노크로탈린(MCT) 주사와 대동맥강 션트(MCT+Flow)를 통한 폐혈류 증가를 결합하여 유도됩니다. 션트는 복부 대동맥에서 인접한 기강 정맥으로 18-G 바늘을 삽입하여 생성됩니다. 폐류의 증가는 조기 내측 비대에 이어 신내막 병변과 작은 폐혈관의 점진적인 폐색이 뒤따르는 뚜렷한 질병 진행 단계를 가진 심각한 형태의 PAH에 대한 필수적인 유발 요인으로 입증되었습니다. 이 모델에서 우측 심장 및 폐 혈류역학을 측정하기 위해 우측 경정맥을 통해 유연한 볼팁 카테터가 포함된 단단한 캐뉼라를 우심실에 삽입하여 우측 심장 카테터 삽입을 수행합니다. 그런 다음 카테터는 주요 폐동맥과 더 원위적인 폐동맥으로 진행됩니다. 폐 혈관 구조의 조직 병리학은 근육화의 정도와 신생근의 존재에 대해 전혈관 및 시내혈관의 점수를 매겨 질적으로 평가하고, 벽 두께, 벽-내강 비율 및 폐색 점수를 측정하여 정량적으로 평가합니다.

대표 결과는 그림 4에 제시되어있다. 제어 (N = 3), MF8 (N = 5), MF14 (N = 5), MF28 (N = 5) 및 MF-RVF (: 제시된 결과는 MCT + 다음 그룹 루이스 래트에서의 흐름 특성을 보여 N = 10). 통계 분석은 본 페로 니 보정 된 일방 ANOVA를 사용하여 수행 하였다. 60 / kg의 MCT mg을하고 수축기 우심실 압력의 평균 상승 (sRVP) (23 ± 6 56 ± 11 mmHg로에), 수축기 폐동맥압 (SPAP) (20 ± 4 54.0 ± 10 mmHg로에에 폐 혈류의 우위를 더욱 굳혔 ), 16 ± 3 이십팔일 (MF28)에서) mmHg로 ± 4 36 () 폐동맥압 (mPAP를 의미한다. 그들은 우심실의 실패가 개발 단계 (MF-RVF) (그림 4)까지</stron...

이 프로토콜은 쥐에서 흐름 유도 폐동맥 고혈압(PAH)에 대한 모델을 만들기 위한 수술 절차와 이 모델에서 주요 혈역학적 및 조직학적 끝점을 분석하는 절차를 설명합니다.

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

이 절차의 전반적인 목표는 쥐의 흐름 유도 폐동맥 고혈압에 대한 모델을 만들고 우심 카테터 삽입 및 혈관 형태 측정을 통해 원리 혈역학 및 조직학적 종점을 분석하는 것입니다. 우리는 인간의 폐동맥 고혈압과 유사한 새로운 인티말 유형 혈관 리모델링을 특징으로 하고 임상적으로 잘 알려진 유발 요인, 즉 폐혈류 증가에 의해 유도되는 흐름 관련 폐 고혈압에 대한 쥐 모델의 생성을 제시합니다. 이러한 특성은 이 모델의 연구 결과를 인간 질병에 대한 번역을 향상시킬 것입니다.또한 정량적 형태 측정법을 사용하여 조직 병리학의 혈류역학적 평가 및 특성화를 위한 표준화된 방법을 보여줍니다. 이러한 기술의 의미는 새로운 치료 전략의 발견 및 평가로 확장되며 폐 혈류역학 및 혈관 형태에 대한 특정 효과를 평가할 수 있습니다. 이 실험실의 미세외과 의사인 Annemieke Smit-Van Oosten과 Michel Weij가 절차를 시연할 것입니다.수술을 시작하기 전에 마취된 쥐의 피부를 소독을 위해 염화물 헥사덴으로 문지르고 수술 후 진통제를 위해 부프레노르핀을 피하에 주사합니다. 그런 다음 가위를 사용하여 횡격막 아래 1cm에서 시작하여 생식기 바로 위까지 복부를 따라 정중선을 절개합니다. 0.9%식염수가 적신 멸균 거즈에 장을 옮겨 동물의 왼쪽에 놓고 더 젖은 멸균 거즈로 장기를 덮습니다.새 면봉을 사용하여 복부 대동맥과 주변 조직보다 아래쪽에 있는 대정맥을 연결하는 막을 분리합니다. 해부 현미경으로 쪼개진 집게를 사용하여 바늘이 삽입될 대동맥 오른쪽의 분기점 바로 위에 있는 혈관 주위 대동맥 지방을 제거합니다. 그런 다음 대동맥과 대정맥을 바늘 삽입 부위보다 2mm 더 높은 위치에서 분리하여 빔 클램프를 위한 공간을 만듭니다.이제 대동맥 주위에 느슨한 5-O 봉합사를 놓고 봉합사에 Kocher 클램프를 놓아 절개 부위 위쪽 결찰에 장력을 만듭니다. 빔 클램프를 봉합사 바로 위에 놓고 새 스왑을 사용하여 대정맥을 가능한 한 원점으로 압축하여 흐름을 방해합니다. 다음으로, 베벨을 바깥쪽으로 놓고 18 게이지 바늘을 45도 각도로 구부리고 바늘을 동물에 대해 90도 각도로 잡고 바늘 끝을 경사가 왼쪽을 향하도록 분기점 바로 위의 대동맥에 삽입합니다.대동맥과 대정맥을 둘러싸고 있는 막을 과도하게 박리하면 션트의 삽입 영역이 잘 보일 수 있을 만큼만 절개해야 하는데, 과도하게 박리하면 션트가 누출될 수 있습니다. 바늘 끝을 왼쪽으로 조작하고 혈관 내에서 관찰할 수 있을 때까지 바늘을 대정맥에 삽입합니다. 혈전증을 예방하려면 새 면봉을 사용하여 삽입 부위를 통해 대동맥에 남아 있는 혈액을 밀어내고 멸균 거즈를 사용하여 션트 주변을 말리십시오.바늘을 제거하고 즉시 천자 부위에 조직 접착제 한 방울을 바르십시오. 그런 다음 대동맥에서 클램프를 제거하고 대동맥 전단지의 합자를 션트로 수동으로 해제합니다. 션트 원위부의 대정맥은 밝은 빨간색이 되어야 하며 션트 부위에 난류를 생성해야 합니다.션트를 확인한 후 장을 복강으로 되돌리고 흡수성 4-0 봉합사를 사용하여 근육과 피부층을 봉합합니다. 그런 다음 마취 회복을 위해 동물에게 100% 산소를 공급하여 인공호흡을 합니다. 우측 심장 카테터 삽입을 위해서는 염화물 헥사덴으로 목을 소독하고 10번 메스 날을 사용하여 오른쪽 쇄골에서 하악골까지 목의 오른쪽 복부 쪽을 1.5cm 절개합니다.해부 현미경 아래에서 가위를 사용하여 조직을 펴고 핀셋을 사용하여 경정맥이 나타날 때까지 조직을 부드럽게 잡아당깁니다. 쪼개진 집게를 사용하여 경정맥 주위의 막을 절개합니다. 그런 다음 혈관 주위에 느슨한 5-O 봉합사를 놓고 인공호흡 마스크에 결찰을 테이프로 붙여 정맥의 장력을 높입니다.삽입 부위의 하류에서 혈관 주위에 느슨한 결찰을 놓습니다. 그런 다음 집게 손잡이를 사용하여 경사가 안쪽을 향하도록 20게이지 바늘 끝을 약간 구부리고 바늘 끝을 정맥에 삽입합니다. 카테터가 포함된 캐뉼러를 혈관 내부에 빠르게 배치하고 바늘을 제거하고 캐뉼라 주위의 다운스트림 결찰을 닫아 캐뉼라를 제자리에 고정합니다.이제 캐뉼라와 카테터를 경정맥으로 안내하고 쇄골 아래의 캐뉼라를 움직여 오른쪽 심방으로 들어갑니다. 캐뉼라의 끝이 심장 쪽을 향하도록 하여 우심실로 들어갑니다. 우심실 압력 곡선이 병상 모니터에 나타나야 합니다.우심실 압력 곡선이 일정할 때 수축기 및 이완기 우심실 압력을 기록하고 캐뉼라 끝을 왼쪽과 위쪽으로 조작합니다. 캐뉼라 내에서 카테터를 전진시킨 다음 카테터를 주폐동맥으로 전진시킵니다. 폐동맥 압력 곡선이 일정할 때 수축기, 이완기 및 평균 폐동맥 압력을 기록합니다.그런 다음 카테터 끝에 있는 공이 폐동맥에 끼일 때까지 캐뉼라 내에서 카테터를 전진시킵니다. 압력 곡선의 강하는 침대 옆 모니터에서 관찰해야 합니다. 쐐기 압력 곡선이 일정하면 수축기, 확장기 및 평균 쐐기 압력을 기록합니다.그런 다음 카테터를 천천히 뒤로 당기고 침대 옆 모니터의 곡선에 따라 PA 및 RV 압력에 대한 각각의 값을 기록합니다. 카테터가 우심실에 도달하면 캐뉼라와 카테터를 약간 뒤로 당겨 평균 우심방 압력을 측정합니다. 이 대표적인 실험에서는 MCT 투여 후 28일 후 폐혈류가 증가한 후 수축기 우심실, 수축기 폐동맥 및 평균 폐동맥 압력의 평균 상승이 관찰되었습니다.우심실 대 좌심실 및 중격 중량 비율은 치료 후 14일째부터 우심실 부전 단계까지 크게 증가하며, 이는 우심실 비대를 나타냅니다. 또한 우심실 부전 단계에서 간과 건식의 비율이 크게 증가하는데, 이는 간의 부종과 울혈성 우심실 부전을 나타냅니다. 폐동맥 고혈압이 진행되는 동안 아시나르 혈관의 근육화는 점진적으로 증가하며, 혈관의 거의 절반이 질병의 말기에 근육화된 거의 모든 세동맥에서 치료 후 14일째까지 전체 근육 매체를 나타냅니다.또한, 신내막 병변은 21일째에 처음 관찰되며, 질병 진행이 끝날 때까지 모든 세동맥의 약 65%가 신내막층을 나타냅니다. 이로 인해 진행성 혈관 폐색이 발생하며 질병의 말기에서 내강의 최대 60%가 폐색됩니다. 이러한 기술을 마스터하면 기술당 20분 안에 완료할 수 있습니다.이 절차에 따라 초음파 심전도 또는 압력 볼륨 루핑과 같은 다른 방법을 수행하여 우심실 기능에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 폐동맥 고혈압 분야의 연구자들이 폐 혈관 조직에 대한 혈류 증가의 영향을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 쥐의 흐름 유도 폐동맥 고혈압에 대한 모델을 만드는 방법과 그 원리인 혈역학적 및 조직학적 종점을 분석하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

shunt-surgery-right-heart-catheterization-vascular-morphometry-rat

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 문서에서는 우심실의 크기와 생쥐의 폐 고혈압의 심 초음파 평가를위한 프로토콜을 제공합니다. 응용 프로그램은 유전자 변형과 심장 근육 병증 및 폐 혈관 질환의 독소 유발 마우스 모델에서 표현형 결정 및 직렬 평가를 포함.

마우스의 오른쪽 심장의 심 초음파 평가

폐동맥고혈압(PAH)은 폐동맥의 소멸과 우심실 부전의 발병을 유발하는 폐동맥 질환입니다. PAH의 설치류 모델은 PAH의 병태생리학을 이해하는 데 중요합니다. 여기에서는 마우스와 쥐에서 우측 심장 카테터 삽입 및 심장 초음파 검사를 통한 혈류역학적 특성을 보여줍니다.

폐동맥 고혈압의 설치류 모델의 혈역학 특성

왼쪽된 심 방 협 (라스)은 그룹 2 폐 고혈압 (PH) 및 폐 정 맥 arterialization 기본 메커니즘 연구는 소설 외과 기술입니다. 여기, 선물이 폐 정 맥 arterialization를 일으키는 원인이 되 고 쥐에서 PH를 알 맞도록 하는 티타늄 클립을 사용 하 여 좌 심 수축 하는 프로토콜.

왼쪽된 심 방 협 유발 쥐에서 그룹 2 폐 동맥 고혈압과 폐 정 맥 Arterialization

설치류 왼쪽된 pneumonectomy 폐 고혈압 연구에 귀중 한 기술 이다. 여기, 선물이 쥐 pneumonectomy 절차와 최소한의 사망률 및 사망을 보장 하기 위해 수술 후 치료를 설명 하는 프로토콜.

쥐에 폐 고혈압의 모델로 Monocrotaline 또는 Sugen와 함께 왼쪽된 Pneumonectomy

여기에서, 우리는 오픈 흉부 수술 접근법을 사용하여 마우스에 있는 우심실 및 폐 동맥의 침략적인 혈역학 평가를 능력을 발휘하는 프로토콜을 제시합니다.

마우스에 있는 우심실 시스템 및 저산소증 유도된 폐 동맥 고혈압을 위한 침략적인 혈역학 평가

본 프로토콜은 왼쪽 심장 질환으로 인한 폐 고혈압의 래트 모델에서 오름차순 대동맥 밴딩을 제거하기 위한 외과적 절차를 기술한다. 이 기술은 폐 순환과 오른쪽 심장에서 역리모델링의 내인성 메커니즘을 연구하여 폐 고혈압 및 / 또는 우심실 기능 장애를 역전시키는 전략을 알려줍니다.

쥐의 대동맥 해산에 의한 좌심 질환으로 인한 폐고혈압의 역혈관 리모델링 모델

현재 프로토콜은 폐동맥 고혈압의 쥐 모델에서 우심실 형태 및 기능의 심초음파 특성을 설명합니다.

폐동맥 고혈압의 쥐 모델에서 우심실 기능의 종합적인 심초음파 평가

이 프로토콜은 마우스에서 다중 정맥 볼루스 용량 투여 및 침습적 혈류역학적 모니터링을 실행하기 위한 단계별 절차를 제공합니다. 조사관은 폐동맥 고혈압에 대한 향후 치료 화합물 스크리닝을 위해 이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

저산소증 유도 마우스 폐동맥 고혈압 모델에서 다중 정맥 볼루스 투여 및 침습적 혈류역학 평가

우심부전(RHF)은 우측 심장 확장과 비대가 특징이며, 심실 및 심방 기능 부전을 유발합니다. RHF와 관련된 심폐 질환은 심장 부정맥의 위험 증가를 동반합니다. 이 논문은 향상된 심실 및 심방 부정맥 형성과 관련된 폐동맥 밴딩 유도 RHF의 표준화된 모델을 설명합니다.

폐동맥 밴딩을 이용한 우측 심장 리모델링 및 부정맥의 쥐 모델

우심실 기능 평가를 위한 세부 방법의 발표는 폐고혈압 연구의 품질과 신뢰성을 향상시켜 향후 연구를 위한 강력한 프레임워크를 제공하고 다양한 실험실에서 재현성을 향상시킬 것입니다.

폐동맥 고혈압의 실험 모델에서 우심실 기능 평가

프로토콜은 쥐의 폐동맥압을 감지하기 위해 우심 카테터 삽입법을 사용한 경험을 자세히 소개하여, 더 정확한 데이터를 효율적으로 얻고 실험의 성공률을 높이는 데 도움을 줍니다. 이 방법은 또한 다양한 실험실 간 실험의 재현성을 향상시킵니다.

쥐의 폐동맥압 측정 우심 카테터 삽입술

학습하세요 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측을 이용한 흐름 유도 폐동맥 고혈압 연구 방법. 이 기술은 혈역학 변화와 혈관 재형성을 분석하여 새로운 치료 전략 개발에 기여합니다.

흐름 유도 된 폐동맥 고혈압에 대한 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측

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