전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

면역 적격 마우스에서 신 세포 암의 동소 모델의 구현은 연구자에게 동일한 동물의 신장 차 종양 및 폐 전이의 존재에 의해 정의 된 임상 관련 시스템을 제공한다. 이 시스템은 전임상 생체 내에서 다양한 트리트먼트를 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 종양 성장 및 전이 및 항종양 요법의 효능 연구를 위해 종양 세포의 신장 내 이식을 통해 마우스 정소성 신장 종양을 확립하는 것입니다. 이 방법은 신장암의 전임상 모델에서 새로운 치료법이 얼마나 효과적인지와 같은 비뇨기과 종양학 분야의 주요 질문에 답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 신장 내 종양 이식이 임상적 신세포 암종 발병을 모방하여 원발성 폐 전이성 신장 종양을 확립한다는 것입니다.

Renca 종양 세포를 준비하려면 먼저 PBS로 헹군 후 0.25% 트립신과 HBSS로 세포 배양을 분리합니다. Complete RPMI Medium으로 5분 후에 반응을 중화합니다. 원심분리를 위해 세포를 원뿔형 튜브로 옮기고 펠릿을 새로운 HBSS에 다시 현탁시킵니다.

계수 후 HBSS의 1밀리리터당 6개 세포 농도에 대해 부피를 2 곱하기 10으로 조정하고 18게이지 바늘이 장착된 1ml 주사기에 세포를 끌어들입니다. 다음으로, 발열 패드 위에 멸균 수술용 드레이프를 놓고 발가락 꼬집기로 적절한 수준의 진정 효과를 확인합니다. 마우스의 왼쪽 측면에서 머리카락을 제거하고 눈에 수의사 연고를 바르십시오.

그런 다음 5% 포비돈 요오드 소독제로 착상 부위를 면봉으로 닦고 멸균 메스를 사용하여 복막을 관통하지 않도록 주의하면서 왼쪽 측면을 1-1.5cm 절개합니다. 가위를 사용하여 복막에서 진피를 분리하고 절개 부위에 멸균 면 거즈를 두드려 피를 제거합니다. 그런 다음 왼손으로 머리를 잡고 오른손으로 옆구리를 지지하여 복막을 통해 비장을 찾습니다.

오른손에서 한 손가락을 사용하여 아래에서 마우스를 촉진합니다. 신장이 보여야 합니다. 복막과 신장 전체에 긴장을 주기 위해 동물을 단단히 잡고 보조자가 온전한 복막을 통해 0.1ml의 렌카 세포를 신장 중앙으로 천천히 전달하도록 합니다.

세포의 역류를 줄이기 위해 5-10초 동안 바늘을 제자리에 고정합니다. 그런 다음 시아노아크릴레이트 조직 접착제의 얇은 층으로 절개 부위를 닫습니다. 실험 종료 지점에서 가위를 사용하여 흉곽, 목 및 타액선을 통해 복부 중간에서 시작하여 정중선을 절개합니다.

가위와 집게를 사용하여 폐 조직을 손상시키지 않고 갈비뼈를 조심스럽게 제거하고 결합 조직을 제거하여 기관을 노출시킵니다. 18 게이지 바늘이 장착된 3밀리리터 주사기에 10%India Ink와 PBS를 채웁니다. 그런 다음 집게를 사용하여 기관 아래에 실크 봉합사를 조심스럽게 꿰매고 느슨한 매듭을 묶습니다.

다음으로, 바늘을 기관에 조심스럽게 삽입하고 India Ink 용액을 1-1.5밀리리터로 천천히 폐를 팽창시킵니다. 기관 주위의 매듭을 단단히 당겨 잉크의 역류를 억제한 다음 바늘을 제거하고 결합 조직을 조심스럽게 잘라내어 팽창된 폐를 제거합니다. 실온의 화학 흄 후드에 5ml의 Fekete 용액이 들어 있는 15ml 원뿔형 튜브에 폐를 고정합니다.

24-48시간 후, 손상되지 않은 염색된 폐를 제거하고 35 x 10mm 페트리 접시에 담긴 엽을 조심스럽게 떼어냅니다. 그런 다음 해부 현미경으로 백색 종양 결절의 수를 세십시오. 성공적인 마우스 신장 내 Renca 세포 이식은 신장에서 종양이 발생하고 종양이 있는 동물과 함께 폐로 전이되며, 종양이 이식된 신장의 무게 증가로 측정된 강력한 종양 부담을 보여줍니다.

관찰된 바와 같이, Renca 종양은 사이토케라틴 8 및 18에 대한 면역조직화학적 염색으로 확인할 수 있습니다. Renca 세포주를 발현하는 루시퍼라아제를 이식하면 생물 발광 이미징을 통해 신장의 종양 부담과 폐로의 전이를 추적할 수 있으며, 이는 india link lung inflation에 의해 추가로 확인되었습니다. 이 기술을 완전히 익히면 제대로 수행하면 마우스당 5분 이내에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 시도하는 동안 정확한 신장 내 종양 이식을 보장하기 위해 복막을 통해 신장을 명확하게 식별하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 전임상 약물 검사와 같은 다른 방법을 수행하여 신약이 신장 내 종양의 성장 또는 전이에 어느 정도 영향을 미치는지와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 마우스에 정소성 신장 종양을 확립하기 위해 신장 내 종양 세포 이식을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

살아있는 동물 및 수술 기구를 다루는 것은 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 기관의 동물 취급 지침을 따르고 멸균된 수술 부위 및 기구를 유지하는 것과 같은 예방 조치를 항상 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.