Name: 실험 성 대장염 동안 장내 상피 장벽 기능에 영양 보조 식품의 유익한 효과 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: 배우세요 쥐 대장염 모델에서 영양 보조 식품이 장내 상피 장벽 기능에 미치는 유익한 효과를 평가하는 방법을. 이 기법은 저비용으로 대장 형태학을 명확히 분석하여 염증성 장 질환 연구에 기여합니다.

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이 작품은 멕시코 과학 기술위원회 (CONACYT, 207268 및 233395 마이클 Schnoor에)에서 보조금에 의해 지원되었다. KFCO는 석사 학위를 취득 할 수있는 CONACYT의 장학금 (396260)의받는 사람입니다.

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저자는 공개 아무것도 없어.

임상 연구에서 영양 보충제를 사용하기 위해, 이득 등과 보충 안전 신중 동물 연구에서 생체 내에서 평가한다. 대장염의 경우, IBD의 임상 증상과 유사한 여러 적절한 동물 모델은 DSS, TNBS, 또는 아세트산을 이용한 화학 모델을 포함하여, 확립되었다; 녹 - 아웃 등 IL10-KO로 (KO) 모델; 및 입양 T 세포 전송 19-21를 사용하여 대장염을 면역 세포 매개. 대장염의 DSS 모델은 인간 IBD 많은 질병 증상과 유사한 및 대장염 (22)의 분자 메커니즘을 조사 연구의 과다 사용되어왔다 대장염 유도 신속하고 신뢰할 수있는 방법이다. 또한, DSS 대장염은 가역적이며, colitogenic 자극이 제거 된 후, 따라서 또한 조직의 치유에 대한 연구 수 있습니다. 제공되는 프로토콜 상세 이전에 우리의 실험실 8에 최적화 된 DSS 대장염 모델을 설명합니다. <p클래스 = &quot;jove_content는&quot;&gt; 단점은 환경...

대장염은 설사와 복통을 일으킬 수있는 대장의 염증 상태이다. 대장염 감염 또는 스트레스에 응답하여, 급성이거나, 그러한 염증성 장 질환 (IBD)의 그룹에 속하는 궤양 성 대장염 (UC)와 같이 만성 질환으로 발전 할 수있다. UC의 임상 증상이 잘 설명되었지만, 병인은 여전히 좋지 1 이해된다. UC는 중요한 역할이 재생 유전 변이 및 비정상적인 면역 반응과 더불어, 인성 질병이라고 전문가들 사이에서 허용됩니다. 그러나, 생활 스타일 및 영양과 같은 환경 적 요인은 또한 질환의 발생 및 진행 (3)에 기여한다. 불행하게도, IBD는 경화 아니라, 임상 증상을 완화하는 것을 목표로 많은 치료 옵션이 있습니다. 현재의 치료법은 설파살라진 및 코르티코 스테로이드와 같은 소염제를 포함한다; 이러한 azathio과 같은 면역 억제제,prine; 이러한 인테그린과 같은 종양 괴사 인자 α (TNF-α), 또는 블록과 같은 부착 분자 캡처 염증성 사이토 카인, 과도한 백혈구 보충을 감소시키는 모노클로 날 항체; 이러한 야누스 키나제 (JAK) 4와 같은 염증성 경로를 트리거 키나제를 표적 억제제. 모든 환자가 모든 치료에 반응 때문에 치료 전략 (5)를 개별화해야합니다. 또한, 이들 치료제의 대부분은 종종 심각한 부작용을 일으키는 대사 및 면역 반응을 방해. 이런 이유로, 대안적인 치료 옵션이 조사되었다. 대체 치료는 프로 바이오 틱과 성공 6,7 다양한 수준의 동물 모델 및 임상 시험에 적용된 영양 보충제를 포함한다. 최근 발견되는 것과 같은 항산화 비타민 또는 ω3 - 불포화 지방산과 같은 다른 하나의 영양제의 애플리케이션 (PUFAs)는 대장염 및 심혈관 질환의 증상을 완화 8,9 그러한 보조제의 조합의인가 열등하다. 이러한 연구는 마우스에서 수행되었다 때문에 임상 연구이 연구 결과는 인간에 적용 가능할지 여부를 결정하기 위해 인간이 수행되어야한다. 임상 연구가 시작되기 전에, 새로운 치료 방법의 효능 및 안전성은 동물 모델에서 평가되어야한다. IBD를 들어, 덱스 트란 황산나트륨 (DSS) 모델은 광범위 질병 발전의 메커니즘과 약물 및 영양제 6,10의 유익한 효과를 연구하기 위해 사용되었다. 대부분의 연구에서 유도 칠일의 기간 동안 만 급성; 그럼에도 불구하고, 이들 동물에서 관찰 된 임상 징후 밀접 IBD 환자에서 관찰 된 것과 유사한 (즉, 혈변, 체중 감소, 상피 장애, 및 면역 세포 침윤) 10. DSS는 점막에 미란을 야기장벽 기능 장애에 증가 장내 상피 투과성 (11)의 결과. 정확한 메커니즘은 알 수없는 남아 있습니다. 그러나, 연구는 DSS는 상피 세포를 입력하고, 염증성 신호 전달 경로 (12)를 유도 할 수있는 나노 lipocomplexes을 형성하는 중간 사슬 길이의 지방산과 상호 작용하는 것을 의미한다. 이 글에서, 우리는 유도와 각 동물에 일정한 용량을 보장하기 위해 위관 영양법으로 적용하는 방법을 영양 보충제 마우스에 분석 대장염 방법을 자세히 설명하고 다양한 대장염 증상에 같은 보충제의 효과는 방법을 조사하고 있습니다.

<table><tbody><tr><td>젤라틴 0.3%&nbsp;</td><td>Bioxon</td><td>158</td><td></td></tr><tr><td>10% 포름알데히드</td><td>J.T. Baker</td><td>2106-03</td><td></td></tr><tr><td>96-웰 플레이트, 평평한 바닥</td><td>Corning</td><td>3368</td><td></td></tr><tr><td>절대 에탄올&nbsp;</td><td>J.T. Baker</td><td>9000-03</td><td></td></tr><tr><td>앱솔루트 크실렌</td><td>J.T. Baker</td><td>9490-03</td><td></td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H5882</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>ColoScreen</td><td>Helena Laboratories</td><td>5072</td><td></td></tr><tr><td>Corabion (Merck, Naucalpan, Mexico에서 친절하게 제공)</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>덱스트란 황산염 나트륨</td><td>Affymetrix</td><td>9011-18-1</td><td>(M.W. 40,000-50,000)</td></tr><tr><td>Dihydroethidium</td><td>Life Technology</td><td>D11347</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y&nbsp;</td><td>J.T. Baker</td><td>L087-03</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>314-13-6</td><td></td></tr><tr><td>급식&nbsp; 바늘</td><td>Cadence Science Inc.</td><td>9921</td><td></td></tr><tr><td>손잡이가 있는 유리 슬라이드 랙</td><td>전자 현미경</td><td>70312-16</td><td></td></tr><tr><td>유리 슬라이드</td><td>코닝</td><td>2947</td><td></td></tr><tr><td>Harris hematoxylin&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3136</td><td></td></tr><tr><td>헥사데실트리메티아암모늄 (HTAB)</td><td>시그마 알드리치</td><td>H6269</td><td></td></tr><tr><td>히스토셋 (임베딩 카세트)</td><td>Simport</td><td>M498.2</td><td></td></tr><tr><td>염산 1 M</td><td>J.T. Baker</td><td>9535-62</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>시그마 알드리치</td><td>H3410</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>PiSA 아그로페쿠아리아</td><td>Q-7833-028</td><td></td></tr><tr><td>액상 파라핀&nbsp;</td><td>Paraplast</td><td>39501-006</td><td></td></tr><tr><td>리튬 카보네이트&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2362</td><td></td></tr><tr><td>N,N-dimethylformamide</td><td>J.T. Baker</td><td>68-12-2</td><td></td></tr><tr><td>N-acetylcysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 큐브</td><td>전자 현미경</td><td>70181</td><td></td></tr><tr><td>폴리-L-라이신 용액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25988-63-0</td><td></td></tr><tr><td>Prism 5 통계 </td><td>소프트웨어 GraphPad 소프트웨어</td><td>Prism 5</td><td></td></tr><tr><td>식염수 용액 0.9% NaCl</td><td>CS PiSA</td><td>Q-7833-009</td><td></td></tr><tr><td>시트르산</td><td>나트륨 시그마-알드리치</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>합성 수지&nbsp;</td><td>Poly Mont</td><td>7987</td><td></td></tr><tr><td>Taq DNA 중합효소</td><td>Invitrogen</td><td>11615-010</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-tek. OCT 컴파운드</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Tuberculine 주사기</td><td>BD Plastipak</td><td>305945</td><td></td></tr><tr><td>트윈 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD 안티페이드 마운팅 매체 with DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>PiSA Agropecuaria</td><td>Q-7833-099</td><td></td></tr></tbody></table>

실험 성 대장염 동안 장내 상피 장벽 기능에 영양 보조 식품의 유익한 효과 분석

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

크론 병과 궤양 성 대장염을 포함한 염증성 장 질환 (IBD)는, 내장의 만성 재발 성 질환이다. 그들은 영향을받는 개인 이러한 복부 경련, 피 묻은 설사, 체중 감소 등의 심각한 문제를 일으킬. 불행하게도, 치료법은 아직없고, 치료는 증상을 완화하는 것을 목표로하고 있습니다. 현재 치료는 심각한 부작용을 일으킬 수 소염 및 면역 억제제를 포함한다. 이는 부작용을 일으키지 않는 등의 영양 보충제와 같은 다른 치료 옵션에 대한 검색을 보증한다. 임상 연구에의 응용하기 전에, 이러한 화합물은 엄격 동물 모델에서 효율성과 보안을 테스트해야합니다. 신뢰성있는 실험 모델은 인간에서의 궤양 성 대장염의 임상 징후의 많은 재생 마우스에서 덱스 트란 황산나트륨 (DSS) 대장염 모델이다. 우리는 최근에 들어있는 영양 보충의 유익한 효과를 테스트하기 위해이 모델을 적용비타민 C와 E, L 아르기닌, 및 ω3-고도 불포화 지방산 (PUFA). 우리는 다양한 질병 매개 변수를 분석하고이 보충 질병 활동 지수가 전반적으로 개선 선도, 부종 형성, 조직 손상, 백혈구 침윤, 산화 스트레스 및 염증성 사이토 카인의 생산을 개선 할 수 있었다 것으로 나타났습니다. 이 글에서, 우리는 구체적으로 올바른 C57BL / 6 마우스의 DSS 대장염 모델을 사용하여 영양 보충제의 응용 프로그램뿐만 아니라 방법 등 조직학, 산화 스트레스, 염증 등 질병 매개 변수가 평가됩니다 설명합니다. 다른 다이어트 보조제의 유익한 효과를 분석하는 것은 다음 결국 IBD의 증상을 완화 및 / 또는 그 심각한 부작용을 유발하지 않고 죄 사함의 위상을 연장 대체 치료 전략의 개발을위한 새로운 길을 열 수 있습니다.

다이어트 보조 식품 DSS 대장염에서 보호 할 수 있습니다 비타민 C, 비타민 E, 산화 질소 (NO) -source의 L- 아르기닌 및 ω3 - 불포화 지방산 (ω3-PUFAs에) 등의 항 염증 및 항산화 다이어트 보조제, 동물에서 다양한 성공 사용되고 모델은 염증성 질환 3,6,15의 흔적을 완화한다. 영양 실조, 산화 스트레스, 및 염증성 사이토 카인의 생산은 급성 및 만성 대장염 3을 트리거 할 수있다. 이전의 연구에서, 우리는 미량 영양소의 조합이 생체 내에서 DSS 유도 된 대장염에 대한 보호 효과를 보였다 있음을 증명했다. 여기, 우리는 이러한 효과가 8을 측정 하였다 방법에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 첫째, 우리는 체중 감소의 세 파라미터 이루어진 질병 활성 지수 (D...

염증성 장 질환 (IBD)의 현재 치료는 질병의 증상을 완화 목표로하지만 심각한 부작용을 일으킬 수 있습니다. 따라서, 대안 전략은 동물 대장염 모델에서 연구되고있다. 여기서 우리는 임상 IBD 표지판에 다이어트 보조제의 유익한 효과는 이러한 대장염 모델에서 분석 방법에 대해 설명합니다.

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 dextran sulfate sodium으로 유도된 생쥐 대장염 모델에서 보충 영양소의 효과를 평가하는 것입니다. 이 방법은 대장염 모델 실험 과정 전반에 걸친 임상 과학의 발전에 관해 장 면역학 분야의 핵심적인 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비용이 저렴하고 정밀한 장비가 필요하지 않으며, 전체 결장의 형태학적 분석을 명확하게 제공한다는 점입니다.이 방법은 과도한 호중구 모집의 결과로 발생하는 결장의 산화 스트레스를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 경구 투여(gavage)를 통한 영양 보조제 투여를 위해, 먼저 꼬리를 세 번째 손가락과 엄지손가락 뿌리 사이에 두고 마우스의 목덜미를 잡아 수동으로 고정합니다. 그다음, 마우스를 세운 자세로 유지한 채 가바지 바늘을 동물의 입 왼쪽으로 삽입하고, 입천장을 따라 조심스럽게 이동하여 식도를 찾습니다.저항이 느껴지지 않으면 바늘을 위장 쪽으로 더 진입시킵니다. 보충제 전체 용량을 천천히 주입한 후, 주사기를 조심스럽게 제거하고 동물의 체중을 측정합니다. 체중 감소 백분율에 따라 0점에서 4점까지 점수를 부여한 다음, 신선한 분변 샘플을 채취하고 제공된 어플리케이터를 사용하여 guaiac 분변 잠혈 검사 키트의 슬라이드 위에 샘플을 얇게 도말합니다.키트 전면의 커버를 닫고 뒷면 창을 열어 샘플 위치 뒷면에 발색액 두 방울을 떨어뜨립니다. 30초 후에 결과를 판독하고, 신호 강도에 따라 0점에서 4점까지 점수를 부여합니다. 그런 다음, 두 번째 신선한 분변 샘플을 관찰하여 분변의 일관성을 평가하고, 적절하게 0점에서 4점까지 점수를 부여합니다.생체 내(in vivo) 장 상피 투과성을 측정하려면, 마취된 동물을 앙와위로 눕히고 정중선 절개를 하여 장을 노출시킵니다. 맹장을 찾아 상행 결장의 근위부 분절에 작은 절개를 만듭니다. 그런 다음 22 gauge feeding needle을 삽입하고 일반 실크사 결찰사로 바늘을 고정합니다.바늘을 통해 충분한 양의 PBS를 조심스럽게 흘려보내 결장에서 모든 분변을 씻어낸 후, 염료가 항문에 도달할 때까지 Evans blue 용액을 주입합니다. 15분 후, 항문 주위 세척액이 투명해질 때까지 과량의 PBS로 튜브를 씻어냅니다. 그런 다음 결장을 절제하고 조직을 PBS로 더 씻어낸 후, 결장 점막에 붙어 있는 염료를 제거하기 위해 6 mM N-acetylcysteine

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연구

JoVE Journal

Medicine

의학

DNBS / TNBS 유도 대장염은 다른 염증성 장 질환의 한테 진찰 Pathobiology을 연구하는 저렴한 방법을 제공합니다. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 생쥐와 쥐 대장염을 유도하는 DNBS의 성공적인 응용 프로그램을 설명 하나는 철저하게 호스트 매개 장 반응을 연구 할 수 있습니다.

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

여기에서 우리는 소장 오르가노이드의 장벽 무결성을 정량화하는 기술을 기술합니다. 이 방법이 살아있는 오르가노이드를 기반으로 한다는 사실은 시간 해결 방식으로 상이한 장벽 무결성 변조 물질 또는 이들의 조합에 대한 순차적 조사를 가능하게 한다.

살아있는 오르가노이드의 장 장벽 고장 조사

인트라비티 현미경 검사를 활용하여, 여기에 제시된 방법은 살아있는 동물에서 장 상피 세포 흘림의 실시간 시각화를 가능하게 합니다. 따라서, 마취마우스의 국소 염색장 점막(acriflavine 및 rhodamineB-dextran)은 공초점 현미경검사를 이용하여 단일 세포 해상도까지 심화된다.

장 내 투과성 및 상피 세포 흘리기 성능을 평가하기 위한 인트라바이탈 현미경 기반 접근법

Dysregulated 장 상피 장벽 기능 및 면역 반응은 생리적인 모형의 부족 때문에 제대로 조사되지 않는 선동적인 장 질병의 특징입니다. 여기서는 생체 내 점막 투과성 및 백혈구 모집을 연구하기 위해 잘 혈관화되고 외부화된 장 세그먼트를 사용하는 마우스 장 루프 모델을 설명합니다.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

무료 컴퓨터 보조 시스템을 사용하여 장 염증의 체계적인 점수는 궤양과 염증 변화의 존재를 특징으로 하는 대장염 모델의 조직 병리학적 변화를 정량적으로 비교할 수 있는 강력한 도구입니다. 조직학 대장염 점수 평가는 임상 관찰을 강화하고 데이터 해석을 용이하게합니다.

뮤린 Dextran 나트륨 황산염 유도 대장염 모형에 있는 장 염증을 위한 체계적인 채점 분석

여기에서는 대장염에 대한 Bacillus cereus 의 긍정적인 효과를 조절하는 장내 미생물총(microbiota)의 역할을 조사하기 위해 항생제 유도 pseudo-germ-free dextran sulfate 나트륨 유발 대장염 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

장내 미생물군 조절을 통한 대장염에 대한 Bacillus cereus 투여의 완화 효과 조사

본 연구에서, 플루오레세인-이소티오시아네이트 표지(FITC) 덱스트란을 경구 위관영양을 통해 마우스에 투여하여 생체 내 및 혈장 및 대변 샘플 모두에서 장 투과성을 평가합니다. 장 장벽 기능은 많은 질병 과정에서 영향을 받기 때문에 이 직접적이고 정량적인 분석은 다양한 연구 분야에서 사용될 수 있습니다.

Fluorescein-Isothiocyanate-labeled dextran을 사용한 생쥐의 장 장벽 무결성 평가

우리는 3차원 결장류의 발달을 위한 쥐 결장 선와(miline colonic crypt)의 분리를 자세히 설명하는 프로토콜을 설명합니다. 확립된 콜로노이드는 염증성 챌린지를 받거나 상피 단층을 형성하도록 지시되기 전에 숙주 상피의 세포 구성을 반영하도록 최종적으로 분화될 수 있습니다.

확립된 쥐 콜로노이드에 대한 시험관 내 장 염증의 상피 효과 연구

여기서는 기본 3차원(3D) 장 세포주 모델 시스템과 고정 장 등가물의 광학 현미경 평가를 위한 파라핀 임베딩 프로토콜을 구성하는 방법을 설명합니다. 선택한 단백질의 염색을 통해 단일 실험에서 여러 시각적 파라미터를 분석하여 전임상 약물 스크리닝 연구에 사용할 수 있습니다.

면역 성분이 있는 기본 3차원(3D) 장 모델 시스템

폐 상피 세포는 생쥐의 호흡기로부터 격리하고 차별 호흡기 상피의 모델로 공기 - 액체 인터페이스에서 교양 수 있습니다. 프로토콜이 환경 독소에 분자 반응을 연구하기 위해, culturing를 분리하고 주류 담배 연기 이러한 세포를 노출에 대해 설명합니다.

에어 리퀴드 인터페이스에서 마우스 호흡기 상피 세포 및 실험 담배 연기에 노출의 분리

배우세요 쥐 대장염 모델에서 영양 보조 식품이 장내 상피 장벽 기능에 미치는 유익한 효과를 평가하는 방법을. 이 기법은 저비용으로 대장 형태학을 명확히 분석하여 염증성 장 질환 연구에 기여합니다.

실험 성 대장염 동안 장내 상피 장벽 기능에 영양 보조 식품의 유익한 효과 분석

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