Name: 포스 콜린 유발 장내 Organoids에 붓기 일 : 체외 분석 낭포 성 섬유증 환자의 약물 반응을 평가하기위한 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 학습하세요 포스콜린 유발 팽창 분석법을 활용하여 낭포성 섬유증 환자 유래 장내 오가노이드에서 CFTR 기능 및 약물 반응을 평가하는 방법입니다. 이 기술은 맞춤형 치료 전략 수립에 활용됩니다.

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이 작품은 네덜란드의 CF 재단 (NCFS), ZonMW (40-00812-98-14103)는 빌헬미나 아동 병원 연구 기금과 CZ, 및 Zilverenkruis / Achmea의 HIT-CF 프로그램에 의해 지원되었다. 우리는 S. HEIDA 미셸, M. Geerdink, KM 드 겨울 드 그루, 그리고 G. Berkers (소아 호흡기학, 빌헬미나 어린이 병원, UMC 위트레흐트학과), 및 RHJ Houwen (소아 소화기, 빌헬미나의 부서에 감사드립니다 환자 접근과 CF 바이오 뱅크의 발전을 위해 조직 검사를 얻기를위한 어린이 병원, UMC 위트레흐트).

<ol><li>De Boeck, K., Amaral, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+therapies+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Progress in therapies for cystic fibrosis.</a> Lancet Respir Med. 4 (8), 662-674 (2016).</li>
<li>Cutting, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+genetics%3A+from+molecular+understanding+to+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application.</a> Nature Rev Genet. 16 (1), 45-56 (2015).</li>
<li>Sosnay, P. R., Siklosi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+disease+liability+of+variants+in+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genet%22%5BJournal%5D)">Defining the disease liability of variants in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene.</a> Nature Genet. 45 (10), 1160-1167 (2013).</li>
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<li>Van Goor, F., Hadida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+CF+airway+epithelial+cell+function+in+vitro+by+a+CFTR+potentiator%2C+VX-770%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Rescue of CF airway epithelial cell function in vitro by a CFTR potentiator, VX-770.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 106 (44), 18825-18830 (2009).</li>
<li>Van Goor, F., Hadida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+the+F508del-CFTR+protein+processing+defect+in+vitro+by+the+investigational+drug+VX-809%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Correction of the F508del-CFTR protein processing defect in vitro by the investigational drug VX-809.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 108 (46), 18843-18848 (2011).</li>
<li>Accurso, F. J., Rowe, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+VX-770+in+persons+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D-CFTR+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of VX-770 in persons with cystic fibrosis and the G551D-CFTR mutation.</a> N Engl J Med. 363 (21), 1991-2003 (2010).</li>
<li>Ramsey, B. W., Davies, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CFTR+potentiator+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation.</a> N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).</li>
<li>De Boeck, K., Munck, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+ivacaftor+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+a+non-G551D+gating+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of ivacaftor in patients with cystic fibrosis and a non-G551D gating mutation.</a> J Cyst Fibros. 13 (6), 674-680 (2014).</li>
<li>Boyle, M. P., Bell, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CFTR+corrector+%28lumacaftor%29+and+a+CFTR+potentiator+%28ivacaftor%29+for+treatment+of+patients+with+cystic+fibrosis+who+have+a+phe508del+CFTR+mutation%3A+a+phase+2+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">A CFTR corrector (lumacaftor) and a CFTR potentiator (ivacaftor) for treatment of patients with cystic fibrosis who have a phe508del CFTR mutation: a phase 2 randomised controlled trial.</a> Lancet Respir Med. 2 (7), 527-538 (2014).</li>
<li>Wainwright, C. E., Elborn, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumacaftor-Ivacaftor+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+Homozygous+for+Phe508del+CFTR%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR.</a> N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).</li>
<li>Van Goor, F., Yu, H., Burton, B., Hoffman, B. J. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1569199313001136">Effect of ivacaftor on CFTR forms with missense mutations associated with defects in protein processing or function.</a> J Cyst Fibros. 13 (1), 29-36 (2014).</li>
<li>Neuberger, T., Burton, B., Clark, H., Van Goor, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+primary+cultures+of+human+bronchial+epithelial+cells+isolated+from+cystic+fibrosis+patients+for+the+pre-clinical+testing+of+CFTR+modulators%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Use of primary cultures of human bronchial epithelial cells isolated from cystic fibrosis patients for the pre-clinical testing of CFTR modulators.</a> Methods Mol Biol. 741, 39-54 (2011).</li>
<li>Randell, S. H., Fulcher, M. L., O'Neal, W., Olsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+epithelial+cell+models+for+cystic+fibrosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary epithelial cell models for cystic fibrosis research.</a> Methods Mol Biol. 742, 285-310 (2011).</li>
<li>Karp, P. H., Moninger, T. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+differentiated+human+airway+epithelia.+Methods+for+establishing+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of differentiated human airway epithelia. Methods for establishing primary cultures.</a> Methods Mol Biol. 188, 115-137 (2002).</li>
<li>Sato, T., Vries, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Sato, T., Stange, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon%2C+adenoma%2C+adenocarcinoma%2C+and+Barrett%27s+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li>
<li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+development+and+disease+with+Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling development and disease with Organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Wiegerinck, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+CFTR+assay+using+primary+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Med%22%5BJournal%5D)">A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids.</a> Nature Med. 19 (7), 939-945 (2013).</li>
<li>Dekkers, J. F., van der Ent, C. K., Beekman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+opportunities+for+CFTR-targeting+drug+development+using+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Novel opportunities for CFTR-targeting drug development using organoids.</a> Rare Diseases. 1 (1), e27112(2014).</li>
<li>Servidoni, M. F., Sousa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rectal+forceps+biopsy+procedure+in+cystic+fibrosis%3A+technical+aspects+and+patients+perspective+for+clinical+trials+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Rectal forceps biopsy procedure in cystic fibrosis: technical aspects and patients perspective for clinical trials feasibility.</a> BMC gastroenterology. 13, 91(2013).</li>
<li>Ommen, D. D. Z. -V., Vijftigschild, L. A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+premature+termination+codon+suppression+by+read-through+agents+in+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Limited premature termination codon suppression by read-through agents in cystic fibrosis intestinal organoids.</a> J Cyst Fibros. 15 (2), 158-162 (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Gogorza Gondra, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+correction+of+distinct+CFTR+folding+mutants+in+rectal+cystic+fibrosis+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Optimal correction of distinct CFTR folding mutants in rectal cystic fibrosis organoids.</a> Eur Respir J. , (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Van Mourik, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiator+synergy+in+rectal+organoids+carrying+S1251N%2C+G551D%2C+or+F508del+CFTR+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Potentiator synergy in rectal organoids carrying S1251N, G551D, or F508del CFTR mutations.</a> J Cyst Fibros. , (2016).</li>
<li>Dekkers, J. F., Berkers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+responses+to+CFTR-modulating+drugs+using+rectal+organoids+derived+from+subjects+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Characterizing responses to CFTR-modulating drugs using rectal organoids derived from subjects with cystic fibrosis.</a> Sci Transl Med. 8 (344), 344ra84(2016).</li>
<li>Li, H., Sheppard, D. N., Hug, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+electrical+measurements+with+the+Ussing+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Transepithelial electrical measurements with the Ussing chamber.</a> J Cyst Fibros. 3, 123-126 (2004).</li>
<li>Sheppard, D. N., Carson, M. R., Ostedgaard, L. S., Denning, G. M., Welsh, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+in+a+model+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in a model epithelium.</a> Am J Physiol. 266 (4 Pt 1), L405-L413 (1994).</li>
<li>Farin, H. F., van Es, J. H., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redundant+sources+of+Wnt+regulate+intestinal+stem+cells+and+promote+formation+of+Paneth+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Redundant sources of Wnt regulate intestinal stem cells and promote formation of Paneth cells.</a> Gastroenterology. 143 (6), 1518-1529 (2012).</li>
<li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nat Protoc. 11 (2), 347-358 (2016).</li>
<li>Vijftigschild, L. A. W., Berkers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B22-adrenergic+receptor+agonists+activate+CFTR+in+organoids+and+subjects+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">β2-adrenergic receptor agonists activate CFTR in organoids and subjects with cystic fibrosis.</a> Eur Respir J. 48 (3), 768-779 (2016).</li>
<li>Dekkers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bioassay+using+intestinal+organoids+to+measure+CFTR+in+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">A bioassay using intestinal organoids to measure CFTR in human plasma.</a> J Cyst Fibros. 14 (2), 178-181 (2015).</li>
<li>Graeber, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+Current+Measurements+Detect+Activation+of+Mutant+CFTR+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+with+the+G551D+Mutation+Treated+with+Ivacaftor%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Intestinal Current Measurements Detect Activation of Mutant CFTR in Patients with Cystic Fibrosis with the G551D Mutation Treated with Ivacaftor.</a> Am J Respir Crit Care Med. 192 (10), 1252-1255 (2015).</li>
<li>Van Goor, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ivacaftor+potentiation+of+multiple+CFTR+channels+with+gating+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%3A+Official+Journal+of+the+Eur+Cyst+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Ivacaftor potentiation of multiple CFTR channels with gating mutations.</a> Journal of Cystic Fibrosis: Official Journal of the Eur Cyst Fibrosis. 11 (3), 237-245 (2012).</li>
</ol>

Hans Clevers는 오가노이드 배양 및 Forskolin 유도 부종 분석에 대한 특허에 대한 발명가입니다. Jeffrey M Beekman은 Forskolin 유발 부종 분석에 대한 특허의 발명가입니다. Sylvia F Boj와 Robert Vries는 오가노이드 기술에 대한 독점 라이선스를 보유하고 있는 Hubrecht Organoid Technology(HUB) 재단에 고용되어 있습니다. 그렇지 않으면 저자는 공개할 것이 없습니다.

여기서 우리는 인간의 대장 organoids의 생성, 확장, 냉동과 해동을위한 완벽한 프로토콜을 제공합니다. 우리는 인간의 organoid 문화를 몇 시간 전에 17를 설립하지만, 때로는 교육 실습없이 다른 연구소에서 기술을 확립하기 어려운 입증했다. 우리는 이러한 프로토콜은 교육을 대체 할 것으로 예상. 이 Wnt-3A 에어컨 매체 수립하고 organoid 문화 장기적인 유지에 성공하기 위해 가장 중요한 시약 중 하나입니다. 실제로, organoid 문화가 낮은 활동의 Wnt-3A-conditoned 매체에 &quot;충돌&quot;노출 수있는 경우. 이 Wnt-3A 에어컨 매체 내부에서 이루어지기 때문에, 활성 매체를 생성 할 때 고려되어야 여러 측면이있다. 활성의 Wnt-3A는 L 세포 및 소수성의 안정화를 위해 적절한 성장 신호를 제공하는 고품질의 소 태아 혈청 (FBS)을 매체 중에서 제조 할 수있다이 Wnt-3A 분자. 이...

CF는 상피 음이온 채널을 암호화하는 낭포 성 섬유증 막 횡단 전도도 조정기 (CFTR) 유전자의 돌연변이에 의해 발생합니다. CF는 전 세계적으로 1 약 85,000명에 영향을 미친다. 2,000 CFTR 돌연변이는 (확인되었다 <a href="http://www.genet.sickkids.on.ca">www.genet.sickkids.on.ca</a> ). 이러한 다양성은 부분적으로 관찰 질환 표현형 (넓은 스펙트럼을 설명 <a href="http://www.CFTR2.org">www.CFTR2.org</a> ) 2, 3. CFTR 돌연변이 여섯 클래스 CFTR 단백질 발현과 기능에 미치는 영향에 기초하여 정의된다 : (I)없이 합성 (II) 손상 피킹 (III) 불량 채널 게이팅 (IV)가 변경 컨덕턴스 (V하면) 보통의 수준을 감소 CFTR를 작동하고 (VI) 손상된 세포 표면 안정성 4. 일반적인 CFTR 돌연변이가 잘 연구되어 있지만, CFTR 기능과 임상 적 상태와 관계 poorl 유지Y는 특히 드문 &quot;고아&quot;돌연변이 (의 큰 그룹에 대해 각 레벨에서 이해 <a href="http://www.CFTR2.org">www.CFTR2.org</a> ) 1,3. 최근 약물 돌연변이 특정 방식으로 CFTR 단백질을 대상으로 개발되어왔다. CFTR 단백질 표적 약물의 두 클래스는 임상 현재 사용중인 액션의 독특한 모드가 있습니다. 이러한 VX-770과 같은 강화제는 치근단 지역화 돌연변이 CFTR의 개방 가능성을 향상시키고 세포 5에 자신의 추가에 직접 작용한다. 이러한 VX-809과 같은 교정기는 소포체 지역화 잘못 폴딩의 CFTR의 인신 매매를 복원하고 효과 전에 세포가 6 관찰과 사전 배양이 필요합니다. CFTR의 강화제, VX-770과 같은 다른 팔에 관해서는, G551D 돌연변이 7,8 피험자에 등록되었습니다CFTR은 S1251N (9)를 포함하여, 돌연변이를 게이팅; 함께, 이러한 돌연변이는 모든 CF 과목의 5 %에 ​​의해 수행된다. 다른 임상 시험, VX-770, 보의 VX-809과 결합이 폐 기능에 아직 심각한 영향을 제한 한 것으로 나타났다 환자 10 45-50%에 의해 전달되는 F508del 돌연변이에 대한 동형 접합을 대상으로 악화 속도의 감소가 발생했습니다 11. CF 환자의 나머지 50 % 이내 약물 반응 주체를 식별하는 종래의 임상 비용과 시간을 소모하며, 매우 드문 CFTR 유전자형을 가진 개인 가능하지 않다. 신규 비용 효과적인 개인화 방법 CFTR 돌연변이 임의의 타입을 운반하는 개인 CFTR 조절제의 증가와 일치하는 것이 중요하다. 지금까지 특정 CFTR 돌연변이를 운반하는 환자 그룹의 시험 포함은 시간에 돌연변이 CFTR 유전자 형질 전환을 사용하여 연구에 의해 유도 된챔버들 (5, 6), (12)를 전기 생리 학적 연구에 Ussing 하였다 eterologous 전지 시스템. 때문에 CF 폐 이식편 재료로부터 유도 된 공기 - 액체 계면 분화 기관지 상피 세포에서의 CF 적절한 동물 모델 약물 효능 연구의 부족 약물 개발 13, 14, 15에 사용되었다. 그러나, 폐 절편 조직 및 침습적 제한된 가용성 흔하지 CFTR 돌연변이의 분석을 방해 말기 질환이없는 환자에서 기관지 세포를 수득하고, 개인화 된 방식으로 약물 검사를 방지 할 수있다. 이러한 제한 등 대장 organoids, 비강기도 세포와 유도 만능 줄기 세포에서 파생 된기도 세포와 같은 &quot;쉽게 접근&quot;조직을 극복하기 위해, 현재 맞춤 약물 치료에 대한 탐구되고있다. (16), (17)의 형태로 어떤 위장 기관에서 배양 상피 줄기 세포에 대한 프로토콜을 설립했다. 인간 대장 / 직장 들면, 배양 조건이 정의 된 것을 포함 성장 인자 (상피 성장 인자 (EGF), 가스트린,이 Wnt-3A, R-spondin 3 (Rspo3) 및 소량) 소분자 (니코틴 A83-01와 결합 지하실 막 매트릭스 및 SB202190). 이러한 조건에서, 하나의 줄기 세포 또는 소규모 조직 단편 바깥쪽으로 향한 기부 쪽 고도로 편광 된 상피 세포에 의해 형성된 폐쇄, 낭포, 3 차원 구조 속으로 성장한다. 모든 세포 유형은 일반적으로 정상 비율과 위치에 나타납니다. Organoids 주간 기계적 파괴 및 재 도금에 의해 장기간에 걸쳐 확장 될 수있다. 그들은 유전자 표현형과 안정하고 장기간 팽창 바이오 뱅킹 17 있도록 저장 될 수있다. 그들은 의무가 있습니다모든 표준 세포 생물 / 유전자 조작 및 분석 기술은 2D 셀 라인 (18)을 위해 개발. 최근 CFTR 기능이 용이 포스 콜린 - 유도 부종 (FIS) 분석 19 (20) 대장 organoids 측정 할 수 있음을 보여 주었다. 콜레라 독소 대안 포스 콜린 (FSK) 또는에 노출되면 organoids 급속히 그들 사이 클릭 아데노신 모노 포스페이트 (cAMP) 수준을 증가되는 CFTR 채널 (19)의 개구부에 회전 결과이다. 건강한 사람에서, 또는 잔여 기능과 관련된 CFTR 돌연변이와 과목에서 Organoids는 이후 organoid 루멘, 분비 성 설사의 체외 상당 이온과 물 수송의 결과로 팽창 할 것이다. CFTR 널 개체로부터 유래 organoids으로 나타낸 바와 같이 대장 organoids FIS의 응답은 이전에 완전히 CFTR 의존적 도시 된특정 약리학 CFTR 억제제 (19)의 사용에 의해 찾지. 큰 주제 특정 데이터 세트는 조직 검사를 복용 후 몇 주 내에 유도 될 수있다. 여기에 상세하게 설명 FIS 분석의 경우, organoids는 나이와 제한된 불편 (21)를 얻을 수있다 직장 생검에서 배양한다. Organoids 쉽게 다시 봉인하고 새로운 organoids을 형성 한 지하실에 기계 중단으로 매주 계대 있습니다. FIS 분석을 실행하는 경우, ~이 중단 작은 organoids의 30 ~ 80은 96 웰 플레이트 (19)의 각 웰에 도금되어있다. 분석의 일에서, organoids는 칼 세인 녹색, 그것은 라이브 영상을 용이하게 살아있는 세포 내에서 유지되는 형광 세포 투과성 염료로 염색한다. 그런 다음, 세포 내 cAMP를 제기하여 CFTR을 활성화 FSK는 organoid 부종을 자극하기 위해 추가됩니다. 혀끝의 CFTR에 따라 행동 강화제를 동시에 w 추가포스 콜린 i 번째, CFTR 인신 매매를 복원 보정기 반면 FSK를 추가하기 전에 24 시간을 추가됩니다. organoid 붓기는 포스 콜린을 첨가 할 때마다 포인트에 대한 모든 형광 객체의 전체 면적의 상대적인 증가를 계산하는 자동화 된 이미지 분석에 의해 정량화한다. 3D는 붓기가 챔버 Ussing에서 2D 배양기도 세포에서 기존의 전기 생리 CFTR 판독을 통해 장점과 단점을 제공 organoid. 주요 장점은 부종 검정의 스루풋이다. 세포 배양 배지의 한 유형을 이용하여 분석하고, 숙련 된 기술자는 12 환자 샘플에서 주당 약 1,200 데이터 포인트를 배양 매주 25 organoid 샘플까지 정량화 할 수있다. 우리는 통상적으로 판 당 중복 또는 세중의 측정에 의해 하나의 실험 조건을 입력하고 3 개의 독립적 인 배양 시간 지점에서 이러한 측정을 반복합니다. 총, 약 300-500의화롯불 organoid 구조는 다음 제한 기술 변화와 CFTR 기능의 매우 정확한 측정에 리드 실험 조건에 따라 측정된다. 이 정밀도는 우리가 명확하게 CFTR 변조기에 잔류 기능 및 응답의 차이를 정의 할 수 있습니다 용이 동일 CFTR 돌연변이 19, 22, 23, 24, 25를 들고 환자 사이의 유전 적 배경 효과를 데리러 우리를 할 수 있습니다. 데이터 품질 용이 현미경 이미지에서 평가 될 수있다. FIS가 완전히 CFTR에 의존하지만,이 CFTR 기능에 대한 간접적 인 결과 측정, 유체 수송에 이온 수송의 결합에 의한 그 판독. 이 transepithelial 이온 전류 (26)를 측정 Ussing 실에서 직접 CFTR 기능 측정과 대조. Ussing 챔버 꼭대기 또는 기저 (c)의 선택 자극을 허용ompartments합니다 (organoid 분석이 허용하지 않는); 기저 막을 permeabilizing함으로써, 정점 CFTR 의존성 음이온 분비 선택적 (27)를 측정 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>고급 Dulbecco' s Modified Eagles Medium with Nutrient Mixture F-12 Hams (Ad-DF) 500 ml&nbsp;</td><td>써모 피셔 사이언티픽:&nbsp; Invitrogen</td><td>#12634</td>는 <td>4°C에 보관됨; C</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>써모 피셔 사이언티픽:&nbsp; Invitrogen</td><td>#35050</td>은 <td>4°C에 보관되었습니다. C</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Thermo Fisher 과학:&nbsp; Invitrogen</td><td># 15630-056</td>은 <td>4 &deg에 저장됨; C</td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>써모 피셔 사이언티픽:&nbsp; Invitrogen</td><td>#15140-122</td>는 <td>-20°C에 저장되었습니다. C</td></tr><tr><td>96 웰 배양 플레이트</td><td>Cellstar</td><td>#655180</td><td></td></tr><tr><td>24 웰 배양 플레이트</td><td>Cellstar</td><td>#662160</td><td></td></tr><tr><td>6 웰 배양 플레이트</td><td>Cellstar</td><td>#657160</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (-) CaCl2 (-) MgCl2) (DPBS)</td><td>Life Technologies: Gibco</td><td>#14190-094</td> 4°C<td>에 보관; C</td></tr><tr><td>둘베코' s 수정된 독수리 미디엄&nbsp; (DMEM) 500 ml&nbsp;</td><td>써모 피셔 사이언티픽:&nbsp; Invitrogen</td><td>#31966-021</td><td>Wnt-3A 컨디셔닝 배지 생산용. 4 &deg에 저장; C</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Bovogen</td><td>#SFBS LOT#11113</td><td>Wnt-3A 컨디셔닝 배지 생산용. -20 &deg에 저장됨; C</td></tr><tr><td>L Wnt3A 세포주</td><td>ATCC</td><td>#CRL-2647</td><td>Wnt-3A Conditioend 매체 생산용.</td></tr><tr><td>TOP/FOP 플라스미드</td><td>Millipore&nbsp;</td><td>#17-285</td><td>Wnt 활성 측정용</td></tr><tr><td>pTK-Renilla</td><td>Promega&nbsp;</td><td>#E2241</td><td>Wnt 활동 측정용</td></tr><tr><td>HEK-293</td><td>ATCC</td><td>#CRL-1573</td><td>Wnt 활동 측정용</td></tr><tr><td>Dual-Luciferase Reporter Assay System</td><td>Promega&nbsp;</td><td>#E1910</td><td>Wnt 활성 Zeocin을 측정하기 위해</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>써모 피셔 사이언티픽:&nbsp; Invitrogen</td><td>#R250-01</td><td>Wnt-3A 세포주 선택</td></tr><tr><td>B27 보충제용&nbsp;</td><td>써모 피셔 사이언티픽:&nbsp; Invitrogen</td><td>#17504-044</td>는 <td>-20 &deg에 저장되었습니다. C</td></tr><tr><td>N-아세틸시스테인</td><td>시그마 Aldrich</td><td>#A9165-5G</td>는 <td>-20°C에 저장했습니다. C</td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>시그마 알드리치</td><td>#N0636</td><td>-20 &deg에 저장; C</td></tr><tr><td>Human Epithelial Growth Factor (hEGF)</td><td>PrepoTech</td><td>#AF-100-15</td><td>-20 &deg에 저장; C</td></tr><tr><td>Gastrin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#G9145</td><td>-20 &deg에 저장됨; C</td></tr><tr><td>TGFb 유형 I 수용체 억제제 (A83-01)&nbsp;</td><td>Tocris</td><td>#2939</td>는 <td>-20 &deg에 저장되었습니다. C</td></tr><tr><td>Y-27632 이염산염 (RhoKi)</td><td>Selleckchem</td><td>#S1049</td><td>-20°C에 저장; C</td></tr><tr><td>p38 MAPK 억제제 (p38i) (SB202190)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>#S7067</td><td>-20 &deg에 저장; C</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>InvivoGen</td><td>#ant-pm-1</td>은 <td>-20 &deg에 저장되었습니다. C</td></tr><tr><td>Human Noggin (hNoggin)</td><td>PrepoTech</td> <td># 120-10C</td><td>는 -20 &deg에 저장되었습니다. C</td></tr><tr><td>인간 R-spondin 3 (hRspo-3)</td><td>R& D Systems</td><td>#3500-RS/CF</td><td>는 -20°C에 저장됨; C</td></tr><tr><td>Vancomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#861987- -250</td><td>&deg에 저장되는 250mg; C</td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>Life Technologies: -</td>20 &deg에 보관되는 Gibco<td>#15710-049</td><td>; C</td></tr><tr><td>에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA)</td> <td>시그마 알드리치</td> <td># 431788</td><td>4 °°C에 저장; C</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>#354230</td><td>-80 &deg에 저장됨; C</td></tr><tr><td>TryplE 익스프레스&nbsp;</td><td>Life Technologies:</td> 회수 세포 배양 <td>동결을 위한 트립시니징 오가노이드를 위한</td>Gibco<td>#12605-010</td></tr><tr><td>Medium</td><td>Life Technologies:</td> Calcein <td>동결을 위한</td>Gibco<td>#12648010</td></tr><tr><td></td><td>Life Technologies: -</td>20°C에서 보관<td>#C3100MP</td><td> C</td></tr><tr><td>포스콜린</td><td>R& D Systems</td><td>#1099-50 mg</td><td>은 -80 &deg에 보관됩니다. C</td></tr><tr><td>Lumacaftor (VX-809)</td> <td>Selleckchem</td><td>#s1565</td><td>-80 &deg에 저장; C</td></tr><tr><td>Ivacaftor (VX-770)</td> <td>Selleckchem</td><td>#s1144</td><td>-80 &deg에 저장; </td></tr><tr><td>C시약의 이름/재료</td><td>용매</td><td>원료 농도</strong</td><td>>최종 농도</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td></td><td>200 mM</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>Hepes</td><td></td><td>1 M</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td></td><td>10K U/ml 10K &micro; g/ml</td><td>100 U/ml 100 &마이크로; g/ml</td></tr><tr><td>제오신&nbsp;</td><td></td><td>100 mg/ml&nbsp;</td><td>125 &마이크로; g/ml</td></tr><tr><td>B27 보충제&nbsp;</td><td></td><td>100x</td><td></td></tr><tr><td>1x N-아세틸시스테인</td><td>MiliQ H2O</td><td>500 mM</td><td></td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>DPBS</td><td>1 M</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>인간 상피 성장 인자 (hEGF)</td><td>DPBS 0.1% BSA</td><td>0.5 mg/ml</td><td>50 ng/ml</td></tr><tr><td>Gastrin</td><td>DPBS</td><td>100 &micro; M</td><td>10 nM</td></tr><tr><td>TGFb 유형 I 수용체 억제제 (A83-01)&nbsp;</td><td>DMSO</td><td>5 mM</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>Y-27632 디하이드로클로라이드 (RhoKi)</td><td>DMSO</td><td>10 mM</td><td>10 &마이크로; M</td></tr><tr><td>p38 MAPK 억제제 (p38i) (SB202190)</td><td>DMSO</td><td>30 mM</td><td>10 &마이크로; M</td></tr><tr><td>프리모신</td><td></td><td>50 mg/ml&nbsp;</td><td>100 &마이크로; g / ml</td></tr><tr><td>인간 Noggin (hNoggin)</td> <td>DPBS 0.1 % BSA</td><td>100 &micro; g/ml</td><td>100 ng/ml</td></tr><tr><td>인간 R-spondin 3 (hRspo-3)</td><td></td><td>은 로트당 다름</td><td>300 ng/ml</td></tr><tr><td>반코마이신</td><td></td><td>10 mg/ml</td><td>50 &마이크로; g/ml</td></tr><tr><td>겐타마이신</td><td></td><td>10 mg/ml</td><td>50 &마이크로; g / ml</td></tr><tr><td>에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA)</td> <td>MiliQ H 2 O</td><td>0.5 M</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>Calcein</td><td>DMSO</td><td>10 &micro; g/ml</td><td>3.3 ng/ml</td></tr><tr><td>포스콜린</td><td>DMSO</td><td>10 mM</td><td>변수</td></tr><tr><td>Lumacaftor (VX-809)</td><td>DMSO</td><td>20 mM</td><td>변수</td></tr><tr><td>Ivacaftor (VX-770)</td><td>DMSO</td><td>20 mM</td><td>변수</td></tr></tbody></table>

포스 콜린 유발 장내 organoids에 붓기 일 :<em&gt; 체외</em&gt; 분석 낭포 성 섬유증 환자의 약물 반응을 평가하기위한

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

최근에 개발된 낭포성 섬유증 막횡단 컨덕턴스 레귤레이터(CFTR) 조절 약물은 낭포성 섬유증(CF)을 앓고 있는 피험자에서 돌연변이 CFTR 채널의 표면 발현 및/또는 기능을 수정합니다. 이러한 약물로부터 혜택을 받을 수 있는 피험자의 식별은 CFTR 돌연변이의 광범위한 이질성뿐만 아니라 개별 약물 효능에 기여하는 기타 알려지지 않은 요인으로 인해 어렵습니다. 여기에서는 개별 CFTR 기능 및 CFTR 조절제에 대한 반응을 시험관 내에서 측정하기위한 간단하고 비교적 빠른 분석법을 설명합니다. 3차원(3D) 상피 오가노이드는 표준 오가노이드 배지의 직장 생검에서 성장합니다. 일단 확립되면 오가노이드는 향후 분석을 위해 바이오 뱅크될 수 있습니다. 분석을 위해 30-80개의 오가노이드를 기저막 매트릭스의 96웰 플레이트에 파종한 다음 약물에 노출시킵니다. 하루 후, 오가노이드는 칼세인 녹색으로 염색되고, 포스콜린 유도 붓기는 37 °C에서 컨 포칼 라이브 셀 현미경 검사법으로 모니터링됩니다. 포스콜린 유도 팽창은 완전히 CFTR 의존적이며 충분히 민감하고 정확하여 서로 다른 동일한 CFTR 돌연변이를 가진 개인의 약물 반응 사이의 구별을 허용합니다. 체외 팽창 반응은 치료에 대한 임상적 반응과 상관관계가 있습니다. 이 분석법은 CFTR 돌연변이와 무관하게 약물 반응성 개인을 식별하기 위한 비용 효율적인 접근 방식을 제공합니다. 또한 미래의 CFTR 변조기 개발에 중요한 역할을 할 수 있습니다.

도 1a는 BMM에 포함 된 지하실의 대표 신선한 격리를 보여줍니다. 지하실은 CF 제목의 대장 조직 검사에서 있습니다. 일반적으로, organoid 각 토굴 (- C 그림 1A)에서 생성됩니다. 때문에 CFTR의 기능 장애로, 대장 CF의 organoids의 대부분은 낭포 성 이라기보다는 소형 계획과 buddings (그림 2A - 2B)에 있습니다. 그러나 일부 CF는 낭포 성 모양 (그림 2C), 야생형 organoid 문화 등 (그림 2D)와 몇 organoids이 특히 높은 잔존 기능, 문화를 organoid. 배양을 확장하거나 FIS 분석을...

이 프로토콜은 낭포성 섬유증(CF)이 있는 피험자의 배양 조직에서 CFTR 기능 및 CFTR 조절제 반응을 측정하기 위한 분석을 설명합니다. 생검 유래 장 오가노이드는 cAMP 주도 방식으로 팽창하며, 이는 CF 오가노이드에서 결함이 있는(또는 크게 감소한) 반응이며 CFTR 조절제에 노출되어 회복될 수 있습니다.

포스 콜린 유발 장내 Organoids에 붓기 일 :<em&gt; 체외</em&gt; 분석 낭포 성 섬유증 환자의 약물 반응을 평가하기위한

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

본 절차의 전반적인 목표는 낭성 섬유증 환자로부터 생성된 장 오가노이드에서 포스콜린 유도 팽창(forskolin-induced swelling, FIS) 분석법을 사용하여, CFTR 조절 치료제의 효능에 따른 개별 CFTR 기능을 평가하는 것입니다. 이 방법은 낭성 섬유증 분야의 핵심 질문들을 해결합니다. 특히, 기존 약물이나 실험적 약물로부터 장기적인 혜택을 받을 수 있는 환자를 식별하는 데 도움이 됩니다.이 기술의 주요 장점은 연령에 관계없이 모든 CF 환자로부터 쉽게 접근 가능한 조직을 사용하여 오가노이드를 생성할 수 있다는 점입니다. 이 기술의 활용 범위는 낭성 섬유증의 맞춤형 치료(orthotherapy)까지 확장되며, 비용 효율적이고 개별적인 방식으로 약물 효능을 테스트하고자 하는 현재의 긴급한 요구를 충족합니다. 실험 절차 시연은 Hubrecht Organoid Technology의 Marvin Statia와 Jeffrey Beekman 그룹의 Annelot Vonk가 진행합니다.최적의 forskolin 유도 팽창 분석 데이터를 얻기 위해서는 여러 개의 싹(budding)이 있는 큰 오가노이드가 포함된 배양물을 사용하는 것이 필수적입니다. 이러한 배양물을 확인한 후, 15 mL 원심분리관 하나에는 샘플 이름을, 다른 하나에는 세척용(washed)이라고 라벨을 붙입니다. 그다음, p1000 피펫을 사용하여 기저막 매트릭스 드롭이 흐트러지지 않도록 주의하며 오가노이드 배양 웰에서 배지를 조심스럽게 흡입하여 제거합니다.그리고 각 웰에 basal medium 1 mL를 추가합니다. 이제 피펫을 사용하여 각 웰의 basement membrane matrix 방울을 분쇄하고, 생성된 오가노이드 현탁액을 샘플 이름이 기재된 15 mL 튜브로 옮깁니다. 각 웰을 basal medium 1 mL로 다시 헹구고 세척액을 샘플 튜브에 함께 수집합니다.모든 샘플 수집이 완료되면, 기초 배지를 채워 샘플 튜브의 최종 부피를 12 milliliters로 맞추고, 미리 적셔둔 5 milliliter 피펫을 사용하여 용액을 혼합합니다. 다음으로, 오가노이드를 원심 분리한 후 펠릿을 1 milliliter의 신선한 기초 배지에 다시 현탁합니다. 동일한 p1000 피펫 팁 위에 필터가 없는 p10 팁을 씌우고, 현탁액을 20회 정도 파이펫팅하여 분주합니다.그다음 두 팁을 모두 버리고, 5 mL 피펫을 사용하여 샘플에 4 mL의 신

forskolin-induced-swelling-intestinal-organoids-an-vitro-assay-for

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

여기서, 수확 유지하고, 병원체 관련 분자 패턴 (PAMPs가) 및 리스테리아 마우스 소장 organoids을 치료하는 프로토콜뿐만 아니라, 유전자 발현 및 단백질 적절한 정규화 기술에 중점으로 설명한다.

그만큼<em&gt; 전의 VIVO</em마우스 소장 Organoids의&gt; 문화 및 패턴 인식 수용체 자극

여기 우리 인간의 비 강 상피 세포의 3 차원 회전 타원 체 문화를 생성 하는 방법을 설명 합니다. Spheroids는 다음 드라이브 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 (CFTR) 자극-종속 이온 및 액체 분 비, CFTR 함수에 대 한 프록시로 회전 타원 체 luminal 크기의 변화를 측정.

개별된 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 연구에 대 한 인간의 비 강 상피 세포 Spheroids의 생성

상세한 프로토콜이 인간 비강 상피 세포로부터의 시험관내 오가노이드 모델을 기술하기 위해 여기에 제시된다. 이 프로토콜에는 표준 실험실 장비가 필요한 측정 옵션이 있으며 특수 장비 및 소프트웨어에 대한 추가 가능성이 있습니다.

인간 비강 상피 오가노이드의 문화와 이미징

이 프로토콜은 막 전위의 변화를 측정하여 전기적 막 단백질을 연구하는 방법을 설명합니다. 이 분석은 상피 세포주에서 내인성으로 발현되는 여러 이온 채널의 기능적 판독을 위한 플랫폼을 제공합니다.

두 개의 상피 세포주에서 두 개의 내인성 이온 채널에 대한 고처리량 기능 연구를 위한 막 전위의 형광 기반 분석

여기에서, 우리는 이중 챔버, 투과성 지원 시스템에서 송곳니 장 오가노이드의 배양을 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 투과성 지지체에서의 오가노이드 시딩, 단층 유지, 및 후속 약물 투과성 실험이 기재되어 있다.

이중 챔버 투과성 지원 시스템의 송곳니 장 오가노이드

생검 유래 장 오가노이드 및 장기 온 칩 기술은 미세 생리학 플랫폼으로 결합되어 영역 별 장 기능을 재구성합니다.

인간 오가노이드와 장기 온 칩 기술을 결합하여 장 영역별 기능 모델링

이 프로토콜은 낭포성 섬유증(CF)에 대한 새로운 진단 분석인 직장 오가노이드 형태 분석(ROMA)을 설명합니다. 형태 학적 특성, 즉 진원도 (원형도 지수, CI)와 루멘의 존재 (강도 비율, IR)는 CFTR 기능의 척도입니다. 189 명의 피험자를 분석 한 결과 CF와 비 CF가 완벽하게 구별되었습니다.

직장 오가노이드 형태 분석(ROMA): 낭포성 섬유증의 진단 분석

오가노이드-섬유아세포 공동배양은 생체 내 줄기세포 틈새를 연구하기 위한 모델을 제공한다. 여기서, 식도 오가노이드-섬유아세포 공동배양을 위한 프로토콜이 기재되어 있다. 또한 전체 마운트 이미징을 사용하여 섬유아세포-오가노이드 상호작용을 시각화합니다.

Functional Characterization and Visualization of Espacageal Fibroblasts using organoid co-cultures (오가노이드 공동 배양을 이용한 식도 섬유아세포의 기능적 특성 분석 및 시각화)

여기서는 쥐의 장 오가노이드를 생성하고 여러 다운스트림 응용 분야에서 사용하는 프로토콜을 제시합니다. 쥐는 종종 선호되는 전임상 모델이며, 강력한 장 오가노이드 시스템은 in vivo 연구에 수반되는 in vitro 시스템의 필요성을 충족시킵니다.

쥐 장 오가노이드의 생성과 조작

이 프로토콜은 면역염색에 의한 세포 접착, 오가노이드 형태 및 유전자 발현을 위한 생체 기능성 자기 조립 펩타이드를 평가하는 것을 목표로 합니다. 우리는 결장직장암 세포주를 사용하여 집중적인 테스트를 위한 오가노이드를 얻는 비용 효율적인 방법을 제공할 것입니다.

초단파 자기조립 펩타이드 매트릭스에서 SW1222 세포주의 대장암 오가노이드 제조 및 특성화

이 연구는 소장과 대장에서 유래한 돼지 오가노이드의 2D 단층을 생성하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이러한 단층의 성장은 TEER 값의 증가로 표시되며, 이는 견고한 상피 무결성을 나타냅니다. 게다가, 이 단층은 forskolin의 신청에 따르는 Ussing 약실 실험에 있는 생리적인 분비 반응을 전시합니다.

토종 장의 생리학적 특성을 반영하는 2차원 돼지 장 오가노이드(Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids)

학습하세요 포스콜린 유발 팽창 분석법을 활용하여 낭포성 섬유증 환자 유래 장내 오가노이드에서 CFTR 기능 및 약물 반응을 평가하는 방법입니다. 이 기술은 맞춤형 치료 전략 수립에 활용됩니다.

포스 콜린 유발 장내 Organoids에 붓기 일 :

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