Name: 쥐 대동맥 또는 하대 정맥에 혈관 성형술 패치 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: 학습하세요 쥐 대동맥 또는 하대 정맥에 혈관 성형술 패치 기법으로 생체재료를 이식하고 동맥과 정맥 환경에서 신생내막 과형성을 비교 분석하는 방법입니다. 이 기술은 혈관 생물학 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 국민 건강 보조금 R56-HL095498, R01-HL-095498 (AD로), R01-HL128406, 재향 군인의 생명 연구소 연구 미국 부서에서 메리트 검토 수상 I01-BX002336의 연구소에 의해 부분적으로 지원되었다 개발 프로그램 (AD로), 예일 (AD로) 수술 Ohse 보낸 수상 교실 (JMS까지) 노프 심장 혈관 재단 친목, 그리고 자원을 통해 및 재향 군인 코네티컷 보건 의료 시스템 (웨스트 헤이븐, CT에서 시설의 사용 ). 소 심낭 패치는 아낌없이 LEMAITRE 혈관 주식 회사 (벌링턴, MA)에 의해 제공되었다.

해당 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인은 당신의 프로토콜이 기관의 동물 연구 윤리위원회의 가이드 라인을 따르는 것을 나타내는 얻을 수 있어야합니다. 1. 마취 및 수술 전 절차 <ol><li> 아크릴 유도 챔버 내로 투여 기화 3 % 이소 플루 란 1 L / min의 산소와 함께 200 g의 무게가 나가는 수컷 Wistar 랫트를, 마취. </li><li> 발가락과 꼬리 핀치에 반응의 부족을 통해 적절한 마취를 확인합니다. 동물 마취하에있는 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 연고를 놓습니다. 연속 흡입에 의해 3 %의 이소 플루 란 - 플라스틱 조작 판의 각각의 쥐 부정사를 놓고 실리콘 마스크를 위치 2 기화 제공한다. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. </li><li> 멸균 장갑을 착용하는 동안, 헤어 리무버를 사용하여 복부 복부 머리를 제거합니다. Buprenorphine, 중 피하 또는 복강, 자주이 시점에서 주어진다. </li></ol> 2. 수술 절차 <ol><li> 패치 venoplasty <ol><li> 수술 전에 3 mm X 1.5 mm X 0.6 mm의 크기로 microscissor를 사용하여 소 심낭 패치를 트림. 세포 배양 접시에 5 분 동안 멸균 생리 식염수 10ml에 패치를 담근다. </li><li> 당신의 기관 프로토콜에 따라 국소 방부제와 절개 사이트를 준비하고 외과 드레이프를 적용합니다. 수술 전반에 걸쳐 무균 기술을 유지하기 위해 멸균 장갑과 악기를 사용합니다. 국소 마취는 계획 피부 절개 부위에 주입 할 수있다. </li><li> 메스를 사용하여, 단지 치골 위의 칼 모양의 수준에서 연장하는 중간 선 복부 절개를합니다. </li><li> 트랙터를 삽입하고 오른쪽으로 복강에서 모든 창자를 내용 만. 식염수로 적신 거즈에 창자를 감싸. </li><li> 제 i를 노출nfrarenal 대정 맥 (IVC). 패치 주입의 사이트는 신장 혈관의 기원의 수준 아래 약 2mm입니다; 이 사이트에서 IVC 무료 해부. 결찰 및 6-0 나일론 봉합사를 사용하여이 수준에서 모든 허리와 지류 정맥을 나눕니다. </li><li> 근위 및 원위 infarenal IVC 모두에서 두 미세 클립을 배치합니다. 가위 (그림 1A)를 사용하여 약 3 mm로를 확장 한 다음 IVC의 앞쪽 벽을 천공하여 25 G 바늘과 venotomy를 수행합니다. </li><li> 실행 또는 중단 10-0 나일론 봉합사 (그림 1B)를 사용하여 패치는 venotomy을 닫습니다. </li><li> venoplasty 폐쇄를 완료합니다. 패치를 배출하고 IVC 혈액의 흐름을 복원하는 근위 클램프를 제거하기 위해 먼저 말초 클램프를 제거합니다. </li><li> 압축없이 30 초 동안 관찰하여 지혈을 확인합니다. 자연 위치로 창자를 돌려줍니다. 승인 동물 프로토콜에 따라 실행 봉합과 복부를 닫습니다. </li></ol></li><li> 패치 arterioplasty <ol><li> 수술 전에 3 mm X 1.5 mm X 0.6 mm의 크기로 microscissor를 사용하여 소 심낭 패치를 트림. 멸균 식염수에 담가. </li><li> 국소 방부제와 절개 사이트를 준비하고 외과 드레이프를 적용합니다. 수술 전반에 걸쳐 무균 기술을 유지하기 위해 멸균 장갑과 악기를 사용합니다. </li><li> 메스를 사용하여, 단지 치골 위의 칼 모양의 수준에서 연장하는 중간 선 복부 절개를합니다. </li><li> 트랙터를 삽입하고 오른쪽으로 복강에서 모든 창자를 내용 만. 식염수로 적신 거즈에 창자를 감싸. </li><li> 대동맥을 노출. 패치 주입의 사이트는 신장 동맥의 기원의 수준 아래 약 2mm입니다; 이 사이트에서 무료 대동맥을 해부하다. 결찰 및 6-0 나일론 봉합사를 사용하여이 수준에서 모든 척추 동맥을 나눕니다. </li><li> infrarenal 대동맥 클램프. puncturi에 의해 arteriotomy을 수행하기 위해 25 G 바늘을 사용하여약 3mm 사용 가위 (그림 1C)로 확장 한 다음 대동맥의 앞쪽 벽 ng를합니다. </li><li> 10-0 나일론 봉합사 (그림 1D)를 실행하여 패치와 arteriotomy을 닫습니다. arterioplasty 폐쇄를 완료합니다. 패치를 배출 한 후 대동맥 혈류를 복원하는 근위 클램프를 제거하기 위해 먼저 말초 클램프를 제거합니다. </li><li> 압축없이 30 초 동안 관찰하여 지혈을 확인합니다. 자연 위치로 창자를 돌려줍니다. 승인 동물 프로토콜에 따라 실행 봉합과 복부를 닫습니다. </li></ol></li></ol> 3. 수술 후 절차 <ol><li> 복부의 폐쇄 후, 마취 중단. 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 권장 지침에 따라 진통과 상처 치료를 포함한 수술 후 치료를 적용. </li><li> 진통제를 들어, 0.1 밀리그램에서 프레 노르 핀을 사용 / kg 근육 24 시간 동안 매 12 시간보다 적게는 수행하지수술 절차를 보내고. 요정 수술 시대의 적절한 복구뿐만 아니라 수술 후 통증의 적절한 치료를 보장 동물의 방에서 매일 동물의 상태를 확인합니다. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. </li></ol><style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 12.0px Helvetica}
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<ol><li>Muto, A., Nishibe, T., Dardik, H., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patches+for+carotid+artery+endarterectomy%3A+current+materials+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Patches for carotid artery endarterectomy: current materials and prospects.</a> J Vasc Surg. 50 (1), 206-213 (2009).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+usage+and+future+directions+for+the+bovine+pericardial+patch%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Current usage and future directions for the bovine pericardial patch.</a> Ann Vasc Surg. 25 (4), 561-568 (2011).</li>
<li>Biasi, G. M., Sternjakob, S., Mingazzini, P. M., Ferrari, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nine-year+experience+of+bovine+pericardium+patch+angioplasty+during+carotid+endarterectomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Nine-year experience of bovine pericardium patch angioplasty during carotid endarterectomy.</a> J Vasc Surg. 36 (2), 271-277 (2002).</li>
<li>Papakostas, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+vascu-guard+bovine+pericardium+patch+for+arteriotomy+closure+in+carotid+endarterectomy.+Early+and+long-term+results%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Use of the vascu-guard bovine pericardium patch for arteriotomy closure in carotid endarterectomy. Early and long-term results.</a> Ann Vasc Surg. 28 (5), 1213-1218 (2014).</li>
<li>Ohwada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutaraldehyde-fixed+heterologous+pericardium+for+vena+cava+grafting+following+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatogastroenterology%22%5BJournal%5D)">Glutaraldehyde-fixed heterologous pericardium for vena cava grafting following hepatectomy.</a> Hepatogastroenterology. 46 (26), 855-858 (1999).</li>
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<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardial+patch+angioplasty+heals+via+an+Ephrin-B2+and+CD34+positive+cell+mediated+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pericardial patch angioplasty heals via an Ephrin-B2 and CD34 positive cell mediated mechanism.</a> PLoS One. 7 (6), 38844(2012).</li>
<li>Bai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+pericardial+patches+with+antibiotics+does+not+alter+patch+healing+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of pericardial patches with antibiotics does not alter patch healing in vivo.</a> J Vasc Surg. 63 (4), 1063-1073 (2016).</li>
<li>Muto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eph-B4+prevents+venous+adaptive+remodeling+in+the+adult+arterial+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Eph-B4 prevents venous adaptive remodeling in the adult arterial environment.</a> J Exp Med. 208 (3), 561-575 (2011).</li>
</ol>

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우리는 각각 패치 venoplasty 또는 패치를 생성 arterioplasty, 정맥 또는 동맥 중 하나에 사용될 수있는 쥐 패치 혈관 모델을 설명한다. 이 심낭 패치 모델을 사용하여, 우리는 대동맥 arterioplasty (도 2)도 7,도 8에 비해 래트 IVC의 venoplasty 공격적인 안정 신생 내막의 증식을 보였다. 몇 가지 기술적 인면은 주목할 만하다. 대동맥 arterioplasty에있어서, 상기 봉합 동맥 환경의 높은 압력으로 혈액의 누출을 방지하기 위해 꽉 번호 및 / 또는 간격의 적절한 것이 중요하다. 하대 정맥의 venoplasty에서, 상기 IVC 벽은 매우 얇고 깨지기 때문에 특히 관심과 부드러움과 기동 동작 모두를 수행하는 것이 중요하다....

심낭 패치, 소 또는 돼지 중 하나와 일반적으로 가까운 혈관 혈관 외과 의사는 재 협착 1, 2의 위험을 줄일 수 있습니다. 동맥 수술, 심낭 패치 혈관 성형술은 기본 폐쇄 3, 4에 비해 재 협착의 속도를 줄일 수 있습니다. 패치 venoplasty도 마찬가지로 동맥 절차 5, 6에 자주 비해 있지만, 정맥을 닫 수행된다. 패치는 일반적으로 자신의 내강 표면에 신생 내막의 증식을 개발; 그러나, 신생 내막 형성의 메카니즘은, 특히 동맥 및 정맥 환경 사이 신생 내막 형성에있어서의 차이를 비교하여, 불분명. 우리는 이전에 심낭 패치는 동맥과 정맥 환경과 그 정맥 패치 혈관 성형술 모두에서 전구 세포를 더를 보여줍니다 유치 것으로 나타났다동맥 패치 7, 8과 비교 ggressive 신생 내막 형성. 본 연구는 동맥과 정맥 모두 폐쇄에 공통 심낭 패치 성형술의 쥐 모델을 설명하는 신생 내막 형성을 연구하기 위해 이용 될 수있다; 이 방법은 일반적으로 인간 환자에 사용되는 동작 방법의 작은 동물 모델이다. 래트 모델은 수술의 기술적 사상을 용이하게하고, 모델에 대한 학습을 ​​향상 마우스 모델보다 더 큰 직경을 갖는다.

<table><tbody><tr><td>소 심낭 패치</td><td>LeMaitre 혈관</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈관 클램프</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5424</td><td></td></tr><tr><td>클램프 적용 겸</td>자 <td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Prolene 봉합</td>사 <td>Arosurgical Co.</td><td>T05A10N10-13</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐 대동맥 또는 하대 정맥에 혈관 성형술 패치

Patch Angioplasty in the Rat Aorta or Inferior Vena Cava

심낭 패치는 일반적으로 혈관을 닫습니다 혈관 수술에 사용됩니다. 패치를 형성하는 신생 내막 증식 시험을 용이하게하기 위해, 우리는 각각의 패치 venoplasty 또는 패치 arterioplasty를 생성 정맥 또는 동맥 중 하나에 사용될 수 패치 성형술의 쥐 모델을 개발 하였다. 이 모델의 기술적 인 측면을 설명합니다. 적외선 신장 IVC 또는 대동맥을 절개 한 후 근위 및 원위 고정된다. 3 밀리미터 venotomy 또는 arteriotomy 8 주령의 Wistar 쥐에 6 infrarenal 하대 정맥이나 대동맥에서 수행된다. 소의 심낭 패치 (X 1.5 mm X 0.6 mm 3mm는) 다음 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 사이트를 폐쇄하는 데 사용됩니다. 동맥 패치에 비해 정맥 패치 수술 후 7 일째에서 신생 내막 두께를 증가 보여 심낭 패치 성형술이 신규 모델 혈관 생체 재료의 신생 내막의 증식을 조사뿐만 아니라, 동맥과 정맥의 차이를 비교하는데 사용될 수있다환경.

패치 혈관 성형술 후, 정맥 (N = 42) 또는 동맥 (N = 24) 패치 그룹 중 하나에는 혈전증이 없었다. 7 일에 생존은 정맥 또는 동맥 패치 중 하나와 두 군 모두에서 100 %였다. 패치는 7 일째에 수확를 헤 마톡 실린 및 에오신으로 염색하고, 이전에 7 바와 같이 신생 내막 두께를 비교하고 있었다. 때문에 패치와 신생 내막 사이의 뚜렷한 형태 학적 차이, 신생 내막을 구별하는 것은 매우 쉽습니다. 정맥 패치에서 신생 내막 (그림 2A, 2C)에 축적 이상의 셀과 패치의 내강 측에 두꺼운 신생 내막의 별개의 층이 있었다; 동맥 패치, 패치 (도 2B, 2D)의 내강 측에 연결된 몇 셀 훨씬 얇은 내막 층이 있...

우리는 직경이 작은 정맥이나 동맥에 사용할 수 있는 심낭 패치 혈관 성형술 모델을 확립했습니다. 이 모델은 정맥 및 동맥 신내강 증식 형성을 비교하는 데 사용할 수 있습니다.

Pericardial patches are commonly used in vascular surgery to close vessels. To facilitate studies of the neointimal hyperplasia that forms on the patch, ...

이 절차의 전반적인 목표는 동맥 또는 정맥 환경에 혈관 생체 재료를 이식하는 것입니다. 이 방법은 동맥 또는 정맥 환경에 배치된 생체 재료에서 형성되는 신내막 증식의 차이에 관한 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 습득하기 쉽고 수행하는 데 짧은 시간만 필요하다는 점입니다.발가락 꼬집기에 반응이 없음을 확인한 후, 선제적 진통 처치로 buprenorphine을 IP로 투여합니다. 동물의 복부 하단 털을 제거합니다. 다음으로, 미세 가위를 사용하여 bovine pericardial patch를 3 x 1.5 x 0.6 millimeter 크기로 자르고, 세포 배양 접시에 담긴 10 milliliters의 멸균 식염수에 패치를 5분 동안 담가둡니다.패치를 담가두는 동안, 국소 소독제로 절개 부위를 소독하고 수술용 드레이프로 동물을 덮습니다. 해부 현미경 하에서 메스를 사용하여 검상돌기부터 치골 바로 위까지 복부 정중선 절개를 실시하고, 절개창에 리트랙터를 삽입합니다. 복강이 열리면 장을 복강에서 동물의 우측으로 꺼내고, 식염수에 적신 거즈로 조직을 감쌉니다.멸균 면봉을 사용하여 신하대정맥(infrarenal vena cava, IVC)을 노출시킵니다. 그 후 포셉을 사용하여 신정맥 기점 약 2 mm 아래에서 IVC를 박리하고, 6-0 나일론 봉합사를 사용하여 모든 요정맥 및 지류 정맥을 결찰하고 절단합니다. 다음으로, 근위부와 원위부의 신하대정맥 양단에 마이크로수술용 클립 두 개를 배치하고, 25 gauge 바늘을 사용하여 IVC의 전벽을 천자한 후 가위로 천자 부위를 약 3 mm 정도로 확장합니다.이제 패치와 10-0 나일론 봉합사로 정맥 절개 부위를 완전히 폐쇄합니다. 패치의 공기를 빼기 위해 원위부 클램프를 제거한 후, 근위부 클램프를 제거하여 하대정맥(IVC)으로의 혈류를 복원합니다. 그 다음 압박 없이 30초 동안 패치를 관찰하여 지혈 여부를 확인하고, 장을 복강 내로 되돌린 후 승인된 동물 실험 프로토콜에 따라 연속 봉합으로 복부를 폐쇄합니다.기관 동물실험윤리위원회(IACUC)의 권고 사항에 따라 진통제 투여 및 상처 관리를 포함한 수술 후 처치를 수행하며, 동물이 완전히 흉골 복위(sternal recumbency) 상태가 될 때까지 모니터링합니다. 패치 동맥성형술(patch arterioplasty)의 경우, 방금 시연한 것과 같이 다듬어진 패치를 멸균 식염수에

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