Name: 신생아 쥐 새끼들까지 잔치에서 신경 발달 반사 테스트 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: 배우세요 신생아 쥐 새끼의 신경 발달 반사 테스트 방법을 통해 뇌성마비와 발달 장애 연구에 활용하는 기술입니다. 이 방법은 조기 발달 반사를 정확하고 일관되게 평가하여 신경 발달 이상을 조기에 식별하는 데 도움을 줍니다.

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저자는 NeuroDevNet (우수 국가 센터)를 포함하는 우리의 자금 조달 기관을 감사드립니다의 알바 재단, 여성과 어린이 건강 연구소, 알버타 대학.

앨버타 대학의 동물 관리 및 사용위원회, 건강 과학은 모든 동물 연구를 승인했다. 참고 :이 프로토콜은 다른 종과 균주에 적용 할 수 있지만,이 프로토콜은 긴 에반스 쥐를 대상으로합니다. 이러한 래트 다른 설치류 균주에 비해 우수한 성능 모터 시력을 보여왔다. 다음 타이밍 임신,식이 보충제, 모체 염증 및 신경 발달 반사 25, 26 프로토콜이다. 1. 실험 동물 <ol><li> 쥐 동물 주택 시설에 도착하면, 그들의 새로운 환경에 적응 할 수 있도록 하루 이틀을위한 상호 작용 삼가. 적응 후 약 5 일 동안 매일 쥐를 처리하지, 또는 쥐 때 더 이상 스트레스의 조짐을 보이고. 인간에 의한 스트레스 테스트 결과와 르를 변경할 수 있습니다임신 손실 광고. </li><li> 쥐가 익숙해지면, 번식이 시작됩니다. (오전 8시 - 오후 3시) 두 여성 및 2 층 사육 케이지 한 수컷 쥐 (H = 38cm, 1,800cm 2 면적) 밤새 놓는다. 이 케이지는 스트레스와 혼잡을 방지합니다. 아침에 전달 피펫을 사용하여, 식염수의 약 0.25 mL를 암쥐의 질을 세척. 미세 원심 튜브에 솔루션을 전송합니다. </li><li> 다시 각각 기존의 새장에 두 여성과 남성을 놓습니다. </li><li> 래트 발생한 정자 여부가 존재하는 발정주기의 어느 단계를 결정하기 위해 광학 현미경 (100 배) 아래의 섹션 1.2에서 수집 된 용액을보기. 정자가있는 경우, 배아 일 (E1) (그림 1)과 날짜를 기록합니다. 임신을하면 여성에게 E14에 자신의 새장을 제공합니다. 참고 : 질 도말 검사에서 세포는 분명, 따라서 낮은 조명 설정을 사용합니다. 콘덴서가 가장 낮은 설정으로 조정되어 있는지 확인합니다. 광고단지 휘도 제어 광을 어둡게한다. 밝기 전화를 사용할 수있는 경우, 1로 설정합니다. </li></ol> 2.식이 보충제 참고 :이 프로토콜은 임신 마지막 주 동안식이 브로콜리 새싹 소비의 치료 효과를 평가하기위한 것입니다. 우 등의 알에 따른 콩나물 성장. (27). <ol><li> 3 시간 - 2 브로콜리 새싹 씨앗을 만끽 해보세요. 조리대 씨 sprouter 상자에 씨앗을 확산하고 발아 따뜻한 표면에 설정합니다. </li><li> (오전 9시 - 8)과 한 번 오후에 (3-4 PM) 한 번 오전에, 하루에 두 번 씨앗을 물. </li><li> 5 일째에, 일에 대한 창으로 콩나물을 배치 (콩나물은 두 잎 각을 가져야 하루 위에 녹색이 될 것이다). </li><li> 하루의 끝에서, 부드럽게 체로 상자 밖으로 브로콜리 콩나물을 당겨 콩나물을 수확하고 건조 평평한 표면에 누워. </li><li> 콩나물이 완전히 건조되면, w밀봉 된 플라스틱 백 아웃 eigh 200 mg의 장소. </li><li> E14에서부터 PD21 (새끼가되는 이유 일)까지 매일 건조 브로콜리 콩나물 각각 200 mg의 임신 한 쥐 먹이. </li></ol> 3. 염증 <ol><li> 염증을 유발하고 자손에 흰색 물질 부상을 재현, 지질 다당류 (LPS) E19과 E20의 모든 12 시간 임신 쥐를 주입합니다. 주사의 날, 주거 시설에서 연구실에 새장을 가지고. 임신 한 쥐에 적응 적어도 1 시간 동안 침착이 될 수 있습니다. 쥐가 영구적으로 전신 또는 신장 손상의 임상 적 징후가 표시되면, 즉시 안락사와 연구에서 제거됩니다. </li><li> 임신 댐의 무게를. </li><li> 식염수를 100 μL의 : LPS 200 ㎍ / kg (B8 혈청 0127)을 녹인다. ½ 30 G 바늘을 구비 한 1 ml 주사기로 상기 용액을 대기음. <ol><li> 각 주입에 대한 새 바늘을 사용합니다. 이 솔루션은 불편을 최소화하기 위해 몇 분 동안 예열합니다. </리&gt; </ol></li><li> 시간을 기록하고 복강 임신 댐을 주입. 양쪽 번갈아 주사는 동일한 분포를 보장한다. 참고 : Machholz 등. 적절한 억제 및 주입 절차를 설명한다. (28) </li></ol> 4. 발달 반사 테스트 <ol><li> PD1 (출생 일)에, 댐 및 기록 출생 무게에서 새끼를 제거합니다. 다시 각각의 케이지에 새끼를 놓고 PD3 때까지 동물 시설로 이동합니다. 이 댐과 강아지 사이의 산모 결합을 보장합니다. <ol><li> 신뢰성 평가를위한 반사 테스트를 기록합니다. 이 프레임 단위의 분석 (1 / 1,000 S)의 최대 셔터 속도 오도록 비디오 카메라를 조정한다. 이 위 또는 쥐 강아지 각 반사에 사용되는 모든 재료 바로 옆에 있도록 비디오 카메라를 배치합니다. 예컨대, 사지에 배치하기위한, 승강 및 뒷다리의 배치가 포착되도록 래트 새끼 옆에 카메라를 배치했다. </li><li> 가속 바로 잡기 위해, 공중에서 오른쪽으로 강아지의 능력을 기록하기 위해 쥐의 강아지 및 방문 패드 위에 카메라를 배치합니다. </li></ol></li><li> 실험이 끝날 때까지 매일 기록의 무게. PD3에서 신경 발달 반사 테스트 (그림 4)를 시작합니다. 환경에 적응 수 있도록 시험 전에 1 시간의 최소 조용한 방에 새장을 이동합니다. </li><li> 쥐가 야행성으로 매일 일정한 시간에 신경 발달 반사 테스트를 수행합니다. 예를 들어 9 시까 지 테스트 - 매일 정오. 36.5 ° C의 안정된 체온을 유지하기 위해, 직접 항상 가열 램프 아래 또는 열 패드 새끼 유지; 이 시대의 쥐 새끼 쉽게 열을 잃게됩니다. 직장 온도 프로브로 측정한다. 효율적으로 수행하는 경우가 댐과 충분히 쓰레기에서 제거되지 않기 때문에, 새끼의 체온은 변경되지 않습니다. 참고 : 37 ° C를 초과하지 않도록하는 가열 램프의 온도를 모니터링. <ol&gt; <li> 긍정적 인 반응이 관찰 될 때까지 매일 각 반사의 점수를 기록합니다. 강아지가 이틀 연속에서 작업을 수행 할 수있을 때 긍정적 인 반사 반응이 발생합니다. 긍정 응답의 첫번째 발생의 날짜는 정량화에 사용된다. 더 이상의 테스트는 긍정적 인 반응 다음 필요하지 않습니다. 따라서, 각 반사적 종료 날짜는 가변적이다. </li></ol></li><li> 앞다리 파악하는 <ol><li> PD3 일부터의 앞다리 파악 반사 테스트를 실시합니다. 각 앞발의 손바닥에 대해 평활로드 놓고 수동 가벼운 압력을 적용한다. 가벼운 압력이 약간 이루어지는 것이 접촉을 보장하기 위해 앞발을 치환해야하며, 새끼에는로드를 느낄 수있다. 파악하는는로드 주변의 모든 자리의 굴곡으로 나타납니다. 두 앞발은 연속 이틀간로드를 파악할 때 반사의 성공적인 획득은 발생한다. </li><li> 앞다리 파악 점수 : 더 욕심 0 성공 왼쪽으로 한 앞발로 파지 (또는 R 1ight의 앞발은) 여기에 지정 될 수 있습니다 두 앞발로 성공을 잡는 2 </li></ol></li><li> 뒷다리 파악하는 <ol><li> PD3에 시작하는 후지 파악 반사 테스트를 실시합니다. 각 뒷발의 발바닥에 대해 평활로드 놓고 수동 가벼운 압력을 적용한다. 가벼운 압력이 약간 이루어지는 것이 접촉을 보장하기 위해 뒷발을 치환해야하며, 새끼에는로드를 느낄 수있다. 로드의 성공 욕심은로드 주변의 숫자의 굴곡으로 나타납니다. hindpaws 모두가 연속 이틀간로드를 파악할 때 반사의 성공적인 획득은 발생한다. </li><li> 사지 이해 점수 : 더 욕심 0 1 일 뒷발로 잡고 성공을 위해 (왼쪽 또는 오른쪽 뒷발은 여기에 지정 될 수 있습니다) 모두 hindpaws에 의해 성공을 잡는 2 </li></ol></li><li> 바로 잡고 <ol><li> PD3에 시작하는 바로 잡고 반사 테스트를 시작합니다. 네 발 수직으로 단단히, 앙와위에서 강아지를 누르고 있습니다. 오 가자강아지 f를 바로하면 타이머를 시작합니다. 강아지가 / 플립 네 발에 롤오버 할 때 바로 잡고 달성되고, 각각의 발 신체에 수직이다. 각 강아지이 목표를 달성하기 위해 15 s의 최대 값을 지정합니다. </li><li> 복원 정 점수 : 0 (최대 할당 된 시간 또는 15 초) 뒷면에 누워에 대한 1 측면에 거짓말 (왼쪽 또는 오른쪽은 여기에 지정 될 수 있습니다) 또는 (최대 할당 된 시간 또는 15 초) 잘못된 자세 오른쪽에 있지만에서 강아지의 능력 성공적인 복원 정 적절한 자세 2 </li></ol></li><li> 뒷다리 배치 <ol><li> PD4 일부터 반사 테스트를 놓기 사지를 시작합니다. 몸통에 의해, 공중에 수직으로 강아지를 잡으십시오. 부드럽게 스트로크 무딘 표면과 뒷발의 배부 (같은 테이블의 가장자리). 래트 새끼가 다운 그 표면에 배치 뒷다리이어서 자극 뒷다리를 철회 할 때 정확한 배치 반사이다. </li><li> 사지 PL 점수반사를 acing : 어떤 성공 0 1 일 뒷발의 배치에 대 한 (왼쪽 또는 오른쪽 뒷발은 여기에 지정 될 수 있습니다) 모두 hindpaws 성공적인 사지 배치에 대 2 </li></ol></li><li> 클리프 회피 <ol><li> PD4 일부터 절벽 회피 테스트를 시작합니다. 강아지의 앞발과 주둥이가 낭떠러지이되도록 평탄면의 에지에서 래트 새끼를 놓는다. 정확한 결과는 래트 새끼 절벽 모서리 쉬게 보호 반응이다. 실험자의 손이나 거품 착륙 가을에서 강아지를 잡으려고 절벽 아래에 배치됩니다. </li><li> 절벽 회피 점수 : 0 어떤 운동이나 가장자리에서 떨어지는 멀리 절벽에서 이동하는 시도를하지만 매달려 사지 1 멀리 절벽에서 성공적인 운동 2 </li></ol></li><li> 보조 <ol><li> PD6에 걸음 걸이의 평가를 시작합니다. 15 센티미터 diamet의 센터에있는 새끼어 원과 작업을 완료하기 위해 강아지에게 30 초를 할 수 있습니다. 쥐 강아지 미만 30 초에 원 내외 앞발을 움직일 수있을 때 14 성공적인 걸음 걸이가 수행됩니다. </li><li> 이 원의 외부 이동 래트 새끼 걸리는 시간 (초)로 보용 점수. 이 원 안팎 앞발을 이동 강아지 걸리는 시간을 기록한다. 기록 30 초 강아지가 주어진 시간 내에 작업을 완료 할 수없는 경우 </li></ol></li><li> 청각 놀람 <ol><li> PD10에 청각 놀람의 분석을 시작합니다. 놀라게 응답이 존재하는지 여부를 평가하기 위해 직접 강아지 통해 시끄러운 소음 (종)을 제시한다. 강아지 멀리 사운드로부터는 &#39;쳐주는 운동을 표시 할 때 긍정적 놀라게 응답이 관측된다. </li><li> 청각 놀람 점수 : (또는) 않음 놀라게 응답 (예) 긍정적 인 놀라게 응답 </li></ol></li><li> 자세 <ol><li> PD에 대한 자세 분석 시작12.의 비 개방 미끄러운 표면 새끼, 그리고 이동할 때 강아지가 갖는 자세를 관찰한다. 미숙 자세 이동 복부 신체에 대하여 앞발과 hindpaws 모두 직교 좌표의 드래그에 의해 반사된다. 이동 몸체에 강아지가 표면으로부터 복부를 올릴 수 있고, 앞발과 hindpaws 모두 직선 뾰족하거나 평행하면 성숙한 자세를 취득한다. </li><li> 자세 점수 : 어떤 운동 0 미숙 한 자세로 이동 성숙한 자세 2 움직이면서 </li></ol></li><li> 눈 열기 <ol><li> PD12에 눈을 열어 분석을 시작합니다. 두 눈꺼풀이 열려 하루를 기록한다 : 눈에 띄는 눈 0 (1) 하나의 볼 눈용 (좌측 또는 우측 여기 지정 가능) 2 개의 볼 눈 </li></ol></li><li> 가속 바로 잡고 <ol><li> PD14 일부터 가속 바로 잡고 테스트를 시작합니다. 앙와위 30.48 C에 배치 강아지거품 착륙 위 entimeters. 강아지를 삭제하고 그 자체를 잘 할 수있는 능력을 관찰한다. 바로 잡고는 강아지가 발에 발생하기 쉬운 위치 및 토지에 인계 할 수있을 때를 말한다. </li><li> 가속 복원 정 점수 : 그 뒤에 떨어지는 0 1 옆에 떨어지는 위해 (왼쪽 또는 오른쪽은 여기에 지정 될 수 있습니다) 그것의 발에 착륙 2 </li></ol></li></ol> 참고 : 반사의 정량화의 종류는 조사관의 질문에 따라 사용할 수 있습니다. 반사의 정량화는 초기 반사의 관찰, 리플렉스의 실종까지 등장까지의 첫날,이 작업을 성공적으로 수행하는 데 걸리는 시간, 성능의 속도 및 / 또는 시간 경과에 따른 성능의 향상으로 수행 할 수 있습니다. ㄴ 13, 14, 29, 30, 31urrent 연구는, 외관의 첫 날은 점수를 사용 하였다. 다산 모델을 사용하는 경우, 같은 쓰레기에서 새끼는 일반적으로 자궁과 산후 환경, 영양 가용성, 그들의 유전자 구조와 유사하게 동작합니다. (32) 따라서, 하나의 새끼 인해 쓰레기 바이어스에 N = 1로 설명 될 수 없다. 각 깔짚이 없음을 나타내도록 담가 내에 조사 새끼 = 1 평균화 될 수있다. 32, 33 또는, 같은 쓰레기 내의 여러 새끼 같은 쓰레기 내 계정 새끼 고려한 혼합 효과 모델을 이용하여 분석 될 수있다. 32 33

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저자가 공개하는 게 없다.

신경 발달 플렉스 시험 명백한 병리학 분명없는 상황 의미 일 수있다 비정상적인 피질 개발과 성숙의 예측 계수이다. 신경 발달 테스트하는 동안,이 새끼가 매일 같은 시간에 조사되어 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 쥐는 야행성 및 테스트가 하루 중 다른 시간에 수행되는 경우 때문에, 자신의 일주기 리듬 성능을 변경할 수 있습니다. 시끄러운 소리가 새끼에 스트레스를 추가 할 수있는 34 테스트는 조용한 방에 완료되어야한다. 35 새끼 반송 인간 처리 및 신규 설정 새끼에 응력을 유도 할 수 있기 때문에, 새로운 환경에 적응하기 위해 최소 1 시간을 필요로한다. 35 개 새끼도 가열 램프 아래 또는 가열 패드 위에 직접 테스트 할 필요가있다. 새끼 더 젊은 덜 수 그들은 thermoregulate 할 수 있습니다. 이러한 이유로, 36, 15 새끼 주어진다의 각각...

신경 발달 반사 신경, 또는 발달 이정표는 인간의 신생아 및 유아에 사용되는 초기 평가의 하나입니다. 신경 반사 신경은 뇌간과 척수의 반사 신경을 보여 불수의 반복적 인 운동이다. 이주 수초 및 synaptogenesis 진화하는 것을 특징으로 높은 두피 네트워크의 성숙 자율 제어 및 피질 억제를 촉진한다. 중추 신경계의 진화의 정상적인 진행의 변화는 신경 발달 반사 지연이나 결석을 일으키는 비정상적인 대뇌 피질의 배선, 기능 및 수초의 결과로, 두뇌 발달을 방해 할 수 있습니다. 신경 발달 장애 위험이 높은 인간의 유아는 종종 비정상 초기 반사를 표시합니다. 이상은 나중에 반사의 인수없는 지연 장기간 존재하거나 재현로서 존재하고, 발달 장애 예측할 수있다. 1,2 따라서신경 발달 장애의 실험 모델에서 반사 지연을 모방하는 것이 중요하다. 설치류는 일반적으로 실험 모델로 사용된다. 쥐 새끼 그러므로 특정 복잡한 모터, 감각 및 / 또는인지 행동 업무를 수행하기에 너무 미성숙 태어 때 altricial, 그리고. 이와 관련하여, 그들의 발달 미숙은 모두 물리적 및 장기 개발에 관한 것이다. 쥐, thermoregulate 무능력과 털이 태어 블라인드, 그리고 걸을 수없는된다. 두뇌 발달을 참조하면, 상당한 대뇌 피질의 성숙은 출생 후 발생합니다. PD7-10 새끼가 근에 해당하는 반면 28 주 임신 - (23)의 조기 인간의 뇌와 비슷한 뇌의 성숙 수준에 도달하기 위해 제안되었다; 신생아 쥐 새끼 (PD1 출생의 날이 출생 후 하루 1로 함) 용어는 인간의 두뇌. 3, 4, 5, 6이 상관은 총 해부학 적 분석에 기반하지만, 이러한 수초 진폭 집적 뇌파 등의 뇌 성숙 다른 방법도 기재되어있다. 예를 들어, 5, 7, 올리고 덴드로 사이트가 사전 (23)로부터 현상 인간 태아 뇌에서 주된 세포이다 - 자궁 32 주, 이러한 성숙 단계는 PD1-3 설치류에 대응한다. 래트 새끼에 그 주위 PD7-10 전뇌에 나타나는 반면, 5, 8, 9, 10이 또한, 수초 형성은 인간 자궁 시작; 신생아 쥐의 뇌는 대부분 해제 유수 남아있다. 11, 12 터커 등. P1 및 쥐의 진폭 집적 뇌파 패턴은 23 주 gesta 유사 할 것으로기 태아하는 PD7 및 PD10 강아지는 30에 가깝다 반면, - 각각 32주 및 용어 유아. 7 이러한 이유로, 신생아 쥐 새끼 신생아 반사 테스트는 개체 발생 및 / 또는 두뇌 개발의 중단을 캡처하는 기회를 제공한다. 후술 반사의 전지는 WM 폭스 마우스에서 반사의 개체 발생에 대하여 초기 조사원 중 하나 WM 폭스 Lubics A. 13 (14)에 의한 연구에서 적응된다. (13 개)이 반사는 포함하지만, 걸음 걸이, 청각 놀라는, 자세, 아이 오프닝을 바로 잡고, 사지 잡고 배치, 절벽 회피에 국한되지 않습니다 바로 잡고 가속. 양쪽 앞다리와 뒷다리 파 (각각 인간의 손바닥과 발바닥 파라고 함)은 척수 반사 및 비 - 일차 운동 피질 영역에서 저해에 의해 촉진된다. 15, 16 뒷다리 배치 (발바닥 반사)는 피질 기관의 성숙을 반영한다. 16, 17, 18 벼랑 회피 (보호 반응) (미로)을 바로 잡고, 그리고 (예 코털 (vibrissae) 전정 시스템과 관련된 것과 같은) 감각 입력 및 모터 출력 사이의 통합과 관련된 통신 바로 잡는 가속. 19, 20, 21 보행은 운동을 반영한다. (14) 청각 깜짝 놀라는 핵 pontis의 caudalis을 reticularis에서 음향 자극 거대한 뉴런의 시냅스 연결을 평가합니다. 21 자세 적절한 피질 척수 - / - 피질 척수 돌기, 근육 강도 및 신경근 신경 분포를 포함한다. 22, 23 마감마 아미노 부티 산 수용체 turation 눈 개구와 연관된다. 24 반사가 훨씬 더 복잡한 네트워크를 반영하고 여기에 제공된 일반적인 상관 관계가 있다는 사실을 유지하는 것이 중요합니다. 또한, 이러한 반사 신경보다 복잡한 행동 테스트가 가능하지 않습니다 아주 어린 나이에 신경 발달을 평가하는 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다. 본 연구의 목적은 쉽게 실험 신생아 래트 연구에 혼입 될 수 반사 신경 발달 테스트에 대한 일반적인 가이드 라인을 제공하는 것이다. 기술 된 방법론은 긴 에반스 신생아 쥐 새끼에서 수행 된 결과의 정량화는 외관의 첫 날을 기준으로했다. 테스트를 리플렉스 하루가 시작되고 사용되는 장비는 더 나은 (예 : 다른 변종과 종과 같은) 다른 실험 모델에 맞게 수정 될 수있다. 심판의 정상적인 생리 학적 진행을 구축함으로써특정 동물 모델에서 렉스 성숙, 연구자들은 외부 스트레스, 내생 조작 및 / 또는 신생아 쥐 모델에서 신경 발달에 대한 치료 적 개입의 효과를 평가할 수 있습니다. 전반적으로, 뇌 성숙 결정으로서 반사의 사용 산기 뇌 손상을 예측하는데 유리하다 이상 신경 발달 결과를 반영한다.

<table><tbody><tr><td>Breeding</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transfer 피펫</td><td>Fisherbrand</td><td>12-711-9AM</td><td>질 세척에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>멸균 식염수</td><td>호스피라(Sterile Sagine Hospira</td>) <td>7983254</td><td>질 세척 중에 세포를 모으는 데 사용되는 용액입니다.</td></tr><tr><td>400 &마이크로; L 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Fisherbrand</td><td>05-408-120</td><td>식염수를 담는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>Leica Leica</td><td>ATC 2000</td><td>식염수 관찰용. 실험실에서 사용되는 모든 광학 현미경이 될 수 있습니다.</td></tr><tr><td>슬라이드</td><td>Fisherbrand</td><td>12-552-5</td><td>식염수를 슬라이드에 놓습니다. 실험실에서 사용하는 모든 슬라이드가 될 수 있습니다.</td></tr><tr><td>커버슬립</td><td>Fisherbrand</td><td>12-545-F</td><td>슬라이드를 커버슬립합니다. 실험실에서 사용되는 모든 커버슬립을 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>다이어트&nbsp; Supplementation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Broccoli Sprouts seeds</td><td>Mumm's Sprouting Seeds</td><td></td><td>브로콜리 새싹 씨앗은 실험실에서 주문하고 재배합니다.</td></tr><tr><td>조리대 씨앗 스플래터 박스</td><td>멈의 싹이 트는 씨앗</td><td></td><td>상자는 수확하기 전에 씨앗을 발아시키고 성장시키는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>250mL 비커</td><td></td><td></td><td>비커는 씨앗을 담그는 데 사용됩니다. 맞는 모든 크기의 비커를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>모계 염증</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>지방당(LPS)</td><td>Sigma</td><td>L3129</td><td>모체 염증을 모방하는 데 사용되는 내독소.</td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>BD 주사기</td><td>309659</td><td>임신한 쥐를 주사하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>게이지 (30 g x 1/2)</td><td>BD PrecisionGlide Needle</td><td>305106</td><td>통증과 불편함을 피하기 위해 가장 작은 바늘을 사용하십시오.</td></tr><tr><td>멸균 식염수(0.9% 염화나트륨, USP)</td><td>호스피라</td><td></td><td>식염수는 LPS를 용해하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Weights</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scale</td><td>덴버 악기</td> 무게를 기록하기 위한 것입니다<td></td><td>. 실험실에서 사용되는 소수점 이하 2자리의 모든 척도가 될 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Neurodevelopmental Reflexes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thin Blunt Rod</td><td></td><td></td><td>클립이나 이쑤시개가 될 수 있습니다. 이것은 앞다리와 뒷다리를 잡기 위한 것입니다.</td></tr><tr><td>원형 여과지</td><td>Whatman</td><td>1001 150</td><td>15cm 직경의 종이는 보행 분석에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>타이머</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-662-51</td><td>바로잡기와 보행에 할당된 시간을 측정합니다.</td></tr><tr><td>무딘 표면</td><td></td><td></td><td>테이블의 가장자리가 될 수 있습니다. 이것은 뒷다리 배치 및 절벽 회피를 위한 것입니다.</td></tr><tr><td>폼 랜딩</td><td></td><td></td>: <td>강아지가 가속 교정을 수행할 때.</td></tr><tr><td>비디오 레코더</td><td>Sony</td><td>VCT-D580RM</td><td>테스트 된 모든 반사 신경을 기록합니다. 청각적 놀라움을 위해 1/1,000fps</td>벨</tr><tr><td></td><td></td><td></td>로 녹음할 수 있어야 합니다<td>.&nbsp;</td></tr><tr><td>히트 lamp 또는 패드</td><td></td><td></td><td>검사를 받는 강아지의 체온을 유지하기 위해.</td></tr></tbody></table>

신생아 쥐 새끼들까지 잔치에서 신경 발달 반사 테스트

Neurodevelopmental Reflex Testing in Neonatal Rat Pups

신경 발달 반사 테스트는 일반적으로 신경계의 성숙을 평가하기 위해 임상에서 사용된다. 반사 신경 발달은 원시적 반사 칭한다. 그들은 민감하고 나중에 결과와 일치한다. 이상은 반사 신경 발달 장애 위험이 높은 유아의 예측 지표이다 반사의 부재, 지속성, 재현성, 또는 지연과 같이 설명한다. 인간의 유아에서 관찰 할 것 같은 뇌성 마비와 같은 신경 발달 장애의 동물 모델은 종종 비정상적인 발달 반사를 표시합니다. 설명 된 기술은 신생아 래트에서 반사 신경 발달의 다양한 평가. 신경 발달 반사 테스트는 연구자에게 같은 젊은 동물, 그렇지 않으면 사용할 수없는 시험 방법을 제공합니다. 여기에 제시된 방법론은 감지 조기 발병의 BR하는 방법으로 신생아 쥐의 발달 이정표를 검사에 수사관을 지원하는 것을 목표로아인 부상 및 / 또는 치료 적 개입의 효과를 결정. 여기에 제시된 방법은 연구자에 대한 일반적인 지침을 제공하는 것을 목표로하고있다.

이 실험 설계의 타임 라인은 그림 2에 제시되어있다. 30 개 방법 및 결과는 이전에 발표되었다. 연구의 30 목적은 브로콜리 임신 동안 콩나물과 preweaning 기간식이 보충이 LPS 자궁 내 노출에 의해 유도 된 신경 발달 지연의 자손을 보호 여부를 평가하는 것이다. 타이밍 임신 래트 식염수 (대조군, 100 μL) 또는 12 시간마다 E19 및 E20에 LPS (200 ㎍ / kg은 멸균 생리 식염수에 희석 100 μL)을 복강 내 주사를 받았다. 임의로 선택된 임신 댐은 E14에서 PD21 건조 브로콜리 콩나물 하였다 (200 mg / 일)의식이 보충제를 받았다. LPS는 자손을 보호하기 위해 잠재적 인 치료 개입으로 주어졌다 산모의 염증과 브로콜리 콩나물을 모방하는 데 사용되었다....

행동 검사는 뇌 손상 다음과 같은 결과를 결정하기위한 황금 표준이며, 유아와 아동의 발달 장애의 존재를 식별 할 수 있습니다. 신경 발달 반사 신경이 이상의 초기 지표입니다. 신생아 설치류에서 쉽게 달성 발달 반사 검사의 호스트가 개발하고 여기에 설명했다.

Neurodevelopmental reflex testing is commonly used in clinical practice to assess the maturation of the nervous system. Neurodevelopmental reflexes are ...

본 신생 쥐 반사 방법론의 전반적인 목표는 이러한 과업들을 신속하고 정확하며 비교 가능하게 수행하는 방법을 익히는 것입니다. 이 방법은 뇌성마비와 같은 신경 발달 장애 분야의 핵심 질문들에 대한 답을 제시할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 신생 쥐 새끼의 초기 발달 반사를 테스트할 수 있는 방법을 제공한다는 점입니다.인간과 마찬가지로, 갓 태어난 설치류는 이후의 발달 과정을 예측할 수 있는 초기 발달 반사를 보입니다. 이 방법에 익숙하지 않은 연구자는 반사가 빠르게 일어나고 점수를 매기기 어려울 수 있어 시행착오를 겪을 수 있습니다. 따라서 가능한 한 일관성을 유지하는 것이 중요합니다.이 기술의 함의는 뇌성마비 및 발달 장애의 치료와 진단으로 확장됩니다. 반사 행동의 결정은 진단 및 치료적 중재의 효능을 확인하는 표준 방법(gold standard)입니다. 이 방법의 단계들은 글로 배워 익히기 어렵기 때문에, 시각적 시연이 매우 중요합니다.먼저, 함께 제공된 텍스트 프로토콜에 기술된 대로 쥐를 환경 및 사람의 핸들링에 적응시킵니다. 적응이 완료되면, 쥐를 교배시켜 테스트에 사용할 새끼 쥐 무리를 생성합니다. 생후 3일부터 매일 일정한 시간에 새끼 쥐들을 조용한 방으로 옮깁니다.일련의 신경발달 반사 테스트를 수행하기 전, 최소 한 시간 동안 적응 시간을 갖게 합니다. 실내에는 가열 램프나 가열 패드를 설치하여 새끼 쥐의 체온을 36.5 °C로 유지하십시오. 또한, 매일 새끼 쥐의 체중을 기록하십시오.다음으로, 반사 테스트를 프레임 단위로 분석하기 위해 셔터 속도가 최소 1/1000초 이상인 비디오 카메라를 설치합니다. 각 테스트 중에 카메라가 새끼 쥐와 테스트 재료의 바로 위 또는 옆에 위치하도록 배치하십시오. 다음의 각 테스트에 대해, 새끼 쥐가 이틀 연속으로 과제를 수행할 수 있을 때까지 매일 테스트를 실시합니다.데이터 정량화를 위해 기록해야 하는 날짜는 첫 발생일입니다. 생후 3일부터 전지 파지 반사 테스트를 수행합니다. 이 테스트를 위해, 새끼 쥐의 각 앞발 손바닥에 뭉툭한 막대를 하나씩 차례대로 대고 가볍게 압력을 가합니다.접촉이 이루어지고 새끼 쥐가 막대를 느낄 수 있도록 압력을 가해 앞발을 약간 밀어내야 합니다. 움켜쥐는 동작은 막대 주변의 모든 손가락이 굴곡되는 것으로 나타납니다. 양쪽 앞발 모두 이틀 연속으로 막대를 움켜쥐었을 때 이 반사의 습득이 성공한 것으로 간주합니다.다음으로, 각 뒷발바닥에 뭉툭한 막대를 대고 수동으로 가볍게 압력을 가하여 뒷다리 파지 반사 테스트를 수행합니다. 가벼운 압력으로 뒷발을 약간 밀어내어 접촉이 이루어지고 새끼 쥐가 막대를 느낄 수 있도록 해야 합니다. 막대를 성공적으로 잡으면 막대 주변으로 손가락이 굽혀지는 모습이 나타납니다.양쪽 뒷발이 이틀 연속으로 막대를 잡았을 때 이 반사가 습득된 것으로 간주합니다. 또한 출생 후 3일부터는 정위 반사 테스트를 수행하십시오. 이 테스트를 위해 새끼 쥐를 네 발이 모두 위를 향하도록 仰臥位(supine position)로 단단히 잡으십시오.새끼를 놓고 즉시 타이머를 시작하십시오. 새끼가 몸을 뒤집거나 굴려 네 발로 모두 일어서고 각 발이 몸체와 수직이 되면 정위(righting)가 달성된 것입니다. 각 새끼가 이 목표를 달성할 수 있도록 최대 15초의 시간을 부여하십시오.생후 4일부터 후지 배치 반사 테스트를 수행합니다. 이 테스트를 위해 새끼 쥐의 몸통을 잡고 수직으로 공중에 띄웁니다. 테이블 가장자리와 같은 뭉툭한 표면으로 뒷발의 등쪽을 부드럽게 자극합니다.정상적인 배치 반사(placing reflex)는 쥐 새끼가 자극을 받은 뒷다리를 움츠린 후, 해당 표면 위에 다시 뒷다리를 내려놓는 반응을 말합니다. 또한, 생후 4일부터 절벽 회피 검사(cliff avoidance test)를 수행하십시오. 이 검사를 위해 쥐 새끼의 앞발과 코 끝이 표면 가장자리에 걸치도록 평평한 표면의 끝에 놓으십시오.정확한 결과는 쥐 새끼가 절벽 가장자리에서 몸을 돌려 피하는 보호 반응입니다. 생후 6일에 보행 평가를 시작하십시오. 이 테스트를 위해 쥐 새끼를 지름 15 centimeter 원의 중심에 두고, 30초 동안 원 밖으로 이동하도록 하십시오.새끼 쥐가 30초 이내에 양쪽 앞발을 모두 원 밖으로 이동시킬 수 있을 때 보행이 성공적으로 이루어진 것으로 간주합니다. 생후 10일째에 청각 놀람 반응 분석을 시작합니다. 이때는 벨과 같이 큰 소리를 낼 수 있는 도구가 필요합니다.종을 새끼 쥐 바로 위에 위치시킵니다. 종을 울린 후, 놀람 반응이 나타나는지 평가합니다. 새끼 쥐가 소리로부터 멀어지는 방향으로 홱 움직이는 동작을 보이면 양성 놀람 반응으로 판단합니다.생후 12일부터 새끼 쥐를 미끄럽지 않은 개방된 표면에 두고, 이동할 때의 자세를 관찰합니다. 미성숙한 자세는 이동 시 복부를 바닥에 끈다거나, 앞발과 뒷발이 몸체와 수직 방향을 향하는 특징을 보입니다. 새끼 쥐가 표면에서 복부를 들어 올릴 수 있고, 이동 시 앞발과 뒷발이 몸체와 직선 또는 평행하게 향하면 성숙한 자세를 획득한 것으로 간주합니다.또한 생후 12일부터 새끼의 눈꺼풀을 관찰하기 시작하십시오. 양쪽 눈꺼풀이 모두 떠지는 날짜를 기록하십시오. 생후 14일에 가속 우측 반사 테스트를 시작하십시오.이 테스트를 위해, 강아지를 폼 랜딩 패드 위 30.48 centimeters 높이에서 배가 위로 향한 정면 누운 자세로 배치하십시오. 강아지를 떨어뜨린 후 스스로 자세를 바로잡는 능력을 관찰하십시오. 적절한 자세 바로잡기는 강아지가 엎드린 자세로 몸을 돌려 발로 착지할 수 있는 경우를 의미합니다.자궁 내 염증에 노출된 신생 자손은 대조군보다 유의하게 작게 태어났습니다. 브로콜리 새싹을 통한 식이 보충은 이러한 자손들의 출생 체중을 증가시킬 수 있었습니다. 출생 체중과 더불어, 신경발달 반사 테스트는 비정상적인 피질 발달 및 성숙도를 예측하는 측정 지표이며, 이는 명백한 신경병리학적 소견이 나타나지 않는 상황에서 중요할 수 있습니다.출생 후, 이들 그룹의 신생아 후지 배치 반사(hindlimb placing reflex)를 조사한 결과, 자궁 내 염증에 노출된 새끼 쥐는 대조군에 비해 이 반사의 습득이 유의하게 지연된 것으로 나타났습니다. 브로콜리 새싹의 식이 보충은 이러한 지연을 방지했습니다. 신생아 반사 절벽 회피 테스트 결과, 자궁 내 염증에 노출된 새끼 쥐는 보호 반응을 습득하는 것이 유의하게 지연됨이 밝혀졌습니다.마찬가지로, 브로콜리 새싹 섭취는 유의미한 지연을 방지했습니다. 동일한 결과가 신생아 반사 보행 검사 후에도 관찰되었습니다. 이 과정 동안, 일일 성장률, 보충 성장, 손상 정도 및 성장 제한의 영향과 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 일일 체중 기록과 같은 다른 방법들을 함께 수행할 수 있습니다.이 기술의 개발 이후, 신경과학 분야의 연구자들은 신생 쥐의 발달 반사 테스트를 탐구할 수 있는 길을 열게 되었습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 신생 쥐 새끼의 초기 발달 반사 테스트를 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 또한, 초기 행동 반사가 손상의 조기 바이오마커 및 치료적 개입의 효과를 제공한다는 점에서 갖는 중요성을 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

신생아 중환자 실 네트워크 신경 행동 학적 스케일 (NNNS)는 위험에 처한 유아에 대한 평가로 개발되었다. 이 문서의 목적은 NNNS을 설명 NNNS 절차의 비디오 예제를 제공하고 시험에 사용 된있는 방법을 논의하는 것입니다.

평가 및 고위험 신생아의 평가 : 신생아 중환자 실 네트워크 신경 행동 학적 규모

이 프로토콜은 급성 단일 나리스 폐색을 사용하여 쥐에서 측면화된 조기 냄새 선호 학습을 소개합니다. 수평적 학습은 동일한 동물 내에서 행동 결과를 조사하고 생물학적 메커니즘을 뒷받침할 수 있도록 하여 동물 간 설계로 인한 분산을 줄입니다. 이 프로토콜은 조기 냄새 학습을 뒷받침하는 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

신경 회로 토대 메모리 형성을 해부에 대한 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델

Presented는 마우스 신생아 운동 테스트의 간결한 배터리입니다. 이러한 검사를 사용하면 다양한 신생아 운동 장애에서 신생아 운동 결손을 입증할 수 있습니다. 표준화된 테스트 세트를 통해 서로 다른 연구의 결과를 비교할 수 있으므로 그룹 간에 더 우수하고 정확한 보고가 가능합니다.

뇌성 마비의 신생아 마우스 모델에서 모터 테스트의 배터리

추적 eyeblink 클래식 컨디셔닝 (ECC) 평가 하는 데 사용 되었다 hippocampal 종속 연관 학습 했다 성인 쥐에 투여 초기 신생아 두뇌 개발 하는 동안 알코올의 높은 농도 (11.9 %v / v). 일반적으로, ECC 절차는 많은 심리적, 생물 의학 설정을 통해 뇌 기능 장애를 탐지 하기 위한 사운드 진단 도구입니다.

태아 알코올 스펙트럼 장애의 쥐 모델에서 Hippocampal 기능 장애를 평가 하기 위해 추적 Eyeblink 클래식 컨디셔닝의 사용

여기서는 자유롭게 움직이는 신생아 간질 강아지에게 뇌파 검사 (EEG)를 기록하고 그 절차, 특징 및 적용을 설명하기 위해 고안된 새로운 기술을 소개합니다. 이 방법으로 1 주일 이상 뇌파를 기록 할 수 있습니다.

새로운 방법으로 자유롭게 움직이는 신생아 쥐의 뇌파 기록

우리는 출생 후 하루에 일방적인 경 동맥 폐색을 수행 7-10 CD-1 신생아 hypoxic-허 혈 성 (HI) 모델을 만드는 새끼 마우스와 뇌 손상의 영향을 조사. 우리는 운영 되지 않은 정상 쥐에 비해 이러한 마우스 neurobehavioral 함수 공부.

신생아 Hypoxic-허 혈 성 뇌 손상의 마우스 모델에서 Neurobehavioral 평가

여기에 제시 된 행동 테스트의 목표는 쥐에 외상 성 뇌 손상 후 기능적인 적자를 검출 하기입니다. 4 특정 테스트 시간에 부상 후 1 년 연장 하는 특정 뇌 영역에 손상을 반영 하는 행동에 적자를 감지 표시 됩니다.

외상 성 뇌 손상 후 쥐에서 행동 적자를 감지

본 연구는 뇌성마비를 앓고 있는 유아 쥐의 성장과 발달에 대한 선택적 척추 교정의 효과를 설명하며, 구체적인 절차와 표준화된 프로토콜을 강조한다. 프로토콜을 평가하기 위해 체중 측정, 로타로드 테스트, 발 결함 점수, 기타 행동 테스트 및 성장 호르몬 감지를 수행했습니다.

Enhancing the Development and Growth of Infant Cerebral Palsy Rats Using Selective Spinal Manipulations

여기에서는 조기 생쥐 모델을 만들기 위한 간결한 프로토콜을 제시하여 조기 산후 통증 관리에 대한 연구를 촉진합니다. 이 방법은 출산 예정일 3일 전에 제왕절개를 하고, 자궁절제술을 통해 조산아 새끼를 추출하고, 대리모 댐의 생물학적 자손과 통합하는 것입니다.

통증 연구를 위한 조산쥐 모델

이 프로토콜은 쥐에서 신생아 상완신경총 손상을 생성하는 단계별 지침을 제시하며, 이를 모델로 삼아 상완신경총 출생 손상 연구의 모델로 사용합니다.

상완신경총 출생 손상을 위한 신생아 쥐 모델 개발

배우세요 신생아 쥐 새끼의 신경 발달 반사 테스트 방법을 통해 뇌성마비와 발달 장애 연구에 활용하는 기술입니다. 이 방법은 조기 발달 반사를 정확하고 일관되게 평가하여 신경 발달 이상을 조기에 식별하는 데 도움을 줍니다.

신생아 쥐 새끼들까지 잔치에서 신경 발달 반사 테스트

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