Targeted <em>in Situ</em> Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

Andrea A. Duina; Claire E. Turkal

doi:10.3791/55263

JoVE Journal
Genetics

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Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

대상 현장에서 돌연변이 유발 히스톤의 유전자

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08:48 min

January 26, 2017

DOI: 10.3791/55263-v

Andrea A. Duina¹, Claire E. Turkal¹

¹Biology Department,Hendrix College

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Saccharomyces cerevisiae의 내인성 위치에서 히스톤 유전자의 돌연변이를 생성하는 전략이 제시됩니다.

이 절차의 전반적인 목표는 발아 효모 세포의 내인성 염색체 위치에서 히스톤 유전자에 특정 돌연변이를 생성하는 것입니다. 이 방법은 DNA 전사와 같은 기질로 염색질을 사용하는 다양한 공정에서 모든 조합에서 특정 히스톤 잔기의 기여도를 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 효모에서 각 히스톤 단백질이 두 개의 상동성이 높은 비 대립 유전자에 의해 암호화된다는 사실에도 불구하고 특정 히스톤 유전자가 돌연변이 유발을 표적으로 삼을 수 있다는 것입니다.

표적 히스톤 유전자를 knock out하고 URA3로 대체한 효모 균주를 생성한 후, 유전자의 전반부에 대해 다음과 같은 반응을 설정하여 표적 히스톤 유전자의 부분적으로 겹치는 두 단편에 대한 PCR 산물을 생성합니다. 유전자의 후반부에 대해서는 다른 프라이머를 사용하여 유사한 PCR 반응을 설정합니다. 반응을 thermocycler에 넣고 다음 프로그램을 설정합니다.

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