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인간 다 능성의 체외 분화에서 융모 세포로 줄기 세포
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JoVE Journal Developmental Biology
In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

인간 다 능성의 체외 분화에서 융모 세포로 줄기 세포

Full Text
9,169 Views
08:21 min
March 16, 2017

DOI: 10.3791/55268-v

Jianle Wang1, Montserrat C. Anguera1

1Department of Biomedical Sciences, School of Veterinary Medicine,University of Pennsylvania

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes the differentiation of human pluripotent stem cells into human trophoblastic cells using bone morphogenic protein 4 and inhibitors of the Activin/Nodal pathways. This method allows for the efficient generation of trophoblastic cells suitable for various applications, including genetic manipulation.

Key Study Components

Area of Science

  • Stem Cell Biology
  • Developmental Biology
  • Placental Biology

Background

  • Human trophoblastic cells play a crucial role in placental formation and function.
  • Understanding trophoblastic cell differentiation can provide insights into early human development.
  • Current methods for generating these cells are often inefficient.
  • This protocol aims to improve the yield of trophoblastic cells for research purposes.

Purpose of Study

  • To develop a reliable method for generating trophoblastic cells from pluripotent stem cells.
  • To facilitate the study of trophoblastic cell functions.
  • To enable genetic manipulation of trophoblastic cells for various applications.

Methods Used

  • Thawing extracellular matrix on ice.
  • Preparing DMEM F12 medium for cell culture.
  • Using bone morphogenic protein 4 and signaling pathway inhibitors.
  • Transferring cells to culture conditions suitable for differentiation.

Main Results

  • Successful differentiation of human pluripotent stem cells into trophoblastic cells.
  • Abundant production of trophoblastic cells for experimental use.
  • Potential for genetic manipulation of the generated cells.
  • Insights into the early events of human placental development.

Conclusions

  • This protocol provides an efficient method for generating trophoblastic cells.
  • The approach can significantly advance research in placental biology.
  • Future studies can leverage these cells to explore trophoblastic functions.

Frequently Asked Questions

What are trophoblastic cells?
Trophoblastic cells are the outer layer of cells in the blastocyst that contribute to the formation of the placenta.
Why is it important to study trophoblastic cells?
Studying trophoblastic cells helps us understand placental development and function, which is crucial for fetal health.
What is the role of bone morphogenic protein 4 in this protocol?
Bone morphogenic protein 4 is used to promote the differentiation of pluripotent stem cells into trophoblastic cells.
Can the generated trophoblastic cells be used for genetic manipulation?
Yes, the protocol allows for the generation of trophoblastic cells that can be genetically manipulated for various studies.
What are the advantages of this differentiation method?
The method is efficient and produces large quantities of trophoblastic cells suitable for a variety of applications.
How can this research impact our understanding of human development?
It can provide insights into the mechanisms of placental formation and its role in early human development.

여기에서는 뼈 형태 생성 단백질 4 및 Activin/Nodal 경로의 억제제를 사용하여 인간 만능 줄기 세포에서 인간 융막 세포를 효율적으로 생성하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 인간 만능 줄기 세포의 효율적인 분화에 적합하며 유전자 조작을 위해 많은 양의 세포를 생성할 수 있습니다.

이 프로토콜의 전반적인 목표는 인간 태반 형성 및 기능의 초기 사건을 연구하기 위해 뼈 형태 생성 4 및 활성 및 결절 신호 경로의 억제제를 사용하여 인간 만능 줄기 세포를 인간 영양막 세포로 분화시키는 것입니다. 이 방법은 영양막 세포 기능과 이러한 세포가 어떻게 형성되는지에 대한 연구에서 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 유전학을 포함한 다양한 응용 분야를 위해 풍부한 영양막 세포를 생산할 수 있고 세포 기능 분석을 가능하게 한다는 것입니다.

실험을 시작하려면 얼음 위에서 세포외 기질의 분취액을 3-4시간 동안 해동합니다. 얼음처럼 차가운 팁을 사용하여 50ml 원뿔형 튜브 1개와 Dulbecco의 변형 등가 배지 또는 DMEM F12 배지를 사용하여 2mg의 세포외 기질을 24ml의 얼음처럼 차가운 DMEM F12로 전달합니다. 즉시 50ml 원뿔형 튜브를 얼음에 옮겨 넣고 섭씨 4도에서 보관하십시오.

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