Name: 에 의해 쥐 림프구 라벨링 (64) CU-항체 수용체는 대한 타겟팅 생체 PET / CT에 의한 세포 트래 피킹 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: 학습하세요 쥐 림프구를 64Cu-항체로 라벨링하여 PET/CT로 생체 내 세포 이동을 추적하는 방법을. 이 기술은 면역학 및 암 연구에서 세포 치료 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 실험 및 데이터 분석시 지원을 위해 박사 줄리아 만하임, 월터 에를리치만, 라모나 스텀, Funda 케이, 다니엘 부칼라, 마렌 하란트뿐만 아니라 나탈리 Altmeyer 감사합니다. 이 작품은 베르너 지멘스-재단, SFB685 통해 DFG (프로젝트 B6)과 재산 (2309-0-0)에 의해 지원되었다.

<ol><li>Cerri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+Infusion+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+an+Animal+Model+of+Parkinson%27s+Disease%2C+Focusing+on+Cell+Distribution+and+Neuroprotective+and+Behavioral+Effects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Intracarotid Infusion of Mesenchymal Stem Cells in an Animal Model of Parkinson's Disease, Focusing on Cell Distribution and Neuroprotective and Behavioral Effects.</a> Stem Cells Trans Med. 4 (9), 1073-1085 (2015).</li>
<li>Hasenbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+glioma+tropism+of+bone+marrow-derived+progenitor+cells+by+2-photon+laser+scanning+microscopy+and+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Monitoring the glioma tropism of bone marrow-derived progenitor cells by 2-photon laser scanning microscopy and positron emission tomography.</a> Neuro Oncol. 14 (4), 471-481 (2012).</li>
<li>Sood, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+18F-FDG-Labeled+Autologous+Bone+Marrow+%E2%80%93+Derived+Stem+Cells+in+Patients+With+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of 18F-FDG-Labeled Autologous Bone Marrow – Derived Stem Cells in Patients With Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Clin Nucl Med. 40 (9), 697-700 (2015).</li>
<li>Perez-Diez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4+cells+can+be+more+efficient+at+tumor+rejection+than+CD8+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD4 cells can be more efficient at tumor rejection than CD8 cells.</a> Blood. 109 (12), 5346-5354 (2007).</li>
<li>Muranski, P., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+immunotherapy+of+cancer+using+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adoptive immunotherapy of cancer using CD4+ T cells.</a> Curr. Opin. Immunol. 21 (2), 200-208 (2009).</li>
<li>Braumuller, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-helper-1-cell+cytokines+drive+cancer+into+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-helper-1-cell cytokines drive cancer into senescence.</a> Nature. 494 (7437), 361-365 (2013).</li>
<li>Kochenderfer, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+B-lineage+cells+and+regression+of+lymphoma+in+a+patient+treated+with+autologous+T+cells+genetically+engineered+to+recognize+CD19%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19.</a> Blood. 116 (20), 4099-4102 (2010).</li>
<li>Cherry, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+of+Positron+Emission+Tomography+and+Applications+in+Preclinical+Drug+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Fundamentals of Positron Emission Tomography and Applications in Preclinical Drug Development.</a> J. Clin. Pharmacol. 41 (5), 482-491 (2001).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Effective+Immuno-PET+Imaging+Method+to+Monitor+CD8-Dependent+Responses+to+Immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An Effective Immuno-PET Imaging Method to Monitor CD8-Dependent Responses to Immunotherapy.</a> Cancer Res. 76 (1), 73-82 (2016).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+antibody+fragments+for+immuno-PET+imaging+of+endogenous+CD8%2B+T+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Engineered antibody fragments for immuno-PET imaging of endogenous CD8+ T cells in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (3), 1108-1113 (2014).</li>
<li>Dobrenkov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+Efficacy+of+Adoptively+Transferred+Prostate+Cancer-Targeted+Human+T+Lymphocytes+with+PET+and+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the Efficacy of Adoptively Transferred Prostate Cancer-Targeted Human T Lymphocytes with PET and Bioluminescence Imaging.</a> J Nucl Med. 49 (7), 1162-1170 (2008).</li>
<li>Rini, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+with+FDG-labeled+Leukocytes+versus+Scintigraphy+with+111In-Oxine-labeled+Leukocytes+for+Detection+of+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">PET with FDG-labeled Leukocytes versus Scintigraphy with 111In-Oxine-labeled Leukocytes for Detection of Infection.</a> Radiology. 238 (3), 978-987 (2006).</li>
<li>Ritchie, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+macrophage+activated+killer+cells+to+sites+of+metastatic+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of macrophage activated killer cells to sites of metastatic ovarian carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 56 (2), 155-163 (2006).</li>
<li>Adonai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+cell+labeling+with+64Cu-pyruvaldehyde-bis%28N4-methylthiosemicarbazone%29+for+imaging+cell+trafficking+in+mice+with+positron-emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo cell labeling with 64Cu-pyruvaldehyde-bis(N4-methylthiosemicarbazone) for imaging cell trafficking in mice with positron-emission tomography.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (5), 3030-3035 (2002).</li>
<li>Huang, J., Lee, C. C. I., Sutcliffe, J. L., Cherry, S. R., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiolabeling+Rhesus+Monkey+CD34%2B+Hematopoietic+and+Mesenchymal+Stem+Cells+with+64Cu-Pyruvaldehyde-Bis%28N4-Methylthiosemicarbazone%29+for+MicroPET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Radiolabeling Rhesus Monkey CD34+ Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells with 64Cu-Pyruvaldehyde-Bis(N4-Methylthiosemicarbazone) for MicroPET Imaging.</a> Mol. Imaging. 7 (1), (2008).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Tracking+of+Th1+Cells+by+PET+Reveals+Quantitative+and+Temporal+Distribution+and+Specific+Homing+in+Lymphatic+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In Vivo Tracking of Th1 Cells by PET Reveals Quantitative and Temporal Distribution and Specific Homing in Lymphatic Tissue.</a> J Nucl Med. 55 (2), 301-307 (2014).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((64Cu+antibody-targeting+of+the+T-cell+receptor+and+subsequent+internalization+enables+in+vivo+tracking+of+lymphocytes+by+PET%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">64Cu antibody-targeting of the T-cell receptor and subsequent internalization enables in vivo tracking of lymphocytes by PET.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 112 (4), 1161-1166 (2015).</li>
<li>McCarthy, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+high+specific+activity+64Cu+using+a+biomedical+cyclotron%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient production of high specific activity 64Cu using a biomedical cyclotron.</a> Nucl. Med. Biol. 24 (1), 35-43 (1997).</li>
<li>Kalkhof, S., Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chances+and+pitfalls+of+chemical+cross-linking+with+amine-reactive+N-hydroxysuccinimide+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chances and pitfalls of chemical cross-linking with amine-reactive N-hydroxysuccinimide esters.</a> Anal. Bioanal. Chem. 392 (1), 305-312 (2008).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin Iii,, J, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Th17+Differentiation+of+Naive+CD4+T+Lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Th17 Differentiation of Naive CD4 T Lymphocytes.</a> J Vis Exp. (79), e50765(2013).</li>
<li>Flaherty, S., Reynolds, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Naive+CD4%2B+T+Cell+Isolation+and+In+vitro+Differentiation+into+T+Cell+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets.</a> J Vis Exp. (98), e52739(2015).</li>
<li>Judenhofer, M., Wiehr, S., Kukuk, D., Fischer, K., Pichler, B. Chapter 363. <a target="_blank" href="http://www.springer.com/us/book/9783642129445">Small Animal Imaging. Basics and Practical Guide</a>. , Springer. 363-370 (2011).</li>
<li>Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPhelps%2C+ME+%22PET.+Molecular+Imaging+and+Its+Biological+Applications%22">PET. Molecular Imaging and Its Biological Applications</a>. , Springer-Verlag. 93-101 (2004).</li>
<li>Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+and+Antimatter%3A+The+Resurgence+of+Immuno-PET%5BTitle%5D)+AND+%22JNM%22%5BJournal%5D)">Antibodies and Antimatter: The Resurgence of Immuno-PET.</a> JNM. 50 (1), 2-5 (2009).</li>
<li>Lewis, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+pretargeted+64Cu+for+tumor+imaging+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy.</a> J Nucl Med. 44 (8), 1284-1292 (2003).</li>
<li>Boswell, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+in+vivo+stability+of+copper-64-labeled+cross-bridged+and+conventional+tetraazamacrocyclic+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Comparative in vivo stability of copper-64-labeled cross-bridged and conventional tetraazamacrocyclic complexes.</a> J Med Chem. 47 (6), 1465-1474 (2004).</li>
<li>Ghosh, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+DOTA+and+NODAGA+as+chelators+for+%2864%29Cu-labeled+immunoconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of DOTA and NODAGA as chelators for (64)Cu-labeled immunoconjugates.</a> Nucl Med Biol. 42 (2), 177-183 (2015).</li>
<li>Johnson, T. E., Birky, B. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+TE+%22Health+Physics+and+Radiological+Health%22">Health Physics and Radiological Health</a>. , 4th ed, Lippincott Williams & Wilkins. (2011).</li>
<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Meth. 2 (12), 932-940 (2005).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

이 프로토콜은 안정적으로 PET에 의해 생체 내 추적 세포를 방사성 표지하는 신뢰할 수있는 쉬운 방법을 제시한다. 64 CU-DOTA-KJ1-26 - 단클론 항체 및 그 유도와 방사성 표지 수, 코바-TH1 세포, 절연 및 기증자 마우스의 체외에서 확장이 방법을 수 활용하는 A의 코바 프레젠테이션의 사이트로 폐와 perithymic 림프절을 추적했다 급성기도 DTHR을 COVA 유도. 킬레이트와 단클론 항체의 수정은 신속하고 효율적인 작업 및 아민의 흔적이없는 초순수 솔루션의 사용을 필요로한다. 용액은 항체의 잔기 아민 할 DOTA-NHS 활성 에스테르의 적절한 결합을 위해 킬레이트 이온 교환 수지로 처리 하였다. 세포 내 방사능 표지와 같은 킬레이트 공역 항체는 비특이적 세포 표지 제의 사용에 비해 여러 가지 장점을 갖는다. 첫째, 단클론 항체는 정의 된 세포 인구의 대상 표시를 허용 우수한 특이성을 제공합니다. 단클론 항...

비 침습적 셀 추적은 생체 내에서 세포 기능, 이동과 원점을 모니터링하는 다용도 공구이다. 최근 세포 추적 연구는 재생 의학, 암 3, 4에 대한 입양 세포 치료에 염증이나 T 림프구에서자가 말초 백혈구의 맥락에서 중간 엽 1, 2 또는 골수 유래 줄기 세포 3에 초점을 맞추고있다. 행동의 사이트 및 세포 기반 치료의 기본 생물학적 원리의 해명은 엄청난 중요하다. CD8 + 세포 독성 T 림프구는 유전자 널리 금 표준으로 간주 하였다 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포 또는 종양 침윤 림프구 (TILS)를 설계. 그러나, 종양 관련 항원 특이 TH1 세포는 &lt;효과적인 대안 치료 옵션 4, 입증했다/ SUP&gt; 5, 6, 7. 키 염증 플레이어, 기관 고유의자가 면역 질환 (예를 들어, 류마티스 관절염 또는 기관지 천식), 암 면역 요법에 높은 관심의 세포, TH1 세포의 시간적 분포와 유도 패턴을 특성화하는 것이 중요하다. PET에 의한 비 침습적 생체 이미징 생체 원위치에서 세포의 이동 패턴을 조사하는 계량 고도로 민감한 방법 (8)을 제공하고, 염증, 알레르기, 감염 또는 종양 거부 9, 10, 11 중 T 세포의 작용과 반응 사이트. 임상 적으로, 인 옥신 (111)는 2- 데 옥시 -2- (18 동안, 염증 및 감염 (12)의 판정에 대한 백혈구 신티에 사용F) 플루오로 -D- 글루코스 (FDG-18 F)는 일반적으로 PET (3), 셀 (13)에 의해 추적 연구에 사용된다. 이 PET 추적자 하나의 큰 단점은, 그러나, 109.7 분의 핵종 18 F 이후 시점에서 촬상이 대체 세포 이동을 저해 게시 낮은 세포 내 안정성의 짧은 반감기이다. 세포 불안정하지만, 64의 Cu-PTSM 빈번하게하는 데 사용되는 PET 생체 내 세포 추적 연구에서 장기에 대해 비특이적 전지 (14), T 세포 생존에 최소화 해로운 효과 (15)에 라벨 (16) 기능을한다. 이 프로토콜은 또한 T 세포 수용체 (TCR) 특이 방사성 표지 된 항체를 이용하여 세포 생존 및 기능에 대한 불리한 영향을 줄이는 방법을 설명한다. 우선, 방사성 동위 원소 64의 Cu, 제 KJ1-26와 단클론 항체의 결합의 제조E DOTA 킬레이트 및 후속 CU-64 방사성 표지를 나타낸다. 제 2 단계에서, 상기 절연 및 DO11.10 공여 마우스의 코바-TH1 세포의 확장 및 64의 Cu-DOTA로드 공역 단클론 KJ1-26 (64 CU-DOTA-KJ1-26)와 방사성 표지를 상세히 설명한다. 흡수 값 및 도즈 교정과 방사능 유출과 각각 감마 계수에 의해 평가뿐만 아니라, IFN-γ ELISA가 제시와 트립 판 블루 배제 및 기능에 의한 세포 생존율의 64 CU-방사성 표지의 효과의 평가 . 생체 세포의 추적 비 침습적 들어, 대체 세포 전사 후에 PET / CT 의해 COVA 유발 급성기도 DTHR 및 이미지 획득의 마우스 모델의 도출을 설명한다. 또한,이 라벨 접근 방식은 다른 질병 모델, 다른 TCR도 또는 막 결합 수용체 또는 식 마르와 관심의 일반 세포와 쥐의 T 세포로 전송할 수 있습니다KERS 연속 막 (17)을 왕복 밑에.

<table><tbody><tr><td>HCl, Suprapur</td><td>Merck, 다름슈타트, 독일</td><td>1.00318</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>메탄올, Suprapur</td><td>Merck, 다름슈타트, 독일</td><td>1.06007</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>Isopropanol, Suprapur</td><td>Merck, 다름슈타트, 독일</td><td>1.0104</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>Pt/Ir (90/10) plate</td><td>&Ouml; gussa</td><td>맞춤 제작</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>PEEK 챔버</td><td>WKL</td><td>맞춤 제작</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>64Ni</td><td>Chemotrade</td><td></td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>Polygram SIL G/UV 254 플레이트</td><td>Macherey-Nagel</td><td></td> <td>80502164Cu 생산</td></tr><tr><td>이온 교환 column</td><td>BioRad</td><td>AG1-X8</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>PETtrace 용</td><td>솔리드 스테이트 타겟 시스템</td><td>WKL 코스텀 제작</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>64Cu 워크업 모듈</td><td>WKL</td><td>코스텀 제작</td><td>64Cu 생산</td></tr><tr><td>용량 교정기</td><td>Capintec</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr><tr><td>PETtrace cyclotron</td><td>General Electric Medical Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-NHS</td><td>Macrocyclics</td><td>B-280</td><td>DOTA-conjugation</td></tr><tr><td>Anti-cOVA-TCR 항체 (KJ1-26)</td><td></td><td>하이브리도마 세포 배양에서 분리</td><td>DOTA 접합</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71633</td><td>DOTA 접합</td></tr><tr><td>H+ Chelex 100</td>, <td>Sigma-Aldrich</td><td>C7901</td><td>DOTA-conjugation</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-15 필터 유닛</td><td>Merck Millipore</td><td>UFC910008</td><td>DOTA 활용</td></tr><tr><td>Rotipuran 초순수</td><td>Carl Roth</td><td>HN68.3</td><td>DOTA</td></tr> 활용 <tr><td>아세트산 암모늄</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32301</td><td>DOTA 활용</td></tr><tr><td>PBS</td><td>University Tuebingen</td><td></td><td>DOTA-conjugation</td></tr><tr><td>Micro Bio-spin P-6 column</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>7326221</td><td>DOTA-conjugation</td></tr><tr><td>sodium citrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71497</td><td>DOTA-conjugation</td></tr><tr><td>Cyclone Plus PhosphorImager&nbsp;</td><td>Perkin-Elmer</td><td>L2250116</td><td>DOTA 활용</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Merck Millipore</td><td>102568</td><td>T 세포 매체용 성분&nbsp;</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Merck Millipore</td><td>S0115/1004B</td><td>성분 T 세포 배지용&nbsp;</td></tr><tr><td>나트륨 피루브산</td><td>Merck Millipore</td><td>L0473</td><td>성분 T 세포 매체용&nbsp;</td></tr><tr><td>MEM-아미노산</td><td>Merck Millipore</td><td>K0293</td><td>성분 T 세포 매체&nbsp;</td></tr><tr><td>헤페스&nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>L 1613</td><td>T 세포 배지용 성분&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp; 페니실린/스트렙토마이신</td><td>Merck Millipore</td><td>A2212</td><td>성분 T 세포 매체용&nbsp;</td></tr><tr><td>0.05 mM 2-&beta;-메르캅토에탄올</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>성분 T 세포 배지&nbsp;</td></tr><tr><td>DO11.10 마우스</td><td></td><td>사육</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td>TH1 세포 배</td></tr><tr><td>양 세포 스트레이너 40 &마이크로; 엠&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352340</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>ACK 용해 버퍼</td><td>Lonza</td><td>10-548E</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>CD4 MicroBeads, 마우스</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-097-145</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>QuadroMACS 분리기</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-976</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>LS 컬럼</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>항-CD4 항체 (Gk1.5)</td><td></td><td>하이브리도마 세포 배양</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>항-CD8 항체 (5367.2)</td><td></td><td>하이브리도마 세포 배양</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>항-쥐 항체 (MAR18.5)</td><td></td><td>하이브리도마 세포 배양</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>토끼 보체</td>에서 분리 MA <td>tebu-Bio</td><td>CL3221</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>항-IL-4 항체 (11B11)</td><td></td><td>하이브리도마 세포 배양</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>cOVA 323-339-peptide에서 분리&nbsp;</td><td>EMC-micro-collections</td><td>맞춤 주문</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>CPG1668-올리고뉴클레오티드</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>맞춤 주문</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>IL-2</td><td>Novartis</td><td>65483-116-07</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>96-웰 플레이트</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>655180</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>662160</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>660175</td><td>TH1 세포 배양</td></tr><tr><td>48웰 플레이트</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>677 180</td><td>세포 라벨링</td></tr><tr><td>Gammacell 1000</td><td>Best Theratronics</td><td>via 문의&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gulmay RT225</td><td>Gulmay</td><td>via 문의&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Merck Millipore</td><td>L6323</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>마우스 IFN-&gamma; ELISA</td><td>BD Biosciences</td><td>558258</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>PE Annexin V Apoptosis Detection Kit&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td> <td>559763in vitro 평가</td></tr><tr><td>튜브 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>55.476</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>라운드 바닥 튜브&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>352008</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>마법사 &gamma; 카운터</td><td>Perkin-Elmer</td><td>2480-0010</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>ELISA 리더 MultiscanEX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>51118177</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td>via 문의&nbsp;</td><td>in vitro 평가</td></tr><tr><td>BD LSRII&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>via 문의&nbsp;</td><td>체외평가</td></tr><tr><td>BALB/c 마우스</td><td>Charles River</td><td>028</td><td>in vivo 세포 밀매</td></tr><tr><td>알루미늄 젤</td><td>Serva 전기영</td>동 <td>12261.01</td><td>in vivo 세포 밀매</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer HealthCare</td><td>주문 via 대학병원</td><td>in vivo세포 밀매</td></tr><tr><td>케타민</td><td>비율제약</td><td>via 대학병원</td><td>in vivo 세포 밀매</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>CP-Pharma</td><td>주문 via 대학병원</td><td>in vivo세포 밀매</td></tr><tr><td>30 G 바늘</td><td>BD Biosciences</td><td>304000</td><td>in vivo 세포 밀매</td></tr><tr><td>주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>11612491</td><td>in vivo 세포 밀매</td></tr><tr><td>모세혈관 10 &micro; L</td><td>VWR</td><td>612-2439</td><td></td></tr><tr><td>Inveon PET 스캐너</td><td>Siemens Healthineers</td>는 <td>더 이상 사용할 수 없습니다</td><td>in vivo 세포 밀매, 대체 회사: Bruker, Mediso&nbsp;</td></tr><tr><td>Inveon SPECT/CT 스캐너</td><td>Siemens Healthineers</td><td>더 이상 사용할 수 없음</td><td>in vivo 세포 밀매</td></tr><tr><td>Inveon Research Workplace</td><td>Siemens Healthineers</td><td></td><td>이미지 분석, 대체 소프트웨어: Pmod</td></tr></tbody></table>

에 의해 쥐 림프구 라벨링<sup&gt; (64)</sup&gt; cu-항체 수용체는 대한 타겟팅<em&gt; 생체</em&gt; pet / ct에 의한 세포 트래 피킹

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

이 프로토콜은 구리 (64)의 제조 및 뮤린 림프구 세포 배양 및 세포 타겟팅 CU-64 수용체 항체에 따르는 단일 클론 항체 (항체)의 킬레이트 결합 / 방사성 표지를 나타낸다. PET / CT에 의한기도 지연 형 과민 반응 (DTHR)의 동물 모델에서 생체 세포와 방사성 추적 비 침습적 설명되는 시험 관내 평가. 구체적으로는, 킬레이트 1,4,7,10-1,4,7,10 테트라 아자 - 테트라 아세트산 (DOTA)와 항체의 결합을 나타낸다. 방사선 (64)의 Cu의 DOTA 공역의 방사성 표지 된 단클론 항체의 생산을하는 것은 다음을 설명한다. 다음에, 닭 오브 알부민 (코바) 특이 적 CD4 + 인터페론의 확장 (IFN)의 생산 -γ-T 헬퍼 세포 (COVA-TH1)과 코바-TH1 세포의 후속의 방사선은 도시된다. 다양한 체외 기술은 EF을 평가하기 위해 제시이러한 트리 판 블루 배제에 의한 세포 생존의 판정, 유동 세포 계측법 넥신 V와 아폽토시스에 대한 염색 및 IFN-γ 효소 면역 분석법에 의해 기능의 평가와 셀 64의 Cu-방사성 표지의 fects (ELISA) . 또한, 세포 내로 흡수하고 방사성 표지 안정성의 판정을 상세히 설명한다. 이 프로토콜은 상기 따라서, BALB / c 마우스에서 코바 유발 급성기도 DHTR의 유도가 포함되어기도 DTHR에 대한 동물 모델에서 세포 추적 연구를 수행하는 방법을 설명한다. 마지막으로, 이미지 획득, 재구성, 및 분석을 포함하는 강력 PET / CT 흐름이 제공된다. 후속 수용체 내재화와 CU-64 수용체 항체 타겟팅 방법은 셀 공통 표지 용 PET-트레이서에 비해 높은 안정성 및 특이성 감소 세포 독성, 낮은 유출 속도를 제공 예 64의 Cu-pyruvaldehyde 비스 (N4-methylthiosemicarbazone) (64 CU-PTSM). 마지막으로, 우리의 방법은 48 시간을위한 최적의 신호 대 백그라운드 비율 PET / CT 생체 내 세포 추적 비 침습적 수있다. 이러한 실험 방법은 내재화되는 막 결합 수용체와 동물 모델과 다른 종류의 세포에 전달 될 수있다.

도 1은 64의 Cu-DOTA-KJ1-26 단클론 및 시험 관내 및이 프로토콜에 덮여 생체 내 연구에서의 실험 디자인 COVA-TH1 세포의 표지를 요약 한 것이다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55270/55270fig1.jpg" /> 그림 1 : 64 CU-DOTA-KJ1-26 - 단클론 항체 라벨링 공정 및 실험 설계. 64 CU-DOTA-KJ1-26 단클론 방사성 표지의 셀 (A) 도식 표현. 64 CU-DOTA-KJ1-26 단클론은 TH1 세포의 세포 표면에 COVA-TCR 수용체에 결합하고, 24 시간...

형질 전환 쥐 T 세포 수용체에 결합하는 64의 Cu 변성 모노클로 날 항체의 제조에 이어 T 세포 생존, 기능, 표시 안정성과 세포 사멸 분석, 생체 내에서 방사성 표지하고, 적응 적기도 지연 형 과민 쥐에 옮기고 양전자 방출 단층 촬영 / 컴퓨터 단층 촬영 (PET / CT)에 의해 비 침습성 영상화 대한 반응.

에 의해 쥐 림프구 라벨링<sup&gt; (64)</sup&gt; CU-항체 수용체는 대한 타겟팅<em&gt; 생체</em&gt; PET / CT에 의한 세포 트래 피킹

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

이 절차의 전반적인 목표는 구리가 변형된 방사성 단일클론 항체로 마우스 림프구를 안정적으로 표지하여, 염증 또는 암 마우스 모델에서 PET/CT를 통해 림프구의 시간적 분포와 호밍 패턴을 체내(in vivo)에서 추적하는 것입니다. 이 방법은 재생 의학의 줄기세포 치료나 암 면역 치료와 같은 세포 기반 치료제의 작용 부위와 핵심적인 기저 생물학적 원리를 규명하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 높은 대조도를 유지하면서 세포에 미치는 악영향을 최소화하여 48시간 동안 세포 이동을 이미징할 수 있다는 점입니다.이 방법은 특정 막 결합 수용체와 그에 대응하는 단클론 항체가 있는 관심 대상의 모든 세포 유형으로 쉽게 전이될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자는 킬레이트제 접합 및 방사성 표지 과정에서 어려움을 겪을 수 있으며, 이로 인해 면역 반응 분율과 세포 특이적 활성이 낮아질 수 있습니다. 먼저 70% ethanol로 DO11.10 마우스를 소독하는 것으로 시작하십시오.그 후 사지를 접착 테이프로 고정하고, 동물의 복부를 따라 정중선 절개를 실시합니다. 절개 부위의 양측을 가쪽으로 당겨 피부를 복막과 분리한 다음, 경부, 축성, 상완 및 서혜 림프절의 위치를 확인합니다. 둔한 핀셋을 사용하여 림프절을 1% FCS가 포함된 PBS가 담긴 용기에 옮깁니다.그 다음 복막을 절개하고, 비장을 췌장 및 결합 조직으로부터 분리하여 림프절과 함께 보관합니다. 모든 조직이 수집되면 15-milliliter 원심 분리관 내의 40-micron 필터로 샘플을 옮기고, 시린지 플런저를 사용하여 조직을 으깹니다. 이어서 PBS에 희석된 10 milliliters의 FCS로 필터를 세척하고, 원심 분리를 통해 단일 세포 현탁액을 수집합니다.적혈구를 용해시킨 후, 제조사의 지침에 따라 신선한 PBS 및 FCS, 그리고 CD4-positive MicroBeads에 백혈구 펠릿을 재현탁합니다. 4°C에서 20분간 반응시킨 후, 최대 50 mL의 신선한 PBS 및 FCS 버퍼로 세포를 세척하고, CD4-negative 세포군을 자성 컬럼으로 용출시키기 위해 적절한 부피의 PBS 및 FCS에 세포를 재현탁합니다. 세포를 자성 세포 분리 컬럼에 로딩하고, 통과액을 15 mL 원추형 튜브에 수집합니다.자성 세포 분리가 끝나면 플런저를 사용하여 CD4 양성 세포 집단을 새로운 원추형 튜브로 밀어 넣고, 분리된

murine-lymphocyte-labeling-64cu-antibody-receptor-targeting-for-vivo

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오에서는 비침습적 양전자 방출 단층 촬영 이미징을 위해 방사성 동위원소 접합 단클론 항체를 사용하여 T helper cell의 세포 내 방사선 표지를 시연합니다.

Radiolabeled 단클론 항체를 사용한 Murine T Helper 림프구 라벨링

이 비디오는 마우스 모델에서 종양의 생체 내 이미징을 위한 방사성 면역접합체와 관련된 기술을 보여줍니다. 방사성 면역접합체를 주입하면 접합체의 항체는 암세포의 특정 막 항원에 결합합니다. 접합체의 방사성 추적자는 주변 전자와 상호 작용하여 에너지를 생성하는 양전자를 방출하며, 이는 양전자 방출 단층 촬영(PET) 스캐너에 의해 감지되어 종양의 이미지를 생성합니다.

방사선 표지된 항체를 사용하여 쥐 모델에서 종양을 감지하는 In Vivo PET 이미징 기술

우리는 생체 표지 세포와 마우스 모델에서 MRI를 사용하여 생체 내 세포 추적을위한 일반적인 프로토콜을 설명합니다. 셀 라벨, 이미지 수집 처리 및 정량화를위한​​ 일반적인 프로토콜이 포함되어 있습니다.

세포 추적을위한 생체 19 F MRI에서

생물직교 역전자 수요 Diels-Alder cycloaddition은 암에 대한 효과적이고 모듈화된 사전 표적 PET 이미징 전략을 수립하기 위해 활용되었습니다. 이 프로토콜에서 이 방법론의 단계는 대장암 표적 항체 huA33 및 64Cu 표지 방사성 리간드를 사용하는 모델 시스템의 맥락에서 설명됩니다.

Pretargeted PET 영상에 대한 Bioorthogonal 역 전자 수요 딜스 - 알더 고리 모으고

바이러스 성 파생 된 펩 티 드 항 체 어원이 같은 말 (ACs)에 결합 된 증가 된 종양 세포 축적과 분자 페이로드를 제공의 가능성으로 인해 기세를 얻고입니다. 펩 티 드 활용, AC 및 페이로드 세포내 축적, 및 종양을 대상으로 평가 하는 일반적인 방법을 활용 하 고,이 프로토콜 연구원 주요 초기 개발 단계에서 도움이 됩니다.

세포 축적을 증가 하 고 종양을 대상으로 개선에 대 한 바이러스 성 파생 된 펩 티 드 항 체 어원이 같은 말의 초기 평가 수정

이 프로토콜에서는 이미지 거주 종양 침투 CD8 T 세포 인간 폐 종양 조각 내 붙일 결합 된 항 체와 함께 표시 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 CD8 T 세포 이동의 실시간 분석을 허용 한다.

전 비보 인간의 폐 종양에 거주 CD8 T 림프 톨의 이미징 조각 사용 하 여 Confocal 현미경 검사 법

림프 구 chemotaxis 및 마이그레이션에 대 한 양적 평가 대 한 프로토콜은 면역학 연구를 위한 중요 한 도구입니다. 여기, 생체 외에서 프로토콜 허용 실시간, 다중화 세포 이동의 평가 뿐만 아니라 상호 보완적인 vivo에서 기술 활성화 추적 기본 셀의 비장에 설명 되어 있습니다.

인간 Monocyte Chemotaxis에서 생체 외에서 그리고 Vivo에서 인신 매매 Murine 림프 구 측정

여기, 우리는 순 진, 염증된에서 백혈구 탈출구의 정량화 vivo에서 악성 murine 피부에 대 한 방법을 보여 줍니다. 두 모델의 머리 비교를 수행 하는 우리: 경 피 FITC 응용과 현장에서 photoconversion. 또한, 피부 종양에서 백혈구 탈출구를 추적 하기 위한 photoconversion 유틸리티를 설명 합니다.

백혈구 탈출구 Murine 피부 및 종양 림프 혈관을 통해 측정

이 프로토콜은 장기 구조의 변화없이 림프절을 배출하는 다른 세포 집단을 이미지화하는 기술을 설명합니다.

전 생체 내 공초점 현미경을 사용하여 림프절 구조 및 세포 국소화 시각화

이 프로토콜은 임상적으로 이용가능한 플랫폼으로 생체내에서 키메라 항원 수용체를 발현하도록 유전적으로 조작된 T 세포를 비침습적으로 추적하는 방법론을 기술한다.

키메라 항원 수용체 T 세포의 동적 이미징 [18F]테트라플루오로보레이트 양전자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영

이 논문은 인간 특이적 항-CD19 단클론 항체를 방사선 표지하는 방법론과 생체 내 PET 이미징, 생체 외 감마 계수 및 자가 방사선 촬영 접근법을 사용하여 다발성 경화증 마우스 모델의 중추 신경계 및 말초 조직에서 B 세포를 정량화하는 데 사용하는 방법을 자세히 설명합니다.

양전자 방출 단층 촬영을 사용한 실험적 자가면역 뇌척수염 마우스 모델에서 CD19+ B 세포 이미징

학습하세요 쥐 림프구를 64Cu-항체로 라벨링하여 PET/CT로 생체 내 세포 이동을 추적하는 방법을. 이 기술은 면역학 및 암 연구에서 세포 치료 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

에 의해 쥐 림프구 라벨링

더 많은 동영상 탐색