Name: 사육 Ixodes의 scapularis, 블랙 다리 틱 : 마우스에 미성숙 단계를 먹이 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: 학습하세요 Ixodes scapularis 미성숙 단계의 마우스 먹이 사육 방법을. 이 프로토콜은 혈액을 먹은 진드기 생존율을 높이고 설치류 스트레스를 줄여 생물학 연구에 필수적인 진드기 군집 사육을 간소화합니다.

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저자는 리노에 있는 네바다 대학의 실험실 동물 의학 직원의 도움을 인정합니다. MM은 Nevada INBRE로부터 자금을 지원받았습니다.

아래에 설명 된 프로토콜 (수-00682)는 네바다 리노의 대학에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인 네바다, 리노의 동물 연구 윤리위원회의 대학의 지침을 다음입니다. 요약하면, 마우스를 이소 플루 란으로 마취시키고, 노즈콘을 20 ​​분 동안 연속 이소 플루 수준을 유지하기 위해 사용되었다. 수의사의 연고 마취 눈의 건조를 방지하기 위해 사용되었다. 발가락 핀치는 마취 수준을 확인하는 데 사용 된 호흡 속도는 절차를 통해 측정 하였다. 마우스는 각각의 케이지에 보관 의식이 회복 될 때까지 관찰 하였다. 마우스는 틱 공급 한 번만 사용 된 포스트 틱 복구를 안락사시켰다. 안락사는 동물 의학 직원 인원의 연구소에 의해 수행되었다. CO 2 및 자궁 경부 탈구 동물을 안락사에 사용되었다. 참고 : 틱에서 작업이 완료 개인 보호 EQ의 사용을 필요로uipment. 미성숙 틱 카운트 흰색 실험실 코트, 고무 밴드로 캡핑 실험실 코트 슬리브의 개구를 커버하는 긴 니트릴 장갑 막힌 신발을 착용한다. 진드기와 마우스를 감염시키고 들어, 머리 그물, 일회용 작업복, 소매 위에 긴 소매 장갑, 발 커버를 사용합니다. 변덕스러운 진드기를 감지하는 흰색 또는 밝은 색의 작업복을 사용합니다. 정기적으로 진드기를위한 장갑과 소매를 확인합니다. 동물 주택 1. 준비 룸 <ol><li> 진드기가 득실 거리는 집 마우스에 별도의 공간을 지정합니다. 사고 틱 탈출을 방지하기 위해 외부와 도어 안쪽에 끈적 끈적한 매트 또는 양면 카펫 테이프를 놓습니다. </li></ol> 2. 계수 마우스 침입 틱 <ol><li> 모든 7 &quot;× 5&quot;X 14 &quot;플라스틱 용기의 상부 가장자리 주위에 양면 테이프를 넣고 약 2cm 물로 채운다. </li><li> A &amp; 컨테이너의 중앙에 다른 작은 상자 또는 페트리 접시에 놓고 생성 1cm 물로 채우기# 34; 해자 &quot; </li><li> 페트리 접시 안에 애벌레 또는 애벌레가 들어있는 유리 병을 보관하십시오. </li><li> 유리 병에서 애벌레 또는 애벌레를 제거하고 현미경으로 계산하려면 훌륭한 페인트 브러시를 사용하십시오. 50 개의 애벌레 또는 25 명의 애벌레를 별도의 신틸레이션 바이알로 계산하십시오. 나일론 메쉬 나 organdy 천 스크린으로 즉시 튜브를 덮고 고무 밴드로 막으십시오. </li></ol> 3. 미성숙 한 틱으로 생쥐에 감염 <ol><li> 흰색 또는 밝은 색상의 작업대를 사용하고 작업 영역의 둘레에 양면 테이프를 붙입니다. </li><li> isoflurane으로 마우스를 anesthetize. 발가락 핀치로 마취 수준을 확인하십시오. 마취가 끝나면 마우스를 종이 타월로 덮인 가열 패드로 옮기고 계속해서 이소 플루 란 공급을 위해 코 콘에 붙이십시오. </li><li> 건조를 피하기 위해 석유 젤리 기반 안약을 바르십시오. 마우스의 호흡 양상에 따라 isoflurane 수치를 조절하십시오 (분당 80-230 회 호흡은 정상입니다). br 인 경우 isoflurane 수치를 낮추십시오속도 eathing하는) 동물을 죽이는 피하기 분당 호흡 80 미만이다. </li><li> 50 유충 또는 25 요정 중 한 병을 가지고 장소는 페인트 브러시 (그림 1)과 귀 사이의 머리에 모피에서 틱. 진드기 첨부 할 충분한 시간을 제공하기 위해 배치를 다음 20 분 동안 마취 마우스를 유지합니다. </li><li> 정적 뚜껑과 흰색 침구 표준, 플라스틱 신발 상자 형 일회용 마우스 케이지에 마우스를 이동합니다. 일반 마우스 관리에 따라 장난감, 물, 식품 수의를 제공합니다. </li><li> 상단 가장자리 양면 접착 테이프로 줄 지어 큰 쥐 또는 햄스터 케이지 내에서 마우스 케이지를 저장합니다. 물 3cm (도 2)와 외측 케이스를 채운다. </li></ol> 4. 수집은 마우스에서 펜치 <ol><li> 미성숙 틱 3 일 (6) 사이에 급전의 분리. 부풀어 오른 진드기 3 일 후 매일 새장 물 해자를 확인합니다. </li><li> 일 4 6. 고통 사이의 케이지에서 분리 된 진드기를 수집t 브러시 또는 고무 밴드로 고정 나일론 메쉬 천으로 덮인 깨끗한 섬광 유리 병에 부풀어 오른 진드기 및 저장을 따기위한 부드러운 집게. </li><li> 마취 및 나머지 부착 진드기 7 일째에 마우스를 확인하십시오. </li><li> 전술 한 바와 같이 절차에 따라 하루 7 안락사 쥐에 부풀어 오른 진드기 침구, 식품 통, 물병을 확인합니다. 어떤 탈출 unfed 틱을 방지하기 위해 일회용 케이지, 침구, 물 병, 식품 저점을 압력솥. </li></ol> 연방 틱 5. 스토리지 <ol><li> 습도 90 %, 20에서 부풀어 오른 틱 유지 ° C, 및 광 12시 12분 : 습도 및 온도 조절 배양기에서 탈피 암주기가 발생할 때까지. 이 발생하는 약 12 ​​~ 18 주 걸릴 수 있습니다. </li><li> 높은 습도는 진드기의 생존을 촉진하지만, 또한 곰팡이과 성장하는 경향이 눈금을합니다. 연준이 금형을 위해 적어도 일주일에 한 번 현미경 틱 확인합니다. 검출 된 경우, 5, 70 % 에탄올로 세척 생존자분., 물로 씻어 건조 여과지로 전송하고 새로운 깨끗한 바이알로 옮긴다. </li></ol>

<ol><li>Gleim, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+associated+with+tick+bites+and+pathogen+prevalence+in+ticks+parasitizing+humans+in+Georgia%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26amp%3B+Vectors%22%5BJournal%5D)">Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA.</a> Parasites &amp; Vectors. 9 (125), Available from:
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<li>Krober, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
<li>Kuhnert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+of+Hard+Ticks+In+Vitro%3A+New+Perspectives+for+Rearing+and+for+the+Identification+of+Systemic+Acaricides%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides.</a> ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).</li>
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</ol>

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프로토콜 내에서 중요한 단계 진드기를 양육하는 것은 우발적 인 탈출을 방지하기 위해 때 안전 조치의 여러 단계를하는 것이 중요합니다. 접착 테이프와 물 해자의 사용은 안전을 보장하는 것이 중요하다. 몸의 온도를 일정하게 유지하기 위해 가열 패드에 마취 된 마우스를 유지하는 것이 중요합니다. 우리는 또한 마우스를 면도하는 진드기 첨부 파일에 대한 추가 혜택을 제공하지 않는 것을 발견했다. 개인 마우스가있는 직원과 진드기의 추가 제한 접촉 지정된 &quot;틱 방&quot;에서 일주일 동안 같은 케이지에 보관 될 수있다. 수정 및 문제 해결 고품질의 실험실 사육 틱의 생산은 틱 생물학에 대한 연구와 진드기 병원체 상호 작용이 필요하다. 이전 공급 프로토콜은 생쥐 6 1 부동 계속 현탁...

진드기는 척추 동물의 가지 의무적 hematophagous 체외 기생충이며, 전 세계적으로 배포됩니다. 미국의 경우, 틱의 적어도 11 종은 공중 보건의 중요성 (1)의 병원균의 벡터이다. Ixodes의 scapularis는 라임 병 (보렐리 burgdorferi에) 열 (B.의 miyamotoi를) 재발, 인간 과립구 anaplasmosis (아나 플라스마의 phagocytophilum), 및 babesiosis의 원인이되는 에이전트로 여러 병원체의 전송에 대한 책임 (Babesia 종.). 실험실에서 연구 야생에서 풍부한에서이 거미를 수집 질병 벡터 등의 I.의 scapularis의 중요성에도 불구하고 항상 가능하지 않습니다. 따라서, 건강한 실험실 사육 틱의 생산 틱 생물학에 대한 연구에 필수적이며, 상호 작용 병원체을 선택합니다. I.의 scapularis을 포함한 모든 하드 진드기 (가족 Ixodidae)의 라이프 사이클은, 계란 세 액티브 구성e 단계 : 유충, 요정, 및 성인. 각 활성 단계는 척추 동물 숙주에게 먹이를줍니다. 첨부와 수유 며칠 동안 진드기와 숙주 사이에서 발생하는 복잡한 상호 작용은 인공 지류를 사용하여 거의 복제 할 수 없으며 대규모 양육 2 , 3 , 4 에 충분한 수의 진드기를 제공하지는 않습니다. 따라서 생쥐와 토끼는 미성숙 (애벌레와 애벌레) 및 진드기의 성숙 단계 (어른)를 키우는 주인으로 가장 많이 사용됩니다. 각 발달 단계에서 혈액 공급을위한 다중 숙주의 요구는 진드기 양육을 복잡하게하고, 시간과 비용을 많이 소비한다 5 , 6 , 7 . 대부분의 진드기 양육 프로토콜은 매달린 와이어 그리드 플로어 케이지 7 , 8 또는 원통형 ca동물이 자유롭게 이동 자체 6, 9, 10을 손질 할 수없는 등의 치수 GE. 이 원통 케이지 후에 와이어 그리드와 콘서트홀 케이지에 전송된다. 충혈, 분리 틱이어서 아래 물로부터 수집된다. 그러나 공급 노출이 Methods는 소변과 곰팡이의 성장을 증가시키고 사망률 (9)을 체크 할 수 배설물로 오염 된 물에 틱. 또한, 눈금 물 통 탈출뿐만 아니라 마우스에 스트레스를 야기 할 가능성을 증가시킨다. 이러한 문제를 회피하기 위해, 우리는 여기에 플라스틱 신발 상자 형 일회용 케이지 내에서 마우스에 애벌레 진드기 먹이를 보여줍니다. 이 방법은 틱 복구 충혈 마우스 증가의 정상적인 동작을 허용하고, 오염물에 의한 진드기 사망률을 감소시킨다.

<table><tbody><tr><td>Puralube 수의사 연고</td><td>아마존</td><td></td><td>모든 애완동물 상점이나 온라인 상점에서 사용 가능</td></tr><tr><td>일회용 마우스 케이지</td><td>&nbsp; 이노바이브, 샌디에이고, 캘리포니아&nbsp;</td><td>MV 2</td><td>바닥과 뚜껑</td></tr><tr><td>세트 화이트 알파 드리 침구&nbsp;</td><td>Lab Supply, 텍사스주 포트워스</td><td>&nbsp; 알파-드리&트레이드;</td><td></td></tr></tbody></table>

사육<em&gt; ixodes의 scapularis,</em&gt; 블랙 다리 틱 : 마우스에 미성숙 단계를 먹이

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Ixodes의 scapularis, 라임 병의 벡터, 동부와 중서부 미국에서 가장 중요한 질병 벡터 중 하나입니다. 이 종은 각 개발 단계의 척추 호스트에서 혈액 식사를 필요로하는 세 개의 호스트 틱, 그리고 성인 여성은 재생을위한 혈액 식사를 필요로한다. 수유 5 일 완전히 부풀어 오른 경우 호스트를 내려 - 애벌레는 3 자신의 호스트에 연결 틱. 여러 호스트에이 종속성과 울혈의 긴 부착 시간은 실험실 환경에서 틱 양육을 복잡하게한다. 그러나 상호 작용 틱 생물학을 이해하고 병원체를 체크하기 위해, 건강, 실험실 사육 틱의 생산이 필수적이다. 여기, 우리가 쥐에 먹이 미성숙 한 진드기에 대한 간단하고 비용 효율적인 프로토콜을 보여줍니다. 우리는 생쥐에서 감소 스트레스에 대한 기존의 프로토콜을 수정 틱 위스콘신의 접촉을 피하기 위해 메쉬 바닥없이 일회용 케이지를 사용하여 성공과 생존을 공급 틱 증가생쥐 소변과 대변으로 오염 된 물.

마우스 숙주의 먹이 효율을 높이고 스트레스를 줄이기 위해 기존의 진드기 양육 프로토콜 6 , 10 을 수정했습니다. 결과는 표준 슈 박스 스타일 마우스 케이지가 진드기 양육에 적합 함을 보여줍니다. 화이트 침구는 깍지 줍기를 쉽게 수집 할 수 있도록 좋은 대비를 제공했습니다. 대부분의 진드기는 수유 후 용기의 벽을 올라가서 수집하기가 쉬웠습니다. 또한, 일회용 플라스틱 상자의 뚜껑이 꼭 끼어서 (UNR에있는 마우스에 일상적으로 사용됨) 진드기가 상자에서 빠져 나가지 못했습니다. 또한, 우리는 진드기에 감염된 쥐를 면도하지 않았습니다 ( 그림 1 ). 발표 된 프로토콜의 이러한 변화는 진드기 부착, 충혈 및 생존을 초래했습니다. ...

건강한 실험실에서 재배 한 진드기의 생산은 진드기 생물학 및 진드기 - 병원체 상호 작용에 대한 연구에 필수적입니다. 여기서 우리는 마우스에 비용 효과적이고 스트레스가 적은 미성숙 진드기 먹이를위한 간단한 프로토콜을 시연합니다.

사육<em&gt; Ixodes의 scapularis,</em&gt; 블랙 다리 틱 : 마우스에 미성숙 단계를 먹이

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

본 진드기 흡혈 프로토콜의 전반적인 목표는 설치류 호스트의 스트레스를 줄이면서 흡혈 진드기의 생존율을 높임으로써 기존 표준을 개선하는 것입니다. 이 방법은 진드기 군집 사육을 단순화할 뿐만 아니라, 거대생물학 분야의 핵심적인 생물학적 질문에 답하는 데 필수적인 단일 수집일 내 다수의 흡혈 진드기를 더 쉽게 수집할 수 있는 방법을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 진드기가 마우스 배설물이 포함된 물에 노출되지 않아 진드기 사망률을 낮출 수 있다는 점입니다.또한, 하루 만에 진드기를 모두 수집함으로써 마우스의 스트레스를 줄일 수 있습니다. 개체 수 측정을 위해 진드기 바이알을 보관할 때, 탈출을 최소화할 수 있는 용기를 제작하십시오. 플라스틱 용기의 상단 가장자리를 따라 양면테이프를 모두 붙이십시오.그런 다음, 용기에 물을 약 2cm 높이로 채웁니다. 이어서 또 다른 작은 상자나 접시를 용기 중앙에 배치하고, 물을 약 1cm 높이로 채워 상자나 접시가 가라앉아 고정되도록 합니다. 이 상자나 접시 안에 진드기 유충 또는 약충이 든 바이알을 보관합니다.감염을 위해 진드기 수를 셀 때는 현미경과 가는 붓을 사용하여 바이알에서 유충 또는 약충을 제거하십시오. 유충 50마리 또는 약충 25마리를 신틸레이션 바이알로 옮깁니다. 바이알이 가득 차면 즉시 나일론 메쉬 또는 오간디 천 스크린으로 덮고, 고무줄로 덮개를 단단히 고정하십시오.진드기에 감염된 마우스를 수용할 별도의 공간을 지정하십시오. 진드기가 우발적으로 탈출하는 것을 방지하기 위해, 방 바깥쪽에 끈끈이 매트나 양면 카펫 테이프를 부착하고, 방 안쪽 문 앞에도 매트를 배치하십시오. 먼저, 마우스 근처에 진드기를 처리할 공간을 마련하십시오.흰색 또는 밝은 색상의 작업대를 사용하십시오. 작업대 위 작업 영역의 둘레를 따라 양면테이프로 테두리를 만듭니다. 이제 isoflurane으로 마우스를 마취하십시오.준비가 되면 마우스를 페이퍼 타월로 덮은 가열 패드 위로 옮기고, 이소플루레인을 지속적으로 투여하기 위해 노즈 콘을 부착합니다. 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 마취 수준을 확인합니다. 호흡 패턴에 따라 마취제 양을 조절합니다.분당 80~230회의 호흡수가 정상입니다. 호흡이 느려지면 이소플루레인(isoflurane) 투여량을 줄이십시오. 또한, 눈에 바세린 기반의 안연고를 도포하십시오.이제 유충 50마리 또는 약충 25마리가 들어 있는 바이알 하나를 준비하고,

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면역학 및 감염학

감염된 진드기의 hemolymph, 침샘, 그리고 타액의 컬렉션 병원균이 질병을 일으킬 방법 진드기 매개로 공부하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜에서는 먹이로부터 hemolymph과 침샘을 수집하는 방법을...

Ixodes Scapularis 진드기의 타액, 침샘 및 Hemolymph 컬렉션

라임 병은 북미에서 가장 일반적으로보고 된 벡터 매개 질병입니다. 원인 물질은 보렐리 아 burgdorferi는 Ixodid 진드기에 의해 전송 spirochete 박테리아입니다. 동물 모델에서 감염의 전송 및 검출은 우리가 여기에서 설명하는 진드기의 먹이의 사용에 최적화되어 있습니다.

라임 병 연구의 변속기 및 Xenodiagnosis에 대한 동물에 진드기의 먹이

이 연구에서는 실험실 마우스에 부착된 캡슐을 사용하여 하드 틱의 님프및 애벌레 단계를 위한 먹이 시스템이 개발되었습니다. 수유 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 적어도 일주일 동안 마우스에 단단히 부착되어 있어 진드기 공급에 대한 편안한 모니터링을 가능하게 합니다.

실험실 마우스에 미숙한 하드 진드기 단계 감염에 대 한 캡슐 기반 모델

본 프로토콜은 진드기 배아를 주입하는 방법을 기술한다. 배아 주입은 유전자 조작을 위해 트랜스제닉 라인을 생성하는 데 선호되는 기술입니다.

검은다리진드기의 유전자 편집을 위한 배아 주입 기술, Ixodes 견갑골

여기에 제시된 것은 다양한 진드기 수명 단계의 부분적 또는 전체 충혈을 허용하기 위해 인공 막 시스템을 통해 시험관 내에서 진드기를 혈액으로 공급하는 방법입니다.

Ixodes 견갑골에 대한 진드기 인공 막 공급

이 기사에서는 임상 연구를 위해 인간을 유충 Ixodes scapularis 에 노출시키는 방법을 제시합니다. 이 기술은 비교적 간단하고 연구 지원자가 견딜 수 있으며 실험적 필요에 따라 수정할 수 있습니다. 인간 피험자를 대상으로 하는 이러한 연구는 해당 규제 당국이 승인한 임상 연구 프로토콜에 따라 수행되어야 합니다.

유충 Ixodes scapularis 진드기에 대한 인간의 실험적 노출을 위한 모델

이 방법은 3D 프린팅 챔버와 실험실에서 제작한 실리콘 막을 통합한 시험관 내 진드기 혈액 공급 시스템 개발을 개략적으로 설명합니다. 이 시스템은 진드기 인공 먹이를 가능하게 하여 다양한 먹이 단계에서 쉽게 샘플링할 수 있고, 혈액량도 적어 이조디드 진드기 연구에 매우 유용한 도구가 됩니다.

Ixodid 진드기 연구에서 3D 프린팅된 챔버의 인공 막을 통해 진드기 혈액을 공급하는 모습

라임 질병 연구 조사는 종종 병원체 Borrelia burgdorferi, 일반적으로 몇 주 정도 소요 프로세스에 감염된 진드기의 생성을 필요로합니다. 여기 시간 이내에 수행할 수 있습니다 microinjection 기반 틱 감염 절차를 보여줍니다. 우리는 또한 진드기 이내 B. burgdorferi의 현장 지방화에 대한 immunofluorescence 방법을 보여줍니다.

틱 굿 내에서 빠른 전송과 라임 질병 병원균의 현지화을위한 방법

방법은의 hemocoel에 entomopathogenic 박테리아의 직접 분사을 이용하여 여기에서...

의 양육 및 분사<em&gt; Manduca sexta</em박테리아 독성을 평가하기&gt; 애벌레

비만 세포와 호염기구의 활성화를 특징으로 알레르기 반응은, IgE 항체의 가교 및 염증 매개 물질의 방출에 의해 구동된다. 알레르기 반응의 정량적 인 평가는 알레르겐 공격 후 혈관 투과성의 변화를 모니터하는 에반스 블루 염료를 사용함으로써 달성 될 수있다.

마우스에 현지 아나필락시스 측정

학습하세요 Ixodes scapularis 미성숙 단계의 마우스 먹이 사육 방법을. 이 프로토콜은 혈액을 먹은 진드기 생존율을 높이고 설치류 스트레스를 줄여 생물학 연구에 필수적인 진드기 군집 사육을 간소화합니다.

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