Name: 측정과 남성의 변경 결합 드라이브 노랑 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster 수컷의 짝짓기 충동을 측정하고 조작하는 행동 분석법을 통해 동기의 유전적 및 신경 기전을 탐구하는 방법입니다. 이 고효율 분석법은 동기 회로의 논리를 밝히는 데 활용됩니다.

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저자는 원고에 대한 논평을 해준 Mike Crickmore, Dragana Rogulja, Michelle Frank에게 감사를 표합니다. 파벨 고렐릭(Pavel Gorelik)은 행동 분야의 제조를 위한 기술 지원을 제공했습니다. 이 연구는 Mike Crickmore의 연구실에서 수행되었으며 Whitehall Foundation(수석 연구원: Dragana Rogulja)의 지원도 받고 있습니다. S.X.Z.는 하버드 의과대학의 Stuart H.Q. 및 Victoria Quan Fellow입니다.

참고 :이 프로토콜은 준비 (섹션 1-3) 설명, 실행 (4 절), 및 분석 2-D의 물림 분석 (제 4). 그런 다음, 예를 들어 도파민 자극을 사용하여, 5 장에서는 성욕 과다증을 유발하는 2-D의 물림 분석과 thermogenetic 자극을 결합하는 방법을 보여줍니다. 제 6 절은 2-D의 물림 분석의 결과를 확인하는 3 가지 방법을 설명합니다. 마지막으로, 제 7 남성 파리 짝짓기 드라이브의 복구를 측정하는 방법을 보여줍니다. 1. 8 비트 및 32 실 행동 아레나스의 제조 참고 : 각 행동 경기장은 네 모서리 (그림 1A)의 각각 육각 나사와 엄지 손가락 너트에 의해 함께 개최 레이저 절단 플라스틱 시트의 여러 레이어로 구성되어 있습니다. <ol><li> 경기장의 층을 제조. 적절한 형상 아크릴 플라스틱 시트를 절단하는 레이저 커터를 사용하여, 각 층의 제작 (도 1B, 1C 제품 참조). 참고 : 많은 연구 institutioNS는 기계 상점 또는 메이커 공간에서 레이저 절단기가 있습니다. 기관은 레이저 커터에 액세스 할 수있는 경우 다음 단계를 계속합니다. 그렇지 않다면, 대신 단계 1.2의 지침을 따르십시오. <ol><li> 각각의 층에, 레이저 절단기의 소프트웨어의 설계 패턴을 연다. 주 : 설계 적절히 명명 된 PDF 파일을 찾을 수있다 (예를 들면, 8 챔버 아레나 - 계층 2 - Doors.pdf) 보충 자료 1이 파일은 또한 플라스틱의 종류에 대한 주석을 포함에서 사용되는 (예를 들면, 1 / 8 인치 (즉, 3.175 mm) 명확한 아크릴). 각 층의 정확한 두께는 중요하지 않다. 주요 요구 사항은 챔버에서 0.12 인치 (3mm) 또는 무료 수직 공간을 더 허용하는 것입니다. </li><li> 종류 및 플라스틱 두께 레이저 설정 (전력, 포커스 등)를 조정하는 데 사용된다. 레이저 커터 침대에서 플라스틱을 놓고 레이저 커터를 실행합니다. 참고 :이 설정은 널리 레이저 절단기에에 따라 달라집니다R 모델 및 레이저의 강도. 과거의 경험 또는 스크랩 플라스틱에 테스트 인하함으로써 기반 적절한 설정을 찾을 수 있습니다. 깊은 육각형 조각은 육각 나사 머리를 휴회 할 수있는 디자인에 포함되어 있습니다. 이 기능은 엄지 손가락 너트의 한 손으로 긴축을 허용하고 경기장이 (나사 머리를 돌출하지 않고) 벤치에 평평하게 휴식 할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 깊은 조각을 종종 달성하기 어려운, 시간 소모적 레이저 커터를 사용하는 것이다. 이 단계는 선택적이며, 행동의 결과에 영향을 미치지 않고 생략 될 수있다. </li><li> 도어 프레임 (층 (2)도 1a)를 절단하면도 (도 1b,도 1c에서와 같이) 디자인에 포함 된 챔버 번호를 새기는 적절한 레이저 설정을 사용한다. </li></ol></li><li> 온라인 레이저 커팅 제작자와 주문을. 재료 유형을 8 비트 및 / 또는 32 실 경기장에 대한 모든 PDF 디자인 파일을 업로드하고 지정 (예를 들어, 1/8 인치 (즉, 3.175 mm) 클레아파일에 주석을 기반으로 R 아크릴). 결과는도 1B (8 실 경기장) 및 1C (32 실 경기장)에서와 같이 표시됩니다. </li><li> 정렬과 함께 플라스틱 층 (그림 1A)를 보유하는 네 개의 육각 나사와 네 손가락 너트를 사용하여 경기장을 조립합니다. 경기장은 그림 1D, 1E (8 실) 그림 1 층, 1G (32 실)과 같이 표시됩니다. 주 : (도 1a의 계층 4) 식품 벽은 단지 2-D 포만 분석에 사용되며 구애 분석에 사용되는 32- 챔버 경기장에서 생략된다. </li></ol> 2-D 포만 분석 2. 음식 준비 주 : 2-D의 물림 분석은 4.5 시간에 걸쳐 있기 때문에, 식품 영양과 물을 제공하기 위해 경기장에 사용되는 비행. 이 프로토콜을 이용하지만, 종래의 옥수수 가루 한천 음식 플라이에 한정되지 않는다. <ol><li> 부분적으로 레이어와 2-D의 물림 분야 (8 실)를 조립 3-6(계층 할당에 대한 그림 1A 참조) 엄지 손가락 너트와 육각 나사를 조입니다. </li><li> 깨끗하고 전자 레인지 용 병에 신선한 플라이 음식을 놓습니다. 병 (그림 2A)의 바닥면을 충당하기 위해 충분한 물을 추가합니다. </li><li> 45 초 - 30 고에 전자 레인지 음식. 진행 상황을 확인하고 (그림 2B) 용해 될 때까지 매 15 초 교반한다. 주의! 플라이 음식은 쉽게 이상 종기. </li><li> 천천히 mL의 각 챔버 (그림 2D)에 음식을 용융 1 ~ 전송할 둔화 1,000 μL 피펫 팁 (그림 2C)를 사용합니다. </li><li> 음식이 완전히 경기장 (그림 2 층)을 조립하기 전에 10 분 (그림 2E) ~ 4 ° C에서 재고 화 할 수 있습니다. </li><li> 4 ° C에서 완성 된 실험 무대 (제 4 장 참조) 또는 저장소를 사용합니다. </li><li> 4 ° C와 재사용에 남은 음식을 저장합니다. </li></ol> 3. 행동 분석 실험에 대해 버진 여성을 준비 참고 : - 표준 방법을 사용하여 수집하기 어려운 (전체 행동 경기장 160 ~ 120) 2-D 물림의 분석은 처녀 여성 파리의 큰 숫자를 사용합니다. 이 섹션에서는 구애 분석 (25), (29)에 성공적으로 사용 된 Y 염색체 28에 HS-HID 형질 전환 유전자를 사용하여 다른 방법을 설명합니다. 흰 눈 처녀 암컷을 생성하는 데 사용되는 주식은 유전자형 w1118 (X) / HS-HID (Y)가 + / +, + / + (블루밍턴 재고 번호 24638). <ol><li> 플립 번 20 새로운 병에 파리 - 번데기의 50 %가 eclosed있다 (예를 들어,도 3a 참조) 충분히 남성 (5-10)가 주식을 전파은. </li><li> 열은 충분히 (그림 3B)을 남성을 죽일 HS-HID를 활성화 1 시간을위한 37 ° C 뜨거운 물을 욕조에 원래의 병을 충격. 열 쇼크 후 여성 만이 병에서 eclose하고 있으므로까지 버진 남아분석. 참고 : (물 라인도 3a 참조) 병의 모든면이 균일하게 가열되어 있는지 확인합니다. 1 시간 모든 남성을 안락사하기에 충분하지 않은 경우 최대 2 시간 동안이 시간을 연장합니다. </li><li> 그들은 25, 29 성적으로 받아 들일 수있는 나이 있는지 확인하기 위해 실험을하기 전에 적어도 3 일 동안 수집 된 여성을 격리 할 것. 참고 : Y 염색체가없는 남성은 때때로이 주식에서 발생한다. 이 수컷 흰 눈이 그들이 HS-HID 유전자를 포함하지 않기 때문에 열충격에 의해 영향을받지 않는다. 그들은 (31) 여성 (30)에 감수성을 감소 할 수 있으므로 정자를 생산 할 수 없습니다. </li></ol> 4. 공연 및 2-D 포만 분석 실험을 득점 참고 :이 남성의 나이가 나이와 결합 드라이브 변경으로 운항하는 항공사 제어하는 ​​것이 중요하다. 이 프로토콜은 3입니다 남성 사용 - 4 D 이전 25 </suP&gt;. <ol><li> 원하는 온도 (예를 들어, 23 °의 표준 C, RT 실험)와 습도 (&gt; 30 %)에 인큐베이터를 설정합니다. 인큐베이터에서 물 한 잔을 떠나 습도 조절없이 창업을 위해 충분하다. </li><li> 온도 평형 및 실험 과정에서 챔버의 결로 방지 ~ 동안 인큐베이터에 30 분을 2-D 포만 분석 분야를 놓는다. 회전 문 열림 위치에 있어야합니다. </li><li> 경기장 (그림 4)의 각 실에 20 처녀 여성 - 15 대기음하는 플라이 흡인기 (32)를 사용합니다. 참고 :이 여성과 남성이 분석 같은 날에 마취하지 않는 것이 중요합니다. 우리의 경험에 의하면, 이렇게하면 여성의 감수성과 남성 짝짓기 행동에 영향을 미칠 수 있습니다. </li><li> 각 챔버 내로 흡인 한 남성. </li><li> 4.5 시간에 대한 표준 소비자 캠코더 (그림 5)와 영화에서 인큐베이터에서로드 경기장을 놓습니다. </li><li> 각각의 남성이 시작 비행 각각의 짝짓기 (즉, 교미를) 종료 될 때 지적으로 동영상을 점수. 이 단계는 시간 소모적 우선 할 수있다. 연습으로, 하나는 5 배 속도 이상에서 동영상을 득점 할 수 있습니다. 주 : 파리 ~ 23 ° C (높은 온도에서 짧은 시간) 29시 ~ 20 분 동안 짝짓기를하기 때문에, 하나는 각 결합의 첫 15 분을 통해 탈지 수 있습니다. </li><li> 모든 결합 번 로그인 한 후, 각 플라이를위한 교배의 수를 합계 (대표 결과를 참조). </li><li> ethogram를 생성하기 위해 제공된 코드를 사용합니다. 코드, 지침 및 예제 데이터에 대한 보충 자료 2를 참조하십시오. </li><li> 그들을 제거하기 전에 파리를 마취하는 CO 2 또는 저온를 사용합니다. </li></ol> 5. 2-D 포만 분석 실험에 포만 역에 Thermogenetic 조작을 사용하여 참고 : 정의 된 신경 인구의 thermogenetic 자극 포만감을 극복 할 수 있는지 여부를이 프로토콜 테스트합니다. 실험 FLI에스 신경 세포 (UAS-TrpA1)의 정의 인구의 열에 민감한 양이온 채널 TrpA1을 표현한다. 아래 단계 짝짓기 드라이브 (25)을 촉진하는 것으로 나타났다 도파민 뉴런 (TH-GAL4)의 자극에 적용됩니다. 이 단계는 결합을 촉진 드라이브 다른 개체군을 발견하기 위해 다른 신경 드라이버와 함께 사용될 수있다. <ol><li> thermogenetically 인큐베이터의 온도를 증가, 만족을 했소 파리에서 짝짓기 행동을 유도하기 위해 (예를 들어, 23 ° C에서 28.5 ° C까지) 전체 4.5 시간 2-D의 물림 실험을 완료 한 후. </li><li> 인큐베이터가 원하는 온도에 도달 한 후, 열 자극을 계속하고 1 시간 (대표 결과를 참조)의 교배 (예. 교미) 남성의 점수. 참고 : 여전히 robu을 생산하면서 신경의 자극을 넘어선을 방지하기 최적의 조건을 해결하는 데 필요한, 그래서 자극의 온도와 길이는 유전자형에 따라 달라질 수 있습니다성 표현형. </li></ol> 6. 포만을 확인하기 위해 구애와 로코를 사용하여 주 :이 섹션은 2-D의 물림 분석의 결과를 확인하는 데 사용할 수 있습니다 3 선택 방법을 설명합니다. 그들은 모든 분석 필요하지 않습니다. <ol><li> 포만감을 확인 구애 분석을 사용합니다. <ol><li> 기음 한 남자와 구애 분야에서 32 각 챔버에 한 처녀 여성. </li><li> 표준 소비자 캠코더를 사용하여 20 분 ~의 파리 영화. </li><li> 구애 (25)을 정량화 할 수있는 구애 지수 (CI)를 점수; 이 구애 행동을 수행하는 동안 (등, 다음, 노래.) 시간과 5 분 창을 통해 (즉, 교미를) 짝짓기의 비율이다. 이 창은 구애 행동의 첫 번째 인스턴스에서 시작됩니다. 남성 비행은 처음 15 분에 구애를 시작하지 않으면, 그 CI는 완전 만족을 했소 비행은 CI의 B가 있어야하는 반면 0 나이브 WT 파리가 0.9보다 CI 더 보여 주어야입니다0.2 elow. 기타 구애 수단은, 33 (23)로 간주 될 수있다. </li></ol></li><li> 2-D의 물림 분석에서 득점 구애 <ol><li> 2-D 포만 분석의 기간 (예를 들면, 제 H)를 통해 남성 비행 구애 소비하는 시간을, 점수. 구애는 의식의 단계 (등, 다음, 노래)을 수행하는 남성으로 정의된다. 제 6.1.3 달리,이 단계는 남성이 짝짓기를 보내는 시간은 포함되지 않습니다. </li><li> 수형이 동일한 시간에 (즉, 교미되지 않음) 연결되지 않은 총 시간 이상 구애 시간을 나눈다. (- 20 분에서 60 분) = 0.375 수컷가 제 시간에 걸쳐 20 분 동안 15 분 동안 코트 메이트 플라이 경우, 예를 들어, 비율은 15 분 /이다. 비율은 대표 결과에서 &quot;구애의 시간을 nonmating의 분수&quot;로 표시됩니다. </li></ol></li><li> 피로를 평가하기 위해 운동 분석을 사용하여 <ol><li> 부분적으로 32을 조립모든 부분 만 대비 시트와 챔버 경기장. </li><li> 구애 분야에서 32 실의 각각에 흡인 한 남자 플라이 (NO 여성 파리). </li><li> 표준 소비자 캠코더를 사용하여 10 분 ~의 파리 영화. </li><li> ImageJ에 (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html)에서 MTrack2 플러그인과 함께 파리를 추적 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 2-D 포만 분석 한 후 결합 드라이브 복구 (7) <ol><li> 4 절에 설명 된 2-D 포만 분석을 수행하지만, 남성 분석의 끝에서 밖으로 날아 대기음. </li><li> 일 원하는 번호를 23 ° C에서 남성 파리를 분리합니다. </li><li> 복구 된 남성과 2-D의 물림 분석을 수행하고 단지 1 시간 (대표 결과를 참조) 자신의 교배 (즉, 교미를) 점수. </li></ol>

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동기 부여 상태, 만족을 했소 유지, 34을 복구 할 수 있습니다. 우리는 신속하고 견고하게 즉석에서 드라이브 짝짓기의 이러한 측면을 모두 측정하는 2-D의 물림 분석을 제시한다. 이 분석은 동기 동작의 분자 및 회로 부품을 연구 고급 플라이 유전자 조작을 사용할 수있는 가능성을 연다. 포만 분석은 남성의 능력을 성공적으로 법원과 교접하고, 적절한시기에 교미를 종료하기 위해 사용합니다. 이하 hyposexual 파리 법원, 저 구애 파리 반드시 hyposexual하지 비록; 이들은, 예를 들면, 문제인지 또는 암컷 (35)의 추적을 가질 수있다. 이 때문에, 포만 분석은 시험 성욕 과다증, 나이브 야생형 수컷 포만 분석 SH 1. 성욕 과다증 접근 구애 지표를 표시하므로 신뢰성 표준 구애 분석에서 관찰 될 수없는 표현형에 가장 적합의 나이를 기준으로 고려 될 울드 남성-에 우리의 경험, 노년...

초파리 작품은 유전자 하나의 성질을 포함한 다수의 생명 현상에 깊은 선구 통찰력을 제공하고, 배아 발달 2 활동 일주기 3 및 신경계 4, 5, 6의 개발 및 배선의 원리. 동기 부여는 아마도 때문에 지금까지 연구 된 시스템의 한계, 훨씬 덜 이러한 현상보다 이해 남아있다. 비행의 동기는 주로 인해 지방 증착의 명백한 징후를 배제 공급 한판 승부와 외골격에 따라 자신의 하고서 음식 섭취에 많은 도전을 제시 기아의 맥락에서 연구되고있다. 따라서, 즉석에서 동기를 연구하기 위해 사용 된 시스템을 확장 할 필요가있다. 우리는 상대 드라이브의 연구를위한 행동 프레임 워크를 설명초파리. 이 시스템은 비행과 접근성 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 성적 동종 이형 회로 (8), (13)의 추정에 커 넥톰 neurogenetic 툴을 이용한다. 또한, 많은 선천성 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 및 22, 23, 24 관능 모터 회로 제어 구애 드문 기회를 제공하고, 세부에서 작동되었다 습득동기가 충돌하는시 정확한 회로 노드를 찾습니다. 우리는 최근 파리에서 인간으로, 도파민 수준이 결합 드라이브 25, 26, 27의 중심에 있으며, 보도했다. 우리는 여기에 25을 설명하는 분석을 사용하여이 보존 된 현상 분석 관련 도파민 생산 및 비행에 신경을 수신 촉진 상세한 분자 - 회로 수준에 유전 적 접근을 얻고있다. 우리는 장 등의 등의 행동 분석에 추가 할 수 있습니다. 우리는 2 차원 (2-D) 포만 분석 이전 방법에 비해 중요한 개선 호출 영상 득점을 허용 25 새로운 평면 행동 경기장. 따라서, 새로운 분석은 확장 성 및 정량화, 동기에 관여하는 유전자와 신경 세포의 유전 스크린의 때문에 더 적합하다. 우리는 구애 분석 및 neuroge와 함께,이 새로운 분석을 사용네틱 조작은, 측정하고 즉석에서 짝짓기 드라이브를 변경하는 방법을 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>1/16 인치 투명 아크릴</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K12</td><td>아레나를 만드는 데 사용됩니다. 디자인은 보충 자료 1을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>1/8 인치 투명 아크릴</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K42</td><td>아레나를 만드는 데 사용됩니다. 디자인은 보충 자료 1을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>3/16 인치 투명 아크릴</td><td>McMaster-Carr</td><td>8560K219</td><td>아레나를 만드는 데 사용됩니다. 디자인은 보충 자료 1을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>1/32 인치 블랙 delrin</td><td>McMaster-Carr</td><td>8575K132</td><td>아레나를 만드는 데 사용됩니다. 디자인은 보충 자료 1을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>육각 나사, 1인치 길이 (50개)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92314A115&nbsp;</td><td>경기장을 만드는 데 사용됩니다. 32챔버 경기장의 경우 3/4인치 나사(92314A113, McMaster-Carr)로 교체할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>엄지 너트 (25x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92741A100</td><td>경기장을 만드는 데 사용됩니다. 일반 육각 너트(90480A005, McMaster-Carr)로 교체할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>캠코더</td><td>Canon</td><td>Vixia HF R700</td><td>모든 소비자 컴코더로 교체할 수 있습니다.</td></tr></tbody></table>

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em&gt; 노랑 초파리</em

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

조사의 수십 년에도 불구하고, 동기 부여 상태의 신경 세포 및 분자 기지 신비 남아있다. 우리는 최근에 여기에 세부 사항을 우리 방법에있는 남성 노랑 초파리 (Drosophila의)의 결합 드라이브를 사용하여 동기 부여에 대한 심층 조사를위한 소설, 환원 및 확장 가능한 시스템을 개발했다. 행동 패러다임은 남성 짝짓기 드라이브가 반복 교미의 과정을 통해 다산과 함께 감소하고 ~ 3 일에 걸쳐 복구 발견 중심으로. 이 시스템에서, 파리에서 사용할 수있는 강력한 neurogenetic 도구는 유전 적 접근성과 성적 행동에 사용할 추정 배선도 수렴. 이 수렴 신속한 격리 및 특정 동기 부여 기능을 가진 작은 신경 인구의 심문을 할 수 있습니다. 여기에 세부 사항을 측정하고 남성 비행에 구애 의욕을 변경하는 데 사용되는 물림 분석의 설계와 실행을 우리. 사용이분석, 또한 낮은 남성 상대 거리가 도파민 성 신경 자극에 의해 극복 될 수 있다는 것을 보여준다. 포만 분석은 유전 적 배경의 영향으로, 간단한 저렴하고 강력한이다. 우리는 포만감 분석이 동기 부여 상태의 신경 생물학에 많은 새로운 통찰력을 생성 할 전망이다.

초파리 상대 거리를 특성화하기 위해, 3 일된, WT 캔톤-S 남성은 2-D 포만 분석에서 시험 하였다. 분석 (4.5 시간)에 걸쳐, 수컷 4.8 ± 0.3 평균 정합 시간 (평균, SEM의 ± 표준 오차를 의미한다). 교배는 제 2 시간 (78 %) (도 6A, 6B)에 주로 개시 및 분석법 (도 6A, 6B)에 진행됨에 따라 덜 빈번해진다. 이 감소는 상대 파트너의 부족 (74 %의 여성이 분석을 통해 결합 해제 유지) 또는 육체 피로 (그림 6 층) 때문이 아니다. 오히려,이 효과 가능성이 2.0 ± 0.7 %로 42.6 ± 8.0 % (± SEM을 의미) (1 일 시간)에서 분석하는 동안 수컷의 구애의 감소에 의해 설명된다 (평균 ± SEM) nonmating 시간 (마지막 시간) (그림 6C). 구애에있...

이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다.

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

본 분석의 전반적인 목표는 환원주의적 시스템에서 동기 부여를 조사하기 위해 수컷 초파리(Drosophila)의 교미 추진력을 측정하고 조작하는 것입니다. 이 방법은 어떤 유전자와 뉴런이 교미 추진력을 제어하는지와 같이 동기 부여 연구의 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있으며, 잠재적으로 동기 부여 회로 뒤에 숨겨진 논리를 밝혀낼 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 초파리에서 사용 가능한 강력한 유전적 도구들과 결합하여 교미 추진력을 측정할 수 있는 고효율 분석법을 제공한다는 점입니다.2-D 포만감 분석(satiety assay)을 수행하기 최소 3일 전에, heat shock hid 초파리 계통의 white 11 18 병에서 암컷 초파리를 준비합니다. 번식에 필요한 수컷이 최소 5마리 이상 확보되고 번데기의 20~50%가 우화하면, 초파리들을 새 병으로 옮깁니다. 그 다음, 수컷 유충과 번데기를 죽이기 위해 heat shock hid를 충분히 활성화하도록 원래 병을 37 °C 온수조에서 1시간 동안 열처리합니다.열충격 후에는 암컷만이 이 병에서 우화합니다. 실험을 위한 아레나를 준비하려면 2-D 포만감 아레나를 부분적으로 조립하고 썸 너트와 육각 나사로 조여 고정하십시오. 다음으로 깨끗한 전자레인지용 병에 신선한 초파리 먹이를 넣고 바닥 표면이 살짝 덮일 정도로만 물을 추가하십시오.식품을 고출력 전자레인지에서 30~45초 동안 가열합니다. 가열 상태를 육안으로 확인하며, 식품이 완전히 녹을 때까지 15초마다 저어줍니다. 식품이 녹으면 끝이 뭉툭한 1000 µL 피펫 팁을 사용하여 녹은 식품 약 1 mL를 각 챔버에 천천히 옮깁니다.아레나를 완전히 조립하기 전, 4 °C에서 10분 동안 음식물이 다시 응고되도록 둡니다. 완성된 아레나는 실험에 사용할 수 있습니다. 남은 음식물은 재사용을 위해 4 °C에서 보관하십시오.2-D 포만감 분석(2-D satiety assay)을 시작하기 전, 표준 상온 실험을 위해 인큐베이터를 23 °C로 설정하고 습도가 30% 이상인지 확인하십시오. 인큐베이터에 습도 조절 기능이 없는 경우 물컵을 넣어 두십시오. 실험 과정 중 챔버 내 응결을 방지하고 온도를 평형화하기 위해 2-D 포만감 분석 아레나를 인큐베이터에 30분 동안 넣어 두십시오. 회전 도어는 열린 상태로 유지하십시오.다음으로 초파리 흡입기를 사용하여 각 아레나 챔버에 처녀 암컷 15~20마리를 흡입하여 넣습니다.

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연구

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Neuroscience

신경과학

정자 경쟁의 능력에 대한 평가의 차이<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜은 초파리 또는 다른 곤충을 개별적으로 식별하는 간단하고 비용 효율적인 방법을 설명합니다. 3종의 초파리에 대한 짝짓기 성공을 조사한 시연 데이터는 이 방법이 CO2 마취의 사용과 비슷하거나 더 우수하다는 것을 보여줍니다.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

Drosophila melanogaster의 사회적 공간에 대한 유전자와 환경의 영향은 강력하지만 간단한 분석 패러다임을 통해 정량화할 수 있습니다. 우리는 여기에서 이 사회적 공간에 영향을 미칠 수 있는 다양한 요인을 보여주므로 이 패러다임에서 실험을 설계할 때 고려해야 합니다.

사회적 공간에 영향을 미치는 조건<em&gt; 초파리</em

과일 동안 행동 패턴은 역학 싸움, 관찰 및 관련 학습과 기억은 실험 조건에 의해 영향을 받는다, 싸움을 비행. 여기에 제시된 프로토콜은 전체 실험 기간 동안 파리의 처리를 제거하는 새로운 절차를 설명합니다. 이 싸움 역학을 개선하고 강력한 "패자"효과의 형성을 할 수 있습니다.

침략 유학을위한 처리 제거하는 새로운 접근하고 &quot;낙오자&quot;효과<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜은 단일 동물 해상도에서 Drosophila melanogaster의 산란 선호도를 테스트하기 위한 고처리량 분석을 설명합니다.  이 분석은 간단한 의사 결정 과정을 제어하는 유전자 및 회로 구성 요소를 식별할 수 있는 간단하고 효율적이며 확장 가능한 플랫폼을 제공합니다.

높은 처리량 분석은 개인의 알을 낳는 환경 설정을 검사합니다<em&gt; 노랑 초파리</em

우리는 보람 유도 및 보상 상태의 변화에 대한 조치로 자발적인 에탄올 소비를 사용하여 초파리 (Drosophila의 melanogaster의) 경험을 nonrewarding위한 프로토콜을 설명합니다.

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우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

이 프로토콜은 구애 조건 조절이라고 불리는 Drosophila 학습 및 기억 분석을 설명합니다. 이 고전적 분석은 비 수용성 전제 암컷에 의한 성적 거부 이후의 남성 구애 행동의 감소에 근거합니다. 이 자연적 형태의 행동 소성은 학습, 단기 기억 및 장기 기억을 시험하는데 사용될 수 있습니다.

학습과 기억의 척도 로서의 Drosophila Courtship 컨디셔닝

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초적혈구 멜라노가스터의생존능력을 배아에서 성인으로 평가하는 직접적이고 간단한 방법

배우세요 Drosophila melanogaster 수컷의 짝짓기 충동을 측정하고 조작하는 행동 분석법을 통해 동기의 유전적 및 신경 기전을 탐구하는 방법입니다. 이 고효율 분석법은 동기 회로의 논리를 밝히는 데 활용됩니다.

측정과 남성의 변경 결합 드라이브

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