Name: 식민지 수준에 개인에서 꿀 꿀벌 개발에 대한 환경 화학 물질의 효과를 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: 학습하세요 살충제 잔류물이 개체 및 군집 수준에서 꿀벌에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 이 실험은 생태독성학 연구에 중요한 시각적 기술을 제공합니다.

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이 연구는 부여 105AS-13.2.3-BQ-B1 교육부에서 동물의 국과 식물 건강 검사 및 검역, 농업위원회, 집행 위안 그랜트 103-2313-B-197-002-MY3에서에 의해 지원되었다 과학 기술 (MOST)의.

1. 준비 <ol><li> 50 %의 설탕 시럽 1 L합니다. 1 L의 DDH 2 O.에 1kg 자당 녹이고 </li><li> BLD에서 pyriproxyfen (PPN) 솔루션을 준비합니다. 10,000 ppm의 PPN 원액 1.1 L을 4 ° C에서 2 DDH O. 스토어 멸균 1 L에 PPN 100 ㎖ 용액을 희석. </li><li> 다음 실험을위한 BLD 0.1, 1, 10 및 100 ㎎ / ㎏ (PPM)의 최종 농도로 PPN 원액을 희석. </li><li> (식민지 레벨) PPN-시럽을합니다. 다음 실험에 대한 50 %의 설탕 시럽 10 및 100 ppm으로 최종 농도로 PPN 주식을 희석. </li><li> 꿀 꿀벌 사육. 참고 : 여기, 실험 위치는 국립 일란 대학 (NIU) 양봉장, 이순신 - 란시, 대만은; (GPS 좌표 : N24.747278, E121.746200). <ol><li> 꿀벌 (아피스 mellifera이 L.)는 식품 수량 매주 식민지 확인하고 (꿀 저장 영역이 비어) 필요한 경우 1리터 50 %의 설탕 시럽을 공급. 건강한 정의일반적 산란 퀸 각 콜로니의 꿀벌 빗 9 프레임으로서 콜로니. </li></ol></li><li> 기본 애벌레 다이어트 (BLD)의 100 mL로 준비합니다. (DDH 2 O) 멸균 증류수, 탈 이온수에 6 % D- 글루코오스, 프 룩토 오스 6 %, 1 % 효모 추출물을 용해시키고, 50 % 로얄 젤리 보충. 4 ° C에서 보관하지만 3 일 이상합니다. 실험 전에 35 ° C로 사전 따뜻하고 3 일 이내에 사용합니다. </li></ol> 생체 수유 방법 2. 노트 : 생체 내에서 공급 법은 헨리 등의 알로부터 변형되었다. (20) <ol><li> 꿀 꿀벌 유충 선택 및 라벨링. <ol><li> 4 프레임 부에 퀸을 제한하면서 4 프레임 5 개 프레임으로 건강한 콜로니 9 프레임 분할 퀸 excluder입니까. 산란을 위해 4 프레임 섹션에서 적어도 하나 개의 빈 프레임을 남겨주세요. </li><li> 여왕이 1 일 산란 후계란의 외관을 검사 프레임 1 일령 유충이 부화까지 72 시간 (4 일째)에 벌통 내부의 알을 유지한다. 손으로 테스트 하이브 밖으로 (24 시간 내에 부화) 1 일 된 노동자 유충을 포함하는 프레임 중 하나를 가지고 꿀벌 브러시 프레임에서 꿀벌 노동자를 제거합니다. </li><li> 투명 슬라이드 (크기 = 길이 X 너비 X 두께 29.7 mm X 21mm X 0.1 mm)를 가진 프레임을 덮고 압정 (도 1a)와 프레임의 가장자리에 상기 투명 슬라이드 손톱. </li><li> 각각의 치료를위한, 임의로 하나 50 일령 유충 (4 일째)을 선택하고, 상기 투명 슬라이드 영구 마커 펜을 사용하여 각 브루 셀 마크 (도 1a 및도 1b). 참고 : 다른 치료 사이의 혼동을 피하기 위해 영구 마커 펜을 사용하여뿐만 아니라 프레임과 투명 슬라이드의 각 치료의 정보를 작성합니다. 표시된 슬라이드를 제거하고 생체에 대한 유지 &lt;/ EM&gt; 급전 관찰. </li></ol></li><li> 생체 먹이. <ol><li> 의 흡기 양에 따라 각각 10 μL, 10 μL, 20 μL로 일 1, 2, 3에 피펫으로 각 표지 브루 셀 PPN-BLD (0.1, 1, 10, 100 PPM)의 상이한 농도를 추가 유충의 나이. 대조군에 BLD (NO PPN)의 동일한 금액을 추가합니다. 이에 따라, 각 분류 브루 셀 PPN-BLD의 총 투여 량은 4, 40, 400, 4000 페이지에 축적한다. 참고 : 표시된 투명 슬라이드하여 표시 무리 세포를 인식하고 공급 한 후 표시된 투명 슬라이드를 제거합니다. 일벌에 의해 무리 세포의 청소를 방지하기 위해 공급하는 신선한 BLD를 사용합니다. </li><li> 더 관찰의 원래 식민지로 PPN 처리 된 프레임을 돌려줍니다. 참고 : 각각의 치료는 네 개의 식민지에서 네 생물 반복 있습니다. </li></ol></li><li> 7 일에서 처리 유충의 관측. <ol><li> 일을 관찰하려면전자 표지 무리 세포의 사망률과 상한 율을 기록하기 위해 프레임에 표시된 투명 슬라이드를 반환 유충을 PPN은 처리. </li></ol></li><li> 하루에 13에서 처리 번데기와 우화 요금의 관측. <ol><li> 덮인 무리 세포의 꿀벌 왁스를 제거합니다. </li><li> 브루 셀에 소프트 팁 핀셋을 넣고 클램프 번데기를 아주 약간 부드럽게 번데기를 꺼내. </li><li> 각 웰 아래 기관 조직의 이중층으로 24 웰 조직 배양 플레이트에 번데기로 이동. 번데기 전송 중에 손상과 사망률을 기록합니다. </li><li> (약 팔일) 출현 될 때까지 34 ° C, 70 % 상대 습도 인큐베이터에서 24 웰 조직 배양 플레이트 유지. </li><li> 관찰과 번데기와 등장 꿀벌을 기록합니다. </li></ol></li><li> 통계 <ol><li> ± SD 평균값으로 기록 된 데이터와 현재 계산 </li><li> SA에 의해 변동 (ANOVA)을 이용하여 분석 데이터를 분석S 및 다른 처리의 두 방법의 차이를 분석하기 위해 최하위 차 (LSD)를 사용하여 시험. P - 값 &lt;0.05로 통계적으로 유의 한 정의합니다. 테이블의 동일한 열에서 서로 다른 글자는 통계적 분석에 의해 현저한 효과를 나타냈다. </li></ol></li></ol> 벌집에서 식민지 수준에서 PPN 3. 독성 <ol><li> 꿀벌 그룹을 설정합니다. <ol><li> 프레임 4 (파트 A) 및도 5의 프레임 (파트 B) 4 프레임 부에 여왕으로 제한하면서 건강한 콜로니 9 개 프레임을 분할하는 수직 퀸 excluder입니까. 산란을위한 4 프레임 부분에 적어도 하나 개의 빈 프레임을 남겨주세요. 참고 : 다른 여왕 부품 사이에 이동 여왕을 방지하기 위해 여왕 부분의 상단에있는을 excluder 넣습니다. </li><li> 여왕이 1 일 산란 한 후, 달걀 모양의 프레임을 선택합니다. 손으로 A 부분에서 계란을 포함하는 적절한 프레임을 가지고 꿀벌 근로자를 제거꿀벌 브러시로 프레임입니다. </li><li> 투명 슬라이드 프레임을 덮고 압정와 프레임의 가장자리에 상기 투명 슬라이드 손톱. </li><li> 임의로 함유 달걀 100 개 브루 셀을 선택하여 상기 투명 슬라이드 영구 마커를 사용하여 각 브루 셀을 표시한다. 그룹 1. 다른 치료 사이의 혼동을 피하기 위해 영구 마커를 사용하여 프레임과 투명 슬라이드의 각 치료의 정보를 기록 이러한 100 개 무리 세포를 할당합니다. </li><li> 3 일 A 부분에 표시된 프레임을 반환 한 후 알을 낳기 위해 파트 B에 여왕을 전송합니다. </li><li> 일일 후, 파트 B의 프레임을 검사 한 적절한 프레임을 선택하고, 단계 3.1.4에 기술 된 바와 같이 계란 함유 100 브루 셀 라벨. 그룹이 이러한 100 개 무리 세포를 할당합니다. </li><li> 3 일 파트 B로 표시된 프레임을 반환 한 후 알을 낳기에이 부분에 여왕을 전송합니다. </li><li> 6 번 파트 A와 파트 B의 여왕 교환을 반복하고 수치 그룹을 할당,각각 (도 2). 9 개 그룹의 총이 있어야합니다. </li></ol></li><li> 일 13 PPN 설탕 시럽 T reat 꿀벌 콜로니 (도 2). <ol><li> 1 L 플라스틱 꿀벌 급전 박스 (10) 또는 100 PPM (W X L x 높이 = 20 cm X 30cm X 3.5 cm)를 함유하는 50 % PPN 설탕 시럽을 추가 실험 콜로니의 프레임의 상부에 박스를 넣어. 참고 : 무리 세포가 봉인 된 것처럼 그룹 1 13 일째에 PPN을받지 않습니다. </li><li> 단계 2.2에 기재된 바와 같이 1 L 50 % 설탕 시럽 (NO PPN)와 대조군 사료. </li></ol></li><li> 5 일 (그림 2)에서 각 그룹에 대해 100 개 라벨 무리 세포의 계란 부화 속도로 일일 된 유충 기록을 계산합니다. 꿀 꿀벌 계란은 일반적으로 0일 유충으로 부화 3 일이 걸릴; 따라서 확인하고 100 계란 함유 하루 1에 무리 세포를 라벨 및 부화 속도의 비율을 얻기 위해 하루 5에서 각 그룹에 대해 1 일 된 유충의 수를 계산합니다. </li><li> 기음날 (11) (도 2)에서 각 그룹 (100 개) 표지 브루 셀의 애벌레 캐핑 레이트 캡핑 브루 셀 기록 ount. 6 ~ 7 일 된 애벌레 무리 세포는 애벌레 pupating 꿀 꿀벌 노동자 꿀벌 왁스로 제한됩니다. </li><li> 번데기 성숙을 관찰하고 17 일 (도 2)에서 각 그룹 (100 개) 표지 브루 셀의 우화 율을 기록한다. <ol><li> 덮인 무리 세포의 꿀벌 왁스를 제거하고 부드럽게 부드러운 밀고 족집게와 번데기를 꺼내. 각 웰 아래 기관 조직의 이중층으로 24 웰 조직 배양 플레이트에 번데기로 이동. </li><li> 출현 될 때까지 34 ° C, 70 % RH에서 항온 24 웰 조직 배양 판을 유지한다. </li><li> 관찰과 번데기를 기록하고 그룹 9까지 각 그룹 (49 실험 일)를 위해 꿀벌을 등장. 참고 : 각 치료는 네 생물 반복 있습니다. </li></ol></li><li> 통계 <ol><li> 기록 데이터를 계산하고, 평균으로서 본± SD. </li><li> 치료의 쌍 사이의 유의 한 차이를 분석하여 (예를 들어 0 PPM / 10 PPM 10 PPM / 100 ppm을 0 PPM / 100 PPM) 학생의 양측의 t -test를 사용하여 각 그룹이다. P - 값 &lt;0.05처럼 통계적으로 유의 한 정의합니다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ruffi nengo, S. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/287268867_Integrated_pest_management_to_control_Varroa_destructor_and_its_implications_to_Apis_mellifera_colonies">Integrated pest management to control Varroa destructor and its implications to Apis mellifera colonies.</a> Zootecnia Trop. 32 (2), 149-168 (2014).</li>
<li>Mullin, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+levels+of+miticides+and+agrochemicals+in+North+American+apiaries%2C+implications+for+honey+bee+health%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High levels of miticides and agrochemicals in North American apiaries, implications for honey bee health.</a> PLoS One. 5, e9754(2010).</li>
<li>Lu, C. A., Chang, C. H., Tao, L., Chen, M. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/282222257_Distributions_of_neonicotinoid_insecticides_in_the_Commonwealth_of_Massachusetts_A_temporal_and_spatial_variation_analysis_for_pollen_and_honey_samples">Distributions of neonicotinoid insecticides in the Commonwealth of Massachusetts, a temporal and spatial variation analysis for pollen and honey samples.</a> Environ. Chem. 13, 4-11 (2016).</li>
<li>Tsai, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ccsenet.org/journal/index.php/ep/article/view/25732">Analysis of coupling the pesticide use reduction with environmental policy for agricultural sustainability in Taiwan.</a> Environ. & Pollut. 2, 59-65 (2013).</li>
<li>Weng, Z. H. Pesticide market status and development trend (in Chinese). PRIDE. , 
 <a target="_blank" href="https://pride.stpi.narl.org.tw/">https://pride.stpi.narl.org.tw/</a> (2016).</li>
<li>Kevan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167880999000444">Pollinators as bioindicators of the state of the environment, species, activity and diversity.</a> Agric. Ecosys. Environ. 74 (1-3), 373-393 (1999).</li>
<li>Kevan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0006320775900452">Forest application of the insecticide fenitrothion and its effect on wild bee pollinators (Hymenoptera: Apoidea) of lowbush blueberries (Vaccinium SPP.) in Southern New Brunswick, Canada.</a> Biol. Conserv. 7, 301-309 (1975).</li>
<li>Crane, E., Walker, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrane%2C+E+%22The+impact+of+pest+management+on+bees+and+pollination%22">The impact of pest management on bees and pollination</a>. , IBRA. Cardiff, UK. (1983).</li>
<li>Haouar, M., Decormis, L., Rey, J. <a target="_blank" href="https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/19920232241">Fluvalinate applied to flowering apple trees-contamination of honey-gathering bees and hive products.</a> Agronomie. 10 (2), 133-137 (1990).</li>
<li>Chauzat, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+pesticide+residues+in+pollen+loads+collected+by+honey+bees+in+France%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">A survey of pesticide residues in pollen loads collected by honey bees in France.</a> J. Econ. Entomol. 99 (2), 253-262 (2006).</li>
<li>Bonzini, S., Tremolada, P., Bernardinelli, I., Colombo, M., Vighi, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s13592-011-0011-2">Predicting pesticide fate in the hive (part 1), experimentally determined τ-fluvalinate residues in bees, honey and wax.</a> Apidologie. 42 (3), 378(2011).</li>
<li>Sanchez-Bayo, F., Goka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pesticide+residues+and+bees-a+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pesticide residues and bees-a risk assessment.</a> PLoS One. 9 (4), e94482(2014).</li>
<li>Johnson, R. M., Ellis, M. D., Mullin, C. A., Frazier, M. <a target="_blank" href="http://www.apidologie.org/articles/apido/abs/2010/03/m09141/m09141.html">Pesticides and honey bee toxicity-USA.</a> Apidologie. 41, 312-331 (2010).</li>
<li>Yang, E. C., Chang, H. C., Wu, W. Y., Chen, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+olfactory+associative+behavior+of+honeybee+workers+due+to+contamination+of+imidacloprid+in+the+larval+stage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impaired olfactory associative behavior of honeybee workers due to contamination of imidacloprid in the larval stage.</a> PLoS One. 7, e49472(2012).</li>
<li>Urlacher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+chlorpyrifos+levels+in+forager+bees+and+comparison+with+levels+that+disrupt+honey+bee+odor-mediated+learning+under+laboratory+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Ecol%22%5BJournal%5D)">Measurements of chlorpyrifos levels in forager bees and comparison with levels that disrupt honey bee odor-mediated learning under laboratory conditions.</a> J. Chem. Ecol. 42 (2), 127-138 (2016).</li>
<li>Chen, Y. W., Wu, P. S., Yang, E. C., Nai, Y. S., Huang, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1226861516300012">The impact of pyriproxyfen on the development of honey bee (Apis mellifera L.) colony in field.</a> J. Asia Pac. Entomol. 19 (3), 589-594 (2016).</li>
<li>Dennehy, T. J., DrGain, B. A., Harpold, V. S., Brink, S. A., Nichols, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDennehy%2C+TJ+%22Whitefly+Resistance+to+Insecticides+in+Arizona%3A+2002+and+2003+Results%22">Whitefly Resistance to Insecticides in Arizona: 2002 and 2003 Results</a>. , San Antonio, TX, USA. 
 <a target="_blank" href="http://ag.arizona.edu/crop/cotton/insects/wf/whiteflyresistance0204.pdf">http://ag.arizona.edu/crop/cotton/insects/wf/whiteflyresistance0204.pdf</a> 1926-1938 (2004).</li>
<li>Yang, E. C., Wu, P. S., Chang, H. C., Chen, Y. W. Effect of sub-lethal dosages of insecticides on honey bee behavior and physiology. Proceedings of international seminar on enhancement of functional biodiversity relevant to sustainable food production, ASPAC, Tsukuba, Japan, , 
 <a target="_blank" href="http://www.niaes.affrc.go.jp/sinfo/sympo/h22/1109/paper_06.pdf ">http://www.niaes.affrc.go.jp/sinfo/sympo/h22/1109/paper_06.pdf </a> (2010).</li>
<li>Fourrier, J., et al. <a target="_blank" href="http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0132985">Larval exposure to the juvenile hormone analog pyriproxyfen disrupts acceptance of and social behavior performance in adult honey bees.</a> PLoS One. 10, e0132985(2015).</li>
<li>Hanley, A. V., Huang, Z. Y., Pett, W. L. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.2003.11101097">Effects of dietary transgenic Bt corn pollen on larvae of Apis mellifera and Galleria mellonella.</a> J. Apicult.Res. 42 (4), 77-81 (2003).</li>
<li>Kaftanoglu, O., Linksvayer, T. A., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+honey+bees%2C+apis+mellifera%2C+in+vitro+1%2C+effects+of+sugar+concentrations+on+survival+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Rearing honey bees, apis mellifera, in vitro 1, effects of sugar concentrations on survival and development.</a> J. Insect Sci. 11 (96), 1-10 (2011).</li>
<li>Vandenberg, J. D., Shimanuki, H. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1987.11100743">Technique for rearing worker honey bees in the laboratory.</a> J. Apicult. Res. 26 (2), 90-97 (1987).</li>
<li>Peng, Y. S. C., Mussen, E., Fong, A., Montague, M. A., Tyler, T. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/002220119290085I">Effects of chlortetracycline on honey bee worker larvae reared in vitro.</a> J. Invertebr.Pathol. 60 (2), 127-133 (1992).</li>
<li>Bitondi, M. M., Mora, I. M., Simoes, Z. L., Figueiredo, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Apis+mellifera+pupal+melanization+program+is+affected+by+treatment+with+a+juvenile+hormone+analogue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Apis mellifera pupal melanization program is affected by treatment with a juvenile hormone analogue.</a> J. Insect Physiol. 44 (5-6), 499-507 (1998).</li>
<li>Zufelato, M. S., Bitondi, M. M., Simoes, Z. L., Hartfelder, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+juvenile+hormone+analog+pyriproxyfen+affects+ecdysteroid-dependent+cuticle+melanization+and+shifts+the+pupal+ecdysteroid+peak+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The juvenile hormone analog pyriproxyfen affects ecdysteroid-dependent cuticle melanization and shifts the pupal ecdysteroid peak in the honey bee (Apis mellifera).</a> Arthropod Struct. Dev. 29 (2), 111-119 (2000).</li>
<li>Santos, A. E., Bitondi, M. M., Simoes, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone-dependent+protein+patterns+in+integument+and+cuticular+pigmentation+in+Apis+mellifera+during+pharate+adult+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hormone-dependent protein patterns in integument and cuticular pigmentation in Apis mellifera during pharate adult development.</a> J. Insect Physiol. 47 (11), 1275-1282 (2001).</li>
<li>Brouwers, E. V. M. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1984.11100616">Glucose/Fructose ratio in the food of honeybee larvae during caste differentiation.</a> J. Apicult.Res. 23 (2), 94-101 (1984).</li>
<li>Howe, S. R., Dimick, P. S., Benton, A. W. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/00218839.1985.11100649">Composition of freshly harvested and commercial royal jelly.</a> J. Apicult. Res. 24 (1), 52-61 (1985).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

여왕 제한 알을 낳는 방법과 퀸 교환 방법은이 프로토콜 내에서 필드 테스트를 위해 꿀벌 그룹을 설정하기위한 중요한 단계이다. 여왕 제한 알을 낳는 방법은 꿀벌의 수명주기의 동기화를 가능하게한다. 그 결과, 연구진은 살충제의 서로 다른 용량으로 치료를 위해 같은 나이 1 일 된 유충을 선택할 수 있습니다. 퀸 교환 방법, 여왕이 부 A (4 개 프레임) 및 살충제 살충제 잔류 물의 영향을 평가하기위한 필드 테스트 꿀벌 상이한 발달 단계를 얻기 위해 B (5 개 프레임) 사이에서 교환 하였다. 또한, 선택된 브루 셀의 다수의 투명 표시를 위해 슬라이드를 사용하여 필드 테스트에 기록 하였다. 그러나 오버 누워 계란 가끔 산란 여왕에 대한 불충분 한 무리의 세포에서 발생합니다. 따라서, 빈 프레임의 제조는 퀸 교환법 요구된다. 또한, 여왕 제한 알을 낳는 방법은 또한에 사용될 수있다벌집에서 테스트를 위해 다른 꿀벌 그룹을 준비합니다. 파트 A의 2 프레임 부 (7 개) B의 프레임으로 프레임 분리 부 A (2 개 프레임)의 퀸의 위치...

환경에서 농약의 존재는 가장 심각한 문제 중 하나 인 영향을 미치는 꿀 꿀벌 1, 2, 3의 생명. 몇몇 연구는 꿀벌 식민지 꿀벌 제품에서 살충제 잔류의 일반적인 존재를 증명하고있다. 대만, 농약의 평균 응용 프로그램 11-12kg / (2005 년부터 2013 년) 매년 하였다. 대만에서 사용되는 농약의 양이 5 EU 국가보다 높은, 그리고 라틴 아메리카 국가 4. 즉, apicultural 환경은 특히 대만과 가능성이 다른 국가에서 심각한 농약 스트레스를 겪고있다. 꿀벌 API를 mellifera이 농업 시스템 (6)의 주요 매개자 중 하나이며 또한 꿀 가치있는 제품을 생산하고 있습니다. 그러나 꿀벌은 박람회는다양한 농약이 농약에 대한 ED 꿀과 꽃가루 7, 8을 수집 할 때 농약을 살포 한 꽃에서 먹이 찾아 돌아다 후 벌통에 다시 가져올 수 있습니다. 또한 자체가 두드러기 9, 10, 11 내 해충 문제를 제어하기 위해 목표로 양봉에 의해 농약에 노출 될 수 있습니다. 꿀벌 유충이 자신의 개발, 유충, 무인 항공기에 대한 간호사 꿀벌에 의해 공급되고 있기 때문에, 심지어 여왕은이 농약으로 오염 된 감로 및 꽃가루 (12)에 노출 될 수 있습니다. 꿀벌에 대한 다양한 농약의 독성 (13)를 해결해야합니다. 많은 노력은 환경 잔류 농약의 문제를 평가하기 위해 이루어졌다. 양 외. 에서 꿀벌 유충의 개발에 신경 독성 살충제 이미다클로 프리드의 영향을 테스트이 벌집과 이미다클로 프리드의 서브 치사량은 성인 꿀벌 후각 (14)의 결합 동작의 결과를보고했다. 또한 Urlacher 등. 실험실 조건 (15)에서 꿀 꿀벌 노동자의 학습 성능에 유기 인계 살충제, 클로르 피리 포스의 하위 치명적인 영향을 조사했다. 이전 연구에서 우리는 애벌레 꿀벌 16 (PPN) pyriproxyfen 곤충 생장 조절제의 영향 (IGR)을 평가. 본 논문에서는 꿀벌의 발전에 화학적 영향을 평가하기위한 방법을 제시한다. 꿀벌 공급 방법을 설명하고 하나의 개별 꿀벌 또는 콜로니에 적용 하였다. 첫째, 우리는 생체 내에서 개별 꿀벌에 대한 농약의 영향을 평가하기 위해 식민지에서 유충에 농약에 오염 된 기본 애벌레 다이어트 (BLD)의 서로 다른 농도를 시험했다. 우리는 자연 CONDIT을 시뮬레이션 진행벌통 내에 농약 오염 시럽을 사용하여 이온 살충제. 이 방법에서, 널리 해충 (17)에 대해 사용되며, 꿀벌 유충 및 번데기 (16), (18, 19)의 발전에 유해하다 PPN은 현장에서 농약의 부정적인 효과를 나타내는 지표가 될 것이다.

<table><tbody><tr><td>꿀벌 상자</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>W1266</td><td>꿀벌 사육</td></tr><tr><td>여왕 제외 장치 (프레임 사이)</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>I1575</td><td>여왕 한정&nbsp;</td></tr><tr><td>퀸 excluder (상단)</td><td>SAN-YI Honey Factory</td><td>I1566</td><td>상단에 퀸 제한&nbsp;</td></tr><tr><td>꿀벌 브러시</td><td>SAN-YI Honey Factory, Taiwan</td><td>W1414</td><td>프레임의 꿀벌을 부드럽게 청소</td></tr><tr><td>꿀벌 피더</td><td>SAN-YI Honey Factory, 대만</td><td>P0219</td><td>식민지에 설탕 시럽 공급</td></tr><tr><td>투명 슬라이드</td><td>Wan-Shih-Chei, Taiwan (http://www.mbsc.com.tw/a01goods.asp?s_id=40)</td><td>1139</td><td>프레임의 유충 영역 표시(재질: 폴리에틸렌 테레프탈레이트, PET) (크기 = 길이*너비*두께 = 29.7mm * 21mm * 0.1mm)</td></tr><tr><td>24 잘 tissu 문화 판</td><td>광저우 제트기 생물 여과 Co., 주식 회사</td><td>TCP011024</td><td>적출에서 번데기를 기르</td></tr>기 <tr><td>오토클레이브</td><td>Tomin 의학 equipmenco., 주식 회사.</td><td>TM-321</td><td>멸균 증류수 탈이온수 제조(ddH2O)</td></tr><tr><td>P20 피펫맨</td><td>Gilson</td><td>F123600</td><td>꿀벌 유충 식품 풀</td></tr><tr><td>인큐베이터에 PPN 추가&nbsp;</td><td>공급자:Yihder Co., Ltd.</td><td>LE-550RD</td><td>추출 후 번데기 사육</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>COW LUNG INSTRUMENT CO., LTD</td><td></td> KCS34155 <td>추출 후 번데기 사육</td></tr><tr><td>로얄 젤리</td><td>국립 일란 대학교 (NIU)</td><td>NIU</td><td>기본 유충 다이어트 (BLD) 만들기</td></tr><tr><td>D-(+) - 포도</td>당 <td>시그마</td><td>G8270</td><td>기본 유충 다이어트 (BLD) 만들기D</td></tr><tr><td>-(-) - 과당</td><td>시그마</td><td>F0127</td><td>기본 유충 다이어트 ( BLD)</td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>CONDA, 프로나디사</td><td>1702</td><td>제조법 기초 유충 다이어트(BLD)</td></tr><tr><td>설탕</td><td>대만 설탕 코포레이션</td><td>E01071010</td><td>꿀벌 사료용 설탕 시럽 제조</td></tr>법 <tr><td>Pyriproxyfen (11%)</td><td>LIH-NUNG CHEMICAL CO.. LTD.</td><td>등록 제 1937 호</td><td>실험에 사용된 곤충 성장 조절제(IGR)</td></tr></tbody></table>

식민지 수준에 개인에서 꿀 꿀벌 개발에 대한 환경 화학 물질의 효과를 평가

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

양봉 환경에 살충제가 존재하는 것은 꿀벌의 삶에 영향을 미치는 가장 심각한 문제 중 하나입니다. 살충제는 꿀벌이 살충제가 뿌려진 꽃을 먹은 후에 벌집으로 다시 가져올 수 있습니다. 살충제에 오염된 식품은 작업자들 간에 교환되어 유충에게 먹이가 될 수 있으므로 잠재적으로 꿀벌의 발달에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 환경에 남아 있는 살충제는 꿀벌 개체군에 만성적인 피해 요인이 될 수 있으며 점차 군집 붕괴로 이어질 수 있습니다. 제시된 프로토콜에서는 꿀벌 먹이 방법을 설명하고 개별 꿀벌 또는 군체에 적용합니다. 여기서, 해충을 방제하기 위해 널리 사용되고 꿀벌 유충 및 번데기의 발병에 유해한 곤충 성장 조절제(IGR) 피리프록시펜(PPN)이 살충제로 사용됩니다. 제시 절차는 추가 연구를 위해 잠재적으로 유해한 다른 화학 물질 또는 꿀벌 병원체에 적용할 수 있습니다.

꿀벌 필드 시험, 여왕이 산란을위한 4 프레임 부에 한정되었다. 이 단계는 한 프레임에 무리 밀도를 증가시키고 이후의 관찰을 용이하게 할 수있다. 각각의 치료는 표시되었고, 꿀벌 &#39;개발은 분명 투명 슬라이드를 통해 관찰되었다. 벌집 꿀벌 유충에 PPN-BLD의 생체 먹이 정확하게 콜로니에 꿀벌의 개발 PPN의 영향을 평가하기 위해 수행 하였다. 생체 공급 법을 사용하여 벌집에 화학적 처리의 영향의 관찰을 용이. PPN-BLD의 각 복용량 오십 개 브루 셀의 총 표시하고 처리 하였다. PPN-BLD를 첨가 한 후, 처리 된 프레임들이 자연 상태에서 관찰 일본어 콜로니로 복귀 하였다. 애벌레 단계 꿀벌에 PPN-BLD의 부정적인 영향은 쉽게 obse했다rved. 투여 량에 의존하는 효과가 관찰되었다. 표 1은<...

여기에서 우리는 제시 방법은 개별 꿀벌과 벌집 콜로니 모두 농약 오염 된 식품을 공급한다. 절차는 기본 유생 다이어트 생체 공급함으로써, 또한 벌집 콜로니의 자연 상태에서 개별 꿀벌의 살충제 효과를 평가한다.

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

본 실험의 전체적인 목표는 환경 내 살충제 잔류물이 벌통 군집이라는 자연 상태의 개별 꿀벌에게 어떤 영향을 미치는지 평가하는 것입니다. 이 방법의 주요 장점은 살충제 또는 관심 대상인 기타 오염 물질이 개별 꿀벌과 전체 군집 모두에 미치는 영향을 조사할 수 있다는 점입니다. 번데기는 매우 취약하여 다루기가 어렵기 때문에, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다.본 실험 절차의 시연은 제 실험실의 박사 과정 학생인 Ko Chong-Yu가 진행하겠습니다. 실험 전, 각 군집에 50% 설탕 시럽 1L를 공급하십시오. 먹이 저장소는 매주 보충하며, 건강한 군집은 9개의 벌집 프레임과 알을 낳는 여왕벌 한 마리를 보유해야 합니다.먼저 군집 내에서 여왕벌의 위치를 파악하고, 여왕벌이 있는 쪽의 소비 프레임을 최소 하나 이상 빈 프레임으로 교체합니다. 그런 다음 여왕 격리판을 삽입하여 여왕벌을 최소 하나의 빈 프레임이 포함된 4개 프레임 구역에 격리합니다. 다음 날, 프레임에 새로 산란된 알이 있는지 확인하고, 이 알들을 여왕벌과 분리하여 72시간 동안 둡니다.그 후 해당 소초광을 제거하고 일벌들을 털어낸 뒤, 봉개된 셀 내의 유충을 처리할 준비를 합니다. 각 처리군마다 소초광 내에서 무작위로 선택한 1일 된 유충 50마리를 투명 슬라이드로 덮습니다. 압정으로 슬라이드를 고정한 다음, 유성 마커를 사용하여 슬라이드에 식별 정보를 기입합니다.이제 35 °C로 데워진 BLD를 사용하여, 100 mL 부피에 PPN 처리 농도를 0.1에서 100 ppm 범위로 다르게 하여 조제합니다. 이후 3일 동안 유충 세포군을 처리합니다. 유충을 처리하려면, 덮개를 열고 각 유충 세포에 PPN BLD 용액 10 µL를 첨가합니다.다음 날 10 µL의 처리 용액을 사용하여 처리를 반복하고, 셋째 날에는 20 µL의 처리 용액을 사용하여 처리를 반복합니다. 세 번째 처리 후, 유충이 콜로니 내에서 발육하도록 둡니다. 실험 설계에서는 서로 다른 콜로니를 사용하여 각 처리군을 4회 반복합니다. 7일째에 PPN 처리된 유충을 검사하여 처리군의 폐사율과 밀봉률을 기록합니다.13일째에 각 처리군의 우화율을 기록합니다. 먼저, 밀봉된 유충실에서 밀랍을 제거합니다. 그런 다음, 끝이 뾰족한 핀셋으로 번데기를 아주 살짝 잡고 부드럽게 끌어내어 꺼냅니다.번데기를 제거할 때 머리와 가슴 사이를 잡아 매우 조심스럽게 꺼내십시오. 실험을 수행하기 전에 최소 90% 이상의 생존율을 확보하려면 여러 번의 연습이 필요합니다. 번데기를 실험실용 티슈를 두 겹으로 깐 24웰 조직 배양 플레이트에 옮기십시오.이송 중에 발생하는 손상이나 폐사 여부를 반드시 기록하십시오. 우화가 일어날 때까지 배양 플레이트를 34 °C, 상대 습도 70%로 유지하십시오. 이후 8일 동안 우화율을 기록하십시오.여왕벌이 최소 하나 이상의 빈 소초를 포함하는 4개 프레임 구역으로 제한된 건강한 9개 프레임 군집을 이전과 같이 준비합니다. 이 4개 프레임 구역을 A구역으로, 5개 프레임 구역을 B구역으로 지정합니다. 여왕벌이 구역 사이를 이동할 수 없도록 여왕 격리판이 군집을 완전히 분리했는지 확인하십시오. 이러한 분리는 부화한 지 하루 된 유충 집단을 수집하는 데 매우 중요합니다.다음 날, 이전과 동일하게 갓 산란된 알이 들어 있는 육아실 100개를 한 그룹으로 표시합니다. 이 그룹을 제1그룹으로 지정하고, 3일 동안 A 구역으로 되돌려 놓습니다. 이틀 후, 여왕벌을 B 구역으로 옮겨 알을 낳게 합니다.다음 날, B구역에서 갓 산란된 알 100개를 2그룹으로 표시하고 해당 섹션을 군집의 B구역으로 되돌려 놓습니다. 이틀 후, 여왕벌을 다시 A구역으로 옮깁니다. 이제 이 과정을 반복하여 또 다른 그룹을 만들고, 3일 간격으로 1일 된 알들로 구성된 9개 그룹이 지정될 때까지 3일마다 여왕벌을 A구역과 B구역 사이로 계속 교체합니다. 발달 초기 5일 동안, 표시된 각 산란실 그룹의 부화율을 측정합니다.발육 11일 후부터 각 그룹의 봉개된 유충 세포 수를 기록하기 시작합니다. 실험 13일 차에 10 또는 100 ppm의 PPN이 포함된 50% 설탕 시럽으로 군집을 처리합니다. 급이기에 처리액 1L를 채운 후 이를 군집에 연결합니다.첫 번째 그룹은 무처리 대조군이며, 해당 세포들은 이제 캡핑되어야 합니다. 17일째부터 각 그룹의 우화율을 기록하십시오. 이를 위해, 이전에 시연한 방법대로 유충을 24웰 플레이트로 옮긴 후, 플레이트를 배양하고 이후 우화율을 기록하십시오.49일 후, 9개 모든 그룹의 우화 데이터가 확보되었을 것입니다. 개별 봉개 세포는 PPN BLD를 사용하여 설명된 대로 처리되었습니다. 유충 단계의 꿀벌에 미치는 살충제의 부정적인 영향이 쉽게 관찰되었으며, 이는 투여량에 의존적이었습니다.이러한 효과에는 멜라닌화와 날개 변형이 포함되었습니다. 환경 내 PPN 잔류물로 인해 피해를 입는 꿀벌 군집을 모사하기 위해, 군집 전체에 PPN 시럽을 급여했습니다. 첫 번째 그룹은 처치 전 성충으로 발달한 벌들이므로 대조군으로 설정하였습니다.그룹 2와 3은 초기 처리를 유충 단계에서 수행하였으며, 그룹 4부터 9까지는 초기 처리를 알 단계에서 수행하였습니다. PPN 처리에 따라 부화, 캡핑(capping), 우화 및 기형 발생에 변화가 나타났습니다. 부화율을 제외하고는 100 ppm의 PPN이 10 ppm보다 더 효과적이었습니다.또한, 처리 후 많은 번데기가 큐티클이 검게 변하거나 우화에 실패하여 폐사했습니다. 100 ppm PPN 처리군에서는 봉개된 셀이 파괴되었으며, 손상된 번데기는 군집에서 제거되었습니다. 숙달되면 군집 처리 절차는 약 한 달 만에 완료할 수 있으며, 번데기의 일일 조작은 약 2시간 내에 마무리될 수 있습니다.이 절차를 시도할 때는 군집의 상태를 정기적으로 확인하고, 실험을 수행하기 전에 번데기를 다루는 숙련도를 충분히 높이는 것이 중요합니다. 꿀벌을 다루는 작업은 벌독 알레르기로 인해 위험할 수 있음을 유념하십시오. 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 보호복 착용과 같은 예방 조치를 취해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

여기에서 우리는 단일 코호트 꿀벌 식민지의 제조를위한 우리의 상세한 프로토콜을 설명 - 롤 관련 근로자의 생리를 분석하기위한 유용한 도구입니다. 우리는 또한 작업자의 행동 및 / 또는 생리 조절에 이러한 호르몬의 참여를 평가하기 위해 청소년 호르몬과 에크 디손과 근로자를 치료하기위한 상세한 프로토콜을 설명합니다.

단일 코호트 식민지와 노동자 꿀벌의 호르몬 치료의 준비 역할 및 / 또는 내분비 시스템과 생리학 관련 분석하기

범블 비 하이브 내 미생물 컨소시엄 풍부 하 고 꽃가루 꿀벌 애벌레에 대 한 유지. 살 균 제 잔류물 꽃가루 미생물, 및 궁극적으로 식민지로 이어지는 식민지 인구 통계를 변경 하는 가설을 테스트 하는 데 사용 하는 프로토콜을 설명 합니다이 원고 실험실 및 필드 기반 실험 다음 세대 시퀀싱을 사용 하 여 손실입니다.

실험, Metagenomic, 및 계산 기법 밝히는 어떤 균 타협 꿀벌 건강 메커니즘

농약의 sublethal 복용량만 주기적 또는 시각적 방법을 사용 하 여 검출 하기 어려운 방법으로 식민지 영향을 미칠 수 있습니다. 총 성인 꿀벌 질량을 측정 하는 방법 가만히, 그리고 식량 자원 하이브와 하이브 부품 무게, 프레임, 촬영 및 센서를 설치 하 여 제공 됩니다. 데이터 분석은 또한 해결 되었습니다.

꿀 꿀벌에 Sublethal 농약 노출의 식민지 수준 효과 모니터링

꽃 식물에 균 스프레이 고독한 꿀벌 꽃가루 부담 균 잔류물의 높은 농도에 노출 될 수 있습니다. 실험실 기반 실험 체 외에관련 된을 사용 하 여-reared 꿀벌 애벌레,이 연구 균 처리 꽃가루 호스트와 호스트 비 식물에서 파생 된 소모의 대화형 효과 조사.

생체 외에서 고독한 꿀벌의 양육: 애벌레 위험 요소를 평가 하기 위한 도구

이 프로토콜은 농약이 꿀벌(아피스 멜라이프라)재생에 미치는 이해를 향상시키기 위해 개발되었으며, 꿀벌 여왕과 그 노동자 관리인을 통제 된 실험실 환경에서 농약에 노출시키는 방법을 확립하고 관련 반응을 주의 깊게 모니터링합니다.

꿀벌 여왕을 짝짓기하는 농약적 위험 평가

본 프로토콜은 고독한 꿀벌 인 Osmia excavata의 유충에게 살충제로 오염 된 조항을 먹이는 방법을 설명합니다. 이 절차는 독방 꿀벌의 유충에 대한 살충제의 생태 독성을 검사합니다.

살충제가 독방 꿀벌의 유충에 미치는 영향 평가

이 원고는 차세대 염기서열분석을 위해 DNA 단편을 정제하기 위한 자동화된 겔 크기 선택 접근법을 설명합니다. Ranger Technology는 아가로스 겔 로딩, 전기영동 분석 및 표적 DNA 단편 회수의 전체 프로세스를 완전히 자동화하여 고처리량 및 고품질 차세대 염기서열분석 라이브러리를 가능하게 합니다.

자동 젤 사이즈 선택은 환경 물 샘플에서 준비 차세대 시퀀싱 라이브러리의 질을 향상시키기 위해

증발에 대기 강제력의 효과를 연구하기 위해 작은 기후 제어 풍동에 인터페이스 토양 탱크의 설계 및 구성에 대한 프로토콜이 제시된다. 토양 탱크 및 풍동 모두 환경 조건 인 시츄 측정을위한 연속적인 센서 기술로 계측된다.

증발에 대기 강제력의 효과를 탐구 : 대기 경계층과 얕은 표면 하의의 실험 통합

생산 블리드 워터 (PBW)는 산화 구리 나노 입자 (CuO-NPs)로 처리되고 배양 된 인간 세포에서 세포 독성을 평가했다. 이 프로토콜의 목표는 CuO-NP 처리로 인한 독성의 변화를 평가하는 세포 배양 형식으로 네이티브 환경 샘플을 통합하는 것이 었습니다.

우라늄에서 구리 산화물 나노 입자에 의한 미량 원소의 제거<em&gt; 현장에서</em&gt; 복구 블리드 물과 세포 생존에 미치는 영향

현탁액의 침전물을 유지하도록 설계된 견고하고 유연한 플로우 스루 노출 시스템이 제시됩니다. 이 시스템은 실험실에서 다양한 수생 종과 생활 단계에 대한 부유 퇴적물의 영향을 조사하는 데 사용됩니다.

수산 생명에 일시 중지를 평가하면 퇴적물 효과에 대한 플로우를 통해 노출 시스템

학습하세요 살충제 잔류물이 개체 및 군집 수준에서 꿀벌에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 이 실험은 생태독성학 연구에 중요한 시각적 기술을 제공합니다.

식민지 수준에 개인에서 꿀 꿀벌 개발에 대한 환경 화학 물질의 효과를 평가

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