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DOI: 10.3791/55300-v
Keith C. Heyde*1,2, Felicia Y. Scott*3, Sung-Ho Paek3, Ruihua Zhang3, Warren C. Ruder3,4
1Department of Mechanical Engineering,Carnegie Mellon University, 2Engineering Science and Mechanics Program,Virginia Polytechnic Institute and State University, 3Department of Biological Systems Engineering,Virginia Polytechnic Institute and State University, 4Department of Bioengineering,University of Pittsburgh
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
이 논문은 조작 된 세포와 합성 제어 프로그램 재료 표면을 조작하는 대장균을 설계 에이블 작용 표면을 개발하기위한 프로토콜의 시리즈를 제공합니다.
이러한 절차의 전반적인 목표는 합성 공학적 대장균을 사용하여 유전자 변형 및 표면 기능화 전략을 결합하여 프로그래밍 가능한 재료 표면을 제어하고 조작하는 것입니다. 이 방법은 분자 의학 및 환경 모니터링과 같은 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 유전적으로 프로그래밍된 세포를 사용하여 지역 환경을 해석하고 그에 따라 기능화된 재료를 수정함으로써 다양한 응용 분야를 위한 모듈식 도구를 제공하고 있습니다.
이 기술의 주요 장점은 살아있는 세포가 기능화된 인터페이스를 통해 주변 상태를 읽고, 처리하고, 기록할 수 있는 동적 센서로 작동할 수 있다는 것입니다. 용액을 준비하고 비오틴 생성 E.coli에서 비오틴이 풍부한 상등액을 채취한 후, 텍스트 프로토콜에 따라 20마이크로리터의 스트렙타비딘 또는 SA 용액에 1.4마이크로리터의 SPDP 용액을 첨가합니다. 튜브를 알루미늄 호일로 싸서 실온에서 1시간 30분 동안 배양하여 SPDP 크로스 링커가 아미노기를 통해 SA에 결합하여 피리딜디티오 활성화 SA를 형성할 수 있도록 합니다. 배양 후 튜브에 2.4마이크로리터의 DTT 용액을 추가하고 샘플을 실온에서 1시간 동안 배양하여 피리딘-2-티온 절단을 통해 설프하이드릴 활성화 SA를 생성합니다. 다음으로, HRP 용액 72 μl에 SCC 용액 7.5 μl를 첨가하고 알루미늄 호일로 싸서 실온에서 1 시간 30 분 동안 배양합니다.
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