Name: Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 연구 Neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 배우세요 바이브라톰을 이용한 해마 오가노타이픽 슬라이스 배양 기법으로 신경보호 및 종양 세포 침입을 연구하는 방법입니다. 이 프로토콜은 고품질 뇌 조각을 제작하여 다양한 실험에 활용할 수 있습니다.

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저자는 크리스틴 Auste 그의 우수한 기술 지원에 대 한 비디오 녹화 및 종합 Ghadban 그녀의 지원에 대 한 감사 하 고 싶습니다. Urszula Grabiec 루 프로그램 FKZ 29/18에 의해 지원 되었다.

에 의해 유럽 공동체 위원회 지침 2010/63/EU 유럽 의회의 승인으로 동물 실험 윤리 정책 및 신경 과학 연구에 있는 동물의 사용에 정책에 따라 수행 했다 고 과학적 목적을 위해 사용 하는 동물의 보호에 유럽 연합의 위원회.
 1. 준비의 악기와 문화 미디어 <ol><li>OHSC의 준비에 대 한 사용의 다음 세트: 2 개의 작은 위, 두 곡선된 핀셋, 좋은 팁, 한 트위터 (크기 11, 하나 크기 15의 2), 3 개의 블레이드 세 메스 홀더, 필터 종이 라운드 (직경: 35mm), 한 천, 한 면도날 하나 수정 파스퇴르 피 펫, 그리고 한 파스퇴르 피 펫 팁 없이 수정. ( 그림 1) 사용 전에 압력솥에 모든 재료를 소독.</li>
	<li>한 천 5 g의 무게와 증류수 100 mL 물에 용 해. 압력솥에 210.8 kPa에서 121.7 ° C에서 20 분에 대 한 솔루션을 소독. 60 mm 페 트리 요리를 멸 균 유리 피 펫을 사용 하 여 3 mL 액체 agar 솔루션 배포, 5 h에 대 한 강화, 오염을 방지 하 고 더 사용 될 때까지 4 ° C에서 저장 플라스틱 파라핀 영화 커버 수 있습니다. 한 블록 조각화 절차 동안 두뇌를 안정화 하는 데 필요한.</li>
	<li>미디어 <ol><li>준비 매체 (pH 7.35)의 게 200 mL로 구성 된 198 mL 최소한의 필수 매체 (MEM)와 2 mL L-글루타민 솔루션 (최종 농도 2 m m). 미디어 준비의 날에는 솔루션을 준비 하 고 4에서 저장 ° c.</li>
		<li>준비 49 mL MEM, 25 mL 행 크 스의 구성 된 문화 매체의 100 mL &#39; 균형 소금 솔루션 (HBSS), 25 mL (v/v) 정상 말 혈 청 (NHS), L-글루타민 솔루션 1 mL (최종 농도 2 m m), 100 µ g 인슐린, 혈당 120 mg, 10 mg 스 10000 U 페니실린과 800 µ g 비타민 C로 이전 보고. 따뜻한 매체 (37 ° C), pH 값 pH 7.4와 살 균 필터 (0.2 µ m 기 공 크기)을 조정. 매체를 변경 하기 전에 모든 둘째 날 (워밍업, pH 조정, 등.) 하는 절차를 반복 합니다. 1 주일 동안 매체를 가장 사용 하는 방법 4에 저장 될 때 ° c.</li>
	</ol></li> <li>준비 중간 두뇌를 저장 한 35 mm 페 트리 접시를 채워. 작업 영역에서 냉각 팩에 조직을 수집 하기 위해 두 개의 빈 접시를 놓습니다.</li>
</ol> 2. 준비 하 고는 Vibratome와 썰 <ol><li>사용 두뇌 4-5 일 또는 7-9 일 오래 된 쥐에서 Stoppini 동부 표준시 알에 따르면 OHSC 준비에 대 한 오래 된 쥐. 4 후 동물의 잘린, 제거 피부 두개골에서가 위.</li>
	<li>구멍 매그넘으로 좋은 시저의 블레이드를 소개 하 고 꼬리 (다시) rostral (프론트) 축 따라 절단 하 여 두개골을 엽니다. 두 게가 위가 각각 왼쪽과 오른쪽 귀 쪽으로 포인트를 첫 번째 수직 인하 (&#34; T-절 개 &#34;).</li>
	<li>주목 하지 뇌 손상 미세 집게와 신중 하 게 두개골을 엽니다. 메스 (블레이드 크기 11)를 사용 하 여 정면 극과 소 뇌의 가장 rostral 부분을 잘라.</li>
	<li>주걱의 두뇌를 제거 하 고 신중 하 게 준비 중간 ( 그림 2)으로 가득 페 트리 접시에 배치에 의해 의미 합니다. 두뇌 견본 홀더를 놓고 의료 cyanoacrylate 접착제로 그것을 수정 합니다. 한 천 조각을 사용 하 여 기계적인 안정화 보장.</li>
	<li>350 µ m에 가로 조직 해 부 슬라이딩 vibratome를 사용 하 여 두꺼운 OHSC.</li>
	<li>광학 쌍 안 현미경을 사용 하 여 분할 영역을 평가 합니다. 낮은 품질의 OHSC를 즉시 삭제 합니다. 만 그 조각 그대로 cytoarchitecture 해 마의 중간 부분에서 고립 된 데는 것이 중요 하다 (그림 3 및 4 참조)는 지 느 러 미 및 복 부 해 마 사이.</li>
	<li>Hippocampal 지역과 entorhinal 외피 (둥근 블레이드 크기 15; 메스를 사용 하 여 분리 그림 3)입니다. Perforant 통로 entorhinal 외피를 유지 해야 합니다.</li>
	<li>6 ~ 8 OHSC 각 뇌에서 얻을 수 있습니다. 한 셀 문화 삽입 (기 공 크기 0.4 µ m)에 2-3 조각을 전송 하 고 잘 당 1 mL 문화 매체를 포함 하는 6-잘 문화 접시의 한 잘에.</li>
	<li>5% (v/v) 공동 2 완벽 하 게 습도 분위기에서 35 ° C에서 6-잘 요리를 품 어 및 변경 세포 배양 매체 마다 둘째 날. 
	참고: 6 일간에 체 외에서 (div)에서 실험을 실시 합니다. 조각화 절차와 관련 된 염증 성 반응 하루 6 사라집니다. 이 단계에서 microglial 셀 다시 없는 형태 표시 고 시 냅 스 연결 성숙 했다.</li>
</ol> 3. 조직의 품질의 평가 <ol><li>고정, 라벨 및 OHSC 서에서 degenerating 신경의 시각화 <ol><li>실험을 수행한 후에 5 µ g/mL propidium 요오드 화물 (PI) 이전에 고정, 2 h와 OHSC를 품 어 degenerating 신경 세포의 핵을 얼룩 순서. 
		주의: PI는 의심 되는 발암 물질, 장갑 등 개인 보호 장비 (PPE)를 항상 착용.</li>
		<li>0.1 M 인산 버퍼 (pH 7.4)와 OHSC를 세척 하 고 24 헤 대 한 paraformaldehyde (PFA)의 4% (v/v) 솔루션으로 해결 
		주의: PFA 의심과 독성 발암 물질 이다. 증기 두건에서 작업 및 보호구 착용.</li>
		<li>1 mL PBS와 삽입에는 OHSC를 세척 하 고 찡그린 브러시 막에서 분할 영역을 사용 하 여.</li>
		<li>24-잘 접시 ( 그림 5)에 IB 4 염료와 OHSC 라벨.</li>
	</ol></li> <li>붙일 사용 하 여 종양 내 습 실험의 전도 라는 단일 셀 <ol><li>실험의 시작에 앞서 24 h 형광 염료 Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl를 사용 하 여 종양 세포를 라벨 에스테 르 (CFDA SE).</li>
		<li>분리 Neubauer 챔버를 사용 하 여 종양 세포를 계산 하 고.</li>
		<li>매체에 셀 서 스 펜 션의 10 µ L 원하는 휴대폰 번호 (일반적으로 50000 또는 100000 세포) 포함 되도록 resuspend.</li>
		<li>슬라이스 문화에 세포 현 탁 액의 10 µ L을 적용 하 고 3 일에 대 한 침략을 세포 허용.</li>
		<li>실험의 끝에, 4% (v/v) PFA 24 h를 사용 하 여 슬라이스 문화를 수정 하 고는 cytoarchitecture를 시각화 하기 위해 또 다른 24 h에 대 한 PI와 공동 문화를 라벨. 
		주의: PFA 의심과 독성 발암 물질 이다. 증기 두건에서 작업 및 보호구 착용.</li>
		<li>설치 미디어를 사용 하 여 추가 분석을 위해 커버 슬립에 공동 문화를 탑재.</li>
	</ol></li></ol> 4. OHSC 실험의 평가 는 OHSC confocal 레이저 스캐닝 현미경 (CLSM) 분석. PI의 감지 표시, 신경 세포를 변질 또는 파장 λ의 단색 광을 사용 하는 cytoarchitecture를 표시 하는 PI = 543 nm 및 방출 밴드 파장 λ에 대 한 필터를 통과 = 585-615 nm. CFDA 레이블이 종양 세포 또는 IB 4 microglia는 여기 파장 λ의 사용 = 488 nm. 두 실험 종류에 대 한 z-스택 2 µ m 두께 광 조각으로 기록 하 고 평가 대 한 사용.

<ol><li>Gähwiler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+cultures%3A+a+technique+has+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice cultures: a technique has come of age.</a> Trends Neurosci. 20 (10), 471-477 (1997).</li>
<li>Bahr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Term+Hippocampal+Slices%3A+A+Model+System+for+Investigating+Synaptic+Mechanisms+and+Pathologic+Processes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Long-Term Hippocampal Slices: A Model System for Investigating Synaptic Mechanisms and Pathologic Processes.</a> J Neurosci Res. 42 (3), 294-305 (1995).</li>
<li>Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+microglia+in+brain+slices+and+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protoc%22%5BJournal%5D)">Imaging microglia in brain slices and slice cultures.</a> Cold Spring Harbor Protoc. 2013 (12), 1142-1148 (2013).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neurosci Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Kleinberger-Doron, N., Schramm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+mature+hippocampus+slices+for+4+days+in+a+newly+developed+medium%3A+preservation+of+transmitter+release+and+leucine+incorporation+into+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Culture of mature hippocampus slices for 4 days in a newly developed medium: preservation of transmitter release and leucine incorporation into protein.</a> Brain Res. 533 (2), 239-247 (1990).</li>
<li>Legradi, A., Varszegi, S., Szigeti, C., Gulya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+hippocampal+slices+as+in+vitro+models+for+neurodegeneration+Studies+on+cell+viability+and+apoptotic+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Adult rat hippocampal slices as in vitro models for neurodegeneration Studies on cell viability and apoptotic processes.</a> Brain Res Bull. 84 (1), 39-44 (2011).</li>
<li>Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+Monolayer+Cultures+of+Nervous+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Organotypic Monolayer Cultures of Nervous Tissue.</a> J Neurosci Methods. 4, 329-342 (1981).</li>
<li>Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+cultures+of+neural+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic cultures of neural tissue.</a> Trends Neurosci. 11 (11), 484-489 (1988).</li>
<li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+%28P25-30%29+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J Neurosci Methods. 130 (1), 19-32 (2003).</li>
<li>Kim, H., Kim, E., Park, M., Lee, E., Namkoong, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23159795">Organotypic hippocamal slice culture from the adult mouse brain: A versatile tool for translational neuropsychopharmacology.</a> Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 41, 36-43 (2013).</li>
<li>Xiang, Z., Hrabetova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+maintenance+of+mature+hippocampal+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Long-term maintenance of mature hippocampal slices in vitro.</a> J Neurosci Methods. 98, 145-154 (2000).</li>
<li>Adamchik, Y., Frantseva, M. V., Weisspapir, M., Carlen, P. L., Perez Velazquez, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+induce+primary+and+secondary+traumatic+damage+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+rRes+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to induce primary and secondary traumatic damage in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Brain rRes Brain Res Protoc. 5, 153-158 (2000).</li>
<li>Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+slices+as+models+for+neurodegenerative+disease+and+screening+platforms+to+identify+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Neuropharmacol%22%5BJournal%5D)">Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics.</a> Curr Neuropharmacol. 5 (1), 19-33 (2007).</li>
<li>Noraberg, J., Poulsen, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+hippocampal+slice+cultures+for+studies+of+brain+damage%2C+neuroprotection+and+neurorepair%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets+CNS+Neurol+Disord%22%5BJournal%5D)">Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair.</a> Curr Drug Targets CNS Neurol Disord. 4 (4), 435-452 (2005).</li>
<li>De Simoni, A., Griesinger, C. B., Edwards, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Development+of+rat+CA1+neurones+in+acute+versus+organotypic+slices%3A+role+of+experience+in+synaptic+morphology+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">a Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity.</a> J Physiol. 550 (Pt 1), 135-147 (2003).</li>
<li>Poindrom, P., Piguet, P., Förster, E. New Methods for Culturing Cells from Nervous Tissues. , BioValley Karger. Basel, Switzerland. (2005).</li>
<li>Berger, T., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+and+morphological+characteristics+of+oligodendrocytes+in+the+rat+hippocampus+in+situ+and+in+vitro%3A+An+immunocytochemical+study+with+the+monoclonal+Rip+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Distribution and morphological characteristics of oligodendrocytes in the rat hippocampus in situ and in vitro: An immunocytochemical study with the monoclonal Rip antibody.</a> J Neurocytol. 23 (1), 61-74 (1994).</li>
<li>Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+oligodendrocyte+dynamics+in+organotypic+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture.</a> Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).</li>
<li>Bonde, C., Sarup, A., Schousboe, A., Gegelashvili, G., Zimmer, J., Noraberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxic+and+neuroprotective+effects+of+the+glutamate+transporter+inhibitor+DL-threo-beta-benzyloxyaspartate+%28DL-TBOA%29+during+physiological+and+ischemia-like+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Neurotoxic and neuroprotective effects of the glutamate transporter inhibitor DL-threo-beta-benzyloxyaspartate (DL-TBOA) during physiological and ischemia-like conditions.</a> Neurochem Int. 43 (4-5), 371-380 (2003).</li>
<li>Derouiche, A., Heimrich, B., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+layer-specific+astrocytic+glutamine+synthetase+immunoreactivity+in+slice+cultures+of+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Loss of layer-specific astrocytic glutamine synthetase immunoreactivity in slice cultures of hippocampus.</a> Eur J Neurosci. 5 (2), 122-127 (1993).</li>
<li>Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+microglial+cells+in+vitro%3A+analysis+of+morphology+and+adhesion+molecule+expression+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Resting microglial cells in vitro: analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Glia. 18 (4), 319-331 (1996).</li>
<li>Hailer, N. P., Wirjatijasa, F., Roser, N., Hischebeth, G. T. R., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+factors+protect+neuronal+integrity+and+reduce+microglial+activation+in+an+in+vitro+model+of+N-methyl-D-aspartate-induced+excitotoxic+injury+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocytic factors protect neuronal integrity and reduce microglial activation in an in vitro model of N-methyl-D-aspartate-induced excitotoxic injury in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Eur J Neurosci. 14 (2), 315-326 (2001).</li>
<li>Bahr, B. A., Kessler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+maintenance+of+glutamate+receptors+and+other+synaptic+components+in+long-term+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices.</a> Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).</li>
<li>Holopainen, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+hippocampal+slice+cultures%3A+A+model+system+to+study+basic+cellular+and+molecular+mechanisms+of+neuronal+cell+death%2C+neuroprotection%2C+and+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Organotypic hippocampal slice cultures: A model system to study basic cellular and molecular mechanisms of neuronal cell death, neuroprotection, and synaptic plasticity.</a> Neurochem Res. 30 (12), 1521-1528 (2005).</li>
<li>Guy, Y., Rupert, A. E., Sandberg, M., Weber, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+measuring+organotypic+tissue+slice+culture+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for measuring organotypic tissue slice culture thickness.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 78-81 (2011).</li>
<li>Grabiec, U., Koch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocannabinoid+N-arachidonoyldopamine+%28NADA%29+exerts+neuroprotective+effects+after+excitotoxic+neuronal+damage+via+cannabinoid+receptor+1+%28CB+1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">The endocannabinoid N-arachidonoyldopamine (NADA) exerts neuroprotective effects after excitotoxic neuronal damage via cannabinoid receptor 1 (CB 1).</a> Neuropharmacology. 64 (4), 1797-1807 (2012).</li>
<li>Daviaud, N., Garbayo, E., Schiller, P. C., Perez-Pinzon, M., Montero-Menei, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+cultures+as+tools+for+optimizing+central+nervous+system+cell+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Organotypic cultures as tools for optimizing central nervous system cell therapies.</a> Exp Neurol. 248, 429-440 (2013).</li>
<li>Ebrahimi, F., Hezel, M., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+neuronal+damage+in+excitotoxically+lesioned+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">Analyses of neuronal damage in excitotoxically lesioned organotypic hippocampal slice cultures.</a> Ann Anat. 192 (4), 199-204 (2010).</li>
<li>He, S., Shao, L. R., Wang, Y., Bausch, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+and+extrasynaptic+plasticity+in+glutamatergic+circuits+involving+dentate+granule+cells+following+chronic+N-methyl-D-aspartate+receptor+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic and extrasynaptic plasticity in glutamatergic circuits involving dentate granule cells following chronic N-methyl-D-aspartate receptor inhibition.</a> J Neurophysiol. 109 (6), 1535-1547 (2013).</li>
<li>Kann, O., Taubenberger, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/51802845_Muscarinic_receptor_activation_determines_the_effects_of_store-operated_Ca2-entry_on_excitability_and_energy_metabolism_in_pyramidal_neurons">Muscarinic receptor activation determines the effects of store-operated Ca2+-entry on excitability and energy metabolism in pyramidal neurons.</a> Cell Calcium. 51 (1), 40-50 (2012).</li>
<li>Pérez-Gómez, A., Tasker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+neurogenesis+in+organotypic+cultures+of+rat+hippocampus+after+transient+subfield-selective+excitotoxic+insult+induced+by+domoic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enhanced neurogenesis in organotypic cultures of rat hippocampus after transient subfield-selective excitotoxic insult induced by domoic acid.</a> Neuroscience. 208, 97-108 (2012).</li>
<li>Raineteau, O., Rietschin, L., Gradwohl, G., Guillemot, F., Gähwiler, B. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15207849">Neurogenesis in hippocampal slice cultures.</a> Mol Cell Neurosc. 26 (2), 241-250 (2004).</li>
<li>Pozzo Miller, L. D., Mahanty, N. K., Connor, J. A., Landist, D. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyramidal+Cell+Death+in+Slice+Cultures+From+Rat+Hippocampus+Is+Prevented+By+Glutamate+Receptor+Antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pyramidal Cell Death in Slice Cultures From Rat Hippocampus Is Prevented By Glutamate Receptor Antagonists.</a> Neuroscience. 63 (2), (1994).</li>
<li>Koch, M., Kreutz, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20135626">The cannabinoid WIN 55,212-2-mediated protection of dentate gyrus granule cells is driven by CB 1 receptors and modulated by TRPA1 and Ca v2.2 channels.</a> Hippocampus. 21 (5), 554-564 (2011).</li>
<li>Pukrop, T., Dehghani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+colonization+of+brain+tissue+by+breast+cancer+cells+in+a+Wnt-dependent+way%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way.</a> Glia. 58 (12), 1477-1489 (2010).</li>
<li>Kohl, A., Dehghani, F., Korf, H. W., Hailer, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bisphosphonate+clodronate+depletes+microglial+cells+in+excitotoxically+injured+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The bisphosphonate clodronate depletes microglial cells in excitotoxically injured organotypic hippocampal slice cultures.</a> Exp Neurol. 181 (1), 1-11 (2003).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochem Biophys Res Commun. 269 (2), 513-520 (2000).</li>
<li>Aaberg-Jessen, C., Nørregaard, A., Christensen, K., Pedersen, C. B., Andersen, C., Kristensen, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+primary+glioma-+and+cell+line-derived+spheroids+implanted+into+corticostriatal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures.</a> Int J Clin Exp Pathol. 6 (4), 546-560 (2013).</li>
<li>Vinci, M., Box, C., Eccles, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+%283D%29+tumor+spheroid+invasion+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional (3D) tumor spheroid invasion assay.</a> J Vis Exp. (99), e52686(2015).</li>
<li>Hagemann, C., Fuchs, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+MACC1+on+human+malignant+glioma+progression+and+patients+%27+unfavorable+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Impact of MACC1 on human malignant glioma progression and patients ' unfavorable prognosis.</a> Neuro Oncol. 15 (12), 1696-1709 (2013).</li>
<li>Hohmann, T., Grabiec, U., Ghadban, C., Feese, K., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Biomechanical+Properties+and+Cannabinoids+on+Tumor+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh+Migr%22%5BJournal%5D)">The Influence of Biomechanical Properties and Cannabinoids on Tumor Invasion.</a> Cell Adh Migr. 11 (1), 54-67 (2016).</li>
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저자 공개할 게 없다

현재 프로토콜 OHSC의 준비를 설명합니다. 이 모델은 내장 기능 및 뇌 조직의 반응의 생리 및 병리학 자극의 적용 후 테스트 수 있습니다. Electrophysiological 매개 변수 분석, 외 OHSC lesioned 수와 모든 세포 유형에 손상의 효과 확인할 수 있습니다. 다른 물질 및 lesioning 프로세스 또는 대 식 세포와 림프 톨의 부재에서 치유의 자세한 설명과 함께 치료 가능 하다.
The most 중요 한 단계는 성공적인 준비와 자란 있습니다: 1) 무 균 조건 하에서 작동, 2) 준비 미디어 제대로, pH, 온도 고려 하 고 3) OHSC의 처리 동안에 필요한 수동 손 재주를 개발.
OHSC의 특성
신경 세포의 변형된 형태 때문에 그들의 vivo에서-조직 같이, 조각 organot...

OHSC는 공부 microglia1, 이다 및 신경 세포의 생리 및 병 적인 속성을 잘 특징이 생체 외에서 모델입니다. Extracellular 환경을 제어 하 고 다양 한 자극 후 셀룰러 및 형태학 상 변화를 모니터링 하는 것이 쉽습니다. Hippocampal 신경의 조직 및 그들의 연결 준비2,3후 잘 보존 되어 있습니다. 여러 장점 중 OHSC 동물 수술 없이 뇌 상해와 종양 내 습의 모니터링 하실 수 있습니다. 6 ~ 8 OHSC 단일 설치류 두뇌에서 얻어질 수 있다. 크게 동물의 수를 줄이고 같은 동물에 여러 약물 농도, 유전자 조작 또는 다른 병 변 모델을 테스트 허용 OHSC 따라서 도움이 될. 분할 영역 기반 분석 실험에서 실험 조건 정확 하 게 제어할 수 있습니다. 또한, 보조 손해 같은 병 적인 상태의 시간 종속 개발 시간 경과 영상에 의해 쉽게 모니터링할 수 있습니다.
Stoppini 그 외 여러분 에 의해 원래 설립 주어진된 프로토콜에서 4, 준비 단계는 설명 하 고 적절 한 조각의 선택에 대 한 중요 한 형태학 랜드마크 강조 표시 됩니다. 생 후 7-9 일 쥐 또는 산 후 4-5 일 쥐의 준비를 좋습니다. 이 기간에서 OHSC 기계적 충격 및 신경 회로의 개편을 위한 높은 잠재력에 강력한 저항을 표시. 반면, 배아 또는 성인 쥐에서 준비 급속 하 게 그들의 구조를 변경 재배 하는 동안 그들의 organotypic 형태를 잃고 고 따라서 덜 공부 하는 기초 연구5,6 장기 프로세스에 적합 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. OHSC의 생존 율에 대 한 또 다른 중요 한 포인트 확산 및 따라서 영양소 공급은 제한 된12,,1314조각 자체의 두께입니다.

<table><tbody><tr><td>6-Well</td><td>Falcon</td><td>35-3046</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fluka</td><td>5040</td><td></td></tr><tr><td>Autoclav</td><td>Systec</td><td>DX-45</td><td></td></tr><tr><td>CFDA</td><td>&nbsp; Thermo Fisher</td><td>V12883</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 레이저 스캐닝 현미경(CLSM) LSM700</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eagle&acute; s 미니멀 에센셜 미디엄&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>32360-034</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein labeled Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Labs</td><td>FL-1101</td><td></td></tr><tr><td>글루코스</td><td>머크</td><td>1083371000</td><td></td></tr><tr><td>글루타</td><td>민 Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Hank&acute; s 평형 염 용액 (Ca2+ 및 Mg2+)</td><td>Invitrogen</td><td>24020-133</td><td></td></tr><tr><td>Hank&acute; s 평형 염 용액(Ca2+&nbsp; 및 Mg2+)</td> <td>Invitrogen</td><td>14170-138</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>L-아스코르브산</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>LN229</td><td>세포주-서비스</td><td>300363</td><td></td></tr><tr><td>의료용 시아노아크릴레이트 접착제(Histoacryl glue)</td><td>B.Braun</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>밀리셀 배양 인서트</td><td>Millipore</td><td>PICMORG50</td><td></td></tr><tr><td>NMDA N-methyl-D-aspartic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>Normal Horse Seum</td><td>Invitrogen</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish (모든 크기)</td><td>Greiner</td><td>627160/664160/628160</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>독성</td></tr><tr><td>Propidium iodid (PI)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81845-25MG</td><td>독성</td></tr><tr><td>U138</td><td>ATCC</td><td>HTB-14</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica Leica</td><td>VT 1200</td><td></td></tr></tbody></table>

organotypic hippocampal 슬라이스 문화 연구 neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화 (OHSC), 신경 그리고 glial 세포의 형태학 적 및 기능적 특성은 잘 보존 된. 이 모델은 neuroprotection, 뉴런, 신경 네트워크 또는 종양 침입에 electrophysiological 실험 연구를 포함 하는 다양 한 연구 질문을 해결 하는 데 적합 합니다. Hippocampal 건축과 multisynaptic 회로에 신경 활동은 잘 보존 OHSC, 비록 조각화 절차 자체가 처음 병 변 및 glial 흉터의 형성에 이르게. 흉터 형성 아마도 기계적 특성 및 작은 분자, 등의 방산 동작을 변경합니다. 분할 영역 동물 수술, 그리고 다양 한 두뇌 파생 된 셀 형식, 즉 이다, microglia 및 생리 적 및 병 적인 모두에서 뉴런 간의 상호 작용에 대 한 연구 없이 뇌 손상 후 시간 종속 프로세스의 모니터링 허용 조건입니다. 이 모델의 상반 된 측면 혈 및 면역 혈의 부재 이다. 신경 손상의 진행 하는 동안 혈액 재생 중요 한 역할에서에서 면역 세포를 마이그레이션. 그 셀은 조각에, 문화에 본질적인 프로세스 외부 간섭 없이 관찰 될 수 있습니다. 또한, OHSC에서 중간 외부 환경의 구성 정확 하 게 제어 됩니다. 이 방법의 더 이점은 표준 준비에 비해 희생된 동물의 낮은 수입니다. 몇몇 OHSC는 가능한 한 동물에서 여러 치료와 동시 연구를 만드는 하나의 동물에서 얻을 수 있습니다. 이러한 이유로, OHSC는 조직 손상 후 또는 종양 침공 기간 동안 새로운 보호 치료제의 효과 분석 하는 데 적합.
제시 하는 프로토콜 여기 매우 재현할 수 생성을 허용 하는 OHSC의 준비 방법에 설명 합니다, 그리고 잘 neuroprotection 또는 종양 침입 연구 처럼 실험적인 연구의 다양 한 사용할 수 있는 분할 영역을 보존.

Neuroprotection 연구: 신경 손상, PI 긍정적인 핵과 IB4 가 이랑 (DG)의 립 세포 층 (GCL)의 모든 3 광학 섹션에서 microglia 계산 했다 긍정적인의 수를 결정 합니다. 종양 내 습 실험, 스택의 최대 강도 z 프로젝션 계산 침략의 다른 침입 패턴 (그림 6)를 시각화 하는 측정으로 종양 세포에 의해 커버 된 지역에 대 한 사용 되었습니다.
치료 컨트롤 OHSC (CTL)에서 신경 잘 보존 되 남아 있었다. DG의 GCL에 거의 아무 PI 긍정적인 신경 핵 (그림 5A) 관찰 되었다. 분자 층에서 microglial 셀의 대부분 ramified 했다. 만 년 DG의 GCL에 거...

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화 (OHSC) 아주 잘 vivo에서 상황을 시뮬레이션 하는 체 외에서 모델을 나타냅니다. 여기 설명 vibratome 기반 소설 물질의 신경 가능성 또는 종양 세포의 생물학 행동 평가에 사용 하기 위해 고품질 슬라이스를 얻기 위해 프로토콜을 깔 끔 히 개선 합니다.

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 연구 Neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

진동 절편기(vibratome)를 이용한 준비 및 절편 제작. 절편 제작 과정 중 뇌를 고정하기 위해 3개의 아가르 블록이 필요합니다. 오염을 방지하기 위해 멸균 처리된(Autoclave) 기구 세트를 사용하십시오.한천(agar)을 제거합니다. 금속판에 의료용 시아노아크릴레이트 접착제로 접착하기 전, 거름종이 위에서 건조시켜야 합니다. 스패튤라를 사용하여 뇌를 제거한 후, 준비 배지가 채워진 페트리 접시에 조심스럽게 놓습니다.다음으로, 필터 페이퍼 위에서 뇌를 짧게 건조시킵니다. 금속 플레이트를 의료용 Cyanoacrylate 접착제로 덮습니다. 핀셋과 스패튤라를 사용하여 뇌를 시료 홀더 위에 배치합니다.이전에 준비한 두 조각의 한천(agar)을 사용하여 양측에서 기계적 안정성을 확보하십시오. 이때, 절편 제작 중 조직이 손상되는 것을 방지하기 위해 뇌를 한천 블록 옆에 배치하고 추가로 두 개의 블록으로 고정해야 합니다. 금속 플레이트를 바이브라톰(vibratome)에 넣고 조직을 차가운 전처리 배지로 덮으십시오.그 후, 슬라이딩 바이브라톰을 사용하여 조직을 350 micrometers 두께의 OHSC로 수평 절편합니다. 부러진 파스퇴르 피펫의 뒷부분을 사용하여 절편을 수집하고 페트리 접시로 옮깁니다. 뇌 절편은 냉각된 준비 배지에 보관합니다.쌍안 현미경으로 절편을 광학적으로 평가합니다. 15번 원형 칼날이 장착된 메스로 해마 부위를 분리하고 내측 피질로 진입합니다. 등쪽 해마와 배쪽 해마 사이의 해마 중간 부분에서 분리된, 세포구조가 온전한 절편만을 취하는 것이 중요합니다.품질이 낮은 OHSC는 즉시 폐기해야 합니다. 얻은 절편 중 2~3개를 공극 크기가 0.4 µm인 세포 배양 인서트로 옮깁니다. 파스퇴르 피펫을 사용하여 세포 배양 인서트 상단의 준비 배지를 흡입하여 제거합니다.웰당 1 mL의 배지가 들어 있는 6-웰 배양 접시에 인서트를 넣습니다. 6-웰 접시를 5% CO2가 포함된 완전 가습 분위기의 35 °C에서 배양하고 이틀마다 세포 배양 배지를 교체합니다. 랫드 조직의 경우 6일, 마우스 조직의 경우 14일 동안 배양하면 슬라이싱 절차 자체와 관련된 염증 반응이 사라집니다.이제 실험을 수행할 수 있습니다. 신경 보호 연구의 대표적인 결과입니다. 이미지 A 부분은 아무런 처리 없이 9일 동안 시험관 내 배양액에 유지하여 대조군 슬라이스로 사용한 병변이 없는 OHSC를 보여줍니다.공초점 레이저 주사 현미경으로 확인한 결과, 대조군 OHSC는 양호한 신경세포 보존 상태를 보였습니다. Isolectin B4 양성 미세아교세포는 주로 분자층과 망상층에 위치하며 분지형 표현형을 나타냈습니다. 치상회의 과립세포층에서는 Isolectin B4 양성 미세아교세포가 매우 적게 발견되었으며, Propidium Iodide 양성 핵은 거의 발견되지 않았습니다.이미지 B 부분에 나타난 또 다른 OHSC 세트는 6일 동안 배양액에서 유지되었으며, 50 µM NMDA로 4시간 동안 손상을 유도했습니다. 그 후 3일 동안 다시 배양액에서 유지했습니다. NMDA 손상 후, 활성화된 Isolectin B4 양성 미세아교세포가 치상회(dentate gyrus)의 모든 층에 걸쳐 신경 손상 부위에 대량으로 축적되어 부착되었습니다.정량 분석 결과, 치상회 과립세포층에서 Isolectin B4 양성 미세아교세포의 수가 대조군 조건에 비해 손상된 OHSC에서 더 높게 나타났습니다. 이와 유사하게, NMDA로 손상된 절편의 과립세포층에서는 Propidium Iodide 양성 퇴행성 뉴런의 수가 크게 증가했습니다. 종양 침습 연구의 샘플 결과입니다.모든 이미지는 공초점 레이저 주사 현미경으로 촬영한 OHSC를 이용한 종양 침습 SS의 결과를 나타냅니다. 빨간색은 OHSC의 세포 구조를, 녹색은 종양 세포를 표시합니다. 이미지 A는 4일 동안 침습시킨 U138 교모세포종 세포의 전형적인 침습 패턴을 보여줍니다.뚜렷하고 구형이며 구분이 가능한 종양들이 관찰되며, 치상회(dentate gyrus)와 암몬각(Cornu Ammonis)이 명확하게 보여 OHSC 구조가 온전한 것으로 보입니다. 이미지 B는 4일 후 LN229 교모세포종 세포에 의해 생성된 다른 침습 패턴을 보여줍니다. 이 경우, 세포 구조는 변형되지 않은 치상회와 암몬각을 유지하며 온전하게 남아 있음에도 불구하고, OHSC의 대부분을 덮고 있는 네트워크가 형성되어 개별 종양을 명확하게 구분할 수 없습니다.또한 LN229 세포가 U138 세포보다 더 침습적이라는 결론을 내릴 수 있습니다. 이미지 C와 D는 4일간의 침습 후 LN229 세포의 동일한 종양 침습 결과를 보여줍니다. 왼쪽에서는 종양 덩어리가 거의 전체 시야를 덮고 있는 것을 관찰할 수 있습니다.이미지 D는 이에 상응하는 Propidium Iodide 염색 결과를 보여줍니다. 이 슬라이드에서는 Cornu Ammonis가 더 이상 보이지 않고 dentate gyrus 또한 왜곡되어 있어 세포 구조가 더 이상 온전하지 않습니다. 이러한 결과의 가능한 원인으로는 실험 시작 당시 OHSC가 완전히 온전하지 않았거나, 너무 많은 수의 종양 세포를 적용했거나, 또는 침습 시간이 너무 길어 관찰된 구조적 손실이 발생했을 수 있습니다.따라서 이러한 종류의 침범 결과는 폐기해야 합니다. 기관형 해마 슬라이스 배양은 온전한 신경 연결을 통해 뇌의 생리를 반영하는 매우 우수한 in vitro 모델입니다. 하나의 모델로서 여러 개의 슬라이스 배양물을 얻을 수 있으므로, 한 마리의 동물 조직에서 여러 조건을 테스트할 수 있으며 결과의 재현성이 매우 높습니다.접근성이 매우 높기 때문에, 유기체형 해마 슬라이스 배양은 다양한 유형의 실험에 매우 적합합니다. 여기에는 전기생리학 및 신경발생 연구뿐만 아니라, 신경 보호, 종양 침습, 그리고 종양 세포와 건강한 뇌 조직 간의 상호작용에 관한 실험들이 포함됩니다.

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Neuroscience

신경과학

organoptypic hippocampal 슬라이스 문화...

의 연결을 부상을 검사에 대한 Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 모델

우리는 쉽게 다른 뇌 영역 적용할 수 있습니다 organotypic hippocampal 조각을 준비하는 방법을 설명합니다. 뇌 조각이 인터페이스를 형성하기 위해 허용되는 구멍이 세포막과 문화 미디어에 누워있다. 이 방법은 최대 문화에 이주하는 해마의 매출 구조를 유지합니다.

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화

이 비디오는 3D 공동 문화 시스템의 개발을 보여줍니다. 쥐의 뇌 절편을 막에 놓고 형광 표지된 인간 뇌종양 세포가 그 위에서 자랄 수 있도록 합니다. 시스템이 준비되면 이미징을 위해 염색됩니다.

Organotypic Slice 공동 배양 모델에서 뇌종양 확립

이 비디오는 교모세포종 조직에서 유기형 절편 배양의 생성 및 유지를 보여줍니다. 분리된 조직은 아가로스 매트릭스에 내장되고 얇은 절편은 비브라톰을 사용하여 얻습니다. 그런 다음 이러한 절편을 마이크로플레이트 내의 투과성 멤브레인 삽입물에 놓고 장기 유지 관리를 위해 슬라이스 배양 유지 매체에서 배양합니다.

인간 교모세포종 조직으로부터 Slice 배양 생성 및 유지

암 세포와 뇌의 Organotypic 슬라이스 공 배양은 뇌 조직의 암 세포 침략의 과정에서 형광뿐만 아니라 시야 (비디오) 현미경으로 형태 학적 변화를 시각화 할 수 있습니다. 이 모델 시스템은 전지 교환 및 보충 접근이 가능하며 조작 및 분석의 다양한 제공합니다.

뇌의 Organotypic 슬라이스와 암 세포의 3 차원 회전 타원체와 공 배양 시스템

허혈성 뇌 손상의 여러 측면을 재생할 수 있습니다 entorhino - 해마의 Organotypic 슬라이스 문화에 대한 프로토콜은 제공됩니다. 신경 세포의 변화에​​ 더하여 neurovasculature의 변화를 연구함으로써,이 프로토콜은 손상 후 신경 조직 플라스틱 변화를 연구하는 다양한 도구입니다.

에서 신경 혈관 리모델링의 분석 Entorhino - 해마 Organotypic 슬라이스 문화

여기에서 우리는 Organotypic 슬라이스 문화 기술을 사용하여 해마 출생 후 신경 세포를 연구하는 기술에 대해 설명합니다. 이 방법은 성인 신경의 체외에서 조작이 가능하며 배양 된 해마되는 약물의 직접 적용이 가능합니다.

출생 후 신경 발생의 연구 Organotypic 슬라이스 문화

많은 유형의 인간 뇌종양은 뇌 내의 특정 영역에 국한되어 있으며 배양에서 성장하기 어렵습니다. 이 프로토콜은 종양 미세환경의 역할을 다루고 유기형 마우스 뇌 절편에서 자라는 형광 원발성 뇌종양 세포를 분석하여 신약 치료를 조사합니다.

약물 치료를 종양 미세 환경을 공부하고 대상에 대한 뇌종양 / Organotypic 슬라이스 공동 문화 시스템

glioblastoma (GBM)의 현재 ex vivo 모델은 생리 학적으로 인간 종양 침습 연구에 최적화되어 있지 않습니다. 여기, 우리는 신선한 인간 GBM 조직에서 organotypic 슬라이스 문화의 생성 및 유지를위한 프로토콜을 제시한다. 시간 경과 현미경 및 정량 세포 이동 분석 기술에 대한 설명이 제공됩니다.

종양 세포 이동 연구를위한 인간 Glioblastoma Organotypic Slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과

여기에서, 우리는 라인 피질-해마 organotypic 조각의 준비를 설명합니다. 혈청의 점진적이고 통제된 박탈에서, 이 조각은 진화하는 간질 같이 사건을 묘사하고 간질 발생의 전 생체 권 모형으로 간주될 수 있습니다. 이 시스템은 자발적인 활동의 역학을 모니터링뿐만 아니라 간질 발생 과정을 통해 신경 염증 기능의 진행을 평가하기위한 훌륭한 도구를 나타냅니다.

라인 피질-해마 오르가노티픽 슬라이스 배양에서 간질 발생의 모델

우리는 유기형 뇌 슬라이스 모델에서 유방암 뇌 전이성 세포의 실시간 약물 및 방사선 반응을 측정하기위한 프로토콜을 소개합니다. 상기 방법은 뇌 미세환경 계면 내에서 생체외 방식으로 유방암으로부터의 뇌 전이에 대한 다양한 치료법의 치료 효과를 조사하기 위한 정량적 검정을 제공한다.

유방암 뇌 전이성 종양 성장을 연구하고 표적으로 삼는 Ex Vivo 뇌 슬라이스 모델

배우세요 바이브라톰을 이용한 해마 오가노타이픽 슬라이스 배양 기법으로 신경보호 및 종양 세포 침입을 연구하는 방법입니다. 이 프로토콜은 고품질 뇌 조각을 제작하여 다양한 실험에 활용할 수 있습니다.

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 연구 Neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로

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