Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Mia J. Smith; Thomas A. Packard; Shannon K. O'Neill; Rochelle M. Hinman; Marynette Rihanek; Peter A. Gottlieb; John C. Cambier

doi:10.3791/55382

표현형 및 기능 분석에 대한 검색 및 희귀의 농축 항원 특이 적 B 세포

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Immunology and Infection

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Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

표현형 및 기능 분석에 대한 검색 및 희귀의 농축 항원 특이 적 B 세포

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09:25 min

February 16, 2017

DOI: 10.3791/55382-v

Mia J. Smith^1,2, Thomas A. Packard¹, Shannon K. O'Neill¹, Rochelle M. Hinman¹, Marynette Rihanek³, Peter A. Gottlieb³, John C. Cambier^1,4

¹Department of Immunology and Microbiology,University of Colorado School of Medicine, ²Department of Microbiology, Immunology, and Pathology,Colorado State University, ³Barbara Davis Center for Childhood Diabetes,University of Colorado School of Medicine, ⁴Department of Biomedical Research,National Jewish Health

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

기능 및 표현형 분석 항원 반응성 B 세포를 검출하고 풍부 자성 나노 입자를 이용한 간단하면서도 효과적인 방법을 설명한다.

이 간단하면서도 효과적인 절차의 전반적인 목표는 표현형 및 기능 분석을 위해 자성 나노 입자를 사용하여 인간 말초 혈액에서 희귀 항원 결합 B 세포를 분리하고 농축하는 것입니다. 이 방법은 생체 내 항원 만남 전후에 희귀 항원 결합 B 세포의 표현형 및 생물학에 관한 면역학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 특히 스티렌 플레이트나 큰 비드를 사용할 때 형상과 관련된 문제를 없애준다는 것입니다.

또한 상당히 큰 시작 세포 집단에서 희귀 세포를 분리하기 위해 유세포 분석으로 세포를 분리할 때 유속과 관련된 문제를 제거합니다. 30-50ml의 전혈을 헤파린 처리된 채혈 튜브에 모은 직후, 혈액을 멸균된 실온의 마그네슘 및 칼슘이 없는 PBS와 1:1 비율로 혼합합니다. 다음으로, 느리고 일정한 피펫 트리거 압력을 사용하여 멸균 50ml 원추형 튜브에 있는 10ml의 실온 밀도 구배 용액에 혈액 혼합물을 층을 이룹니다.

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