Name: 96 웰 플레이트에 세포 마이그레이션 / 상처 치유를 수행하기위한 장치 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: 배우세요 96웰 플레이트에서 기계식 세포 상처 도구를 이용한 반고속 세포 마이그레이션 분석법입니다. 이 방법은 암 및 피부 연구에서 다양한 처리 조건의 효과를 신속하고 경제적으로 정량화할 수 있습니다.

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저자는이 wounder의 프로토 타입을 만드는 씨 탐 포 렁 씨 웡 치 킨과 기술 능력에 대한 과학 학부 워크샵의 기술 직원, 홍콩 침례 대학과 조언을 감사의 말씀을 전합니다.

Wounder의 부품 1. 소개 (그림 1) <ol><li> 동일한 거리에있는 상처 핀을 고정하여 핀 홀더를 준비합니다. 피펫 팁을 잡고 위아래로 조절 상처 핀을 이동하여 팁 높이를 조정합니다. </li><li> 96- 웰 배양 플레이트의 다른 브랜드의 조절, 안내 막대를 장착하고 상처 면적이 고정 된 위치에있을 것을 보장한다. </li><li> 육각 나사를 조여 조정 상처 핀을 고정합니다. 양단에 육각 소켓 헤드 캡을 조여 위치에 안내 바 수정. </li></ol> 2. 핀 홀더의 폭을 설정한다 (그림 2) <ol><li> M5의 육각 렌치 육각 소켓 헤드 캡을 풉니 다. </li><li> 가이드 바 96 웰 배양 플레이트의 폭 딱 맞도록 상기 핀 홀더의 양측에 고리를 조절하는 적절한 번호를 삽입한다. 참고 : 코닝과 이와키 플레이트가 큰 반지 1 쌍의 작은 반지 1 쌍을 필요로한다. 팔콘과 눈크 (PL)ATES 큰 반지 1 쌍을 필요로한다. </li><li> 육각 소켓 헤드를 체결하면 안내 막대를 해결하기 위해 모자. </li></ol> 3. 안내 바 조정 (그림 3) <ol><li> 멸균 10 μL 플라스틱 피펫 팁으로 부상 핀을 맞 춥니 다. </li><li> M5의 육각 렌치 육각 소켓 헤드 캡을 풉니 다. </li><li> wounder를 잡고 96- 웰 배양 플레이트의 한 컬럼에 상처 핀에 담갔다. </li><li> 간신히 우물의 바닥을 터치 팁의 모든 때까지 안내 바의 높이를 조정합니다. </li><li> 육각 소켓 헤드 캡을 조입니다. wounder 이제 완벽하게 배양 접시에와 핀이 우물의 중간에 잘 배치되어 있는지에 맞는지 확인합니다. </li></ol> 핀 4. 교정 <ol><li> 평면 멸균면 (즉, 페트리 접시)에 수직 wounder를 잡고 M3 육각 렌치로 모든 육각 나사를 풉니 다. </li><li> 균등하게 평면 멸균 표면을 만지지 팁의 모든 때까지 wounder을 누릅니다. &lt;/ 리&gt; <li> 위치에 핀을 고정 다시 육각 나사를 조입니다. </li><li> 평면 멸균 표면에 부드럽게 wounder을 눌러 각 팁의 균일 성을 확인합니다. </li></ol> 5. 긁는 셀 단일 플라이 (그림 4) <ol><li> 0.1 % 젤라틴 - 코팅 된 96- 웰 세포 배양 플레이트에 시드 인간 제대 혈관 내피 세포. 매체 (199)의 배양 세포는 20 % 열 - 불 활성화 소 태아 혈청, 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신 및 0.09 g / L의 헤파린 보충. 밤새 사용하기 전에 37 ºC에서 5 % 이산화탄소 가습 배양기에서 세포를 유지한다. 세포는 상처 전에 100 % 포화 상태에 도달한다. </li><li> 가장 왼쪽 (또는 오른쪽) 문화 판의 같은 열에서 각 웰의 측면의 상처 팁을 놓습니다. 우물의 반대편에 걸쳐 wounder를 밀어; 상처 팁 잘 하단을 터치 있는지 확인합니다. </li><li> 모든 열에 대한 긁힘 (단계 5.2) 반복합니다. </li><li> , 폐기 t 상처 후그는 중간 각 잘 신선한 매체를 포함하는 시험 화합물로 대체합니다. </li></ol> 6. 데이터 수집 및 이미지 분석 <ol><li> 디지털 카메라 이미지 (예 10X 대물 렌즈)와 저전력 현미경을 사용하여 세포 단층에서 기계적 상처와 전체 웰 즉시 (t = 0 시간)을 상처 후. </li><li> 원하는 경우, 시험 화합물을 첨가하고 원하는 시간 동안 배양. 이미지 원하는 배양 시간 (t = ΔH) 후 다시 상처 면적 전체도. </li><li> 이러한 ImageJ에 같은 영상 분석 소프트웨어 (사용 <a href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> )은 자유형 도구를 사용하여 이미지의 상처 면적을 측정한다. </li><li> 상처 봉합의 비율을 계산한다 : <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/55411/55411eq1.jpg" /></li></ol>

<ol><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li>
<li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prespecification+and+plasticity%3A+shifting+mechanisms+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li>
<li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li>
<li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A. Jr, Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration%3A+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li>
<li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound%3A+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980(2015).</li>
<li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparsion+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li>
<li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration%2F+wound+healing+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li>
<li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg%281%29+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li>
<li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

우리의 세포 wounder는 기존의 세포 이동 분석의 문제를 해결하는 몇 가지 독특한 기능을 가지고 있습니다. 8 채널 기계적 셀 wounder은 고압 증기 멸균에 의해 멸균 될 수있는 긴 수명과 높은 등급의 스테인레스 (스틸 304)로 이루어진다. 시판 96- 웰 배양 판의 거의 모든 상업용 브랜드 때문에 조정 안내 막대이 기계적 세포 wounder 함께 사용될 수있다. 조정 안내 바의 설계는 찰 영역을 각 웰의 중앙에있는 것을 보장한다. 웰의 중심 위치에 상처를 현미경을 이용하여 촬상을 용이하게 할 수있다. 상이한 시점에서 촬영하면서 화상을 일부 변형을 가지고, 그러나 웰 영역의 약 90 %가 낮은 배율의 대물 렌즈 (예 : 10 배)을 현미경으로 볼 수 있기 때문에, 이들은 데이터를 분석에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 세미 높은 처리량 분석은 96 웰 배양 판 (7) &lt;수행 될 수있다SUP 클래스 = &quot;외부 참조&quot;&g...

세포 이동은 배아 발생, 신경, 혈관 신생, 창상 치유, 점막 수리, 정상적인 발달 및 질병 상태 하에서 1 상피 간엽 - 천이 같은 세포 과정에서 중요한 역할을한다. 이것은 시그널링 분자 상호 작용, 세포 편광 세포 골격 재구성 매트릭스 리모델링 막 돌기 동적 세포 - 세포 부착 2 변조 등 다양한 인터페이스 및 세포 내 사건의 조정을 포함하는 복잡한 과정이다. 세포 이동을 연구함으로써, 세포 이동과 관련된 생화학 적 경로를 선도 화학 또는 생체 분자의 발견 및 확인을 결정할 수있다. 이러한 기본적인 공정은 이러한 질병 치료 약물 표적 같은 다양한 애플리케이션을위한 프록시로서 유리하게 사용될 수있다. 상처 분석법은 세포 이동 분석 (3)의 하나이다. 여기서,셀들의 각각의 샘플은 부분적으로 셀 영역을 덮는 마이그레이션하는 무 결함 영역을 생성하기 위해 기계적인 방법에 의해 제거 될 것이다. 특정 시점에서 회수의 비율을 모니터링한다. 샘플의 많은 수를 처리 할 때, 이러한 샘플 내에서 실험 비용 및 교차 오염 등의 문제가 문제가 될 수 있습니다. 많은 상용 도구와 분석은 세포 이동 4, 5, 6을 연구 할 수 있지만, 그들 중 많은 사람들이 비싸고 복잡한 장비가 필요하고 개선이 여전히 필요하다. 이러한 이유로, 8 채널 기계적 셀 wounder (도 1)가 개발되고있다. 우리 8 채널 기계적 셀 wounder은 상술 한 문제점을 해결하기에 몇몇의 고유 특징을 포함하고있다. 이것은 96- 웰 배양 플레이트 형식으로 분석 부상 / 세포 이동을 수행 할 수있는 유연성을 제공한다. 조정 번지iding 바 설계는 스크래치 영역을 각 웰의 중앙에 위치되는 것을 보장한다. wounder는 배양 접시의 다양한 브랜드에 적용되도록 또한, 가이드 바의 높이를 조정할 수있다. 마지막으로, 상처 조절 핀 디자인과 동시에 재현성 상처 (7, 8)을 달성하기 위해 배양 접시 표면과 피펫 팁의 짝수 접촉 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>96-웰 세포 배양 플레이트</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>다른 브랜드의 96-웰 세포 배양 플레이트도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>P10 피펫 팁</td><td>Axygen</td><td>301-03-051</td><td>짧은 P10 피펫 팁은 명확한 상처를 만들기 더 쉽습니다</td></tr><tr><td>Wounder</td><td>R& P Technology Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td>인간 배꼽 정맥 내피 세포의 세포 배양을 위해. 다른 유형의 세포에 적절한 배양 배지 및 컨디셔닝을 사용하십시오.</td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td>인간 제대 정맥 내피 세포의 세포 배양용. 다른 유형의 세포에 적절한 배양 배지 및 컨디셔닝을 사용합니다.</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>인간 제대 정맥 내피 세포의 세포 배양용. 다른 유형의 세포에 적합한 배양 배지 및 컨디셔닝을 사용합니다.</td></tr><tr><td>돼지 장 점막에서 추출한 헤파린 나트륨 염</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>인간 제대 정맥 내피 세포의 세포 배양용. 다른 유형의 세포에 적합한 배양 배지 및 컨디셔닝을 사용합니다.</td></tr><tr><td>소 피부의 젤라틴</td><td>Sigma</td><td>G9391</td><td>인간 배꼽 정맥 내피 세포의 세포 배양용. 다른 유형의 세포에 적절한 배양 배지 및 컨디셔닝을 사용합니다.</td></tr></tbody></table>

96 웰 플레이트에 세포 마이그레이션 / 상처 치유를 수행하기위한 장치

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

셀 마이그레이션 / 분석 부상은 세포 이동 및 혈관 신생 및 종양 전이 등의 생물학적 과정을 공부하기 위해 일반적으로 사용되는 방법이다. 이 분석에서, 세포가 합류 단층을 형성하기 위해 재배 및 기계적 상처는 장치와 긁힘에 의해 생성된다. 다음에 무 결함 영역을 향해 세포의 이동 속도는 촬상에 의해 모니터링 될 수있다. 우리 8 채널 기계적 wounder은 세포 이동 분석법과 관련된 대부분의 문제를 해결하도록 설계된다. 첫째, 우리의 wounder 쉽게 고압 증기 멸균 또는 일반적인 소독제로 살균 할 수있다. 둘째, 개별 조절 핀도 선명하고 재현성 상처가 생성 될 수 있도록, 세포 배양 플레이트에 접촉 허용한다. 셋째, wounder 양측의 안내 바는 각각의 웰에서 일관된 상처 위치를 보장한다. 더 wounder의 더 나은 핸들링을 제공 할뿐만 아니라 크로스 contaminat을 최소화하기 위해 부상에 대한 일회용 플라스틱 피펫 팁의 사용이온. 결론적으로, 우리 셀 wounder은 표준 96 웰 배양 접시를 사용하여 세포 이동 분석을 수행하기위한 사용자 친화적이고 재생 가능한 장치 연구를 제공 할 수있다.

이 8 채널 기계적 wounder은 세포 이동 분석을 수행하기 위해 세포 단층을 긁어 구성된다. 그것은 특별한 교육을받지 않은 분 안에 96 웰 플레이트 세포 긁힘 분석을 수행 할 수있는 사용자 친화적 인 장치입니다. 이 wounder 약 600 ㎛의 균일 한 폭과 날카로운 가장자리 세포 단층에 감긴 영역을 도입 할 수있다 (도 5 및도 6). 상처의 폭은 피펫 팁의 브랜드 및 사용자의 성능에 의존한다. 권취 폭의 범위는 일반적인 이미지 저전력 배율 하에서 촬상 (도 7)에 적합하다. 이미지를 캡쳐 한 후, 상처 봉합의 비율은 계산 될 수있다. 이 셀 wounder은 세포 이동 분석법에 발생하는 문제를 해결하는 다른 전략을 포함하고있다. 또한, 다양한 96- 웰 배양 PL에서 세포 이동 분석을 수행하는 유연성을 제공한다형식을 먹었다. <p class="jove_conten...

여기서, 우리는 96 웰 세포 배양 접시에 반 처리량 세포 이동 분석을 수행 할 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 셀 단층에 일관성 스크래치 상처를 만들 수있는, 빠르고 간단하고 경제적 인 방법이다.

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

이 8채널 기계식 세포 상처 형성 장치의 전반적인 목적은 고가의 복잡한 장비 없이 신속하고 준고처리량(semi-high throughput) 방식으로 상처 치유 분석(wound-healing assay)을 이용하여 처리가 세포 이동에 미치는 영향을 정량화하는 것입니다. 세포 이동은 다양한 생리적 및 강력한 생리적 조건에서 중요한 세포 프로세스입니다. 인 비트로(In vitro) 상처 치유 분석은 암, 혈관 및 피부 과학 연구를 포함한 다양한 연구에 활용됩니다.이 방법의 주요 장점은 96-웰 플레이트 상에서 세포 이동의 영향을 모니터링할 수 있어, 서로 다른 처리 조건을 동시에 관찰할 수 있다는 점입니다. 실험 절차는 저희 실험실의 대학원생인 Ka Chun Ng이 시연하겠습니다. 실험을 시작하기 위해, 상처 유도 핀을 일정한 간격으로 고정하여 핀 홀더를 준비하십시오.피펫 팁을 잡고 조절 가능한 손상 핀을 위아래로 움직여 팁 높이를 조절합니다. 다음으로, 96-well 배양 플레이트의 서로 다른 브랜드 위에 조절 가능한 가이드 바를 맞추고 손상 부위가 고정된 위치에 있는지 확인합니다. 육각 나사를 조여 조절 가능한 손상 핀을 고정합니다.양 끝의 육각 소켓 헤드 캡을 조여 가이딩 바를 위치에 고정합니다. M5 육각 렌치를 사용하여 육각 소켓 헤드 캡을 풉니다. 가이딩 바가 96-웰 배양 플레이트의 너비와 정확히 맞도록 핀 홀더 양쪽에 적절한 개수의 조정 링을 삽입합니다.그 다음, 육각 소켓 헤드 캡을 조여 가이드 바를 고정합니다. 멸균된 10-microliter 플라스틱 피펫 팁을 권선 핀에 끼워 가이드 바 조정을 시작합니다. 이어서, M5 육각 렌치로 육각 소켓 헤드 캡을 풉니다.운더(wounder)를 잡고 상처 유발 핀을 96-well 배양 플레이트의 한 열에 담급니다. 그 다음, 모든 팁이 웰 바닥에 겨우 닿을 때까지 가이드 바의 높이를 조절합니다. 육각 소켓 헤드 캡을 조여 고정합니다.상처 유도 장치(wounder)가 이제 배양 플레이트에 완벽하게 맞고 핀들이 웰 중앙에 잘 위치했는지 확인하십시오. 페트리 접시와 같이 평평하고 멸균된 표면에 상처 유도 장치를 수직으로 세우고 M3 육각 렌치로 모든 육각 나사를 푸십시오. 모든 팁이 표면에 고르게 닿을 때까지 상처 유도 장치를 가볍게 두드리십시오.팁들이 표면에 고르게 닿으면, 육각 나사를 다시 조여 핀들을 제자리에 고정합니다. 그런 다음 윈더(wounder)를 평평하고 멸균된 표면에 가볍게 두드려 각 팁의 균일성을 확인합니다. 0.1% 젤라틴이 코팅된 96-웰 세포 배양 플레이트에 인간 제대 정맥 내피 세포(human umbilical vascular endothelial cells)를 파종합니다.20% 열불활성화 태아 송아지 혈청, 1% penicillin streptomycin 및 리터당 0.09g의 heparin이 첨가된 medium 199에서 세포를 배양하십시오. 사용 전 37°C, 5% 이산화탄소가 공급되는 습윤 인큐베이터에서 하룻밤 동안 세포를 유지하십시오. 세포의 합쳐짐(confluency)이 100%가 되면, 배양 플레이트의 동일한 열에 있는 각 웰의 가장 왼쪽 지점에 wounding tip을 배치하십시오.운더(wounder)를 웰의 반대편으로 밀어 이동시킵니다. 이때 운더의 팁이 웰 바닥에 닿아 있는지 확인하십시오. 세포 단층의 모든 웰에서 상처가 중심에 위치하고 동일한 방향으로 생성되도록, 운더를 웰의 한쪽 끝에서 다른 쪽 끝까지 가로질러 흔들어 줍니다.모든 컬럼에 대해 스크래칭을 반복합니다. 상처를 낸 후, 각 웰의 배지를 제거하고 테스트 화합물이 포함된 새 배지로 교체합니다. 그런 다음 데이터 획득 및 이미지 분석 단계로 넘어갑니다.스크래칭 직후 웰의 행과 열을 촬영한 대표 이미지를 통해 각 상처의 너비를 정량적으로 분석할 수 있습니다. 상처 이미지는 인간 제대 정맥 내피 세포와 인간 진피 섬유아세포에서 얻었습니다. 점선은 상처 영역을 나타내며 실선은 세포 이동 영역을 나타냅니다.이 영상을 시청하신 후에는, 96-웰 플레이트에서 세미-고처리량(semi-high throughput) 방식으로 상처 치유 분석(wound-healing assay)을 수행하기 위해 이 장치를 사용하는 방법과, 상처 유도기(wounder)를 통해 모든 웰에 스크래치가 확실히 생성되도록 하는 방법에 대해 충분히 이해하시게 될 것입니다.

a-device-for-performing-cell-migrationwound-healing-in-a-96-well-plate

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

일반적으로 사용되는 체외에서 세포의 이동 및 침윤을 조사하기위한 고도의 접근 방법이 설명되어 있습니다. 첫 번째 방법은 세포 운동성을 측정하는 세포 상처 폐쇄 분석이다. 두 번째 방법은 화성과 세포의 침략적인 능력을 평가하는 트랜스 웰 마이그레이션 및 침입 분석이다.

체외 세포 이동 및 내습 분석 실험에서

MRP4는 세포 이동에 최근에 밝혀 역할 등 다양한 주기적 뉴클레오티드 종속 신호 이벤트를 조절한다. 우리는 섬유 아세포 이전의 미세 조정 조절에 중요​​한 역할을 고유 MRP4의 상호 작용 체의 식별 결과 MRP4의 하류 분자 표적을 해명하기 위해 직접하지만, 다각적 인 접근 방법을 설명합니다.

방법은 섬유 아세포 마이그레이션의 규정에 Mrp4 함유 Macromolecular의 단지를 공부하기

이 프로토콜의 목표 3 차원 섬유 소 매트릭스 내에서 셀 마이그레이션에 프로 및 안티 migratory 요인의 효과 평가 하는 것입니다.

환경 상처 3 차원 생체 외에서 내 셀 마이그레이션 특성화

이 연구 보고서의 세포 침입과 마이그레이션 분석에 대 한 두 가지 방법: Boyden 챔버 분석 결과 및 체 외에서 비디오 현미경-기반 상처 치유 분석 결과. 이 두 실험에 대 한 프로토콜 설명, 그리고 그들의 장점과 단점 비교 됩니다.

셀 침공 및 마이그레이션 프로세스의 평가: 비디오 현미경-기반 스크래치의 비교 분석 결과 및 Boyden 챔버 분석 결과 상처

이 원고 방법 절 개 같은 병 변 배양된 상피 세포 monolayers에 편리 하 게 모델 치료 생체 외에서이미징 confocal 의해 상처 또는 레이저 스캔 현미경, 고는 높은 품질을 제공할 수 있습니다. 공부 셀 동작 및 마이그레이션에 관련 된 메커니즘에 대 한 양적 및 질적 데이터입니다.

현미경 기반 방법을 생체 외에서 상처 치유 중 상피 세포 이동의 평가 대 한

여기, 선물이 기관지 상피 세포의 마이그레이션에 펩 티 드의 효과 평가 하는 프로토콜. 이 메서드는 셀 마이그레이션 및 상처 폐쇄의 속도에 양적 데이터의 신속 하 고 재현성 높은 획득에 대 한 수 있습니다.

상처 치유 분석 결과 셀 마이그레이션 평가 하는 새로운 체 외에

현재 프로토콜 암 세포 마이그레이션 및 실시간으로 단일 플랫폼에서 침입을 조사 하 고, 세포 이동성 및 형태학 연구를 쉽게 재현할 수 및 시간 효율적인 옵션을 제공 하는 통합된 방법을 설명 합니다.

자동된 라이브 셀 이미징 사용 하 여 간단한 마이그레이션/침공 워크플로

여기서, 우리는 1차 섬유아세포를 이용한 시험관내 스크래치 분석및 마우스에서 의 피부 상처 치유 분석실험을 위한 프로토콜을 제시한다. 두 방법 모두 시험관 내 및 생체 내 상처 치유를 평가하는 간단한 방법입니다.

스크래치 마이그레이션 분석 및 등갈 피부 접기 챔버 에서 생체 외 및 상처 치유의 생체 내 분석

이 논문에서는 새로 설계된 3D 프린팅 인서트를 공동 배양 모델로 제시하고 내피 세포와 각질 세포 사이의 측분비 세포 간 통신 연구를 통해 검증합니다.

간단한 2D 및 3D 세포 배양이 가능하도록 설계된 혁신적인 3D 프린팅 인서트

상호 작용 경험 설계 및 사용자 요구 사항 분석의 통합을 통해 재현성, 신뢰성, 실용성, 세포 무결성 및 사용자 경험 측면에서 세포 상처 치유 분석을 향상시키는 혁신적인 세포 스크레이퍼를 소개합니다.

Cell Wound Healing Assay의 신뢰성을 개선하기 위해 안정적이고 재현 가능한 cell-free gaps를 자동으로 생성하는 도구

과립 하이드로겔 내부 및 계면으로의 3D 세포 이동에 대한 정량적 평가를 위한 프로토콜이 여기에 제시되어 있습니다.

Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

배우세요 96웰 플레이트에서 기계식 세포 상처 도구를 이용한 반고속 세포 마이그레이션 분석법입니다. 이 방법은 암 및 피부 연구에서 다양한 처리 조건의 효과를 신속하고 경제적으로 정량화할 수 있습니다.

96 웰 플레이트에 세포 마이그레이션 / 상처 치유를 수행하기위한 장치

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