아밀로이드 -β 및 타우 신경 병증의 유전자 변형 마우스 모델에서 자발적 교대, 새로운 대상 인식 및 사지 걸림의 평가

이 절차의 전반적인 목표는 유익한 효과를 가질 수 있는 화합물을 스크리닝하기 위해 표준화된 방식으로 알츠하이머병의 마우스 모델에서 흔히 발생하는 비정상적인 행동을 측정하는 것입니다. 이 방법은 알츠하이머병에 대한 전임상 약물 발견 분야의 주요 질문, 예를 들어 화합물이 효과적인지 또는 화합물이 어떻게 작용할 수 있는지와 같은 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 민감하고 구체적인 단계적 접근 방식을 사용하여 다양한 동작을 모니터링한다는 것입니다.

이 방법은 알츠하이머병에 대한 효과적인 치료법에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 전두측두엽 치매, 외상성 뇌 손상 또는 자폐증과 같은 치매 또는 인지 기능 장애의 다른 마우스 모델에도 적용할 수 있습니다. Y-maze를 사용하기 전에 무향 표백제 살균 물티슈로 철저히 청소하십시오. 그런 다음 70% 에탄올로 닦아내고 물로 헹굽니다.

미로를 달리는 쥐를 적절하게 추적할 수 있도록 데이터 수집 시스템 또는 비디오 카메라를 준비합니다. 이 과정에서 미로에 있는 측정 막대의 이미지를 기록하여 그들이 있는 거리를 보정하십시오. 이제 마우스 케이지를 미로에 가까운 테이블로 매우 부드럽게 옮깁니다.

케이지에서 마우스를 제거하고 중심을 향하는 Y-미로의 한쪽 팔에 부드럽게 놓습니다. 그런 다음 마우스가 당신을 볼 수 없을 만큼 미로에서 충분히 멀리 이동하고 즉시 비디오 녹화를 시작합니다. 10분 동안 마우스를 기록합니다.

10분 후 마우스를 부드럽게 제거하고 홈 케이지로 되돌립니다. 다음 마우스로 진행하기 전에 3단계 세척 절차를 사용하여 Y-미로를 다시 철저히 세척하십시오. 이 테스트에 앞서 Y-미로와 마찬가지로 열린 필드 경기장을 씻으십시오.

물체에 노출되기 하루 전에 쥐를 경기장에 습관화하십시오. 추적 시스템이 작동하는지 확인합니다. 그리고 이전과 같이 측정 스틱을 사용하여 거리를 보정합니다.

또한 태깅 소프트웨어에서 경기장의 모서리를 표시하십시오. 이제 쥐의 케이지를 경기장과 가까운 테이블에 부드럽게 놓습니다. 마우스를 제거하고 경기장 중앙에 부드럽게 놓습니다.

그런 다음 빠르게 녹음을 시작하고 마우스가 30 분 동안 경기장을 탐험 할 수 있도록합니다. 동물의 시야에서 벗어나 테스트 중에는 동물을 방해하지 마십시오. 습관화 세션이 끝나면 생쥐를 집 우리로 되돌립니다.

그리고 다음 마우스에 익숙해지기 전에 이전과 같이 경기장을 철저히 청소하십시오. 2-3시간 후 메모리 테스트의 샘플 단계를 실행합니다. 경기장 안에 두 개의 동일한 개체를 배치하여 경기장을 수정하고, 둘 다 한 벽에 균등하게 정렬합니다.

마운팅 퍼티로 물체를 제자리에 고정하십시오. 소프트웨어에서 두 개체의 위치와 경기장의 모서리를 기록합니다. 마우스를 제시하기 전에 평소와 같이 물체와 경기장을 씻으십시오.

습관화 세션과 같은 테스트를 수행하여 물체를 마주보고 있는 경기장에 마우스를 배치합니다. 이제 쥐가 15분 동안만 경기장을 탐험하도록 하십시오. 2-3시간 후, 기억력 테스트의 마지막 단계를 수행합니다.

이 세션에서는 익숙한 개체 하나를 동일한 위치에 유지하고 다른 친숙한 개체를 제거하여 새로 도입된 새로운 개체로 바꿉니다. 생쥐가 모든 각도에서 물체를 자유롭게 탐색할 수 있도록 벽과 물체 사이에 충분한 거리를 두십시오. 그리고 이전과 마찬가지로 퍼티로 물체를 고정하십시오.

연구의 모든 테스트 그룹에서 새롭고 친숙한 물체에 대한 위치의 균형을 유지해야 합니다. 다른 두 세션과 마찬가지로 마지막 세션을 수행하되 10분 동안만 마우스의 동작을 기록합니다. 사지 걸쇠는 피질 척수 기능의 결손을 정량화하는 기능적 운동 검사입니다.

이 테스트에서는 휴대용 장치를 사용하여 전체 세션을 비디오로 녹화합니다. 깨끗한 테이블 위에 가정용 케이지를 놓고 동물의 ID를 문서화하는 것으로 시작합니다.그런 다음 케이지에서 마우스를 부드럽게 제거하고 꼬리에 매달아 5-10초 동안 동물의 뒷발과 앞발 움직임에 비디오의 초점을 맞춥니다. 쥐가 탈출을 시도하지 않도록 다루려면 연습이 필요합니다.

최소 5초 분량의 비디오를 캡처한 후 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다. 그리고 케이지를 랙에 다시 넣습니다. 그런 다음 다음 마우스에서 절차를 반복하기 전에 테이블을 청소하십시오.

나중에 0에서 4까지의 척도로 비디오의 동작에 점수를 매깁니다. Y-maze 테스트를 사용하여 알츠하이머병과 유사한 병리학을 보이는 노화된 형질전환 마우스 계통에서 예상되는 자발적 교대 결함이 밝혀졌습니다. 대조적으로, 또 다른 알츠하이머 모델 마우스 라인은 라인의 극도의 과잉 행동과 고정 관념으로 인한 자발적 교대가 증가한 것을 보여주었습니다.

이러한 행동은 자발적인 교대의 측정을 크게 방해합니다. 새로운 물체 테스트에서는 습관화 중 과잉 행동 및 기타 고정 관념 행동을 평가할 수 있습니다. 표본 단계에서는 물체 편향이 없는 동물을 식별하기 위해 각 물체에 대한 탐사를 개별적으로 측정했습니다.

열린 원은 편견을 보이고 테스트 단계에서 제외된 동물을 보여줍니다. 테스트 단계는 세 가지 방법으로 분석되었습니다. 총 탐색 시간이 그룹 간에 비교되었을 때 각 물체의 원시 탐색 시간을 분석했습니다.

비교 그룹이 서로 다른 시간 동안 탐색했을 때 신규성 선호도 또는 차별 지수를 사용하여 테스트를 채점했습니다. 인지적 측정이 아닌 사지 움켜쥐기는 여러 형질전환 꼬리 마우스 모델에서 관찰되었습니다. 이러한 행동은 말기 알츠하이머병에서 관찰되는 기능적 운동 기능 결핍 중 일부를 요약합니다.

이 절차를 시도하는 동안 마우스를 부드럽게 다루고 큰 소음이나 새로운 냄새와 같은 테스트 환경의 방해를 최소화하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 화합물이 해마의 기능에 특이적으로 영향을 미치는지 여부와 같은 추가 질문에 답하기 위해 공간적 물 미로 또는 상황별 공포 조건화와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 Y-maze 테스트, 새로운 객체 인식 테스트 및 사지 clasping 테스트를 사용하여 알츠하이머병의 마우스 모델에서 화합물의 효능을 스크리닝하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.