CAPRRESI: Chimera Assembly by Plasmid Recovery and Restriction Enzyme Site Insertion

Orlando Santill&#225;n; Miguel A. Ram&#237;rez-Romero; Guillermo D&#225;vila

doi:10.3791/55526

카스트레 : 플라스미드 회수 및 제한 효소 부위 삽입에 의한 키메라 조립

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Biology

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CAPRRESI: Chimera Assembly by Plasmid Recovery and Restriction Enzyme Site Insertion

카스트레 : 플라스미드 회수 및 제한 효소 부위 삽입에 의한 키메라 조립

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07:37 min

June 25, 2017

DOI: 10.3791/55526-v

Orlando Santillán¹, Miguel A. Ramírez-Romero², Guillermo Dávila³

¹Centro de Ciencias Genómicas,Universidad Nacional Autónoma de México, ²Oncomedic Incorporation, Ciudad de México, ³Laboratorio Internacional de Investigación sobre el Genoma Humano,Universidad Nacional Autónoma de México

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기, 제한 효소 사이트를 동의어 DNA 시퀀스에 삽입 및 기능 플라스미드 복구를 기반으로하는 프로토콜 인 플라스미드 회수 및 제한 효소 사이트 삽입 (CAPRRESI)에 의한 키메라 어셈블리를 제시합니다. 이 프로토콜은 단백질 코딩 유전자 융합을위한 빠르고 저렴한 방법입니다.

이 비디오는 plasmid Recovery and Restriction Enzyme Site Insertion 또는 CAPRRESI에 의한 키메라 어셈블리라는 절차를 보여주며, 이 절차에서는 특정 제한 효소 부위를 동의어 DNA에 도입한 다음 DNA 염기서열을 절단하고 교환하여 두 개의 키메라 유전자를 생성합니다. CAPRRESI에서는 관심 야생형 유전자를 먼저 동일한 벡터의 여러 클로닝 부위에 삽입합니다. 다음으로, 동일한 아미노산 서열을 가진 각 유전자에 대한 절단 영역을 선택하고 암피실린 내성 유전자에 대한 절단 영역을 선택합니다.

Perl 스크립트는 각 중단 영역에 대한 제한 사이트를 포함하는 동의어 시퀀스를 결정하는 데 사용됩니다. 특별히 설계된 올리고를 사용하여 PCR을 수행하여 원하는 제한 효소 부위와 동의어 DNA를 포함하는 4개의 상보적인 부분을 생성합니다. 생성된 PCR 산물은 정제 및 분해된 다음 키메라 서열을 생성하도록 결찰됩니다.

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