Name: 클리닉 기반 생물 저장소의 설립 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: 배우세요 피부 종양 샘플을 수집하고 보관하는 임상 기반 생물 저장소 설립 방법을. Mohs 수술에서 폐기되는 조직을 활용하여 단백질 및 RNA 바이오마커 연구를 위한 고품질 샘플을 확보할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 중서부 대학 건강 과학 연구 촉진 기금, EEH 수여, Midwestern University Office of Research 및 후원 프로그램 교내 기금, KJL에게 수여되었습니다. Affiliated Laboratories 및 Affiliated Dermatology에서 추가 지원을 제공했습니다. 기술 지원을 위해 Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel 및 Ali Zaidi에게 감사드립니다.

인간 조직 샘플에 대한 모든 실험은 Western IRB (WIRB Protocol # 20142461)에 의해 승인되었습니다. 이 절차에 대한 조직 수집에 대한 단일 기준은 생검에서 입증 된 SCC 진단입니다. 원래의 IRB 프로토콜에는 제외 기준이 제시되어 있지 않았지만, 혈액으로 전염 된 질병이 알려진 환자의 샘플은 사용되지 않았습니다. 피부 조직, 혈액 및 타액을 수집하기 전에 사전 동의를 얻었습니다. 중서부 기관 검토위원회 (Midwestern Institutional Review Board)는 Midwestern University (AZ # 807)에서 진료소 기반의 생물 저장소 샘플을 사용한 검증 작업을 승인했습니다. 1. 피부 종양 조직 처리 참고 : 이것은 Mohs histotechnologist가 수행해야합니다. <ol><li> RNA 및 외과 적 배양을위한 새로운 편평 세포 암종 (SCC) 조직의 가공 <ol><li> 조직이 모스 외과 의사에 의해 절제 된 후, 10 ~ 50 mg (≥ 10 mm 3 </sup&gt;) 조직 샘플을 추가 처리하기 전에 이완하는 동안 조직의 꼭대기 쪽 중심에서 제거합니다 (이는 슬라이드에서 평평하게 놓일 수 있도록 조직을 조작하는 과정입니다). 참고 : 이것은 종양이 Mohs 절차의 일부인 조직 학적 평가 이전에 10-50 mg 크기의 샘플 (≥10 mm2)을 제거 할 수있을만큼 충분히 큰 경우에만 가능합니다. 종양의 크기가 최소 2mm 3 이 될만큼 크지 않은 경우 RNA 처리를 계속하지 마십시오 (5 단계 생략). </li><li> 핀셋을 사용하여 문화 매체 (DMEM의 1 : 1 혼합물 : 햄의 F - 12, 25 MM HEPES, 100 IU / ML 페니실린, 그리고 100 μg / ML streptomycin)가 포함 된 표시된 1.5 ML 튜브로 실행 가능한 조직을 전송하고 조직은 매체에 완전히 잠겨 있습니다. 추가 처리 전에이 튜브를 4 ° C에 보관하십시오. </li><li> RNA 분리 및 발현 분석을 위해 조직을 사용하십시오 (5 단계 참조) 및 / 또는24 시간 이내에 체외 이식편 배양 (단계 6 참조). </li><li> 환자 (1.1.1 단계)에서 제거한 종양 샘플의 나머지 부분을 저온 유지 장치 홀더 (또는 &quot;척&quot;) 위에 놓습니다. 모스 조직학의 완성과 실험 분석을위한 추가 histological 슬라이드의 준비를 허용하기 위해 최적 절단 온도 (OCT) 화합물에 조직을 포함, 홀더 내의 조직을 동결. </li></ol></li><li> 조직 슬라이드의 준비 <ol><li> 저온 유지 장치를 사용하여 7 μm 두께의 조직 섹션을 잘라내 각 종양 샘플에 대해 두 개 (또는 그 이상)의 슬라이드를 만듭니다. 각 슬라이드에는 전체 종양의 섹션이 최대 3 개까지 포함되도록하십시오. 참고 : 두 개의 슬라이드 중 하나는 Mohs histotechnologist가 H &amp; E로 염색하고 추가 슬라이드는 IF, IHC 또는 FISH 분석으로 처리 할 수 ​​있습니다. </li><li> 조직을 고정하기 위해 아세톤에 슬라이드를 1-2 초 동안 놓습니다. 이 슬라이드를 건조 상태로 두십시오. H &amp; E하지 마라.실험 프로토콜에 따라 미래 immunofluorescence (IF), immunohistochemistry (IHC), 또는 형광 in situ 하이브리드 화 (FISH) 분석에 사용되는 슬라이드를 얼룩이나 coverslip. </li></ol></li><li> 모종 조직 처리 <ol><li> 일단 모스 처리가 완료되면 (단계 1.1-1.2), 저온 유지 장치 챔버에서 작업하고 냉동 저울 매질에서 샘플을 꺼내어 조직을 표시된 극저온 튜브에 넣습니다. </li><li> 조직이 해동되기 전에 표시된 바이알을 액체 질소에 넣으십시오. 시료를 단백질 및 / 또는 DNA 분석에 사용하려면 액체 질소 또는 -80 ° C의 냉동고로 몇 분 안에 옮겨 미래의 단백질 발현 및 DNA 돌연변이 분석을 위해 보관할 수 있습니다 (4-5 단계 참조) . NOTE : post-Mohs sample에서 온전한 RNA가 필요하다면, cryo-embedding 매질에서 제거하는 동안 샘플을 얼게 유지하는 것이 중요합니다. 극도의주의를 기울이지 않은 경우이 단계에서 모스 샘플은 단백질 및 / 또는 DNA 분석을 위해 예약해야합니다. </li></ol></li><li> 새로운 ANT 처리 <ol><li> 모스 종결 시점에 모스 외과 의사로부터 ANT를 구하십시오. </li><li> 정상 조직의 꼭대기 쪽에서 SCC 샘플 (위 참조)에서 수확 한 것과 동일하거나 더 많은 양의 ANT를 제거하고 배양 배지가 들어있는 라벨이있는 1.5 mL 튜브 (DMEM : Ham &#39;s F- 12에 25 mM HEPES, 100 IU / mL 페니실린 및 100 μg / mL 스트렙토 마이신을 보충 한 것)을 사용 하였다. </li><li> 동일한 배양 배지에 조직을 완전히 담그고 4 ℃에서 보관합니다 (후속 처리 (4-6 단계 참조)까지). </li></ol></li></ol> 2. 혈액, 타액 및 구강 내 면봉 처리 <ol><li> venipuncture를 통해 EDTA 수집 튜브에서 약 10mL의 혈액을 얻습니다. </li><li> 수집 튜브에서 멸균 된 15 또는 50 mL 원심 분리 튜브로 혈액을 옮긴다.. 거품을 피하면서 1.5 mL 극저온 튜브에 약 200 μL를 제거합니다. 필요한 경우이 전체 혈액 샘플을 -80 ° C에 보관하여 향후 genotyping 및 tissue matching에 사용하십시오. <ol><li> 나머지 혈액을 1000 xg에서 30 분간 회전시키고 표준 절차에 따라 혈장 분획을 수집합니다. </li><li> 분주하여 1.5mL 극저온 튜브에서 1mL 씩 증분하고 -80 ° C에서 보관하여 향후 액체 생검 분석에 사용하십시오. </li></ol></li><li> 멸균 된 면봉을 사용하여 협측 면봉 샘플을 얻고 상온에서 멸균 된 튜브에 면봉을 보관하십시오. </li><li> 필요한 경우 타액 샘플을 얻고 실온에서 멸균 튜브에 저장하십시오. NOTE :이 샘플은 필요할 경우, 향후 genotyping과 tissue matching을 위해 사용될 수있다. </li></ol> 3. 샘플의 기록 관리 <ol><li> 환자 표본 체크리스트의 정보를 바이오 저장소 데이터베이스로 전송합니다. 환자 정보 및 진단 포함환자 차트에서 코. </li><li> 각 샘플에 대한 바코드 라벨을 인쇄하고 데이터베이스에 각각 기록하여 수집 된 각 샘플을 환자 데이터와 연결합니다. </li><li> 샘플을 연구실로 옮기기 전에 바이오 리포 지 토리 데이터베이스에 비확인 된 샘플의 분포를 기록하십시오. </li></ol> 4. 단백질 분리 및 Western Blot 분석 <ol><li> 각 조직 샘플 (SCC 및 / 또는 ANT)을 조직 100mg 당 프로 테아 제 억제제가 들어있는 세포 용해 완충액 500 μL가 들어있는 유리 병에 넣고 조직을 녹입니다. 참고 : 우리는 50mM Tris pH 8.0, 150mM NaCl, 0.5 % 나트륨 deoxycholate, 1.0 % NP - 40 및 0.1 % SDS로 구성된 radioimmunoprecipitation 분석 (RIPA) 버퍼를 사용했습니다. 다른 세포 용해 완충액을 사용할 수 있습니다. </li><li> 4 ° C에서 20 초 간격으로 5 분 동안 조직 균질기를 사용하여 조직을 균질화하십시오. 21,000 xg와 4 ° C에서 20 분 동안 시료를 회전시키고 단백질을 함유하는 상청액을 신선한 tu있다. 동일한 조건을 사용하여 상등액을 다시 스핀하고 최종 상등액을 신선한 튜브에 수집합니다. </li><li> 4 ~ 20 % SDS-polyacrylamide gradient gel을 사용하여 각 시료에서 30-50 μg의 단백질을 전기 영동합니다. 원하는 경우 Coomassie Blue로 젤을 염색하여 단백질 밴드를 시각화하십시오. </li><li> 발현 된 단백질의 웨스턴 블럿 분석이 필요한 경우 표준 프로토콜에 따라 젤의 단백질을 polyvinylidene difluoride (PVDF) 막으로 옮깁니다. 전달 후 Ponceau는 원하는 경우 단백질 밴드를 시각화하기 위해 PVDF 막을 얼룩지게합니다. </li><li> 표준 프로토콜에 따라 관심 단백질을 검출하기 위해 PVDF 멤브레인과 프로브를 차단하십시오. 서양 얼룩 분석을 위해 제조업체에서 권장하는 농도로 1 차 항체에 해당하는 2 차 항체와 함께 해당 단백질에 특이적인 1 차 항체를 사용하십시오. </li><li> chemiluminescent 기판을 사용하여 탐침 막을 노출하고 imagi를 사용하여 막 이미지시스템. </li></ol> RNA 분리 및 정량적 중합 효소 연쇄 반응 (qPCR) <ol><li> 즉시 RNA 안정화 용액이 들어있는 1.5 mL 튜브에 신선한 조직 샘플 (SCC 및 / 또는 ANT)을 놓고 고정 된 조직 전이 용액이 들어있는 1.5 mL 튜브에 Mohs 조직 샘플을 넣으십시오. 조직이 완전히 잠겨 있는지 확인하십시오. 이 샘플을 사용할 때까지 -80 ° C에서 보관하십시오. </li><li> -80 ° C에서 RNA 샘플을 제거하고 얼음 위에서 녹입니다. 조직 50-100 MG 당 1 ML의 RNA 추출 버퍼 (페놀 / 구아니딘 thiocyanate)를 포함하는 새로운 1.5 ML 튜브에 조직을 전송하십시오. </li><li> 조직 호 모지 나이저를 사용하여 조직을 용해시킵니다. 6 회의 균질화를 수행 한 다음 샘플 냉각 기간을 수행합니다. 각 사이클은 4 ℃에서 40 초의 균질화와 20 초의 균질화로 구성됩니다. 균질화 후, 실온에서 5 분 동안 샘플을 배양한다. </li><li> 0.2 추가1 mL의 RNA 추출 완충액 당 1 mL의 클로로포름을 넣고 15 초 동안 손으로 튜브를 격렬히 흔드십시오. 실온에서 2-3 분 동안 품어 낸다. </li><li> 12,000 xg와 4 ° C에서 15 분 동안 시료를 회전시킵니다. 샘플의 수성 상을 제거하고 새로운 1.5 mL 튜브에 넣으십시오. </li><li> 수성 상에 단계 5.2에서 사용 된 RNA 추출 완충액 1 mL 당 100 mL의 이소프로판올 0.5 mL를 첨가하고 실온에서 10 분 동안 항온 처리한다. 참고 : RNA 수율이 낮을 것으로 예상되는 경우 ( 즉, 시작 조직 부피가 10mg 미만인 경우), 샘플은 밤새 -80 ° C에서 침전 될 수 있습니다. 또한 RNA 추출액 500 μL 당 RNase가없는 글리코겐 5 μg을 이소프로판올 침전 단계에서 첨가하여 RNA 수율을 향상시킬 수 있습니다. </li><li> 4 ℃에서 12,000 xg에서 10 분간 시료를 회전시킨다. 뜨는을 제거하고 75 % 에탄올 1 ML로 펠렛을 씻으십시오. </li><li> 샘플을 간단하게 볼텍스 한 다음 7,500 x 4 및 4 °로 회전시킵니다.5 분간 C로 처리 하였다. 세척을 버리고 5 ~ 10 분 동안 펠렛을 공기 건조시킵니다. </li><li> RNase가없는 물 20 μL에 RNA 펠렛을 Resuspend. <ol><li> 원한다면 RNA 제조사의 권고에 따라 RNA 클린업 키트를 사용하여 각 RNA 샘플을 정제하십시오. 참고 :이 단계를 수행하면 작은 RNA가 샘플에서 손실됩니다. </li></ol></li><li> RNA의 품질을 분석하기 위해 1.2 % 포름 알데히드 -MOPS 아가 로스 젤을 사용하여 1 μg 샘플을 전기 영동하십시오. 참고 : 대안으로, 바이오 분석기를 사용하여 샘플을 분석하여 RIN 번호 13 을 얻습니다. </li><li> 대상 mRNA (또는 miRNA)의 qPCR 분석을 위해 역전사 프로토콜을 사용하여 RNA를 cDNA에 역전사하십시오. </li></ol> 6. 조직 미생물 배양 <ol><li> 조직을 70 % 에탄올로 침지하여 배양하기 전에 절제 된 조직을 소독하십시오. </li><li> 슬라이드 또는 접시에 조직을 놓고 충분한 배양 배지 (DMEM : Ham &amp; # 1 : 1 혼합물)조직을 건조시키기 위해 10 % FBS, 25 mM HEPES, 100 IU / mL 페니실린 및 100 μg / mL 스트렙토 마이신을 보충 한 F-12; 메스 블레이드를 사용하여 조심스럽게 조직을 파편 (&lt;1 mm 3 )으로 자릅니다. </li><li> 35 mm 조직 배양 접시에 조직 조각을 전송하고 각 조각 상단에 태아 소 혈청 (FBS)의 약 20 μL를 추가합니다. </li><li> 접시를 20 ~ 30 분 동안 또는 거의 건조 될 때까지 문화 후드에서 열어 두십시오. </li><li> 각 접시에 문화 매체 (10 % FBS, 25 MM HEPES, 100 IU / ML 보충의 DMEM : 햄의 F - 12 1 : 1 혼합물, 페니실린 100 μg / ML streptomycin)를 추가하고 37 ° 부화 5 % CO2에서 C. 필요에 따라 하위 문화를 배양하거나 배양 물을 복제하십시오. </li></ol>

<ol><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biorepositories%3A+Building+better+biobanks%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biorepositories: Building better biobanks.</a> Nature. 486, 141-146 (2012).</li>
<li>Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+cancer+center+data+bank+and+biorepository+for+multidisciplinary+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15, 1575-1577 (2006).</li>
<li>Baird, P. M., Gunter, E. W., Vaught, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26974264">Building a biobank.</a> Biopreserv Biobank. 14, 87-88 (2016).</li>
<li>National Cancer Institute. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://biospecimens.cancer.gov/practices">http://biospecimens.cancer.gov/practices</a> (2016).</li>
<li>Caixeiro, N. J., Lai, K., Lee, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+assessment+and+preservation+of+RNA+from+biobank+tissue+specimens%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Quality assessment and preservation of RNA from biobank tissue specimens: a systematic review.</a> J Clin Pathol. 69, 260-265 (2016).</li>
<li>Campbell, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+ISBER+best+practices+for+repositories%3A+Collection%2C+storage%2C+retrieval+and+distribution+of+biological+materials+for+research%5BTitle%5D)+AND+%22Biopreserv+Biobank%22%5BJournal%5D)">Development of the ISBER best practices for repositories: Collection, storage, retrieval and distribution of biological materials for research.</a> Biopreserv Biobank. 10, 232-233 (2012).</li>
<li>Neumeister, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tools+to+assess+tissue+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem%22%5BJournal%5D)">Tools to assess tissue quality.</a> Clin Biochem. 47, 280-287 (2014).</li>
<li>Vaught, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 2011, 1-7 (2011).</li>
<li>Fu, T., Aasi, S. Z., Hollmig, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+high-risk+squamous+cell+carcinoma+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Treat+Options+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of high-risk squamous cell carcinoma of the skin.</a> Curr Treat Options Oncol. 17, (2016).</li>
<li>Rasmussen, C., Thomas-Virnig, C., Allen-Hoffmann, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+human+epidermal+keratinocyte+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Classical human epidermal keratinocyte cell culture.</a> Methods Mol Biol. 945, 161-175 (2013).</li>
<li>Purdie, K. J., Pourreyron, C., South, A. P. Cancer cell culture: Methods and protocols. , Humana Press. 151-159 (2011).</li>
<li>Berglund, S. R., Schwietert, C. W., Jones, A. A., Stern, R. L., Lehman, J., Goldberg, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+methodology+for+sequential+extraction+of+RNA+and+protein+from+small+human+skin+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Optimized methodology for sequential extraction of RNA and protein from small human skin biopsies.</a> J Invest Dermatol. 127, 349-353 (2007).</li>
<li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RIN%3A+an+RNA+integrity+number+for+assigning+integrity+values+to+RNA+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The RIN: an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements.</a> BMC Mol Biol. 7, 1-14 (2006).</li>
<li>Cooper, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+glycosylation+of+MUC1+in+epidermolysis+bullosa-associated+and+sporadic+cutaneous+squamous+cell+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Expression and glycosylation of MUC1 in epidermolysis bullosa-associated and sporadic cutaneous squamous cell carcinomas.</a> Br J Dermatol. 151, 540-545 (2004).</li>
<li>Riihila, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+factor+H%3A+a+biomarker+for+progression+of+cutaneous+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Complement factor H: a biomarker for progression of cutaneous squamous cell carcinoma.</a> J Invest Dermatol. 134, 498-506 (2014).</li>
<li>Ha Lan, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+p40+isoform+of+p63+has+high+specificity+for+cutaneous+sarcomatoid+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cutan+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression of the p40 isoform of p63 has high specificity for cutaneous sarcomatoid squamous cell carcinoma.</a> J Cutan Pathol. 41, 831-838 (2014).</li>
<li>Alomari, A. K., Glusac, E. J., McNiff, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p40+is+a+more+specific+marker+than+p63+for+cutaneous+poorly+differentiated+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cutan+Pathol%22%5BJournal%5D)">p40 is a more specific marker than p63 for cutaneous poorly differentiated squamous cell carcinoma.</a> J Cutan Pathol. 41, 839-845 (2014).</li>
<li>Qiao, B., Johnson, N. W., Gao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+transition+in+oral+squamous+cell+carcinoma+triggered+by+transforming+growth+factor-beta1+is+Snail+family-dependent+and+correlates+with+matrix+metalloproteinase-2+and+-9+expressions%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal transition in oral squamous cell carcinoma triggered by transforming growth factor-beta1 is Snail family-dependent and correlates with matrix metalloproteinase-2 and -9 expressions.</a> Int J Oncol. 37, 663-668 (2010).</li>
<li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+in+biospecimen+research%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Developments in biospecimen research.</a> Br Med Bull. 114, 29-38 (2015).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

저자의 지식에 따르면이 프로토콜은 비용 효율적이고 빠른 접근 방식으로 피부 조직 샘플을 임상 적으로 조달하는 데 주력하는 최초의 제품입니다. Mohs 미세 수술을받는 환자는 일반적으로 특정 시간대에 예정되며 수집은이 기간으로 제한됩니다. 샘플 채취에는 환자 관리에 종사하는 의료 보조원, 종양 샘플을 처리하는 모스 (Mohs) histotechnologist 및 샘플 진입 및 혈액 처리를 담당하는 지정 실험실 직원의 노력이 필요합니다. 수집 팀 ( 예 : 의료 비서, 모스 histotechnologist 및 실험실 기술자) 세 멤버 사이의 조심 조정과 함께, 우리는 기존의 의료 지원 직원이 3-5 조직 샘플의 수집과 관련된 추가 작업을 완료 할 수있는 것으로 나타났습니다 하루에 클리닉 운영에서 명백한 지체없이. 환자 동의서 받기<html> 모스 마이크로 수술 절차와 관련된 일반적인 대기 기간 중에 협측 스왑 및 혈액 수집이 완료됩니다. 샘플을 처리하는 방법에 대...

암 및 바이오 마커 연구는 우수한 인체 조직 샘플의 공급에 의존하며, 제한된 공급으로 인해 연구 1,2 가 방해 받고 있습니다. 많은 피부 과학 연구는 인간 조직의 사용과 관련된 부적절한 공급, 다양한 품질 및 비용으로 인해 제한됩니다. 대형 전용 바이오 뱅크를 설립하는 데 드는 비용은 약 2 백만 달러로 추정되며, 이러한 비용은 인체 조직을 많은 연구자들이 사용할 수 없게 만듭니다. 또한 연구 샘플을 생성하고 저장하는 과정은 신중하게 실행하지 않으면 임상 조작에 영향을 미치고 환자 치료를 지연시킬 위험이 있습니다. 비용 효과적인 클리닉 기반의 바이오 저장소는 권장되는 모범 사례와 샘플 검증 4 , 5 , 6 에 따라 피부암 샘플에 초점을 맞추고 있습니다. <p이 프로토콜은 편평 세포 암종 (SCC), 기저 세포 암종 (BCC) 및 흑색 종 피부암을 제거하기 위해 대량의 모스 현미경 수술을 수행하는 피부과 전문의에서 개발되었습니다. 자원 봉사자 기증자는이 환자 집단에서 모집 할 수 있습니다. 치료를 지연시키지 않고 동의 한 환자의 조직과 혈액을 신속하게 포획하기 위해서는 수집 장소에 바이오 저장소를 설치하는 것이 중요합니다. 같은 클리닉에서 샘플을 수집하면 수집 기술의 변화를 최소화하고 샘플의 품질 변화를 최소화 할 수 있습니다. 이는 다운 스트림 어플리케이션 7 , 8 에서 문제가 될 수 있습니다. Mohs 현미경 수술 기술의 목표는 최대한 많은 건강한 조직을 보존하면서 모든 암 조직을 제거하는 것입니다. 이 절차는 종양 조직의 얇은 층을 점진적으로 제거하는 것을 포함합니다. 연속되는 각 레이어는 그의(모든 종양 조직이 제거되었는지 여부를 결정하기 위해 피부과 의사가 종양 조직을 냉동시키고 H &amp; E 염색을 시행 한 후) 논리적으로 검사했다. 환자가 사무실에있는 동안 조직의 후속 층의 절제 및 검사가 실행됩니다. 이 기술은 SCC 9 에 대한 최상의 치료 옵션으로 간주됩니다. 이 시점에서 상처는 닫히고, 치유 및 미용 외관을 향상시키기 위해 인접한 정상 조직 (ANT)을 자주 절제합니다. 따라서 종양 제거 수술은 향후 연구를 위해 조직 학적으로 특성화 된 조직을 수집하는 데 이상적입니다. 종양 조직, 인접한 정상 조직, 타액 및 혈액 샘플을 얻기위한 조달 절차는 정상적인 직원 업무에 미치는 영향을 최소화하도록 설계되었습니다 ( 그림 1 ). 의료 보조원은 절차를 위해 환자를 준비하는 동안 혈액을 채취합니다. 모스 절차 완료 후, M<html> ohs histotechnologist는 표본의 추가 조직 슬라이드를 준비하고 조직을 biorepository에 전송합니다. 바이오 리포지토리 구축과 관련된 비용으로는 냉동 보관 냉동고 구입, 겸손한 임상 실험실 공간 창출 및 재고 추적 프로그램 개발 등이 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig1.jpg" /> 그림 1 : 샘플 수집 및 담당 직원의 순서. 환자가 체크인하고 환자의 동의를 얻으면 의료 보조원은 협측 면봉을 수집하여 혈액을 채취합니다. 피부과 의사와 의료 보조원은 종양을 절제하고 상처를 닫습니다. SCC와 ANT 표본은 각각 수집됩니다. 헌혈 기술자가 혈액을 처리하고 SCC 및 ANT 표본에 조직 배양, 보존 및 바이오 저장소로 들어가기위한 섹션을 분류합니다.ftp_upload / 55583 / 55583fig1large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt;이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 수집 된 샘플의 다양성은 다양한 실험 접근법을 가능하게합니다 ( 그림 2 ). 환자에게서 채취 한 샘플은 협측 면봉 (필요한 경우 타액을 수집 할 수 있음), 전혈 및 절제 된 조직입니다. 구강 내 면봉과 전혈에서 채취 한 샘플은 유전자 타이핑과 조직 일치를 위해 가공없이 저장됩니다. 미래의 분석을 위해 전혈이 백혈구 (WBC)와 혈장 분획으로 분리됩니다. 모스 처리 후, 동결 된 종양을 액체 질소에 직접 놓고 -80 ° C의 냉동고로 옮깁니다. 신선하고 실행 가능한 종양 조직 및 ANT 샘플은 이전 기술 10 , 11의 변형을 사용하여 배양 한 다음 저온 보존합니다. 수집하는 동안 각 샘플 유형의 번호는 스프레드 시트에 기록되기 전에 기록됩니다<html> 재고 추적 프로그램은 정확한 처리를 용이하게합니다 ( 표 1 ). <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig2.jpg" /> 도표 2 : 진료소 ​​근거한 biorepository 견본 수집과 가공의 개관. 환자에게서 협측 면봉과 혈액 샘플을 수집하여 다운 스트림 genotyping과 조직 매칭을 위해 보관합니다. 전혈은 백혈구 (WBC) 분리 및 CTC 분석뿐만 아니라 혈장 수집 및 액체 생검 분석을 위해 추가 처리됩니다. Mohs 절차 중에 절제 한 조직을 진단 목적으로 조직 학적으로 처리 한 후 조직학 슬라이드를 면역 조직 화학 분석을 위해 실험적으로 사용할 수 있습니다. 절제 된 조직 샘플이 충분히 큰 경우, 신선한 조직의 일부를 제거하고 단백질 및 RNA 분리 및 배양 된 세포주를 확립하기 위해 절단한다.55583 / 55583fig1large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt;이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 컬렉션 날짜 : </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> 환자 1 </td><td> 환자 2 </td><td> 환자 3 </td><td> 환자 4 </td><td> 환자 5 </td></tr><tr><td> 이니셜 및 생년월일 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 눈 색깔 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 샘플 유형 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 샘플 위치 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 타액 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 승구멍 혈액 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 혈장 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 유력한 종양 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 조직 생체 적합성 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 종양 모스 액체 질소 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 조직 일반 액체 질소 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 슬라이드 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 표 1 : 샘플 수집을 기록하기위한 체크리스트. 수집 된 각 샘플과 함께 추적되고 기록 된 데이터에는 환자의 머리 글자, 생년월일, 눈색 (피부 유형의 경우), 로케티on 표본 제거. 타액 샘플 수, 혈액 수집 체적 및 수집 된 생존 및 보존 된 조직 검체 수 또한 추후 사용을위한 참고 자료로 기록됩니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55583/Table1.xlsx">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a> 샘플 수집 절차의 유효성을 확인하기 위해 각 샘플 유형은 다운 스트림 어플리케이션에서 테스트되었습니다. 이전 기술 12의 수정을 사용하여, 종양 및 ANT는 단백질 및 RNA 분리에 성공적으로 사용되었으며 잠재적으로 DNA 분리에 사용될 수 있습니다. 조직 절편으로부터 확립 된 생체 외편은 현미경으로 평가되었으며, 보존 된 조직 슬라이드는 면역 조직 화학과 면역 형광 검사에 사용되었다. 여기에 설명 된 프로토콜을 따르면이 모델을 다른 피부과 진료소, 다른 종양 유형 (예 : 흑색 종)으로 확장 할 수 있습니다., 그리고 인간 암에 대한 다방면 연구를위한 인간 조직 샘플을 제공하는 기타 외과 전문 분야 및 관행. 이 프로토콜의 약간의 수정은 다른 관행에 필수적 일 수 있지만 원칙적으로이 프로토콜은 환자 치료 과정에서 수집 된 환자 샘플을 정기적으로 폐기하는 모든 수술에 적용 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>BD Vacutainer 플라스틱 혈액 채취 튜브와 K3EDTA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>02-685-2B</td><td></td></tr><tr><td>전자 현미경 과학 양날</td> 블레이드 <td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-949-411</td><td></td></tr><tr><td>곡선형 중간 포인트 범용 펜치</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>16-100-110</td><td></td></tr><tr><td>프리미엄 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>05-408-138</td><td></td></tr><tr><td>Lonza Walkersville KGM Keratinocyte Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NC9791321</td><td></td></tr><tr><td>전자 현미경 과학 조직 TEK OCT 화합물</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-363-579</td><td></td></tr><tr><td>Leica CM1950 Cryostat</td><td>Leica Biosystems</td><td>14047743909</td><td></td></tr><tr><td>Frosted Microscope Slides</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12-550-343</td><td></td></tr><tr><td>Shandon 급속 크롬 H& E 냉동 섹션 염색 키트</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>99-900-01</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene 장기 저장 극저온 튜브</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>03-337-7X</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 15 mL 원추형 원심분리기 튜브</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>Boca Scientific BuccalT-Swab&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NC9679349</td><td></td></tr><tr><td>세포 신호 전달 기술 10x RIPA 버퍼</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-195-822</td><td></td></tr><tr><td>중단 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제 칵테일</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PI78443</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5424R 마이크로원심분리기</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>05-401-203</td><td></td></tr><tr><td>펠릿 모르터 무선 균질화기</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12-141-3</td><td></td></tr><tr><td>RNAse Free Pellet Pestle</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>121-141-364</td><td></td></tr><tr><td>Forma SteriCycle CO2 인큐베이터</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>13-998-089</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Fetal Bovine Serum</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>SH30071.02</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Advanced DMEM/F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12-634-028</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 페니실린-스트렙토마이신</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140148</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 1 M Hepes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15-630-130</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 세포 배양 35 mm, 벤트 포함</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1256591</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CFH 단클론 항체 클론 OX-24</td><td>Abnova</td><td>MAB12583</td><td></td></tr><tr><td>Anti-p40 (p63 delta) 항체</td><td>Abnova</td><td>ABX-144A</td><td></td></tr><tr><td>Anti MUC-1 항체</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-7313</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Snail + Slug (phospho S246)</td><td>Abcam</td><td>Ab63568</td><td></td></tr><tr><td>염소 anti-rabbit IgG, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-11034</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 Phallodin</td><td>Molecular Probes&nbsp;</td><td>A12380</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td><td>Molecular Probes&nbsp;</td><td>P36941</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager Z1 현미경(Axiocam 카메라</td><td>포함) Zeiss</td><td>4300009901</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX51 위상차(DP72 카메라</td><td>포함) Olympus</td><td>IX511F3</td><td></td></tr></tbody></table>

클리닉 기반 생물 저장소의 설립

Establishment of a Clinic-based Biorepository

지난 몇 년 동안 피부암 ( 예, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종)이 증가 해 왔습니다. 생물 의학 연구를위한 피부 종양 샘플에 대한 병행 요구가있을 것으로 예상됩니다. 그러나 조직 가용성은 생물 저장소를 확립하는 비용과 임상 조작을 방해하지 않는 임상 샘플을 입수 할 수있는 프로토콜이 없기 때문에 제한적입니다. 모스 수술 날짜에 일상적인 임상 절차에 최소한의 영향을 미치는 피부 종양 및 관련 혈액 및 타액 샘플을 수집하고 처리하기위한 프로토콜이 수립되었습니다. Mohs histotechnologist가 생검에서 입증 된 피부 악성 종양에 대한 첫 번째 모스 수술을받는 환자로부터 종양 샘플을 수집하고 가공합니다. 인접한 정상 조직은 수술 종결시 수집됩니다. 수집 할 수있는 추가 샘플은 전혈 및 협측 스왑입니다.. 정상적으로 폐기 된 조직 표본을 활용함으로써 병원에서 실험실 환경을 기반으로 여러 가지 주요 이점을 제공하는 생물 저장소가 생성되었습니다. 여기에는 광범위한 수집 된 샘플이 포함됩니다. 병리학 보고서를 포함하여 확인되지 않은 환자 기록에 대한 접근; 전형적인 기증자의 경우 추적 방문 중에 추가 샘플을 이용할 수 있습니다.

종양 및 ANT는 단백질 분리에 성공적으로 사용되고 웨스턴 블 랏팅으로 시험되었습니다. 그림 3 에서 볼 수 있듯이, 클리닉 기반 바이오 저장소에 수집 및 저장 한 환자 표본에서 피부 편평 세포 암종 마커 (Muc1 14 , FHL-1 15 및 p40 16 , 17 )를 검출 할 수 있습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/55583/55583fig3.jpg" /> 그림 3 : ANT와 SCC에서 추출한 단백질 분석. 총 단백질을 ANT 및 SCC 샘플로부터 분리하...

피부 종양은 모스 (Mohs) 현미경 수술 후 폐기됩니다. 임상 지원 직원이 임상 작업을 방해하지 않고 하류 실험실 응용을위한 피부 종양 ( 예 : 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종) 샘플을 효과적으로 처리하고 저장할 수있는 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다.

The incidence of skin cancer (e.g., squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, and melanoma) has been increasing over the past several years. It is ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 피부과 진료소의 임상 지원 인력이 일상적인 임상 운영을 방해하지 않으면서 후속 실험실 응용을 위해 피부 종양 샘플을 효과적으로 처리하고 보관할 수 있도록 하는 것입니다. 본 프로토콜은 의료 보조원과 Mohs 조직 기술자가 일상적인 임상 업무의 일환으로 향후 생물 의학 연구 프로젝트를 위한 피부 종양 샘플을 수집하고 보관할 수 있도록 설계되었습니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 평소라면 폐기 및 소멸되었을 절제 조직을 일상적인 임상 운영에 미치는 영향을 최소화하는 절차를 통해 수집하고 연구용으로 보존할 수 있다는 점입니다.수집된 다양한 샘플을 통해 조직 및 혈장 샘플 내의 단백질 및 RNA 바이오마커와 환자의 예후 데이터 간의 상관관계를 분석할 수 있습니다. 원칙적으로 이 프로토콜은 약간의 수정을 거치면, 환자 치료 과정에서 수집된 샘플을 일상적으로 폐기하는 모든 외과 진료 환경에 적용 가능합니다. 본 절차의 시연은 Mohs 조직 기술자인 Stefani Fawks와 본원 연구원인 Dr. Mitchell Manway가 진행하겠습니다.먼저, Mohs 외과의로부터 받은 조직을 사용하여 메스로 조직의 정단부 중심에서 10~50 mg의 샘플을 절제합니다. 핀셋을 사용하여 생존 조직을 배지가 미리 채워진 라벨이 부착된 1.5 mL 튜브로 옮깁니다. 이때 조직이 배지에 완전히 잠겼는지 확인하십시오.시료를 냉장고에 넣어 4°C에서 보관하며, 추가 처리를 하기 전까지 24시간을 초과하지 않도록 합니다. 종양 시료의 크기가 충분하고, 제거 작업이 일반적인 Mohs 처리 과정에 방해가 되지 않는 경우, 절제된 조직의 정단부(apical side)에서 최소 10mm³의 조직 조각을 채취합니다. 다음으로, 처리되지 않은 나머지 종양 시료를 크라이오스탯(cryostat) 조직 홀더 위에 놓습니다.조직을 최적 절편 온도 화합물(optimal cutting temperature compound)에 포매하고, 홀더 내에서 동결시켜 조직학적 슬라이드를 준비합니다. 크라이오스탯(cryostat)을 사용하여 조직을 7 µm 두께로 절편하고, 슬라이드 위에 최대 3개의 절편을 겹쳐 올립니다. 절편 제작 후, 슬라이드를 아세톤에 1~2초 동안 담가 조직을 고정합니다.그런 다음, 슬라이드를 자연 건조시킵니다. 남은 샘플을 크라이오스탯 챔버에 둔 상태에서 조직을 동결 매립제에서 떼어내어 라벨이 부착된 저온 튜브로 옮깁니다. 라벨이 부착된 바이알을 즉시 액체 질소에 넣습니다.Mohs 처리 후 조직을 cryo vial로 옮기는 작업은 -20 °C의 cryostat 챔버 내에서 수행해야 합니다. 이 단계가 적절히 수행되어 조직이 냉동 상태로 유지되면, Mohs 처리 후의 조직 샘플에서 RNA를 성공적으로 추출할 수 있습니다. 다음으로, Mohs 외과 의사로부터 인접 정상 조직을 확보하십시오.인접한 정상 조직의 정단부에서 샘플을 절제합니다. 그런 다음, 핀셋을 사용하여 절제한 샘플을 배양액이 채워진 라벨이 부착된 1.5 milliliter 튜브로 옮깁니다. 조직을 동일한 배양액에 침지시킵니다.적절한 검체 백에 넣고, 다음 처리 단계까지 4°C에서 보관하십시오. EDTA 코팅된 채혈관에 약 10 mL의 정맥혈을 채취합니다. 채취한 혈액 샘플을 멸균된 15 mL 원심분리 튜브에 합칩니다.그 다음, 기포가 생기지 않도록 주의하며 혈액 샘플 약 1 mL를 1.5 mL 냉동 보관 튜브에 옮깁니다. 이 전혈 샘플을 이후의 유전자형 분석 및 조직 매칭 시까지 -80 °C에서 보관합니다. 이어서, 남은 혈액 샘플을 1000 ×g에서 30분 동안 원심 분리하여 혈장을 얻습니다.원심 분리 후, 혈장을 수집하여 1.5 mL 냉동 보관 튜브에 1 mL씩 분주합니다. 그리고 향후 액체 생검 분석에 사용할 수 있도록 시료를 -80 °C에서 보관하십시오. 환자 차트에서 추출한 환자 정보 및 진단 내용과 함께 환자 시료 체크리스트의 데이터를 바이오리포지토리 데이터베이스에 입력하십시오.마지막으로, 비식별화된 샘플의 위치를 바이오리포지토리 데이터베이스에 기록하고, 샘플을 연구실로 이동시킵니다. 그 직후, 조직이 완전히 잠기도록 확인하면서 적절한 추출 용액이 미리 채워진 1.5 milliliter 튜브에 조직 샘플을 옮깁니다. 추가 처리 시까지 샘플을 minus 80 degrees Celsius에서 보관하십시오.정상 인접 조직과 종양 샘플에서 얻은 알려진 편평세포암 마커인 mucin one, FHL-one 및 p40의 대표적인 웨스턴 블롯 이미지를 여기에 제시합니다. Mohs 샘플에서 분리한 RNA의 품질을 먼저 겔 전기영동을 통해 평가한 후, RNA 무결성 분석을 수행하였습니다. 정상 및 종양 샘플에서 얻은 RNA 무결성 수치(RIN) 값은 고품질의 손상되지 않은 RNA가 확보되었음을 나타냅니다.종양 및 정상 환자 조직의 대표 RNA 샘플에 대해 밴드의 사이토메트리 프로파일을 형광 단위 대 뉴클레오타이드 수로 도식화하였습니다. 편평세포암 조직 절편을 위상차 현미경으로 촬영한 결과, 케라티노사이트와 섬유아세포의 혼합 배양 상태임이 확인되었으며, 이는 향후 하위 배양이나 세포주 개발에 활용될 수 있습니다. 마지막으로, 편평세포암 조직 절편에서 상피-간엽 이행 마커의 양성 염색 결과가 확인되었습니다.이 프로토콜을 숙달하면, 적절하게 수행되었을 때 클리닉 직원의 표준 워크플로우를 30분 이내로 단축할 수 있습니다. 대부분의 단계는 환자 진료가 완료된 후 기존 클리닉 직원에 의해 수행됩니다. 본 프로토콜을 시도하는 동안 샘플을 환자의 병력 및 진단 결과와 연결하여 정확한 기록을 유지하는 것이 중요합니다.이러한 정보는 다운스트림 응용 분야에서 자주 필요합니다. 이 기술은 피부과 분야의 연구자들이 편평세포암과 흑색종의 액체 생검 및 바이오마커를 개발하는 길을 닦는 데 도움이 될 것입니다. 이 영상을 시청한 후에는 일상적인 진료 과정에서 생성되는 피부암 샘플을 위한 병원 기반 바이오리포지토리를 구축하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

establishment-of-a-clinic-based-biorepository

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 수술 조직과 생검에서 수집한 결장 소굴에서 인간 장류를 확립하고 결장 소굴에서 콜로노이드를 확립하는 방법을 설명합니다. 이 방법론적 기사에서는 인간 장 및 콜로노이드의 성공적인 성장과 유지에 필수적인 배양 방식을 제시합니다.

전체 조직과 조직 검사에서 인간 상피 Enteroids과 Colonoids 설립

이 방법은 급진적 인 전립선 절제술을 따르는 바이오 뱅킹 조직이 샘플링 절차를 안내하기 위해 전립선 암 환자에 대한 임상 진단 데이터를 활용하는 것을 포함합니다. 이것은 다운스트림 응용의 넓은 범위에 대한 새로운 조직의 효율성과 가용성에 관한 이전에 게시 된 방법과 문제를 극복한다.

전립선암 바이오뱅킹을 위한 샘플링 절차를 안내하기 위해 자기 공명 영상 및 생검 데이터 사용

다음 작업에서는 대장암과 췌장암의 대형 바이오뱅크 설립에 필요한 연속적인 단계를 설명합니다.

살아있는 바이오 뱅크의 창조 및 유지 보수 - 우리가 그것을 하는 방법

바이오뱅크는 생물의학 연구를 위한 중요한 자원이며 유럽 종양학 연구소의 중개 및 디지털 의학 부서를 위한 바이오뱅크는 이 분야의 모델입니다. 여기에서는 다양한 유형의 인간 생물학적 샘플 관리를 위한 바이오뱅크의 표준 운영 절차에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

중개 의학을 위한 바이오뱅크: 최적의 시료 관리를 위한 표준 운영 절차

이 프로토콜은 근치적 전립선 절제술 표본에서 샘플 수집을 용이하게 하는 방법을 설명합니다. 목표는 해부병리학적 기준에 따라 표본의 조직 샘플을 Biobank에 저장하기 전에 매핑, 특성화 및 미시적 매크로 절개하는 것입니다.

개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상

이 프로토콜은 단백질체학, 대사체학 및 글리코믹스를 포함한 분자 다운스트림 분석을 위한 고품질 인간 방수액 및 유리체 액체 생검의 표준화된 수집, 주석 및 바이오뱅킹을 위한 통합 생물 저장소 플랫폼을 제공합니다.

분자 분석을 위한 인간 수성 및 유리체 액체 생검의 바이오뱅킹

이 프로토콜은 다양한 질병 단계의 난소암 오가노이드 확립을 위한 체계적인 프레임워크를 제공하고 환자별 변동성 문제를 해결하여 수율을 높이고 후속 응용 분야에서 강력한 장기 확장을 가능하게 합니다. 여기에는 조직 처리, 파종, 배지 요구 사항 조정 및 면역형광 염색을 위한 자세한 단계가 포함됩니다.

난소암 오가노이드의 바이오뱅킹 전략: 조직학적 아형 및 질병 단계에 걸친 환자 간 이질성 해결

이 기사에서는 바이오뱅킹, 맞춤형 의학 및 기타 연구 응용 분야에 대한 유용성을 최적화하도록 설계된 유방암 샘플 수집을 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 유방 생검 및 유방 절제술 절차를 포함한 샘플 수집 작업 흐름은 조직 손상을 최소화하고 샘플 품질을 극대화하는 데 중점을 두고 자세히 설명합니다.

바이오뱅킹, 맞춤형 의학 및 연구 응용을 위한 유방 생검 및 유방 절제술 샘플 수집 절차의 최적화

차 침략 동 소성 방광 암 이종 이식을 접종하는 설치 방법은 개복 수술과 방광의 동원을 필요로한다. 이 절차는, 마우스에 상당한 이환율을 입히고 기술적으로 어렵고 시간 소모적이다. 따라서 우리는 경피적 접근 방식은 초음파 안내를 이용하는, 높은 정밀도를 개발했다.

쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

요로 감염(UTI)을 모델링하는 능력은 박테리아 발병 기전을 이해하고 새로운 치료법의 개발을 촉발할 수 있도록 하는 데 매우 중요합니다. 이 작업의 목표는 인간에서 관찰된 결과를 요약하고 예측하는 실험적 요로감염 및 카테터 관련 요로감염의 마우스 모델을 시연하는 것입니다.

마우스 모델의 설립 및 요로 감염 및 CAUTI의 특성

배우세요 피부 종양 샘플을 수집하고 보관하는 임상 기반 생물 저장소 설립 방법을. Mohs 수술에서 폐기되는 조직을 활용하여 단백질 및 RNA 바이오마커 연구를 위한 고품질 샘플을 확보할 수 있습니다.

클리닉 기반 생물 저장소의 설립

더 많은 동영상 탐색