Name: 만성 외상성 뇌증 모델링을위한 새로운 방법 Drosophila (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster를 이용한 만성 외상성 뇌증 모델링 방법으로, 조절 가능한 충격을 머리에 직접 가하여 신경 퇴행 메커니즘을 연구합니다. 이 기법은 반복적 외상이 신경세포에 미치는 영향을 정밀하게 분석할 수 있습니다.

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1. 스트라이크 장치의 조립 ( 그림 1 ) <ol><li> 1mL 투베르쿨린 주사기에서 플런저를 제거합니다. 배럴을 1 mL 표시로 자릅니다. </li><li> 200 μL 피펫 팁에서 에어로졸 장벽 (높이 3 mm x 4 mm)을 제거하고 임팩터로 사용하십시오. 충격 장치를 시린지 배럴 안에 놓으십시오. 천천히 배럴을 탭하여 임팩터를 팁 끝으로 움직이십시오. 평평한면이 노즐 입구를 덮습니다. </li><li> Drosophila 마취 스테이션의 이산화탄소 (CO2) 유량 조절기에 연결된 플라스틱 튜빙에 배럴 팁 끝을 연결하십시오. </li><li> 배럴을 수직으로 잡고 표준 클램프 홀더 스탠드에 끼워서 충격 장치가 통의 바닥에 머 무르도록하십시오. </li><li> 플라이 홀더를 만들기 위해 200 μL 피펫 팁을 수정하십시오. <ol><li> 끝에서 4mm를 잘라 0.8mm 지름의 구멍을 만들어 플라이 헤드 만 노출되게하십시오. 참고 : tho뗏목 및 파리 몸의 다른 모든 부분은 피펫 팁 안에 머물 것입니다. </li></ol></li><li> 커넥터를 만들기 위해 1,000 μL 피펫 팁과 1 mL 주사기 바늘 캡을 수정하십시오. <ol><li> 팁의 입구에서 44mm 떨어져 자릅니다. 1 ML 주사기 바늘 캡의 6mm 길이를 가지고 1,000 μL 피펫 팁의 나머지 세그먼트에 단단히 밀어. </li></ol></li></ol> 2. 스트라이크 장치의 작동 <ol><li> 플라이 패드 (fly pad)에서 CO 2 를 사용하여 2 일 된 성인 여성 플라이에게 마취를하십시오. </li><li> 미세한 브러시로 플라이 홀더로 부드럽게 옮깁니다. 플라이 헤드가 팁 끝 외부에 보이도록 홀더를 부드럽게 두드립니다. 가요 성 코의 가위가 팁 외부에 노출 된 경우, 천천히 1 mL 주사기 바늘로 팁 안쪽으로 다시 넣습니다. 참고 : Fly proboscope를 홀더 안에 넣어야합니다. 그렇지 않으면, 파리는 빠는 코의 부상으로 사망 할 수 있습니다. </li><li> 플라이 호를 조이십시오.플라이 헤드가 아래쪽을 향하도록 커넥터가있는 주사기 배럴에 연결하십시오. </li><li> 가스 압력을 100 kPa로 설정하십시오. 실험 설계에 따라 유속을 조정하십시오. </li><li> 임팩트 터가 플라이 헤드를 한 번 치기 위해 유량 조절기 토글 스위치를 빠르게 켜고 끕니다. </li><li> 플라이 홀더를 들어 올려 플라이 패드 위로 옮깁니다. 플라이 홀더를 뒤집고 가볍게 측면을 가볍게 두 드리십시오. 빈 유리 병에 파리를 넣어 복구하십시오. </li></ol> 3. 비디오 지원 이동 추적 <ol><li> 추적 경기장을 만들기 위해 투명 실리콘 엘라스토머가있는 6cm 직경의 페트리 접시를 채 웁니다. 파리와 파리 사이에 3mm의 간격을 두어 파리가 자유롭게 걷고 날 수 없게하십시오. </li><li> 매번 샴 또는 치료 그룹에서 4 개의 파리를 마취하여 경기장에 배치하십시오. 파리를 22 ° C에서 1 시간 동안 방치하십시오. </li><li> 경기장 위에 CCD (Charge Coupled Device) 카메라를 배치하고 5 분 동안 기록합니다.</li><li> Ctrax 소프트웨어 (Caltech에서 무료로 구할 수 있음)를 사용하여 기록 된 운동 궤도를 분석하십시오. 추적 된 데이터를 프로그래밍 언어 (예 : Matlab) 호환 형식으로 내보내고 프레임 당 이동 한 거리를 기반으로 데이터를 분석합니다. 각 비행에 대한 평균 도보 거리를 계산하고 다른 모든 기록 된 파리 / 그룹과 결합하여 같은 그룹의 파일 집단이 이동 한 평균 누적 거리를 얻습니다. </li></ol>

<ol><li>McKee, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+NINDS%2FNIBIB+consensus+meeting+to+define+neuropathological+criteria+for+the+diagnosis+of+chronic+traumatic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The first NINDS/NIBIB consensus meeting to define neuropathological criteria for the diagnosis of chronic traumatic encephalopathy.</a> Acta Neuropathol. 131, 75-86 (2016).</li>
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<li>Barekat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Drosophila+as+an+integrated+model+to+study+mild+repetitive+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Using Drosophila as an integrated model to study mild repetitive traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 6, 25252(2016).</li>
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<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
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<li>Talavage, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionally-detected+cognitive+impairment+in+high+school+football+players+without+clinically-diagnosed+concussion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Functionally-detected cognitive impairment in high school football players without clinically-diagnosed concussion.</a> J Neurotrauma. 31 (4), 327-338 (2014).</li>
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<li>Drobysheva, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+method+for+histological+detection+of+dopaminergic+neurons+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">An optimized method for histological detection of dopaminergic neurons in Drosophila melanogaster.</a> J Histochem Cytochem. 56 (12), 1049-1063 (2008).</li>
</ol>

이 작품은 존스 홉킨스 대 의과 대학 창립 자금 인 LC

신경 생리 학적 변화, 신경 병리학 적 특징, 신경 행동 적 결함을 포함하여 CTE 특성을 충실하게 모델링 한 동물 모델은 질병 기전을 밝히고 진단 및 치료 목표를 개발하는 데 필수적입니다. 인간 질병의 동물 모델이 임상 적으로 관련된 모든 종말점을 모방 할 때 완벽한 것은 아니라는 것을 이해할 수 있습니다. 그러나 우리는 견고한 CTE 모델이 다음 세 가지 요구 사항을 충족해야한다고 생각합니다. (1) 충격은 두피 및 두개골 보호가 손상되지 않은 머리에 직접 적용되어야합니다. (2) 충돌 노출 동안 헤드가 고정되어서는 안되며 따라서 빠른 가속 - 감속 및 회전 및 선형 헤드 이동이 허용됩니다. (3) 실험 디자인은 단일 및 반복적 인 정권을 포함해야하며, 충격 결과는 조직 부종, 타박상 또는 솔직한 출혈과 같은 눈에 보이는 손상을주지 않으면 서 본질적으로 경미해야한다. 오우과일 파리 모델은 파리 13,14,15에서 외상성 뇌 손상을 일으키는 다른 방법과 구별됩니다. Bead...

만성 외상성 뇌병증 (CTE)은 최근 알츠하이머 병과 같은 다른 타우 병증과 별개로 별개의 신경 퇴행성 장애로 인정 받고 있습니다. 가장 중요한 위험 요소가 나이와 치매의 가족력이있는 알츠하이머 병 및 다른 일반적인 타우 병증과는 달리 CTE는 그 이름에서 알 수 있듯이 접촉 스포츠 선수들에게서 볼 수있는 뇌 외상의 병력과 밀접한 관련이 있으며, 사각 팬티, 축구 선수, 군대 참전 용사 2 , 3 , 4 , 5 등이 있습니다. 그것은 반복적으로 뇌에 뇌졸중과 뇌졸중을 가하는 것으로 시작된다고 생각됩니다. 환자는 알츠하이머 병, 전두 측두엽과 유의 한 중복되는인지 장애, 기분 및 행동 변화, 운동 장애와 같은 증상 및 징후를 나타낼 수 있습니다치매, 레위 몸 치매, 파킨슨 병 6 . 대조적으로, 뇌 조직의 사후 검사는 다른 퇴행성 질환에서 관찰되지 않는 병리학 적 특징 인 피질 상피의 깊이에서 작은 혈관을 둘러싼과 인산화 된 타우 축적의 뚜렷한 패턴을 나타낸다. 그러나 지금까지 질병 발현으로 이어지는 병인에 대해서는 거의 알려지지 않았다. 이것은 충실한 동물 모델이 부족하여 많은 부분을 차지합니다 - 단지 최근에 설치류 모델이 생성되었습니다 ( 5 , 8) . 이러한 모델 생물은 비용 집중 치료와 상대적으로 긴 수명의 단점을 가지고 있으며 신경 퇴행성 질환 연구에 적합하지 않습니다. 포유류 대조 물과 비교하여, Drosophila 와 같은 무척추 동물은 비용 효율적인 유지 관리와 함께 훌륭한 대안이며,유전 적 결정 요인 해부를위한 광범위한 도구 및 상대적으로 짧은 수명 9 . 놀랍게도, 파리와 인간의 두뇌는 진화 적으로 보존 된 분자 및 세포 경로뿐만 아니라 해부학 적 유사성을 공유한다 10 , 11 , 12 . 외상성 뇌 손상을 연구하기위한 두 개의 독창적 인 초파리 모델이 이전에 13 , 14 번 보고되었습니다. Katzenberger와 동료가 고안 한 최초의 &quot;고 충격 손상&quot;(HIT) 장치는 금속 스프링 13 , 15 의 자유 단에 연결된 플라스틱 바이알에 자유롭게 움직이는 파리가 들어있었습니다. 플라스틱 병이 수직으로 기울어 졌을 때 폴리 우레탄 패드를 치고 파리 벽에 부딪쳐 튀어 나와 반발했다. 대조적으로, Barekat과 동료들은 다른 전달 방법을 설계했습니다.Omni Bead Ruptor-24 호 모지 나이저 플랫폼 14 . 파리는 이산화탄소로 무력화되어 호 모지 나이저에 고정되고 사전 프로그램 된 진탕 조건에 적용되는 2 mL 스크류 캡 튜브에 두었다. 조직 균질 기 시스템을 사용하는 한 가지 이점은 실험자가 상해의 강도, 상해의 지속 시간 및 부상의 횟수를 조절할 수 있다는 것입니다. 그러나 두 정권 모두 동일한 단점을 갖고있다 : 머리에 대한 일차적 인 상해는 충격 위치와 힘의 측면에서 무작위로 가해진 다. 또한, 두 가지 방법 모두 신체 및 내부 기관의 다른 부분에 불가피한 부수적 인 손상으로 인해 상당한 사망률을 초래했습니다. 여기, 우리는 과일 파리에서 mTBI를 유도하는 새로운 방법을 설명합니다. 우리의 장치는 가스 추진 탄도 충격기로 구성되어 있습니다. 기존의 Drosophila 모델 14 , 15에 비해 우리의 방법은 meas자유롭게 움직일 수있는 플라이 헤드에서만 지시되는 유랑 충격 (lrable impact)은 충격 강도, 충격 사이의 시간 간격 및 지속 된 충격의 총 횟수와 같은 다양한 요인을 정확하게 제어 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>에어로졸 장벽</td><td>USA Scientific</td><td>1120-8810</td><td>임팩터로 사용</td></tr><tr><td>200 &#956; L 피펫 팁</td><td>USA Scientific</td><td>1111-0706</td><td>플라이 헤드 홀더로 사용</td></tr><tr><td>1000 &#956; L 피펫 팁</td><td>USA Scientific</td><td>1122-1830</td><td>커넥터로 사용</td></tr><tr><td>1mL 투베르큘린 주사기</td><td>Becton Dickinson</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>60mm 페트리 접시</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A</td><td>추적 경기장으로 사용</td></tr><tr><td>유량 조절기</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-122WC</td><td></td></tr><tr><td>표준 클램프 홀더/스탠드</td><td>EISCO Scientific</td><td>CH0688</td><td></td></tr><tr><td>파인 브러시</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-204</td><td></td></tr><tr><td>플라이패드</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-114</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 실리콘 엘라스토머</td><td>Dow Corning</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>CCD 카메라</td><td>Microsoft&nbsp;</td><td>HD-5000</td><td></td></tr><tr><td>Ctrax 워킹 플라이 트래커</td><td>Caltech</td><td>Ctrax 0.2.11</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB Image Processing Toolbox</td><td>MATLAB</td><td>R2015b</td><td></td></tr></tbody></table>

만성 외상성 뇌증 모델링을위한 새로운 방법<em&gt; drosophila</em

A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila

만성 외상성 뇌병증 (CTE)은 반복적 인 경미한 외상성 뇌 손상 (mTBI)에 대한 노출과 밀접하게 관련된 확립 된 신경 퇴행성 질환입니다. 복잡한 병리학 적 변화를 초래하는 기전은 신경 병리학 적 기준을 정의하는 최근의 합의에도 불구하고 크게 애매하다. 여기에서 우리는 Drosophila melanogaster ( Drosophila )에서 CTE 모델을 개발하여 뇌에서 특유의 과산화 된 타우 축적 및 신경 세포 죽음을 유도하는 핵심 유전자와 경로를 확인하려는 새로운 방법을 설명합니다. 경미한 닫힌 상처를 입히기 위해 조정 가능한 강도의 충격이 헤드를 급 가속 및 감속하도록하여 플라이 헤드에 직접 전달됩니다. 우리의 방법은 다른 Drosophila mTBI 모델에 내재 된 잠재적 문제를 제거합니다 ( 예 : 동물의 죽음은신체의 다른 부위 또는 내부 장기). 적은 노동력과 비용 집약적 인 동물 관리, 짧은 수명 및 방대한 유전 도구로 인해 CTE 병인을 연구하고 게놈 전반에 걸친 전방 유전자 및 약리학 적 스크리닝을 수행하는 것이 이상적입니다. 우리는 모델의 지속적인 특성화가 질병 예방 및 치료 방법에 대한 중요한 기계 론적 통찰력을 창출 할 것으로 기대한다.

성인 Drosophila를 사용하여 CTE 모델을 구축하기 위해 단일 폐쇄 머리 손상을 가할 때 우리 장치의 효율성을 결정했습니다. 유전자형, 성별 또는 나이와 관련된 변이를 없애기 위해 우리는 2 일 된 Canton-S WT 암컷 파리를 실험에 사용했습니다. 우리는 100 kPa의 일정한 가스 압력에서 CO 2 의 유량을 조절함으로써 임팩터의 강도를 쉽게 제어 할 수 있습니다. 가장 높은 유속 (15 L / min)에서 단일 타격에 노출 된 파리는 최소한의 외부 결함을 나타 냈습니다 ( 그림 2 ). 외부 눈과 입 냄새가 모두 보였다. 그럼에도 불구하고 우리는 15 L / min의 유속이 치명적이며 24 시간 내에 10 % 미만의 생존율을 나타냄을 발견했습니다 ( 그림 3A ). 대조적으로, 10 또는 7.5 L / 분의 스트...

여기, 우리는 Drosophila melanogaster 에서 닫힌 머리 외상성 뇌 손상을 일으키는 새로운 접근법을 설명합니다. 우리의 방법은 조정 가능한 강도로 반복적 인 충격을 머리에 직접 전달하는 장점이 있습니다. 무척추 동물 시스템의 추가 탐구는 만성 외상성 뇌증의 병인을 밝히는 데 도움이 될 것입니다.

만성 외상성 뇌증 모델링을위한 새로운 방법<em&gt; Drosophila</em

Chronic Traumatic Encephalopathy (CTE) is an established neurodegenerative disease that is closely associated with exposure to repetitive mild Traumatic ...

이 새로운 실험 절차의 전반적인 목표는 초파리(Drosophila)에게 폐쇄성 외상성 뇌 손상을 입혀 새로운 만성 외상성 뇌병증 모델을 구축하는 것입니다. 이 방법은 반복적인 외상이 어떻게 신경 세포 퇴행을 유도하는지와 같은 만성 외상성 뇌병증 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 동물의 다른 신체 부위에 손상을 주지 않으면서 초파리의 머리에 직접 조절 가능한 강도의 반복적인 충격을 가할 수 있다는 점입니다.초파리 머리가 매우 작고 충격을 머리에만 가하는 것이 중요하기 때문에, 장치 조립과 파리 투입 단계는 습득하기 어렵습니다. 따라서 이 방법의 실제 시연이 매우 중요합니다. 초파리에 뇌진탕을 유도하거나 충격을 가하는 장치를 만들기 위해, 먼저 장치의 임팩터 부분을 제작합니다. 1 mL 폴리카보네이트 투베르쿨린 주사기에서 플런저를 제거한 다음, 배럴을 1 mL 표시선에서 절단합니다.임팩터로는 200 µL 파이펫 팁에 있는 에어로졸 차단막을 사용하십시오. 이 임팩터의 길이는 3 mm, 직경은 4 mm여야 합니다. 그런 다음, 평평한 면이 노즐 쪽을 향하도록 하여 임팩터를 시린지 배럴 안에 채우십시오.압력을 가하기 위해 시린지 배럴을 이산화탄소 유량 조절기에 연결하십시오. 조절기에는 On/Off 토글 스위치가 있어야 하며 가스 유속을 정밀하게 제어할 수 있어야 합니다. 그 다음, 임팩터가 배럴 바닥까지 떨어질 수 있도록 배럴을 철제 스탠드에 수직으로 고정하십시오.다음으로, 초파리 홀더를 제작합니다. 200 µL 피펫 팁을 준비합니다. 피펫 팁의 좁은 끝단에서 5 mm 지점을 절단하여 직경 8 mm의 개구부를 만듭니다.초파리의 머리는 이 구멍을 통해 들어갈 수 있지만, 흉부는 들어갈 수 없습니다. 마지막으로, 초파리 고정 장치와 충격 장치를 만듭니다. 먼저, 1 mL 피펫 팁의 끝부분에서 44 mm 지점을 절단합니다.둘째, 1 mL 주사기용 바늘 덮개에서 6 mm 길이로 자릅니다. 그런 다음, 두 개를 함께 밀어 넣습니다. 이산화탄소를 사용하여 2일 된 단일 성체 암컷 초파리를 마취시킵니다.이산화탄소 패드에서 미세 붓을 사용하여 초파리를 홀더로 조심스럽게 옮깁니다. 그런 다음, 머리가 팁 밖으로 나올 때까지 홀더를 가볍게 두드립니다. 만약 구절(proboscis)이 노출되었다면, 끝이 뭉툭한 1 mL 주사기 바늘을 사용하여 이를 다시 팁 안으로 조심스럽게 밀어 넣습니다.초파리의 몸통, 특히 입 부분이 홀더 안에 유지되도록 하는 것이 중요합니다. 그렇지 않으면 내부 기관의 손상이나 먹이 섭취 불능으로 인해 초파리가 죽을 수 있습니다. 다음으로, 가스 압력을 100 kilopascals로 설정하고 필요에 따라 유량을 조절하십시오.초파리를 장착한 후, 커넥터를 사용하여 홀더를 시린지 배럴에 고정하고 초파리의 머리가 아래쪽을 향하게 합니다. 그런 다음 토글 스위치를 사용하여 가스를 분사해 임팩터가 초파리를 단 한 번만 타격하도록 합니다. 이제 초파리 홀더를 분리하고 초파리를 이산화탄소 패드 위로 다시 옮깁니다.초파리가 회복될 때까지 빈 바이알에 넣어줍니다. 바이알당 한 마리의 초파리만 유지하십시오. 회복에는 단 몇 분밖에 걸리지 않습니다.각 실험군당 4마리의 초파리를 테스트하도록 이 과정을 반복하십시오. 테스트군과 샴(sham)군, 두 그룹을 처리하는 데는 20~30분밖에 걸리지 않습니다. 샴군은 테스트 동물과 동일하게 처리하되, 임팩터 튜브에 에어로졸 차단막을 포함하지 마십시오.페트리 접시 내 초파리의 움직임을 추적하려면, 먼저 6 cm 접시에 투명 실리콘 엘라스토머를 채워 추적 아레나를 만듭니다. 초파리가 틈새에서 자유롭게 걸어 다닐 수 있지만 비행은 할 수 없도록 실리콘과 뚜껑 사이에 3 mm 간격을 둡니다. 추적 아레나 아래에는 흰색 배경을 배치합니다.다음으로, 동일한 처리군에서 파리 네 마리를 마취시켜 아레나에 넣습니다. 조명이 완전히 켜져 있고 온도가 약 22°C인 아레나에서 파리들이 한 시간 동안 적응하도록 둡니다. 실온보다 높지 않아야 합니다.한 시간 후, 아레나 상단에 위치한 전하결합소자(CCD) 카메라를 사용하여 파리의 활동을 5분 동안 기록합니다. 5분간의 기록이 끝나면 아레나 내의 파리들을 마취시켜 새로운 보관병으로 옮깁니다. 그 후, 아레나를 폐기합니다.이후, 무료로 제공되는 Ctrax 소프트웨어를 사용하여 녹화된 영상을 분석합니다. 이 소프트웨어는 추적 데이터를 생성하며, 이는 MATLAB 형식과 같이 프로그래밍 언어와 호환되는 형식으로 내보낼 수 있습니다. 해당 데이터로부터 프레임당 이동 거리, 초파리 개체별 평균 보행 거리 및 초파리당 평균 이동 거리를 계산합니다.통계적 유의성을 위해 처리군당 약 100마리의 초파리를 테스트하는 것으로 예상하십시오. 만성 외상성 뇌병증 모델을 구축하기 위해, 다양한 속도로 충격 장치에 의해 가해진 단일 폐쇄성 두부 손상의 효과를 2일 된 Canton-S 암컷을 이용하여 분석하였습니다. 가스 압력은 100 kilopascals로 유지되었습니다.테스트한 최고 유량으로 단일 충격을 받은 초파리는 외부 결함이 거의 나타나지 않았습니다. 외부 손상의 명확한 증거는 없었음에도 불구하고, 분당 15리터의 유량에서 발생한 부상은 급성 치사율을 보였으며, 24시간 이내의 생존율은 10% 미만이었습니다. 유량이 낮아질수록 생존율은 증가했습니다.분당 5리터 이하에서 100% 생존율이 달성되었으므로, 분당 5리터를 모델의 표준으로 선정하였습니다. 충격을 받은 직후, 초파리들은 4분 이내에 점진적으로 운동 능력을 회복하였습니다. 가짜 처치군(shams)의 회복 속도는 약 1분 더 빨랐습니다.충격 후, 비디오 보조 운동 추적을 통해 운동 기능을 측정하였습니다. 충격 후 이틀 동안 운동 능력은 서서히 정상으로 회복되었습니다. 이러한 점진적 회복의 증거는 인간의 CTE 회복 양상과 일치합니다.장기적인 영향을 평가하기 위해, 5일 동안 5회의 충격을 가하는 반복적 외상성 뇌손상 프로토콜을 적용하였습니다. 처리 후 20일째에 각 그룹의 생존 개체들의 운동 능력을 비교한 결과, 처리군의 보행 거리가 확연히 감소하였습니다. 또한 처리군의 수명 또한 상당히 단축되었으며, 대조군의 중앙값이 37일인 것과 비교하여 처리군은 26일로 나타났습니다.이 기술의 개발을 통해 경미한 반복적 외상성 뇌손상 분야의 연구자들은 전형적인 동물 모델인 Drosophila melanogaster에서 병원성 기전을 탐구할 수 있는 길이 열렸습니다. 이 절차를 수행할 때, 에어로졸 차단막을 사용하여 주둥이, 흉부 및 복부가 직접적인 충격을 받지 않도록 보호하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

, 전위의 기능을 측정하는 학습을위한 행동 assays, 및 메모리...

에 시금 운동력이있는 사람, 학습, 및 메모리 적자 Drosophila</emNeurodegeneration의> 모델

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이 비디오는 초파리에서 폐쇄두부 외상성 뇌손상(TBI)을 유도하기 위해 고충격 외상(HIT) 장치를 사용하는 방법을 보여줍니다. TBI는 신경 기능에 영향을 미치는 기계적 뇌 외상을 유발하며, 이는 시간이 지남에 따라 신경 퇴행과 사망으로 이어집니다.

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이 비디오는 초파리 뇌에서 관통 외상성 뇌 손상의 유도를 보여줍니다. 새로 출현한 파리를 선택하고 마취한 후 형광이 장착된 실체 현미경 아래에 배치합니다. GFP 발현 버섯 몸체가 확인되고 Minutien 핀이 삽입되어 부상을 입힙니다. 파리는 추가 연구를 위해 회복할 수 있습니다.

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우리는 신경퇴행성 질환의 모델로 Drosophila melanogaster에서 최적화되고 저렴하며 신뢰할 수 있는 음성 지오택시 분석을 제시합니다. 경미한 운동 결함에 더 민감하기 때문에 이 분석은 잠재적인 유전적 상호 작용 및 약물 표적을 스크리닝하는 데 도움이 됩니다.

퇴행성 신경 질환의 초파리 모델에서 등반 결함의 정량 분석

여기에서 우리는 초파리에서 폐쇄 머리 외상성 뇌 손상 (TBI)를 입힐 수있는 방법을 설명합니다. 이 방법은 파리에 사용할 실험 도구와 기술의 광대 한 배열을 사용 TBI 병리의 기초 세포와 분자 메커니즘을 조사하기 위해 게이트웨이를 제공합니다.

폐쇄 머리 외상성 뇌 손상을 입힐 수있는 방법<em&gt; 초파리</em

초파리 널리 신경 퇴행을 연구하기위한 모델 시스템으로 사용된다. 이 프로토콜은, 뇌의 공포 형성에 의해 결정된 바와 같이, 정량 할 수있는 변성하는 방법을 설명한다. 또한 인해 하나의 샘플로 처리 및 절편 제어 및 실험 파리에 의해 실험 절차에 효과를 최소화 할 수 있습니다.

질량 조직학은에 신경 퇴행을 정량화하기<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜 설명 해 부와 성인 초파리 melanogaster 의 immunostaining 뇌 조직. 특히,이 프로토콜은 신경 개발의 많은 측면을 기본 일반적인 원리를 밝히기 위해 정확 하 게 사용할 수 있는 예제 신경 하위 집합으로 초파리 버섯 몸과 포토 리셉터 뉴런의 사용을 강조 표시 합니다.

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

학습하세요 Drosophila melanogaster를 이용한 만성 외상성 뇌증 모델링 방법으로, 조절 가능한 충격을 머리에 직접 가하여 신경 퇴행 메커니즘을 연구합니다. 이 기법은 반복적 외상이 신경세포에 미치는 영향을 정밀하게 분석할 수 있습니다.

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