신생 전염병 병원체 제거를위한 손씻기의 효능을 시험하는 방법

이 실험의 전반적인 목표는 관심 유기체를 실험적으로 접종한 손에서 손 씻기 옵션의 비교 효과를 테스트하는 것입니다. 이 방법은 감염성 질환을 예방하는 데 도움이 되는 주요 질문에 대한 정보를 제공할 수 있습니다. 연구자들이 관심 있는 특정 유기체에 대한 손 씻기의 효능을 조사할 수 있도록 함으로써.

이 기술의 주요 장점은 유연하고 다양한 유기체를 조사할 수 있도록 조정할 수 있다는 것입니다. 우리는 에볼라 상황에서 염소 용액이 손 씻기에 사용되고 있었고 당시에는 이것의 효능에 대한 증거가 없다는 것을 깨달았을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다. 적격한 피험자를 모집하고 텍스트 프로토콜에 따라 손 씻기 용액을 준비한 후, LB 한천 플레이트에 비병원성 E.Coli를 줄무늬로 만들어 박테리아를 준비하고 섭씨 37도에서 24시간 동안 배양하여 단일 콜로니를 얻습니다.

실험 시작 하루 전에 멸균 윤활유를 사용하여 플레이트에서 단일 콜로니를 잡고 LB 육수 10ml를 접종합니다. 섭씨 37도에서 밤새 흔들면서 배양물을 배양합니다. 실험 당일 아침, 신선한 LB 육수 20ml에 하룻밤 배양 1ml를 첨가합니다.

약 2시간 30분 동안 배양물을 배양하여 10 이상의 염 밀도에서 밀리리터당 8번째 CFU를 달성합니다. 그런 다음 분광 광도계를 사용하여 배양의 농도를 추정합니다. 테스트 직전에 68%의 박테리아 또는 바이러스 현탁액과 32%의 염화나트륨 또는 토양 부하로 구성된 접종물을 준비합니다.

소용돌이치거나 부드럽게 소용돌이치며 섞습니다. 텍스트 프로토콜에 따라 지원자를 준비한 후, 포인터와 중지 사이의 물갈퀴 공간에 평평한 팁 피부 pH 프로브를 배치하여 각 지원자의 피부 pH를 테스트합니다. 전극이 피부에 평평한지 확인하고 pH 판독값을 기록합니다.

다음으로, 지원자가 양손을 함께 컵을 만들게 합니다. 그런 다음 750 마이크로 리터의 접종물을 각 손바닥에 조심스럽게 피펫으로 넣어 손에 스파이크를 쐈습니다. 자원봉사자의 손에 스파이크를 쏠 때 백신을 흘리지 않는 것이 중요합니다.

지원자에게 이것이 중요하다는 것을 상기시키고 절차를 시작하기 전에 물로 연습할 수 있는 기회를 제공합니다. 지원자들이 손의 모든 표면이 접종자로 코드화될 때까지 손을 부드럽게 문지르게 하면서 손은 가능한 한 마찰을 최소화합니다. 지원자들에게 접종물이 건조될 때까지 추가로 30초 동안 손을 움직이지 않고 몸에서 멀리 두도록 지시합니다.

그런 다음 텍스트 프로토콜에 설명된 방법 중 하나를 사용하여 손을 씻습니다. 비누로 손을 씻을 때는 초순수 10ml를 사용하여 손을 적십니다. 지원자들에게 비누로 손에 거품을 낸 다음 20초 동안 손을 함께 문지르게 합니다.

1.5리터의 유속으로 깔때기를 통해 실온의 초순수 500ml를 대형 시료 채취 백에 부어 지원자의 손을 헹구고 2시간 이내에 시료를 처리합니다. 모든 염소 용액의 경우, 분당 1.5리터의 유속으로 깔때기를 통해 지원자의 손에 200ml의 염소 용액을 붓고 지원자가 손을 철저히 문지르도록 합니다. 또 다른 손 씻기 방법으로, 자원봉사자들이 손 소독제를 사용하여 손을 씻게 합니다.

손의 모든 표면을 부드럽게 문지르고, 참가자들에게 문지르는 동안 손바닥, 손톱 등 각 부분에 집중하도록 지시한 다음 손 전체를 헹궈냈는지 확인합니다. 대조군 A의 경우, 접종 후 손 씻기 단계를 수행하지 마십시오. 대조군 B의 경우 실온의 초순수만 사용하여 알려진 유속으로 깔때기를 통해 손 씻기를 수행합니다.

손을 씻은 후, 테스트를 위해 선택한 각 지원자의 손을 손목까지 75ml의 르윈이 들어 있는 샘플 백에 즉시 넣습니다. 가방 상단을 손목에 단단히 잡습니다. 지원자가 용액에 손을 부드럽게 문지르면서 손가락 사이와 손톱 아래를 조심스럽게 문지르도록 합니다.

가방 바깥쪽에서 손을 30초 동안 부드럽게 마사지하여 손 전체가 르윈에서 손목까지 완전히 헹궈지도록 합니다. 가방을 밀봉하고 적절한 에세이에 따라 처리하십시오. 손을 씻는 각 방법을 반복하기 전에 지원자들이 따뜻한 물에 비누를 사용하여 싱크대에서 손을 철저히 씻도록 합니다.

마지막으로, 70% 에탄올을 사용하여 지원자의 손이 양쪽이 코팅될 때까지 스프레이하고 건조시킵니다. 샘플을 분석하려면 화염과 멸균 여과 깔때기와 진공 연결부가 있는 여과 매니폴드를 설정합니다. 겸자를 에탄올에 담그고 불을 붙여 살균합니다.

집게를 사용하여 그리드가 위를 향하도록 하여 0.45미크론 필터를 여과 매니폴드에 놓습니다. 그런 다음 소량의 멸균 PBS를 사용하여 필터를 적십니다. 깔때기를 베이스에 놓고 피펫팅하거나 샘플을 필터에 직접 붓습니다.

전체 샘플이 멤브레인을 통과할 때까지 진공을 작동시킵니다. 그런 다음 멸균 PBS를 사용하여 깔때기의 측면을 헹구고 진공 청소기를 다시 작동시킵니다. 그런 다음 깔때기를 제거하고 집게를 화염 살균한 다음 베이스에서 필터를 들어 올립니다.

그런 다음 그리드가 위를 향하도록 하여 페트리 접시의 매체에 필터를 부드럽게 놓고 필터가 표면과 같은 높이가 되도록 합니다. 플레이트를 뒤집어 섭씨 37도에서 24시간 동안 배양합니다. 배양 후 E.Coli 군체를 세고 데이터를 기록합니다.

텍스트 프로토콜에 따라 데이터 분석을 수행합니다. 이 비디오에 설명된 프로토콜은 18명의 지원자와 함께 E.Coli 및 Phi6로 테스트한 것으로 작성되었으며, 토양 부하가 없는 E.Coli에 대해 HTH, NaDCC 및 안정화된 NaOCl로 손 씻기, 모두 물로만 손 씻기보다 훨씬 더 큰 로그 감소를 가져왔습니다. 토양 부하의 경우, HTH는 비누와 ABHS로 물만 손씻는 것보다 대장균의 통수를 훨씬 더 많이 감소시켰습니다.

토양 하중이 없는 Phi6의 방법 간에는 큰 차이가 없었습니다. 그러나 토양 부하가 있는 Phi6의 경우 물만으로도 ABHS 또는 안정화된 NaOCl보다 더 큰 로그 감소를 보였으며 비누로 손씻기를 하면 ABHS, 안정화된 NaOCl 및 생성된 NaOCl보다 더 큰 로그 감소를 보였습니다. 또한 HTH는 ABHS보다 로그 감소가 컸으며, NaOCl 및 NaDCC가 NaOCl 및 NaDCC가 안정화된 NaOCl 및 ABHS보다 로그 감소가 컸다.

이 그래프에서 볼 수 있듯이, 염소는 비누로 손을 씻는 것보다 헹굼 물에 잔류하는 대장균의 대장균 감소율이 훨씬 더 컸습니다. 마지막으로, 모든 염소 용액과 함께 토양 부하가 없는 Phi6에서도 동일한 패턴이 발견되어 비누로 손을 씻는 것보다 헹굼 물에서 Phi6가 훨씬 더 많이 감소했습니다. Phi6 및 토양 부하로 인한 헹굼 수분의 현저한 감소는 없었습니다.

이 절차를 시도하는 동안 각 조건에 대한 효능 결과는 두 컨트롤에 대한 결과를 비교하여 계산된다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 즉, 각 손 씻기 옵션에 대해 단계를 일관되게 수행하는 것이 매우 중요합니다.