Name: 평가 기본 폭발 효과 체 외에 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 51 s
Description: 학습하세요 체외에서 충격파가 세포 생존율에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 맞춤형 쇼크 튜브 장비를 사용하여 기계적 충격에 대한 세포 반응을 연구하고 폭발 손상 메커니즘을 이해할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 인정 하 고 CAH에 의료 연구 위원회 (M01858X/1)에서 자금을 폭발 부상 연구 로얄 영국 군단 센터의 재정 지원을 하 고 싶습니다.

1. 세포 배양 및 샘플 준비 <ol><li>받기 적절 한 셀 라인 (예를 들어, 피부 시 셀). 
	참고: 현재 프로토콜 설계 되었습니다 부착 세포에 대 한 모델로 사용 하는 털에서 고립 된 쥐 피부 시 fibroblasts.</li>
	<li>최소 필수 매체 (MEM) α 10% 태아 둔감 한 혈 청 및 1% 페니실린 스 보충을 포함 하는 T-75 플라스 크에 세포 문화. 80%의 합류를 도달할 때까지 습도 환경에서 37 ° C, 5% CO 2의 표준 문화 조건에서 세포를 유지.</li>
	<li>매체 발음 및 Dulbecco에서 두 번 셀 세척 &#39; s 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS). 트립 신/EDTA 표준 문화 5 분에 대 한 조건 셀 (10 X 객관적 렌즈와 빛/위상 대비 현미경을 사용 하 여 플라스 크에서 성공적으로 해리는 되도록 짧게 확인의 2 mL에 그들을 배양 하 여 플라스 크에서 세포 분열 ).</li>
	<li>는 Trypsinization 반응 중화 문화 매체의 4 mL를 추가 합니다. 15 mL 원심 분리기 튜브에 세포 현 탁 액을 전송.</li>
	<li>원심 분리기에서 200 x g 셀 작은 4 분. 천천히 발음 상쾌한, 펠 릿을 꺼내 려 하지 않도록 주의 복용. 매체의 5 mL에 펠 릿을 다시 중단.</li>
	<li>깨끗 한 hemocytometer 세포 현 탁 액의 약 20 µ L 수 전송 및 10 X 객관적 렌즈를 장착 하는 현미경을 사용 하 여 셀.</li>
	<li>90 mm 접시 안에 3 개의 35mm 요리를 배치 하 여 폭발에 대 한 셀을 준비 합니다. 그들을 적절 하 게 라벨. 각 35 mm 접시 중간의 2 개 mL를 추가 하 고 접시, 접시 주위에 균등 하 게 세포를 배포 당 5 x 10 4 셀의 총 씨. 쇼크 웨이브 노출 첨부 파일 적절 한 셀에 대 한 수 있도록 표준 문화 조건에 하룻밤 실험 샘플을 품 어. 
	참고: 형광 이미징, 셀 해야 합니다 시드할 수 불 임 유리 coverslips에.</li>
</ol> 2. 튜브 어셈블리 충격 <img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55618/55618fig2.jpg" /> 그림 2 : EVOC 장비 및 충격 튜브 어셈블리. EVOC rig의 (A) 이미지. (B) 충격 관 기구의 회로도 충격 관 차원 4.13 m의 EVOC 장비를 포함 하 여 총 길이 59 m m의 내부 직경을 포함 됩니다. EVOC 장비 합계 2.71 m.와 구동된 튜브의 길이 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55618/55618fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol><li>어셈블리 절차 동안 강철 발가락 작업 부츠와 실험실 코트를 착용.</li>
	<li>삽입 2 개의 볼트 구멍을 통해 두 개의 정렬 바 출구 플랜지의 수평 비행기에서 발견. 니트 릴 고무 가스 켓 시트 정렬 막대의 끝 배치 하 출구 플랜지와 비보 전 기관 문화 (EVOC) 장비 사이 앉아. 
	참고: EVOC 장비는 35 mm 페 트리 접시 ( 그림 2A)와 함께 사용 하기 위한 사용자 정의 설계 된 정착 물.</li>
	<li>EVOC 장비 플랜지를 부착 콘센트 충격 관의 정착 맞춤 바, 그것이 방향의 올바르게 섹션 페 트리 접시를 보유 하는 그것의 기초에 보장을 통해 밀어.</li>
	<li>나머지 구멍에 4 개의 M24 볼트와 와셔를 삽입합니다. 그들은 터치 플랜지 너트 위치.</li>
	<li>단단히 고정 볼트와 너트 순차적으로 대각선 대칭 방식에서 EVOC 장비 및 충격 관 성공적으로 정렬는 시각적으로 확인 하는 동안.</li>
	<li>는 EVOC 장비에 압력 트랜스듀서를 연결 하 고 센서 케이블을 사용 하 여 현재 소스에 그것을 연결. 그런 다음 오실로스코프에 전류 소스 연결 BNC 케이블을 사용 하 여.</li>
	<li>확인 모든 밸브 놓고 흐름 컨트롤 충격 관에 폐쇄 됩니다. 내장 외부 압축 공기 라인을 열고 수동으로 압력 레 귤 레이 터 2.5 바에 솔레노이드를 충전을 시계 방향으로 돌려</li>
	<li>반시계 180 ° 선회 하 여 압축된 가스 병에 안전 밸브를 엽니다.</li>
	<li>천천히 압력 레 귤 레이 터, 가스 병 위에 위치한 약 15 바 압력 증가를 시계 방향으로 돌려 
	참고:이 레 귤 레이이 터의 설정 포인트 해야 될 약간 높은 위에 붕괴 실험에 사용할 수 있는 두꺼운 횡 경 막의 압력.</li>
	<li>10 c m x 10 c m 사각형으로 0.125 m m 두꺼운 플라스틱 시트를 절단 하 여는 격 막 준비. 
	참고: 횡 경 막의 두께 (즉, 더 큰 피크 압력; 충격파는 두꺼운 막 귀 착될 것 이다 충격파의 피크 압력 변경 붕괴 압력 연관 됩니다. 표 1).</li>
</ol> < 테이블 fo:keep-together.within-페이지 = "1" > <tbody><tr><td>Mylar 다이어 프 램 크기 (cm)</td> <td>파열 압력 (바)</td> <td>센서 3 압력 범위 (kPa)</td></tr> <tr><td>10 x 10 x 0.023</td> <td>2 ± 0.2</td> <td>47 ± 7.5</td></tr> <tr><td>10 x 10 x 0.050</td> <td>4 ± 0.2</td> <td>72 ± 7.5</td></tr> <tr><td>10 x 10 x 0.125</td> <td>9.5 ± 0.5</td> <td>127 ± 12.5</td></tr></tbody> < /t 수 > 표 1: 다이어 프 램 두께 최대 압력에 압력 해당 버스트.
<ol start="11"> <li>핸들 테이프에서 만들고, 횡 경 막의 상하에 그들을 수정 하 고 신중 하 게 불 감 증 약 실에 의해 전면 작은 플랜지 옆 횡 경 막의 위치를 그들을 사용 하 여. 횡 경 막 인지 확인 직선과 올바르게 위치는 불 감 증을 닫기 전에.</li>
	<li>4 M24 볼트와 너트를 사용 하 여이 보안. 단단히 볼트와 너트를 대각선으로 대칭 패션에 순차적으로 고정.</li>
</ol> 3. 쇼크 웨이브 노출 하기 전에 그냥 셀의 준비 <ol><li>준비 자외선 살 균을 수행 하 여 조직 층 류 두건. 살 균 제 솔루션 및 70% 에탄올으로 그것을 청소. 모든 항목 처리 세포 이전 을/포스트-shock에 필요한 노출을 살 균 후드 내에서 배치할 수집. 
	참고:이 신선한 매체, 포함 접착제 가스 투과성 막, 소독가 위, 펫, 피 펫 팁.</li>
	<li>전송 한 90 mm 페 트리 접시 살 균 후드에 인큐베이터에서 3 개의 실험 샘플을 포함 하.</li>
	<li>접착제 가스 투과성 멤브레인 시트 (테이블의 자료를 참조) 6 사각형으로 각 한 35mm 페 트리 접시의 상단을 충당 하기 위해 충분히 큰 되도록 컷.</li>
	<li>35 mm 페 트리 접시에서에서 매체를 발음, 1 개의 측에 뚜껑 놓고 막와 접시의 가장자리 사이의 단단한 물개 보장 접착제 가스 투과성 막 섹션과 커버.</li>
	<li>EVOC 장비에 샘플을 전송 하 고 되도록 접시 위에 충격 튜브의 내부 자료와 비품의 기지에 확보.</li>
</ol> 4. 튜브 작업 충격 <ol><li>충격 튜브 시스템 가압 귀 수비수, 눈 고글, 안전 부츠, 그리고 실험실 외 투 착용.</li>
	<li>흐름 조절기는 레 귤 레이 터 시계 방향으로 흘러 충격 관에 압축 공기 실린더를 연결 하는 유연한 호스 가스를 수 있도록 설정.</li>
	<li>선택 컨트롤 패널의 하단에는 &#34; 더블 불 감 증 &#34; 짧은 기간 쇼크 웨이브에 대 한 입구e 또는 &#34; 드라이버 튜브 &#34; 증가 웨이브 동안 입구.</li>
	<li>파형 데이터를 얻기 위해 DC 전원 및 오실로스코프에 스위치. 50.0 MS 오실로스코프 샘플링 속도 설정/s, 레코드 길이 1 M의 포인트. 50의 범위를 설정 2 바에서 발사 및 100 mV 4 봉 위에 대 한 mV</li>
	<li>설정 제어판 맞은편 벽에 스위치를 사용 하 여 안전 조명. 
	참고:이 다른 연구자 충격 관 충전 방에 입력 하지 알려줍니다.</li>
	<li>를 닫습니다 솔레노이드 솔레노이드 제어 상자에 스위치를 설정. 
	참고:이 안전 기능은 청구 시스템에 대 한 허용 더블 불 감 증 챔버에 있는 밸브를 닫습니다.</li>
	<li>컨트롤 패널에서 천천히 노브 시계 반대 방향으로 점차 압축 챔버 내의 압력을 증가 하 여 흐름 제어를 엽니다. 컨트롤 패널 디스플레이 사용 하 여 압력 모니터링.</li>
	<li>일단 횡 경 막 파열 압력에 도달 하면, 횡 경 막 파열 됩니다 및 &#34; 뱅 &#34; 들어 있을 것입니다. 신속 하 게 손잡이 선회 하 여 흐름 제어를 닫습니다. 
	참고: 쇼크 웨이브 셀 샘플 및 튜브의 끝에 밖으로 튜브 여행을 합니다.</li>
	<li>솔레노이드 솔레노이드 제어 상자에 스위치를 해제 하 여 열고 (제어판 맞은편 벽에 스위치를 사용 하 여) 안전 라이트 끄고.</li>
	<li>살 균 후드에 셀 샘플을 전송, 접착제 가스 투과성 막 제거 하 고 신선한 성장 매체의 2 mL 접시를 채우십시오. 셀 하거나 사용할 수 있습니다 즉시 평가 5 단계에 설명 된 대로 장기 연구 인큐베이터에 반환.</li>
</ol> 5. 생존 세포 충격파 노출 redox 지표 분석 결과 및 라이브 및 죽은 세포의 형광 이미징의 조합을 사용 하 여 다음 <ol><li>평가 세포 생존 능력. 
	참고: 형광 이미징, 셀 해야 합니다 시드할 수 불 임 유리 coverslips에 섹션 1 동안: 세포 문화와 샘플 준비. 이 35 mm 페 트리 접시 안에 배치 될 수 있습니다.</li>
	<li>전송 200 µ L redox 표시기 시 약의 (테이블의 자료를 참조) 직접 중간 후 충격의 2 mL와 함께 그들을 채우는 후 각 실험 접시 파도 노출. 4 헤에 대 한 표준 문화 조건에 품 어</li>
	<li>각 요리에 대 한 어느 블랙 2 x 100 µ L aliquots (어두운 불 임 후드)에 전송 하거나 96 잘 접시, 형광 또는 흡 광도 생존 능력을 평가 하는 데 사용 됩니다 여부에 따라 취소.</li>
	<li>올바른 필터를 장착 하는 적절 한 플레이트 리더를 96 잘 접시를 전송 하 고 형광 또는 570 여기 밴드 530ex/590em를 사용 하 여 읽을 nm 흡 광도 대 한 600 nm 참조와 결합. 내보내기 및 데이터를 저장.</li>
	<li>분석 데이터 충격파 노출 샘플 및 비 노출 컨트롤 사이의 어떤 차이를이 세포 생존 능력에 한 방울을 나타낼 수 있습니다. 
	참고: 음수 컨트롤 또한 실험 설계에 포함 되어야 합니다. 또한, 표준 곡선의 보간 셀 숫자를 계산에 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>발음 redox 표시기 시 약을 포함 하는 매체. 신선한 매체의 2 mL와 함께 그것을 대체 하 고 품 어 24 h. 표준 문화 조건에 셀</li>
	<li>두 번째 생존 시간 포인트를 필요에 따라 위의 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>라이브 및 죽은 세포의 형광 이미징, 매체를 발음 하 고 셀 1 mL의 PBS에 두 번 세척. 전송 100 µ L는 영상에 완전 한 시 약의 각 샘플 (재료의 표 참조) 키트 및 15 분에 대 한 빛에서 보호 하는 실 온에서 품 어</li>
	<li>시 발음 하 고 일단 1 mL의 PBS 사용 하 여 씻어. 좋은 포인트 집게를 사용 하 여 신중 하 게 35 m m 접시에서는 coverslip를 제거 하 고 얼굴-다운 유리 현미경 슬라이드에 배치.</li>
	<li>취득 이미지 (10 X 렌즈, 0.50 숫자 조리개) 형광 현미경을 사용 하 여 각 샘플에 대 한 올바른 여기 및 방출 필터 장착 (ex / em 488 nm/515 nm과 570 nm/602 nm). 
	참고: 라이브 셀 강렬한, 유니폼, 녹색 형광을 방출 합니다. 손상 된 세포 막으로 죽은 또는 죽어가는 셀 것 이다 이해 죽은 키트 구성 요소, 셀의 핵 지역에서 주로 발견 붉은 형광의 방출의 결과로,.</li>
	<li>소프트웨어 중 하나를 수동으로 또는 자동으로 각 이미지에서 라이브 및 죽은 세포의 수를 계산 하는 이미지 분석을 사용 하 여.</li>
</ol>

<ol><li>Proud, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physical+basis+of+explosion+and+blast+injury+processes%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Army+Med+Corps%22%5BJournal%5D)">The physical basis of explosion and blast injury processes.</a> J R Army Med Corps. 159, Suppl 1 4-9 (2013).</li>
<li>Born, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast+Trauma%3A+The+Fourth+Weapon+of+Mass+Destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+of+Surg%22%5BJournal%5D)">Blast Trauma: The Fourth Weapon of Mass Destruction.</a> Scand J of Surg. 94 (4), 279-285 (2005).</li>
<li>Kocsis, J. D., Tessler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+blast-related+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Rehabil+Res+Dev%22%5BJournal%5D)">Pathology of blast-related brain injury.</a> J Rehabil Res Dev. 46 (6), 667-671 (2009).</li>
<li>Bass, C. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22012085">Brain Injuries from Blast.</a> Ann Biomed Eng. 40 (1), 185-202 (2012).</li>
<li>Cernak, I. Brain Neurotrauma: Molecular, Neuropsychological, and Rehabilitation Aspects. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26269865">Frontiers in Neuroengineering</a>. Kobeissy, F. H. , (2015).</li>
<li>Alfieri, K. A., Forsberg, J. A., Potter, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast+injuries+and+heterotopic+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Joint+Res%22%5BJournal%5D)">Blast injuries and heterotopic ossification.</a> Bone Joint Res. 1 (8), 174-179 (2012).</li>
<li>Potter, B. K., Burns, T. C., Lacap, A. P., Granville, R. R., Gajewski, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Ossification+Following+Traumatic+and+Combat-Related+Amputations.+Prevalence%2C+Risk+Factors%2C+and+Preliminary+Results+of+Excision%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Ossification Following Traumatic and Combat-Related Amputations. Prevalence, Risk Factors, and Preliminary Results of Excision.</a> J Bone Joint Surg Am. 89 (3), 476-486 (2007).</li>
<li>Sasser, S. M., Sattin, R. W., Hunt, R. C., Krohmer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast+Lung+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Prehosp+Emerg+Care%22%5BJournal%5D)">Blast Lung Injury.</a> Prehosp Emerg Care. 10 (2), 165-172 (2006).</li>
<li>Cho, S. -I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Hearing+Loss+after+Blast+Injury+to+the+Ear%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Hearing Loss after Blast Injury to the Ear.</a> PLoS ONE. 8 (7), 67618(2013).</li>
<li>Bull, M. A., Clasper, J., Mahoney, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBull%2C+MA+%22Blast+Injury+Science+and+Engineering%3A+A+Guide+for+Clinicians+and+Researchers%22">Blast Injury Science and Engineering: A Guide for Clinicians and Researchers</a>. , Springer. (2016).</li>
<li>Arun, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+blast+traumatic+brain+injury+using+in-vitro+model+with+shock+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Studies on blast traumatic brain injury using in-vitro model with shock tube.</a> Neuroreport. 22 (8), 379-384 (2011).</li>
<li>Ahlers, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+effects+of+acute+and+repeated+exposure+to+blast+overpressure+in+rodents%3A+toward+a+greater+understanding+of+blast+and+the+potential+ramifications+for+injury+in+humans+exposed+to+blast%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the effects of acute and repeated exposure to blast overpressure in rodents: toward a greater understanding of blast and the potential ramifications for injury in humans exposed to blast.</a> Front Neurol. 3, 32(2012).</li>
<li>Polfer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+a+rat+model+to+investigate+the+formation+of+blast-related+post-traumatic+heterotopic+ossification%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Joint+J%22%5BJournal%5D)">The development of a rat model to investigate the formation of blast-related post-traumatic heterotopic ossification.</a> Bone Joint J. 97 (4), 572-576 (2015).</li>
<li>Miller, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Blast+Overpressure+on+Neurons+and+Glial+Cells+in+Rat+Organotypic+Hippocampal+Slice+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of Blast Overpressure on Neurons and Glial Cells in Rat Organotypic Hippocampal Slice Cultures.</a> Front Neurol. 6, 20(2015).</li>
<li>Chandra, N., et al. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/s00193-012-0399-2">Evolution of blast wave profiles in simulated air blasts: experiment and computational modeling.</a> Shock Waves. 22 (5), 403-415 (2012).</li>
<li>Kuriakose, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+the+Blast+Exposure+Conditions+in+the+Shock+Tube+for+Generating+Pure%2C+Primary+Shock+Waves%3A+The+End+Plate+Facilitates+Elimination+of+Secondary+Loading+of+the+Specimen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Tailoring the Blast Exposure Conditions in the Shock Tube for Generating Pure, Primary Shock Waves: The End Plate Facilitates Elimination of Secondary Loading of the Specimen.</a> PLoS ONE. 11 (9), 0161597(2016).</li>
<li>Reneer, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Multi-Mode+Shock+Tube+for+Investigation+of+Blast-Induced+Traumatic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A Multi-Mode Shock Tube for Investigation of Blast-Induced Traumatic Brain Injury.</a> J Neurotrauma. 28 (1), 95-104 (2011).</li>
<li>VandeVord, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-regulation+of+reactivity+and+survival+genes+in+astrocytes+after+exposure+to+short+duration+overpressure%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Up-regulation of reactivity and survival genes in astrocytes after exposure to short duration overpressure.</a> Neurosci Lett. 434 (3), 247-252 (2008).</li>
<li>Kane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+gene+expression+in+cultured+microglia+in+response+to+simulated+blast+overpressure%3A+Possible+role+of+pulse+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Altered gene expression in cultured microglia in response to simulated blast overpressure: Possible role of pulse duration.</a> Neurosci Lett. 522 (1), 47-51 (2012).</li>
<li>Nienaber, M., Lee, J. S., Feng, R., Lim, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impulsive+pressurization+of+neuronal+cells+for+traumatic+brain+injury+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Impulsive pressurization of neuronal cells for traumatic brain injury study.</a> J Vis Exp. (56), (2011).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+Profiling+in+Rat+Hair+Follicles+following+Simulated+Blast+Insult%3A+A+New+Diagnostic+Tool+for+Traumatic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Transcriptional Profiling in Rat Hair Follicles following Simulated Blast Insult: A New Diagnostic Tool for Traumatic Brain Injury.</a> PLoS ONE. 9 (8), 104518(2014).</li>
<li>Bo, C., et al. <a target="_blank" href="http://aip.scitation.org/doi/abs/10.1063/1.3686243">Cellular characterization of compression-induceddamage in live biological samples.</a> AIP Conf Proc. 1426 (1), 153-156 (2012).</li>
<li>Tannous, O., Griffith, C., O'Toole, R. V., Pellegrini, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+ossification+after+extremity+blast+amputation+in+a+Sprague-Dawley+rat+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Trauma%22%5BJournal%5D)">Heterotopic ossification after extremity blast amputation in a Sprague-Dawley rat animal model.</a> J Orthop Trauma. 25 (8), 506-510 (2011).</li>
<li>Chen, Y. C., Smith, D. H., Meaney, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-Vitro+Approaches+for+Studying+Blast-Induced+Traumatic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">In-Vitro Approaches for Studying Blast-Induced Traumatic Brain Injury.</a> J Neurotrauma. 26 (6), 861-876 (2009).</li>
<li>Nguyen, T. T. N., Wilgeroth, J. M., Proud, W. G. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/1742-6596/500/14/142025/meta">Controlling blast wave generation in a shock tube for biological applications.</a> JPCS. 500 (14), 142025(2014).</li>
</ol>

저자 아무 경쟁 금융 관심사 있다.

폭발 이벤트 노출에서 얻은 기본 상해는 아직 완전히 이해 되지. 4 와 heterotopic 나오고6,7, 개발에 중요 한 첫 번째 단계는 식별 하 고 폭발을 이용한 부상, 외상 성 뇌 부상3,등을 트리거하는 메커니즘을 이해 예방의 효과적인 방법입니다. 이 목표를 달성 하기 위해, 다양 한 실험 시스템 폭발 이벤트 노출11,12,13,,1418,19 복제 하도록 개발 되었습니다. . 설명 하는 기술은 여기 충격 관 장비 (그림 2) 전체-바디 (즉, 설치류), 조직, 또는 셀 샘플에서 압력의 범위에 충격파를 발사 능력을 사용 합니다. 전체 조직 보다는 오히려 개별 셀 형식을 로드 하는 기능 손상 메커니즘1,2의 범위를 통해 동시에 발생할 수 있습니다 뚜렷한 세포 응답을 구문 분석 하는 기능을 제공 합니다. 예를 들어 외상 성 모델에 뇌 손상, 신경 등 이다, 개별 세포 유형의 평가 셀 전용 상해의 식별에 대 한 허용할 수 있습니다. 또한, 전체 기관 응답 뇌 조직을 사용 하 여 평가 될 수 있다. 개별 세포 유형 및 조직 표본 값 있고 다른 정보를 제공할 수 있습니다. 그것은 또한 이중 불 감 증 또는 드라이버-튜브 입구를 선택 하 여 충격을 생성 하기 위해 가압 공기의 양을 변경할 수 있습니다. 이 충격파의 기간을 제어합니다. 또 다른 가능성 격 막 물자 및 피크 압력25를 변경 하려면 두께 변경 하는.
고려해 야 할 또 다른 요소는 샘플 주택 등 현재 시스템에 설명 된 EVOC 장비에 있는 충격 관의 출구 근처에 있을 때 있을 수 있는 방해 끝 효과입니다. 찬드라 외. 폭발 웨이브 프로 파일 압축 기반 충격 관에 서로 다른 위치에서 발견 하 고 프리 파형 위치 깊은 충격 튜브15시간에 최고의 표현 했다 발견을 보았다. Kuriakose 외. 또한 샘플의 보조 로드를 공부 하 고 충격 튜브의 끝에 엔드 플레이트의 배치 제거 원치 않는 반사 파도16수 있었다 발견. 데이터를 고려 하 고 있는 이러한 간행물15,16이 문서에서 설명 하는 충격 튜브 시스템을 개선 하기 위해 향후 수정 EVOC 장비 구동된 관 내의 더 깊은 위치에 배치를 포함할 수 있었다, 또는, 충격 관에 엔드 플레이트의 포함. 설명된 방법의 한계는 샘플의 상대적으로 낮은 처리량을 포함할 수 있습니다. 단일 사용자의 출력을 주위에 안전 하 게 충격 관을 운영할 수 있다 시간 당 6-8 샘플. 현재, 시스템은 단일 35 mm 페 트리 접시의 사용 주위 설계 되었습니다. 따라서, 여러 그룹 및 생물 복제를 포함 하는 큰 실험 달성 하기 어려울 수 있습니다.
이 방법 문서에서는 어떻게 부착 피부 시 세포의 생존 능력은 단일 충격파에 노출에 의해 영향을 합니다. 짧은 기간 충격파 (&#60; 10 ms) ≤72의 kPa 미치지 않았다 생존 컨트롤 (그림 3 및 그림 4)에 비교 될 때. 반면, 127 kPa에서 쇼크 웨이브 둘 다 redox 지표 분석 결과 (그림 3) 및 형광 이미지 분석 (그림 4)와 같이에서 24 시간 후, 생존 능력에 상당한 드롭 자극. 세포는 중에 노출 됐다 때 밀러 그 외 여러분 쥐 organotypic hippocampal 슬라이스 문화에서 세포 생존 능력에 유사한 감소를 보고 147 kPa 또는 278 kPa 충격파 오픈, 헬륨 구동 충격 튜브14를 사용 하 여. VandeVord 그 외 여러분 의 짧은 기간 압력에 노출 된 쥐 이다에서 생존 능력에 영향을 주지는 보고 하는 반면, &#62; 200 kPa는 barochamber 충격 관18대신 사용 되었다. 따라서 로드의 성격 조직 또는 세포의 기계적 특성에 매우 의존 하는 신체 내에서 복잡 한 스트레스 파도 만들지만이 외부 압력은 폭발 파에 의존을 주목 한다. 폭발 이벤트에 세포질 응답의 추가 특성 연구는 필요 합니다. 또한,이 기술은 같이 세포 수준에서 충격파 노출 평가, 하 여 생물학 응답 신호 경로 또는 epigenetic 변화의 섭 동 등 부상에서 트리거 식별 고 더 탐험.
결론적으로,이 작품 스테인리스 충격 관 및 1 차 셀 문화를 통합 하는 수정 된 EVOC 장비를 사용 하 여를 설명 합니다. 압력의 범위에 충격파 생성 하 고 폭발 파에 노출에서 발생 하는 효과 복제 하려면 라이브 셀 통해 전파 수 있습니다. 이 프로토콜, 세포 생존 능력을 평가 하는 방법을 설명 하지만 개별 셀 형식에 장기 변화 또한 공부 될 수 있다. 앞으로 복잡 한 충격파 폭발 유도 주 부상에 대 한 우리의 이해를 발전의 목표와 더불어 다른 세포 유형으로 이끌어 낼 수 있습니다 차동 효과 평가 계획입니다.

현대 전쟁 및 민간인에 테러 작업에서 즉흥적으로 폭발 장치를 사용 하 여 최근 트렌드, 중요성은 인간의 신체에 폭발적인 이벤트의 효과 이해 합니다. 폭발 이벤트에 노출을 통해 얻은 부상 치명적인 치명적인 부상의 4 개의 종류로 분할 되 고 실제 프로세스와 수 있습니다. 압축 하 고 연속적으로 광대 한 방식으로, 막과 부드러운 조직1의 장애를 일으키는 시체와 로컬 상호 작용 하는 폭발 파에 직접 노출에서 기본 부상 결과입니다. 2 차 부상 무뚝뚝한 외상 또는 침투 상처 충격으로 폭발 파에 의해 빠른 속도로 추진 하는 낮은 질량 개체와 함께 포함 됩니다. 3 차 부상 폭발 파에는 충분 한 에너지를 높은 질량 또는 개체에 대 한 개인의 개체를 던 질 때 발생 합니다. 마지막으로, 제 사기 폭발 부상 플래시 화상2같은 다른 범주에 맞지 않는 다른 기타 부상에 의해 정의 됩니다. 이러한 폭발 이벤트에 노출, 다음 주 부상 외상 성 뇌 부상3,,45, heterotopic 나오고6,7, 폭발 폐 상해8, 청각의 손실을 포함 9, 등10.
폭발 이벤트에서 일반적으로 관찰 된 파형은 프리 파, 대표 하는 무료-필드는 동봉 하는 공간, 반대로 폭발 이다. 긍정적인 압력에 샤 프 하 고 급속 한 상승으로 정의할 수 있는 폭발 전면 파형에 의하여 이루어져 있다. 이것은 높은 속도 대기 수준에 압력을 감소 시키는 릴리스 물결에 움직이는 공기의 돌풍 바람에 즉시 선행 된다. 부분적인 진공은 공기의 느린 역류 발생 초기 폭발의 지역에 남아 있습니다. 파도 (그림 1A)의 긍정적이 고 부정적인 단계 폭발 파도1푸시 풀 운동의 결과. 기본 폭발 부상 뒤에 메커니즘을 명료 하 게 하기 위해, 실험 모델 파형, 프리 파, 세포와 조직 것 이다 얼굴 진짜 폭발 이벤트에 노출 등을 생산 하기 위해 생성 되었습니다. 문학에서 나열 된 현재 시스템 포함 충격 관11,12,13,14,15,,1617, barochambers18,19, Kolsky 바20, 고급 폭발 시뮬레이터21, Split Hopkinson 압력 바22, 그리고 다른 폭발 이벤트 사용 하 여 통제 된 환경에서의 휴양 pentaerythritol tetranitrate23. 사용할 수 있는 모델의 광범위에도 불구 하 고 많은 변수 영향, 적용 전 스트레스를 포함 하 여 폭발 파도 개별 세포 유형 또는 조직 평가24에서 기계적 성질에서 얻은 부상. 조직 또는 장기의 연구 조직 변형 및 폭발 사건의 결과로 지속 심한 형태학 변화에 설명 해 주실 수 있습니다, 하는 동안 세포 수준에서 분석 transcriptional epigenetic 변화는 충격파에 의해 영향을 파악할 수 있습니다.
이 방법 문서는 단층에 라이브 셀 통해 압력의 범위에 충격파를 전파 하는 기법을 설명 합니다. 세포 생존 능력, 충격에서 잠재적인 손상 임계값 elucidating 즉각적인 특성에 대 한 수 있습니다. 또한, 가능한 셀 표준 문화 조건에 반환 될 수 있습니다 그리고 폭발 이벤트에서 장기 생물 학적 효과 평가할 수 있습니다. 프로토콜 아래 문화 셀에 사용할 수 있는 두 가지 셀 생존 방법을 설명 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55618/55618fig1.jpg"> 
그림 1: 프리 웨이브의 근사. (A) 충격 관에 센서 3에서 프리 웨이브의 근사. (B) 대표 데이터 센서 1, 2, 및 충격 관에 3에서 다른 압력 프로필을 게재. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55618/55618fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

<table><tbody><tr><td>MEM &alpha;, 뉴클레오시드</td><td>ThermoFisher</td><td>22571020</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, 인증, 완전한</td><td>성장 배지를 생성하기 위한</td> 미국 유래 <td>ThermoFisher</td><td>16000044</td> 보충제.</tr><tr><td>둘베코' s 인산염 완충 식염수</td><td>시그마 Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>15070-063</td><td>보충제는 완전한 성장 배지를 만듭니다.</td></tr><tr><td>트립신-EDTA (0.5%), 페놀 레드 없음</td><td>ThermoFisher</td><td>15400-054</td><td>사용 전에 10분의 1을 희석하십시오.</td></tr><tr><td>CytoOne T-75 플라스크, TC 처리, 통풍구</td><td>Starlab</td><td>CC7682-4875</td><td></td></tr><tr><td>TC 접시 (PS) 35 mm, 8.5 cm2</td><td>Triple Red</td><td>TCD010035</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish (PS) 90 x 14.2 mm no vent</td><td>VWR UK</td><td>391-0453&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>가스 투과성 접착 플레이트 씰</td><td>ThermoFisher</td><td>AB-0718</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 세포 이미징 키트(488/570)</td><td>ThermoFisher</td><td>R37601</td><td></td></tr><tr><td>Alamarblue 세포 생존도 시약</td><td>Fisher Scientific</td><td>13494309</td><td></td></tr><tr><td>Virkon 정제</td><td>VWR UK</td><td>115-0020</td><td>생존도 제어 시약으로 2% 용액을 생성하는 데 사용합니다.</td></tr><tr><td>Dumont 집게</td><td>SurgicalTools</td><td>11295-10</td><td>페트리 접시에서 커버 슬립을 제거하는 데 사용합니다.</td></tr><tr><td>커버 유리, 사각형</td><td>VWR UK</td><td>631-0125</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>VWR UK</td><td>631-1553</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 플레이트, 솔리드 블랙</td><td>AppletonWoods</td><td>CC760</td><td>형광 측정에 사용되는 플레이트.</td></tr><tr><td>96 웰 플레이트, 투명, (PS)</td><td>VWR UK</td><td>734-1799</td><td>흡광도 측정에 사용되는 플레이트.</td></tr><tr><td>Leica DMi1 카메라 스탠드 장비</td><td>세포 배양에 사용되는</td> <td>Leica Microsystems</td><td></td> 광학 현미경.</tr><tr><td>Zeiss PALM MicroBeam Laser Capture Microdisseciton</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Fluorescence 마이크로솝은 LIVE/DEAD 이미징에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>EnVision Multilabel Reader</td><td>PerkinElmer</td><td>2104-0010A</td><td>플레이트 리더는 형광/흡광도 판독에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Mylar 전기 및 화학 절연 필름, 304 mm x 200 mm x 0.023 mm&nbsp;</td><td>RS Components</td><td>785-0782</td><td>쇼크 튜브 다이어프램을 만드는 데 사용합니다.</td></tr><tr><td>Mylar 전기 및 화학 절연 필름, 304 mm x 200 mm x 0.05 mm&nbsp;</td><td>RS Components</td><td>785-0786</td><td>쇼크 튜브 다이어프램을 만드는 데 사용합니다.</td></tr><tr><td>Mylar 전기 및 화학 절연 필름, 304 mm x 200 mm x 0.125 mm&nbsp;</td><td>RS Components</td><td>785-0798</td><td>쇼크 튜브 다이어프램을 만드는 데 사용합니다.</td></tr><tr><td>현재 소스 전원 장치</td><td>Dytran Intruments Inc.</td><td>4103C</td>, <td>2300V1 센서용 전원.</td></tr><tr><td>IEPE 압력 센서</td><td>Dytran Intruments Inc.</td><td>2300V1</td><td>압력 센서는 쇼크 튜브에 있습니다.</td></tr><tr><td>디지털 포스퍼 오실로스코프</td><td>Tektronix</td><td>DPO 4104B</td><td>센서 2300V1 데이터를 수집하고 저장하는 데 사용합니다.</td></tr></tbody></table>

평가 기본 폭발 효과 체 외에

Evaluating Primary Blast Effects In Vitro

폭발 이벤트에 노출은 폐, 귀, 뇌 등 중요 장기에 심각한 외상을 일으킬 수 있습니다. 같은 폭발 유도 상해 뒤에 있는 메커니즘을 이해 하는 것입니다 현대 전쟁 및 테러 관련 사건에 폭발물의 사용으로 최근 추세를 고려 하는 매우 중요. 폭발 유도 상해를 완전히 이해 하려면 우리 먼저 재현할 수 방법을 사용 하 여 통제 된 환경에서 이러한 폭발 이벤트를 복제 하 수 있을 해야 합니다. 충격 관 장비를 사용 하 여이 기술을, 압력의 범위에 충격파는 라이브 셀 2d, 성장에 전파 될 수 그리고 산화 환 원 지표 분석 결과 및 라이브 및 죽은 세포의 형광 이미징 사용 하 여 세포 생존 능력의 마커를 즉시 분석 될 수 있다. 이 메서드는 컨트롤 치료에 비교 될 때 세포 생존 능력에 상당한 드롭 자극 127 kPa 최대 폭발 압력을 증가 입증. 테스트 샘플 부착 세포에 국한 되지 않습니다 하지만 셀 정지, 포함 될 수 있습니다 전체-바디와 조직 샘플, 충격 관 설치에 사소한 수정. 조직 및 세포 경험 진짜 폭발 이벤트에 노출 되 면 정확한 상태를 복제 하는 것은 어렵습니다. 이 문서에서 제공 하는 것과 같은 기술을 손상 임계값을 정의 하 여 충격파 노출에서 발생 하는 세포 내에서 transcriptional epigenetic 변화를 식별 수 있습니다.

위에서 설명한 방법을 사용 하 여, 세포는 단층에 성장 3 중 충격 관 (그림 2B)를 사용 하 여 생성 충격 파도에서 노출 되었다. 세포 생존 능력의 마커 평가 됐다. Redox 지표 분석 결과 사용 하 여, 127 kPa 충격파의 응용 문화 (그림 3)에서 24 시간 후 컨트롤에 비해 피부 시 세포의 생존 능력을 크게 줄일 수 있었다 발견 했다. 쇼크 웨이브 ≤72 kPa의 응용 프로그램 생존 능력을 감소 하지 않았다. 이러한 관측을 지원 하기 위해 각각, 녹색 또는 빨간색 fluorophores, 라이브 또는 죽은 세포를 라벨 붙일 수 있는 형광 이미지 분석 결과 사용 되었다. 생물 복제 당 13 형광 이미지에서 라이브 및 죽은 세포의 정량화 컨트롤 (그림 4)에 비해 127 kPa 충격파에 노출 된 사람들에서 세포 생존 능력에 있는 감소를 설명 했다. 통계 분석 뒤에 p와 Tukey의 다중 비교 테스트, 일방통행 ANOVA를 사용 하 여 실시 되었다 &#60; 0.05 통계적으로 유의 한 것으로 간주. 그룹 당 샘플 크기 redox 지표 분석 결과 대 한 9 및 양적 형광 이미징 분석에 대 한 39 합쳐집니다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55618/55618fig3.jpg"> 
그림 3 : 산화 환 원 지표 분석 결과 데이터의 시간 과정을 보여주는 세포 생존 충격파 노출 후. 상당히 적은 세포는 127-kPa 충격파 노출 그룹에서 치료 컨트롤에 비해 24 시간 후 관찰 되었다. 30의 치료 2%를의 구성 되어 부정적인 제어 살 균 제 t 0와 모든 다른 그룹에 비해 24 시간에서 현저 하 게 몇몇 세포를 보여주었다 (재료의 표 참조). 각 막대가 나타냅니다 평균 ± 1 표준 편차 (SD); 생물 복제, N = 3; 기술 복제, n = 3. p = &#60; 0.0001. p를 = &#60; 0.05. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55618/55618fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55618/55618fig4.jpg"> 
그림 4 : 형광 이미징. (A) 양적 데이터 24 h 후 충격파 노출에서 형광 현미경을 사용 하 여 캡처한 라이브 및 죽은 세포의 형광 이미지에서 수집. 상당히 적은 가능한 셀 127 kPa에서 관찰 되었다 (의미 = 93.42) 47 kPa에 비해 충격파 노출 샘플 (의미 98.18 =), 72 kPa (의미 98.87 =), 그룹을 제어 하 고 (의미 99.10 =). 실행 가능한 셀 24 h 후 부정적인 제어 그룹에 관찰 되었다 (뜻 = 0). (B) 대표 형광 이미지입니다. 그린 레드 죽은 세포를 표시 하는 동안 라이브 셀을 표시 합니다. 각 상자 그림 표시 Tukey 수염;와 함께 상위 및 하위 quartiles 생물 복제, N = 3; 기술 복제, n = 13. p = &#60; 0.0001. 눈금 막대 = 300 µ m. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55618/55618fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

셀 충격파에 노출에 의해 변조는 어떻게 이해는 폭발 이벤트에서 발생 하는 부상 뒤에 메커니즘을 식별 하는 것을 도울 수 있다. 이 프로토콜 사용자 충격 관 장비를 사용 하 여 셀 monolayers에 압력의 범위에 충격파를 적용할 세포 생존 능력에 후속 효과 확인.

Exposure to blast events can cause severe trauma to vital organs such as the lungs, ears, and brain. Understanding the mechanisms behind such ...

이 방법의 전반적인 목표는 폭발 사고 시 발생할 수 있는 대표적인 충격파를 생성하고, 이러한 기계적 충격이 배양 중인 일차 세포의 생존력에 미치는 영향을 평가하는 것입니다. 이 방법은 충격파 노출과 같은 고에너지 사건에 대한 개별 세포 유형의 반응과 관련된 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 조직이나 장기 수준의 반응과 달리, 단일 충격파에 대한 뚜렷한 세포 반응을 평가할 수 있다는 점입니다.이 기술의 응용 범위는 충격파 노출로 인해 발생하는 1차 폭발 손상의 결과로 변화된 세포 메커니즘을 식별하는 것까지 확장됩니다. 비록 본 방법에서는 특정 관심 세포 유형을 사용하여 시연하고 있으나, 충격파에 대한 세포 특이적 반응을 평가하기 위해 어떤 세포든 배양하여 테스트 설정 내에 배치할 수 있습니다. 우선, 관심 세포주를 80% confluence에 도달할 때까지 표준 배양 조건에서 배양하십시오.그 다음, 배지를 흡입하여 제거합니다. PBS로 세포를 2회 세척하고, Trypsin-EDTA 2 mL를 첨가합니다. 이를 표준 배양 조건에서 5분 동안 배양합니다.세포가 플라스크에서 성공적으로 분리되었는지 잠시 확인합니다. 그 다음, Trypsin을 중화시키기 위해 FBS가 포함된 배양액 4 mL를 플라스크에 넣고 세포를 15 mL 원추형 튜브로 옮깁니다. 세포를 펠렛화하기 위해 200 ×g에서 4분 동안 원심분리합니다.그런 다음, 펠렛이 떨어지지 않도록 주의하며 상층액을 천천히 흡입하여 제거합니다. 그리고 5 mL의 배지에 펠렛을 재현탁합니다. 라벨이 부착된 35 mL 디쉬 3개를 90 mL 디쉬 안에 넣습니다.그 다음, 각 디시에 배지 2 mL를 넣고 7만 개의 세포를 각각 분주합니다. 충격파에 노출시키기 전, 세포가 충분히 부착될 수 있도록 세포를 하룻밤 동안 배양합니다. 충격 튜브 조립을 시작하기 전에 안전화와 실험복을 포함한 적절한 개인 보호 장비를 착용하십시오.먼저 배출 플랜지의 수평면에 있는 볼트 구멍에 두 개의 정렬 바를 삽입합니다. 그런 다음, 정렬 바의 끝단 위에 니트릴 고무 가스켓 시트를 배치하여 배출 플랜지와 ex vivo 장기 배양 장치(EVOC rig) 사이에 위치하도록 합니다. 고정 장치를 정렬 바 위로 밀어 넣어 EVOC 장치를 충격파 관의 배출 플랜지에 부착합니다.페트리 접시를 거치하는 부분이 바닥면에 오도록 방향을 올바르게 맞춥니다. 다음으로, 남은 구멍에 4개의 M24 볼트와 와셔를 삽입하고, EVOC 리그와 충격관(shock tube)이 제대로 정렬되었는지 육안으로 확인하면서 너트와 볼트를 대각선 방향으로 대칭되게 순차적으로 단단히 조입니다. 그런 다음, EVOC 리그에 압력 트랜스듀서를 부착하고 센서 케이블을 사용하여 이를 전류원에 연결합니다.또한, BNC 케이블을 사용하여 전류원을 오실로스코프에 연결하십시오. 충격파 관의 모든 배출 밸브와 유량 제어 장치가 닫혀 있는지 확인하십시오. 그런 다음, 내장된 외부 압축 공기 라인을 열고 압력 조절기를 시계 방향으로 수동으로 돌려 솔레노이드를 2.5 bar까지 충전하십시오.압축 공기 실린더를 열고, 압력 조절기를 천천히 시계 방향으로 돌려 압력을 약 15 bar까지 높입니다. 다음으로, 0.125-milliliter 두께의 플라스틱 시트를 10 centimeter x 10 centimeter 크기의 정사각형으로 잘라 다이아프램을 준비합니다. 테이프로 손잡이를 만들어 다이아프램의 상단과 하단에 고정합니다.이를 사용하여 브리치 챔버(breech chamber) 옆의 전면 소형 플랜지 adjacent에 다이어프램을 조심스럽게 배치하십시오. 브리치를 닫기 전에 다이어프램이 직선으로 올바르게 위치했는지 확인하십시오. 그런 다음 4개의 M24 볼트와 너트를 사용하여 이를 고정하십시오.멸균 후드 내에서 점착성 가스 투과성 막을 준비하여, 각각의 막이 35-milliliter 페트리 접시 하나의 윗부분을 덮을 수 있을 만큼 충분한 크기가 되도록 합니다. 그다음, 3가지 실험 시료가 담긴 90-milliliter 페트리 접시를 후드 내로 옮깁니다. 접시 중 하나의 배지를 흡입하여 제거하고, 막과 접시 가장자리 사이에 틈이 없도록 밀봉하여 두 개의 막 조각으로 덮습니다.샘플을 EVOC 장치로 옮기고, 디쉬의 상단이 충격관의 내부 바닥과 일직선이 되도록 고정 장치의 바닥에 고정합니다. 이때 귀마개, 보안경, 안전화 및 실험실 가운을 착용하십시오. 레귤레이터의 유량 제어 노브를 시계 방향으로 돌려 충격관 시스템을 가압합니다.제어 패널 하단에서 짧은 지속 시간의 충격파를 위한 이중 브리치 입구(double breech inlet) 또는 파형 지속 시간을 늘리기 위한 드라이버 튜브 입구(driver tube inlet) 중 하나를 선택하십시오. 그런 다음, 파형 데이터를 수집하기 위해 DC 전원 장치와 오실로스코프를 켜십시오. 다음으로, 충격파 튜브가 충전 중일 때 다른 연구원이 방에 들어오지 않도록 알리기 위해 제어 패널 맞은편 벽면에 있는 스위치를 사용하여 안전등을 켜십시오.솔레노이드 제어 박스에서 스위치를 눌러 솔레노이드를 닫으십시오. 그런 다음 제어 패널에서 노브를 시계 반대 방향으로 돌려 유량 제어를 천천히 열어 압축 챔버 내의 압력을 점진적으로 높이십시오. 다이아프램의 파열 압력에 도달하면 다이아프램이 파열되면서 펑 하는 소리가 들릴 것입니다.이 소리가 들리면 즉시 유량 조절 노브를 닫으십시오. 그런 다음 솔레노이드 제어 박스의 스위치를 꺼서 솔레노이드를 열고, 안전등을 끄십시오. 세포 샘플을 멸균 후드로 옮기십시오.그곳에서 접착식 가스 투과성 막을 제거하고, 배양 접시에 2 mL의 신선한 성장 배지를 채웁니다. 신선한 성장 배지 2 mL를 다시 채운 직후, 각 실험용 접시에 200 µL의 산화환원 지시약 시약을 첨가합니다. 그런 다음, 배양 접시를 표준 배양기에 넣고 4시간 동안 배양합니다.배양 후, 각 디시에서 100-microliter 분주액 두 개를 적절한 96-well 플레이트로 옮깁니다. 형광 플레이트 리더로 플레이트를 판독한 후 데이터를 내보내고 저장합니다. 살아있는 세포와 죽은 세포의 형광 이미징을 위해서는, 세포를 처음에 35-milliliter 배양 플레이트 내부의 유리 커버슬립 위에 플레이팅해야 합니다.충격파 처리 후, 배지를 흡입하여 제거하고 1 mL의 PBS로 세포를 2회 세척합니다. 그다음, 이미징 키트에 포함된 live dead 시약 100 µL를 각 시료에 옮깁니다. 그리고 빛이 차단된 실온 상태에서 세포와 시약을 15분 동안 배양합니다.배양 후, 시약을 제거하고 1 mL의 PBS를 사용하여 세포를 한 번 세척합니다. 정밀 핀셋을 사용하여 35 mL 디쉬에서 커버슬립을 조심스럽게 제거한 다음, 유리 현미경 슬라이드 위에 뒤집어 놓습니다. 수치구경 0.25의 5X 대물렌즈가 장착된 형광 현미경을 사용하여 각 샘플의 이미지를 획득합니다.그런 다음, 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 각 이미지에서 살아있는 녹색 세포와 죽은 적색 세포의 수를 수동 또는 자동으로 계수합니다. 여기에 설명된 방법을 사용하여, 단층으로 배양된 세포를 충격파 관으로 생성된 충격파에 노출시켰습니다. 충격파 관의 센서는 관을 따라 서로 다른 위치에서 관찰된 압력 프로필을 표시합니다.산화환원 표시 분석을 통해, 127 kPa의 충격파를 가했을 때 배양 24시간 후 대조군에 비해 진피 유두 세포의 생존력이 유의하게 감소함을 확인하였습니다. 72 kPa 이하의 충격파 적용은 생존력을 감소시키지 않았습니다. 이러한 관찰 결과를 뒷받침하기 위해 실시한 생사 분석(live dead assay)에서도 127 kPa 충격파에 노출된 세포는 대조군과 비교하여 세포 생존력이 감소하는 것으로 나타났습니다.이 기술을 숙달하면 시간당 60개의 샘플을 처리할 수 있을 정도로 빠르게 수행할 수 있습니다. 충격파 관을 사용하여 충격파를 생성함으로써 다양한 일차 폭발 손상을 탐구할 수 있습니다. 이러한 손상은 폭발성 폐 손상부터 신체 연조직 내에 뼈가 비정상적으로 형성되는 이소성 골화까지 다양하게 나타날 수 있습니다.이 절차를 수행할 때는 압축 가스와 고에너지 충격파를 다룰 때 수반되는 위험을 유념하고, 항상 올바른 안전 지침을 준수하는 것이 중요합니다. 충격파 관(shock tube)의 미세한 수정을 통해 충격파를 조절할 수 있습니다. 이를 통해 다양한 폭발 시나리오를 나타내는 서로 다른 압력 프로파일과 강도에 대한 세포 반응을 평가할 수 있습니다.이 절차를 마친 후, 충격파 노출이 세포 내의 천연 각인을 어떻게 변화시키는가와 같은 추가적인 연구 질문에 답하기 위해 차세대 염기서열 분석을 수행할 수 있습니다.

evaluating-primary-blast-effects-in-vitro

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 기사에서는 제브라피시 배아가 화학적 독성 검사에 사용됩니다. 화학적 독성은 표현형 판독과 상관관계가 있습니다. 샘플 프로토콜은 화학적 독성 스크리닝을 수행하는 방법론적 접근 방식을 보여줍니다.

배아 기반 화학 독성 스크리닝: 제브라피시 배아 발달에 미치는 영향 평가

T-림프구 유사분열은 배반생성 변형을 동반하며, 이에 따라 세포 분열 전에 세포 부피가 커집니다. 여기에서는 세포 직경을 측정할 수 있는 기능이 있는 자동 세포 계수기를 사용하여 T 림프구의 모세포 형성을 정량화하는 방법을 설명합니다.

면역 마약 식별을위한 T 림프구에서 미토 겐 유도 블라스의 신속한 정량

이 문서는 기본 폭발 외상 성 뇌 손상의 새로운 모델을 설명합니다. 압축 공기 구동된 충격 튜브는 단일 충격파를 마우스 hippocampal 슬라이스 문화 체 외에 노출 하는 데 사용 됩니다. 이것은 높은 처리량을 가진 재현할 수 뇌 조직 손상 생성 하는 간단 하 고 빠른 프로토콜 이다.

모델을 새로운 시험관에 폭발 외상 성 뇌 손상의

여기, 선물이 ex vivo 혈관 반응성 결정 다음 주 폭발 외상 성 뇌 손상 (bTBI) 절연, 가압, 설치류 중간 대뇌 동맥 (MCA) 세그먼트를 사용 하 여 위한 방법을 설명 하는 프로토콜. bTBI 유도 충격 관로 알려진 또한 고급 폭발 시뮬레이터 (ABS) 장치를 사용 하 여 수행 됩니다.

가압된 설치류에 폭발을 이용한 Neurotrauma의 효과 중간 대뇌 동맥

이 절차는 시험관 내에서 고급 3D 간 배양을 개발하는 데 사용되기 위해 설립되었으며, 급성 또는 장기, 반복 투여 요법 모두에 걸쳐 나노 물질 노출과 관련된 물질 독성 위험의 보다 생리적으로 관련 된 평가를 제공 할 수 있습니다.

장기 나노 물질 노출 다음 체외 물질 독성 테스트를 위한 고급 3D 간 모델

우리는 여기에 설치류를위한 폭발파 모델의 프로토콜을 제시하여 경증에서 중등도의 외상성 뇌 손상의 신경 생물학적 및 병리 생리학적 효과를 조사합니다. 우리는 압력 센서가 장착 된 가스 구동식 벤치 탑 설정을 구축하여 폭발로 인한 경증에서 중등도의 외상성 뇌 손상을 안정적이고 재현 가능한 생성이 가능하도록했습니다.

설치류의 폐쇄 머리 경미한 외상성 뇌 손상의 전임상 평가를위한 저강도 폭발파 모델

닭 배아는 고전적인 발달 모델로서, 다양한 환경 오염 물질에 노출 된 후 발달 심장 독성을 평가하기 위해 실험실에서 사용됩니다. 확립된 노출 방법 및 형태학적/기능 적 평가 방법은 이 원고에 설명되어 있습니다.

발달 심장 독성 평가에 강력한 도구로 닭 배아를 사용

여기에서는 레이저 유도 충격파(LISW)를 사용하여 폭발로 인한 달팽이관 손상의 동물 모델을 만들기 위한 실험 프로토콜에 대해 설명합니다. 측두골이 LISW에 노출되면 폭발에 의한 달팽이관 병태생리학이 재현될 수 있습니다. 이 동물 모델은 달팽이관 병리학을 밝히고 폭발 부상에 대한 잠재적 치료법을 탐색하기 위한 플랫폼이 될 수 있습니다.

폭발로 인한 달팽이관 손상을 연구하기 위한 레이저 유도 충격파의 연구 응용

여기에 제시된 것은 마우스를 사용하여 반복적인 저강도 폭발 노출을 생성하는 방법입니다.

마우스에서 매우 반복적인 낮은 수준의 폭발 노출 모델링

우리는 인간의 혈청에서 낮은 분자량의 단백질과 펩티드의 선택적 회수를위한 mesoporous 실리카 박막을 기반으로 기술을 개발했습니다. 우리 mesoporous 칩 physico - 화학적 성질은 잘게 펩타이드 강화에 실질적인 컨트롤을 제공하며, 결과적으로 진단을 위해 혈청 프로테옴을 프로파일하기 위해 조정되었습니다.

Biomarker 디스커버리를위한 Mesoporous 실리카 박막의 낮은 분자량의 단백질 농축

학습하세요 체외에서 충격파가 세포 생존율에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 맞춤형 쇼크 튜브 장비를 사용하여 기계적 충격에 대한 세포 반응을 연구하고 폭발 손상 메커니즘을 이해할 수 있습니다.

평가 기본 폭발 효과 체 외에

더 많은 동영상 탐색