Name: 라이트 시트 기반의 형광 생활의 현미경 또는 고정 및 스테인드 Tribolium castaneum 배아 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 배우세요 Tribolium castaneum 배아의 형태발생을 라이트 시트 형광 현미경으로 장시간 비침습 관찰하는 방법입니다. 세 가지 마운팅 기법과 신규 형질전환계를 활용하여 광표백과 광독성을 최소화하면서 세포 이동과 증식을 실시간으로 분석할 수 있습니다.

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우리는 기술 지원 스벤 플래스합니다. 글 리아 - 블루 형질 전환 라인은 그레고르 버처 (괴팅겐, 독일)에서 일종의 선물이었다. 이 연구는 괴테의 Buchmann 분자 생명 과학 연구소 (BMLS, 감독 엔리코 슐레이프)에서 EHKS 부분적으로 부여 Macromolecular의 단지 (CEF-MC, EXC (115), 스피커 폴커 도이치)에 대한 암마 우수 프랑크푸르트의 클러스터에 의해 투자되었다 Universität 프랑크푸르트 도이치 Forschungsgemeinschaft (DFG)에 의해 홈페이지입니다.

저자가 공개하는 게 없다. 저자 공헌 FS 및 EHKS는 연구를 잉태. FS는 유전자 변형 AGOC 라인을 생성. 광 시트 계 형광 이미징 FS 및 SK에 의해 수행되었다. FS 및 EHKS는 SK의 의견으로 원고를 썼다.

품질 관리 라이브 영상 분석에서, 준비 및 녹음 과정은 기계적 및 화학적 처리 (샘플 홀더에 장착 수집, dechorionation)도 관찰 기간 동안 집단 에너지 부하도, 즉 표본의 생존에 영향을해야, 비 침습적해야합니다. WT 개발의 특성을 연구 들어, 배아가 성공적으로 검색되고, 녹음 과정을 생존하고 건강한 성인으로 발전하는 실험에서만 사용 데이터를 권장합니다. 성인은 비옥해야한다, 어떤 형태 수차를 안되며, 그 자손은 비옥해야합니다. 특히 장기간의 라이브 영상 분석 낮은 생존율에 대한 세 가지 주요 이유가 있습니다 : 우선, 배아 표면 아마도 이온과 가스 교환을 방해하고, 배아를 수축 mechan 7 단계 동안 아가 광범위 덮었다전신적. 영향을받는 배아는 초기 배 발생 동안 몇 군데 특히, 일반적으로 몇 시간 동안 눈에 띄지 않게 개발 갑자기 체포하고 신속하게 자신의 형광...

어둠 속에의 딱정벌레의 대가족 (Tenebrionidae)에 속하는 붉은 가루 딱정벌레 Tribolium의 castaneum는 농업 및 생명 과학에서 오랜 역사를 가지고와 과일에 이어 두 번째로 최고의 연구 모델 곤충 모델 생물은 노랑 초파리 비행입니다. 지난 사십 년 동안, 여러 가지 이유로 배아 형태 형성에서, 지난 20 년 동안, 진화 발생 생물학의 발달 유전학 강력하고 인기있는 곤충 모델 생물되었고 : 초파리와 Tribolium 모두는 Holometabola에 속하지만, 약 300 만 년 전 1, 2, 3, 4 분기. 높은 파생 초파리의 배아 발달이 일반적으로 생각하는 동안, Tribolium는 (STABLE)보다 조상 모드를 보여줍니다곤충 종 5, 6, 7, 8, 9의 상당히 큰 비율로 발견 클럽 봉사. 그 구기 및 안테나는 배아 10, 11, 12, 13, 14, 15 중 이미 출현 즉 첫째 Tribolium는 비 involuted 헤드 현상을 나타낸다. 둘째, Tribolium는 짧은 배아 발달, 즉 복부 세그먼트 germband 신도는 16, 17, 18, 19 중 후방 성장 구역으로부터 순차적으로 추가의 원리를 따른다. 셋째, Tribolium 개발하고 나중에 저하두 개의 별도의 배아 멤브레인은 복부를 커버 배아 양막, 완전히 20, 21, 22 배를 감싸고 장막을 즉. 두 막은 중요한 형태 발생 (23)뿐만 아니라 미생물 24, 25 및 탈수 (26)에 대한 보호 역할을한다. 넷째는 embryonically 개발 다리는 애벌레 삶의 단계에서 완벽하게 작동하며, 번데기 변태 27, 28, 29, 30, 31 중 성인 다리의 primordia 역할을합니다. 때문에 작은 크기와 겸손한 요구에, 실험실에서 Tribolium의 재배는 매우 간단합니다. 야생형의 문화 (WT) 균주 또는 형질 전환 라인들은 전형적으로 약 100-300 성인 구성 및 전체 그레인 밀 구성 성장 배지 서너 센티미터 (약 50g 충전 한 리터 유리 병 (발자국 80cm 2)) 내에서 유지 될 수있다 밀가루는 비활성 건조 효모와 보충. 물 공급이 필요하지 않습니다. 이 소형 또는 중간 크기 상업적으로 이용 가능한 곤충 인큐베이터 내에서 딱정벌레 문화의 수십 유지하기 위해 아주 작은 실험실을 할 수 있습니다. Tribolium 이후 발달 단계 (유충 후 약 네번째 령, 번데기 어른) 쉽게 체질하여 성장 배지로부터 분리된다. 동기화 배아 알을 낳는 매체 단기간 성인 배양함으로써 얻어진다. 재고 유지는 일반적으로 22 ~ 25 ℃에서 수행되는 동안 급속한 발전을 위해, 딱정벌레 문화가 32 ° C (세대 당 약 4 주)에 보관 (약 십주 세대 당). 지난 십 년간 내에서, 많은 표준 절반신흥 모델 생물 책 (32)에 요약 된 바와 같이 hniques 점차 적응 Tribolium 위해 최적화되었다. 매우 중요한 배아 (33) 유전 적 방법, 유충 34, 35 또는 부모 36, 37 RNA 간섭 기반 유전자 녹다운, 어느 피기 38, 39 또는 미노스 40 트랜스 장치 및 CRISPR / Cas9 기반 게놈 생식선 변환 전진 엔지니어링 41. 또한, Tribolium 게놈은 10 년 전의 42 내지 약 서열화되었으며, 효율적인 게놈 전체의 식별 및 유전자 44 체계적 분석이 가능 조립체 (43)를 해제 게놈 번째 라운드에서 지금 </s업&gt; 또는 기타 유전 적 요소 (45), (46). 또한, 다른 네 coleopteran 종의 게놈 비교 유전자 접근법 47, 48, 49, 50 가능하다. 게놈 시퀀싱에 대응하여 두 개의 대규모 유전자 분석은 삽입 성 돌연변이 유발의 스크린 (51) 및 체계적 RNA 간섭 기반 유전자 녹다운 화면 (52), (53), 즉, 실행되었다. 위드, 촛점 또는 광 시트 기반 현미경 (LSFM)와 형광 라이브 영상 다차원 컨텍스트 (표 1)에서 시간의 함수 (즉, 형태 형성)로서 Tribolium 배아의 형태를 관찰 할 수있다. 위드와 공 초점 형광 현미경에서, excitATION과 출사 광은 동일한 대물 렌즈를 통해 안내된다. 두 접근법에서, 전체 시료마다 기록 된 2 차원 평면에 대해 조사된다. 따라서, 표본은 매우 높은 에너지 레벨을 실시한다. LSFM에서, 초점면에서 단지 형광 인해 두 개의 수직 배열 대물 렌즈 (도 1)를 이용하여 조명 및 검출 디커플링 기쁘게. 단일 평면 조명 현미경 (SPIM)와 디지털 스캔 레이저 광 시트 기반의 형광 현미경 (DSLM, 그림 2) - - LSFM 두 규범적인 구현으로 제공하고 기존의 방법에 비해 몇 가지 중요한 이점을 제공합니다 : (I) 고유의 광학 절편 기능, (ⅱ) 좋은 축 해상도, (Ⅲ) 광 표백 강하게 감소 레벨 (IV)의 매우 낮은 광 독성, (V)이 높은 신호대 잡음비 (VI)의 비교적 높은 수집 속도 (VII) 이미징 여러 방향 및 (VI 함께낮아서 개구 조사 대물 렌즈 (54), (55), (56)의 사용과 ⅱ) 깊은 조직 침투. LSFM 이미 성공적으로 거의 전체 배아 형태 형성 57을 기록하고 지느러미 폐쇄 (23)의 시작 부분에 여분의 배아 막 파열의 원칙을 분석 Tribolium에 적용되었습니다. 현미경은 편의성 될 곳은 표준 운영 절차를 수립하고, 방법, 프로토콜과 수준으로 자원의 풀을 개선하기 위해 매우 중요하다의 Tribolium 지역 사회와 일반 곤충 과학에 대한 LSFM의 매력을 높이려면 발달 생물학 실험실에서 표준 도구를 -USE, 생물학적 질문 관심의 중심에있어. 이 프로토콜은 Tribolium의 기초 &lt;시작/ EM&gt; 재배, 즉 유지 보수, 복제 및 배아 수집. 다음으로, 두 실험 전략들이 도시되어있다 : (I) 라이브 주문품 제닉 라인 화상 및 형광 염료 (표 2)으로 염색 하였다 고정 배아 (II) 촬상. (I) 아가로 오스 컬럼 (II) 아가 반구 및 (iii) 신규 거미줄 보유자 :이어서, 약간 다른 목적 세 실장 기술 상세 (도 3 및 표 3)에 설명되어있다. 이 프로토콜은 다음 LSFM와 데이터 수집 절차를 설명합니다. 이미징 양식 및 주요 고려 사항이 설명되어 있습니다. 마지막으로, 배아 검색 설명한다 기본 데이터 처리를위한 제안을 제공한다. 대표적인 결과, 라이브 영상 데이터 개의 신규 주문 제작 및 글 리아 블루 58 개 트랜스 제닉 라인이 도시되어 있고, 각 촬상 데이터 세트는 다운로드 가능한 자원으로 제공된다. 또한, 이미지형광 염료의 다양한 염색 고정 배아의 데이터가 표시된다. 토론은 품질 관리, 라이브 이미징 방식의 전류 제한 및 다른 종의 프로토콜의 적응에 초점을 맞추고 있습니다. 프로토콜은 샘플 챔버 통상적 직경 금속, 플라스틱 또는 유리로 만들어진 원통형 요소 표준 시료 홀더 (54), (59), (60)에 대해 회전 가능한 클램프기구가 장착되어 광 시트 계 형광 현미경 작성된 밀리미터 범위이다. 이 프로토콜은 두 규범적인 구현 예 및 SPIM DSLM뿐만 아니라 둘 이상의 조명 및 검출 아암 (61) (62) (63)에 대한 설정에 적합하다. 대표적인 결과는 두 채널의 스펙트럼 데이터를 표시, 녹색 (IL488 nm의 레이저 검출 관통 필터 대역 통과 70분의 607 관통 필터)와 레드 (a 561 nm의 레이저로 조명 검출 대역 통과 50분의 525)하지만, 프로토콜 lumination 서너 스펙트럼 채널로 확장 될 수있다.

<table><tbody><tr><td>전체 곡물 밀가루</td><td>Demeter e.V.</td><td>1.13E+08</td><td>미국: 통밀가루, 영국: 통밀가루</td></tr><tr><td>405 고운 밀가루</td><td>Demeter e.V.</td><td>1.13E+08</td><td>미국: 페이스트리 가루, 영국: 연질 밀가루</td></tr><tr><td>비활성 건조 효모</td><td>Flystuff / Genesee Scientific</td><td>62-106</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 사인(PBS), pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>차아염소산나트륨, ~12% 활성 Cl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>425044-250ML</td><td>주의: 차아염소산나트륨은 부식성이며</td></tr><tr><td>저융점 아가로스</td><td>Carl Roth</td><td>6351.2</td><td></td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>Orange Scientific</td><td>4430500</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>Orange Scientific</td><td>4430300</td><td></td></tr><tr><td>유리 모세관, 내부 및 오슬래시; 0.46 mm</td><td>Brand GmbH + Co KG</td><td>7087 09</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>57020</td><td>염색 용액 준비는 표 2</td></tr><tr><td>YOYO-1 요오드화물</td><td>에 설명되어 있습니다.Thermo Fisher Scientific</td><td>Y3601</td><td>염색 용액 준비는 표 2</td></tr><tr><td>BOBO-3 요오드화물</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B3586</td><td>염색 용액 준비는 표 2</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A12379</td><td>염색 용액 준비는 표 2</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 546 Phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A22283에 설명되어 있습니다.</td><td>염색 용액 제조는 표 2</td></tr><tr><td>체, 800&마이크로에 설명되어 있습니다. m 메쉬 크기</td><td>VWR International</td><td>200.025.222-051</td><td></td></tr><tr><td>체, 710 &마이크로; m 메쉬 크기</td><td>VWR International</td><td>200.025.222-050</td><td>성장 배지 준비 (1.1 단계)</td></tr> <tr><td>체, 300 &마이크로; m 메쉬 크기</td><td>VWR 국제</td><td>200.025.222-040</td><td></td></tr><tr><td>체, 250 &마이크로; m 메쉬 크기</td><td>VWR International</td><td>200.025.222-038</td><td>알을 낳는 배지 준비 (1.2 단계)</td></tr> <tr><td>유리 접시, &Oslash; 100 mm &times; 20 mm</td><td>시그마 Aldrich</td><td>CLS70165102</td><td></td></tr><tr><td>세포 여과기, 100 &micro; m 메쉬 크기</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>페인트 브러시, 헤드 &Oslash; 2mm</td><td>VWR International</td><td>149-2121</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 1.0mL</td><td>B. Braun Medical AG</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>섬광 바이알 Sigma</td><td>Aldrich</td><td>M1152-1000EA</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td>주의: 파라포름알데히드는 독성이 있으며 부식성이 있습니다.</td></tr><tr><td>N-헵탄 &Ge; 99%</td><td>Carl Roth</td><td>8654.1</td><td>주의: n-헵탄은 가연성 및 독성이 있습니다</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100-100ML</td><td>주의: Trition X-100은 부식성이 있습니다</td></tr></tbody></table>.

라이트 시트 기반의 형광 생활의 현미경 또는 고정 및 스테인드<em&gt; tribolium castaneum</em&gt; 배아

Light Sheet-based Fluorescence Microscopy of Living or Fixed and Stained Tribolium castaneum Embryos

붉은 가루 딱정벌레 Tribolium의 castaneum 발달 유전학 진화 발생 생물학에서 중요한 곤충 모델 생물이되었다. 광 시트 계 형광 현미경 Tribolium 태아의 관찰은 통상 위드와 공 초점 형광 현미경을 통해 여러 장점을 갖는다. 인해 광 시트 기반 현미경의 고유 특성에 살아있는 검체의 3 개 차원 이미지는 높은 신호대 잡음비로 기록 될 수 있고 상당히 여러 지속 기간 동안 광 탈색뿐만 아니라, 다 방향을 따라 광 독성 감소 일. 방법론 개발 및 지속적인 데이터 증가의 4 년 이상으로, 시간은 Tribolium 지역 사회에서 빛 시트 기술의 사용에 대한뿐만 아니라 곤충 사회에서 큰에서 표준 운영 절차를 수립하는 것이 적절 보인다. 이 프로토콜은 F 적합한 세 실장 기술을 설명또는 다른 목적은, 장기 라이브 영상에 적합한 두 개의 새로운 맞춤형 유전자 변형 Tribolium 라인을 제시 고정 배아의 세포 내 구조 레이블을 다섯 형광 염료를 제안하며, 기록 된 데이터의 적절한 평가를위한 데이터 후 처리에 대한 정보를 제공합니다. 대표 결과 장기 라이브 영상 광학 절편 복수 방향을 따라 동일한 태아의 관찰에 집중한다. 각 데이터 세트는 다운로드 가능한 자원으로 제공된다. 마지막으로, 프로토콜은 라이브 영상 분석, 전류 제한 및 다른 곤충 종에 설명 된 절차의 적용을위한 품질 관리에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 주로 표준 실험실 장비를 능가 이미징 솔루션을 추구 발달 생물 학자를위한 것입니다. 그것은 개발하고 마이크로을 수정 기술적으로 지향 실험실 / 지역 사회 사이의 격차를하기 위해 지속적인 시도를 촉진방법 론적으로 복사 및 기술 문제에 &#39;플러그 앤 플레이&#39;솔루션을 필요로 생명 과학 연구소 / 사회. 또한, 관심의 중심에 생물학적 질문을 움직이는 공리 접근 방식을 지원합니다.

이 프로토콜은 생활의 형광 이미징 또는 LSFM와 고정 및 스테인드 Tribolium 배아에 대한 실험 프레임 워크를 설명합니다. 인해 광 표백 광 독성, 그 단면 광학 성능의 직접적인 결과의 낮은 수준으로, LSFM 장기 라이브 영상에 특히 적합하다. 신규 AGOC {} mEmerald ATub&#39;H2B-1 형질 전환 라인은 알파 - 튜 불린 1 촉진제 (74)의 제어하에 histone2B-mEmerald 융합 단백질을 표현한다. 형광 신호는 주로 장막, 난황 여러 신경 세포 클러스터로부터 획득되기 때문에, 그것은, 인핸서 같은 발현 트랩 패턴 (51)을 도시한다. 이 라인을 사용하여, 실온 (23 ± 1 °의 C)에서 배아 발달의 66...

광 시트 계 형광 현미경으로 곤충 배아의 형태 형성을 묘화하는 것은 당 업계의 상태가되었다. 이 프로토콜의 외곽선 Tribolium castaneum 배아 적합한 세 실장 기술을 비교, 실시간 이미징에 매우 적합 개의 신규 주문품 트랜스 제닉 라인들을 도입, 필수적인 품질 관리를 다루고 있으며, 현재 실험적인 한계를 나타낸다.

라이트 시트 기반의 형광 생활의 현미경 또는 고정 및 스테인드<em&gt; Tribolium castaneum</em&gt; 배아

The red flour beetle Tribolium castaneum has become an important insect model organism in developmental genetics and evolutionary developmental biology. ...

이 프로토콜의 전체적인 목표는 Tribolium castaneum 배아의 발달 과정을 매우 오랜 기간 동안 비침습적으로 관찰하는 것입니다. 라이트 시트 기반 형광 현미경법은 새로운 곤충 모델 생물인 Tribolium castaneum의 초기 포배기부터 근육 운동의 시작까지 세포 이동 및 증식 패턴을 다룸으로써 형태 발생과 관련된 질문에 답하는 데 도움을 줍니다. 이 방법의 주요 장점은 배아를 수일 동안 관찰할 때에도 광퇴색 및 광독성과 같은 결정적인 요인들을 최소한으로 유지할 수 있다는 점입니다.Agarose Column을 사용하여 배아를 샘플 챔버에 장착하려면, 먼저 1mm 주사기에 증류수를 채우고 작은 고무 호스를 사용하여 주사기를 유리 모세관에 연결합니다. 모세관의 절반까지 증류수를 채운 다음, 페인트 브러시를 사용하여 배아를 유리 모세관 개구부 안쪽으로 옮깁니다. 그 후 모세관을 액체 agarose에 넣고 배아와 함께 agarose 몇 µL를 모세관 안으로 천천히 빨아들입니다. 배아가 적절한 위치에 놓이면 배아의 위아래로 각각 몇 µL의 agarose가 있어야 합니다.아가로스가 굳으면 모세관을 약 5mm 길이로 짧게 자릅니다. 남은 파편은 아가로스로 완전히 채워져 있어야 하며, 배아는 두 번째 4분위 영역 내에 위치해야 합니다. 그런 다음 핀이 달린 스틸 실린더를 시료 챔버에 삽입하고, 핀 위에 모세관 파편을 고정합니다. 아가로스 컬럼은 배아가 포함된 모세관 파편 영역으로부터 몇 mm 정도 돌출되어야 합니다.아가로스 반구를 사용하여 배아를 시료 챔버에 장착하려면, 먼저 1mm 주사기로 액상 아가로스 200 µL를 취한 다음, 시료 챔버가 있는 강철 파이프 상단부터 아가로스를 채워 파이프 하단 개구부에 반구가 형성되도록 합니다. 아가로스가 응고되면 붓 끝으로 배아를 집어 들어 전단(anterior end)이 노출되도록 위치를 조정합니다. 아가로스 반구를 액상 아가로스에 담가 반구 표면을 얇은 막으로 덮은 후, 배아의 전단이 위를 향하도록 아가로스 반구의 꼭대기에 배치합니다.강철 파이프를 돌리고 브러시를 사용하여 필요에 따라 배아의 위치를 조정합니다. 이상적으로는 배아 표면의 절반 미만이 아가로스로 덮여야 하며, 측면 경사는 가능한 한 가파르게 형성되어야 합니다. 배아 표면에 아가로스가 너무 많이 덮이면 기계적 압박이 가해지고 가스 및 이온 교환이 감소하여 배아의 생존율에 심각한 영향을 미칩니다.그런 다음

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.

라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션

이 기사는 광시트 형광 현미경 검사를 위한 시료 준비에 대해 설명합니다. 또한 장기 이미징을 위해 살아있는 제브라피시 배아를 장착하는 방법을 보여주며, 이를 통해 거의 생리학적 조건에서 살아있는 배아의 긴 타임랩스 동영상을 녹화할 수 있습니다.

광시트 현미경 시료 전처리: 장기 이미징을 위한 살아있는 제브라피시 배아 장착

Source: &lt;a style='text-decoration:none;' href='https://app.jove.com/v/57546/visualization-of-motor-axon-navigation-and-quantification-of-axon-arborization-in-mouse-embryos-using-light-sheet-fluorescence-microscopy'&gt;Liau, E. S.  et al. Visualization of Motor Axon Navigation and Quantification of Axon Arborization In Mouse Embryos Using Light Sheet Fluorescence Microscopy. J. Vis. 특급. (2018). 이 비디오는 가벼운 시트 형광 현미경을 사용하여 운동 뉴런 투영과 축삭 분기를 이미지화하는 방법을 보여줍니다. 형질전환 마우스 배아. 운동 뉴런 성장 및 연결성을 평가하기 위한...

광시트 형광 현미경을 사용한 운동 뉴런 투영 및 축삭 분지 시각화

제브라 피쉬의 개발은 배아가 낮은 농도의 아가로 오스와 광학적으로 명확한 폴리머 튜브에 포함 된 빛 시트 현미경과 일에 따라 할 수있다.

다층 제브라 피쉬의 장기 라이트 시트 현미경에 장착

이 프로토콜은 가벼운 시트 현미경의 설치 및 C의 생체 내 이미징을위한 그것의 구현에 대해 설명합니다 엘레 배아.

에 대한 간단한 라이트 시트 현미경 설정<em&gt; 토토에서</em&gt; 이미징<em&gt; C. 엘레</em&gt; 개발

광시트 형광 현미경은 배아 발달을 이미징하기 위한 훌륭한 도구입니다. 이를 통해 생리학적 조건에 가까운 살아있는 배아의 장시간 타임랩스 동영상을 녹화할 수 있습니다. 우리는 넓은 시공간 규모에 걸쳐 제브라피시 눈 발달을 이미징하기 위한 응용 프로그램을 시연하고 다중 보기 데이터 세트의 융합 및 디콘볼루션을 위한 파이프라인을 제시합니다.

이미지 Zebrafish의 눈 개발에 가벼운 시트 형광 현미경을 사용하여

여기, 우리가 모터 뉴런 프로젝션과 유전자 변형 Hb9::GFP 마우스 배아에서 축 삭 arborization 시각화에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 모터 뉴런에 대 한 immunostaining, 후 우리는 후속 정량 분석에 대 한 이미지 배아를 빛 시트 형광 현미경 검사 법 사용. 이 프로토콜은 중앙 신경 조직에 있는 다른 신경 탐색 프로세스에 적용 됩니다.

모터 축 삭 탐색 및 빛 시트 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 마우스 배아에서 축 삭 Arborization의 정량화의 시각화

이 연구 murine 마음 공부 광 청소와 함께 양면 조명 빛 시트 형광 현미경 검사 법 (LSFM) 기법을 사용 합니다.

Murine 심장 연구에 대 한 빛-시트 형광 현미경 검사 법

광 시트 기반 형광 현미경 검사는 발달 생물학에서 가장 가치있는 도구입니다. 비교 연구의 주요 문제는 주변 분산입니다. 우리의 프로토콜은 여러 표본의 동시 라이브 이미징을위한 실험 프레임 워크를 설명하고, 따라서, 적극적으로이 문제를 해결.

샘플 챔버 기반 광시트 형광 현미경에서 여러 곤충 배아의 동시 라이브 이미징

광시트 현미경을 사용하여 온전한 융모막 내에서 초기 제브라피시 배아를 이미징하기 위한 샘플 준비 전략이 설명되어 있습니다. 70% epiboly 및 bud 단계에서 배아가 융모막 내에서 획득하는 다양한 방향을 분석하고 광시트 시스템을 사용하여 배아 전체에서 세포 규모의 해상도를 얻기 위한 이미징 전략을 자세히 설명합니다.

Light Sheet Microscopy Imaging and Mounting Strategies for Early Zebrafish Embryos

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