Name: 조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: 학습하세요 마우스 췌장 해 부 기법을 조직학 분석 및 대사 프로파일링을 위해. 심장 천자를 통한 말기 혈액 채취 방법도 포함되어 있어 췌장 질환 연구에 필수적인 시각적 가이드를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MAK 인정 건강의 국가 학회에서이 작품에 대 한 지원 / 국립 암 연구소 번호-1R15CA152985-01A1를 부여. 이 프로젝트는 또한 마이애미 대학 학부 연구 보너스 프로그램, 마이애미 대학 박사 학위-학부 기회 장학금 프로그램 및 마이애미 대학 여름 학자 프로그램에 의해 지원 되었습니다.

비디오에서 실행 하 고 아래에 설명 된 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 마이애미 대학에 의해 승인.
 1. 준비 및 자극 테스트 수술 절차, 수술 및 사후 작업 테이블에 대 한 <ol><li>구축 두 가지 영역. 모든 재료와 필요한 기구 두 영역을 무대.
	배기 후드 <ol><li>무대 운영 테이블. 절차의 지속적이 고 한 시 빨리 벗어나게 성능을 하는 방식으로 장비와 테이블 정렬.</li>
		<li>같은 방에 있는 작업의 주요 테이블 근처 수술 후 테이블을 설정합니다. 절차를 통해 메 마른 환경으로 두 테이블을 유지.</li>
	</ol></li> <li>장소 다음 운영 테이블에 공급: 한 유리 항아리 뚜껑, 한 15 mL 튜브, 수술가 위, 70% 에탄올, 두 거품 보드, 두 집게, 두 개의 1 mL 21 게이지 주사기, 두 50 mL 튜브, 1 개의 원심 분리기 튜브의 한 짜기 병의 한 쌍 하나의 극저온 유리병, 4 외과 패드, 10 핀, 살 균 물티슈, 디스펜서 및 sharps 컨테이너.</li>
	<li>후 작업 테이블에는 다음 공급 장소: 액체 질소, 얕은 넓은의 4 L dewar dewar, 부동 microtube 랙, 수술가 위 한 쌍, 두 집게, 4 극저온 튜브, 및의 디스펜서 입 하나 하나 분석 균형 살 균 물티슈.</li>
	<li>하나 50 mL 및 75% 볼륨 한 15 mL 튜브 포 르 말린에 채울.</li>
	<li>한 외과 패드 절 개 보드로 봉사 하는 대략 30 cm x 30 cm 폼 보드 부착 각 모서리에는 핀을 사용 하 여. 나머지 4 개의 핀을 사용 하 여 작업 하는 동안. 수술 패드 장기 수술 테이블에 전송 하는 작은 폼 보드 준비. 
	주의: Isoflurane (99.9%)는 독성 화학, 그리고 폐기물 마 취 가스 8의 청소에서 안전의 최대 수준을 보장 하기 위해 환기 후드에서 사용 해야 합니다. 테일러와 묵 8 기사에 연구자 isoflurane를 사용 하 여 오픈-드롭 방법의 사용과 관련 된 위험에 대 한 추가 정보를 찾을 수 있습니다.</li>
	<li>유리 항아리에 담가 isoflurane (99.9%)의 몇 방울과 한 외과 패드를 배치 하 고 마우스는 isoflurane와의 직접 접촉을 방지 하기 위해 정상 종이 타월 장소. 마찬가지로, 외과 패드를 사용 하 여 나머지 튜브 라인 및 isoflurane의 몇 방울으로 적시고 마우스와는 isoflurane 간의 직접 접촉을 방지 하기 위해 정상 추가 패드를 배치 하.</li>
	<li>Dewar 최대 입력 라인까지 도달 얕은 넓은 입으로 액체 질소를 부 어.</li>
	<li>장소 마 취로 해 부에 대 한 선택 마우스 챔버, 즉 몇 가지 젖은 패드와 유리 항아리 방울 isoflurane (99.9%) ~ 1 분에 대 한 뚜껑으로 덮여 
	참고:이 시간은 마우스 마우스에서 다릅니다. 일단 마우스를 의식이 없는 상공에서 제거 하 고 운영 위원회에 그것을 배치.</li>
	<li>고 과학자에서 지적 하는 그것의 머리와 복 부 측 거짓말 그것 있도록 마우스를 방향을 정합니다. 외과 패드 isoflurane (99.9%)의 몇 방울과 젖 줄지어 튜브 안에 머리 놓고 마우스 자극에 응답 하지 않는 되도록 발 핀치에 의해 자극 테스트를 수행 합니다.
	<ol><li>이 테스트가 실패 하는 경우 마우스 응답 발 핀치 테스트 하 반복 단계 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. 초기 절 개, 심장 펑크, 및 안락사 <ol><li>외과 폼 보드를 마우스의 사지를 고정 하 고 젖은 70% 에탄올과 마우스의 복 부 측.</li>
	<li>집게와 요도 개통 근처 모피/피부를 꼬 집 고 약간 위쪽으로 당겨. 절 개 통해 복 부 구멍 요도 개방은 중간에서 시작 하 고 턱 끝 수술가 위 확인 합니다.
	<ol><li>초기 절 개의 시작 지점 근처는 집게와 모피/피부의 한쪽을 잡아 하 고 만들고 다른 절 개는가 위 아래로 대각선 쪽으로 다시 발.</li>
		<li>반대편에 같은 방식으로이 반복. 
		참고: 모피/피부 만들 넓은 개방을 고정 수 있습니다 하지만 필요 하지 않습니다.</li>
	</ol></li> <li>마음 찾아서 주사기 바늘의 막힘을 방지 하기 위해 심장 주위 sac는 심 낭을 제거.
	<li><ol>는 집게와 심 낭을 파악 하 고는 위로 잘라. 신중 하 게 뛰는 심장에 주사기 바늘을 삽입 하 여 심장 펑크를 수행 하 고 철회 플런저를 천천히 시작.</li>
		<li>최적의 혈액 컬렉션 사용 하 여 바늘의 플런저 심장의 펌핑 작업을 모방 하 고 너무 빨리 그리기 방지. 
		참고: 일반적으로 약 1 mL의 혈액 수집 될 수 있습니다.</li>
		<li>원심 분리기 튜브 및 sharps 용기에 주사기의 dispose에 혈액 혈액 컬렉션을 마친 후 불식.</li>
		<li>심장 찔린 수행 된 후 마음을 연결 하는 첨부 파일을 제거 하 여 안락사를 실시. 
		참고: 헤 파 린, 항 응고 제는 혈 청이 특정 연구에 컬렉션에 대 한 응고 혈액을 있도록 심장 찔린 전에이 절차에서 주사기에 추가 되지 않았습니다. 그러나, 경우 연구원 플라즈마를 수집 혈액 응고를 방지 하 고 싶 었, 헤 파 린에 추가할 수 있는 심장 찔린 이전 주사기.</li>
	</ol></li> <li>연구는 마우스의 유전형을 포함 하는 경우는 위는 귀 부분을 싹 둑 하 고 유전자 확인에 대 한 원심 분리기 튜브.</li></ol>
 3. 췌 장 추출 <ol><li>찾기 마우스의 왼쪽에 위. 시작은 부드럽게 (피하기 찢 어) 두 개의 집게를 사용 하 여 위장 및 십이지 장 췌 분리. 
	참고: 위 및 내장에서 췌를 분리 하는 경우 매우 중요 하다는 집게 장기에서 췌 장 조직 안내 하 고 하지 분쇄는 집게와 췌 눈물 부드럽게 사용 됩니다.
	<ol><li>소장 공장 및 회장 섹션에서 췌 구분 하 고 마지막으로 장 caecum에서.</li>
	</ol></li> <li>Caecum에 집게를 재배치 하 고 계속 항문 쪽으로 나머지 결 따라 췌의 분리. 
	참고:이 시점에서 그것은 편리 잘라내어 콜론 항문 바로 앞의 지역에서 위 부분을 제거.</li>
	<li>췌 찾아서 비장을 첨부 합니다. 마우스의 오른쪽을 향해 췌를 밉니다. 췌 장 및 인접된 비장 완전히 분리 집게 췌와 흉 강 사이 나머지 연결 구분.</li>
	<li>췌를 제거 하 고 시험을 위해 그것을 밖으로 확산. 식별 용 췌에 연결 된 비장을 둡니다.
	<ol><li>제거 모든 결합 조직, 지방과 mesenteric 조직에서 췌 장. 
		참고:이 조직의 색깔에 하얀 이며 따라서 컬러로 pinker는 췌 장 조직에서 쉽게 구분할 수 있습니다. 이것은 췌 장 전체를 제거 해야 하는 경우에 특히 중요 하다입니다. 예를 들어, 췌 장의 무게와 몸 무게에 또는 동물의 그룹 사이 비교 하는 경우. Ptf1a에서 cre / +; LSL Kra G12D / + 마우스 모델 이전 달에서 특히 하드 섬유 췌 장 조직 있을 수 있습니다. 이 경우에, 장내 종양 조직에 인터레이스 수로 췌의 주의 제거를 실시 해야 합니다. 고급의 경우에서 비정상적인 비장 및 간 조직 또한 존재할 수 있습니다.</li>
	</ol></li> <li>원하는 경우이 시점에서 다른 장기를 제거.</li></ol>
 4. 데이터 수집 및 저장 <ol><li>장기의 적 출, 후 보존을 위한 수술 후 영역에 샘플 이동.</li>
	<li>각 장기의 무게 및 그들의 각각 극저온 유리병에 넣어. 
	참고: 따라 위트h 질량 각 샘플의 부정은 나중에 참조할에 기록 되어야 합니다.</li>
	<li>장기 무게는 일단 스냅 동결에 액체 질소에 그들을 배치.</li>
	<li>스냅 동결 후 장기 저장을 위한-80 ° C에서 장기 저장.</li>
	<li>벤치 위에 하룻밤 말린 저장 샘플을 배치 하 고 다음날 아침 그들의 솔루션 포 르 말린에서 70% 에탄올으로 변경. 
	참고: 이러한 샘플은 장기 저장을 위한 4 ° C에 저장 되어야 합니다.</li>
	<li>장기 저장용 고정-80 ° c.에 혈액과 귀 펀치. 혈액에서 혈 청 수집, 30 분 동안 응고 후 그것을 원심 혈액을 수 있습니다. 피 펫을 사용 하 여 혈 청 부분을 제거 하 고 다음-80에 저장 ° c.</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>Sanitize 모든 해 부 도구 살 균 물티슈. 모자는 isoflurane 늘어서 튜브 수술 패드를 젖 었. 신선한 외과 패드에 폼 보드에 외과 패드를 바꿉니다. 처분 시설 당 하지 수집 된 마우스의 부분 &#39; s 동물 처리 정책.</li>
</ol>

<ol><li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li>
<li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12154411">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li>
<li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li>
<li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li>
<li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li>
<li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras%28G12D%29+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li>
<li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li>
<li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li>
<li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li>
<li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-%CE%B2+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li>
<li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li>
<li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+biochemistry%22%5BJournal%5D)">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li>
<li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis%3A+Clinical+Profile%2C+Histology%2C+and+Natural+History+After+Resection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

기존의 방법에 관하여 의미 마우스 해의 다른 비공식적인 동영상 존재 하는 동안이 비디오 문서에서는 첫 번째 전문 품질, 피어 검토, 자세한 단계를 추출에 필요한 해10 부에 의해 마우스 췌의 수확의 모든 시각적 데모 . 신진 대사 활동 및 인슐린에 대 한 주요 기관 되 고 췌와 생산, 해 부와 췌의 수확 생리 특성11의 보존에 대 한 수 있습니다. 췌, 분리 하 여 미래의 분석 샘플에 실시 수 있습니다. 이 절차는 비교와 같은 시간 프레임 내에 동일한 유기 체 내의 다른 조직에서 상호 작용의 연구에 대 한 수 있습니다.
기술의 한계 이 절차의 가장 큰 한계의 마우스의 생활, 경도 컬렉션 방지 및 동일한 마우스에서 여러 조직 샘플의 샘플링입니다. 나이, 성별, 또는 다른 수량자에 관련 된 트렌드를 분석 하기 위하여 횡단면 인구...

마우스는 인간 췌장암1,2의 중요 한 동물 모델로 떠오르고 있다. Ptf1a에서cre / +; LSL KraG12D / + 마우스 모델, 쥐 육 (K-Ras) oncogene은 췌 장, 췌 장, 췌 장 intraepithelial 형성 (PanINs), 그 진행으로 알려져 있는 전 암 병 변의 결과에서 독점적으로 활성화 하는 순 영 췌 장 ductal adenocarcinomas로 일반적으로 불린다 PDACs3. 이 마우스 모델 시스템은 인간의 췌장암4,5는 PanINs 삶과 자주 내 PDAC 진행의 첫 5 개월 이내 등장 추가 이용에 대 한 최상의 사용 가능한 동물 모델 중 하나는 반면 췌장암 가장 자주 발생 인 간에 있는 나이의 60-70 년 년4,5, 단일.
Ptf1a에서 해 부에 의해 췌 장의 추출cre / +; LSL KraG12D / + , 췌 장의 암 개발의 자세한 경도 조직학 시험에 대 한 다양 한 연령대에서 쥐 수 까지의 초기 PanIN 단계에서 진행 PDAC3,4 , 5. 15 개월에 5에서 배열 하는 나가에 수확 하는 췌도 사용할 수 있습니다 준비 조직 질병 조직 건강 한에서 전환 하는 동안 발생 하는 췌 장4 물질 대사에 글로벌 변화 특징을 추출 하 6,7.
이 문서는 마우스 췌 장 추출 하는 데 필요한 단계의 완전 한 시각적 가이드를 제공 하 고 추가 분석을 위해 췌의 저장에 대 한 지침을 제공 합니다. 이 가이드는 개인 연구를 포함 한 다른 췌 장 질환에 유형 I 당뇨병, 그리고 학생과 새로운 사용 하 여 마우스 췌의 수확과 관련 된 연구 조사에 특히 유용 해야 한다 동등 하 게 가치가 있을 것입니다. 신진 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부입니다.

<table><tbody><tr><td>유리병&nbsp;</td><td>코닝</td><td>3140-150</td><td>영상에 사용된 유리병은 단종되었습니다. 이것은 그것을 대체합니다.</td></tr><tr><td>유리병 뚜껑</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>영상에 사용된 유리병 뚜껑은 단종되었습니다. 이것은 그것을 대체합니다.</td></tr><tr><td>15 mL 팔콘 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>스퀴즈 병&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% 에탄올</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>포르말린</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>폼 보드</td><td>테라팩</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>겸자</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 팔콘 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL 마이크로 원심분리기 튜브&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>수술용 패드</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>T-핀 길이:&nbsp; 2"&nbsp;</td><td>사전 상점 제품</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>살균 물티슈</td><td>전문 일회용품 국제 Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>샤프 컨테이너</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>분석 저울</td><td>마샬 사이언티픽</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L 듀어</td><td>테일러-와튼</td><td>4LD</td><td></td></tr><tr><td>얕은 와이드 마우스 듀어</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>플로팅 마이크로튜브 랙</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>극저온 바이알 1.2 mL, 멸균</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>이소감각(이소플루란)&nbsp;</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>액체 질소</td><td>라이트 형제</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>마우스 크라스 균주</td><td>잭슨 연구소</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>마우스 크레 균주</td><td>MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

우리는 조사 하 고 췌 특정 전사 인자, 1a cre-recombinase; lox 그만 lox-순 영 쥐 육, aspartic 산 12 codon에 글리신 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) 인간 췌장암의 모델로 스트레인 마우스. 우리의 현재 연구의 목표는 췌장암 진행의 소설 대사 생체 식별 하입니다. 우리는 소변, 대변, 혈액, 그리고 췌 장 조직 추출, 뿐만 아니라 암 진행을 췌 장의 조직학 분석의 대사 프로 파일링을 수행 했습니다. 마우스 췌 하지 인간, 같은 잘 정의 된 고체 기관 이지만 오히려 마우스 내부 해부학에 익숙하지 않은 개인 또는 개인 거의 또는 전혀 경험 수행에 의해 쉽게 식별 되지 않으면 만들어진다 분산된 부드러운 조직 마우스 장기 해입니다. 이 문서의 목적은 현명한 상세한 제공 하는 시각적 데모 해 부에 의해 마우스 췌 장의 제거에 초보자 가이드. 이 문서는 특히 학생과 새로운 조사 대사 프로 파일링 또는 조직학 분석에 대 한 해 부에 의해 마우스 췌의 수확 필요로 하는 연구에 귀중 한 해야 합니다.

그림 2 는 게시물 작업 영역 및 그림 1 운영 환경 영역에 대 한 개요를 보여준다. 이 설정은 최소한의 장비를 제공 하는 동안 준비, 개인에 가장 개인적인 필요에 맞게이 변경 하도록 선택할 수 있습니다. 프로토콜은 실험의 특정 요구에 따라 최적화 되어야 합니다. 이 절차는 필요 적절 한 euthanization9, 마우스의 생활을 종료 하는 방식으로 실시 됩니다. 연구원은 준비, 마우스 isoflurane 젖은 패드 (그림 3)와 함께 마 취 챔버에 배치 됩니다.
마우스 의식이 일단 마우스를 제거 하 고 보드에 등 쪽을 놓습니다. 발가락-핀치 절차 마우스 통증 ...

이 비디오 문서는 조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 해 부는 마우스에서 췌를 성공적으로 제거 하는 데 필요한 절차의 상세한 데모를 제공 합니다.

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

이 비디오 논문의 주된 목적은 마우스 췌장 적출 과정에 대한 상세한 시각적 지침을 제공하는 것입니다. 이 지침은 인간 췌장 질환의 마우스 모델을 연구하며, 조직학적 분석이나 대사 프로파일링을 위해 적출을 통해 마우스 췌장을 채취해야 하는 연구자들에게 유용할 것입니다. 또한, 본 비디오 논문은 심장 천자법을 이용한 최종 혈액 채취 수행 방법에 대한 상세한 지침을 제공합니다.필요한 소모품들이 준비된 수술대가 표시되어 있습니다. 여기에는 뚜껑이 있는 유리병 1개, 15 mL falcon tube 1개, 외과용 가위 1개, 70% ethanol 분무병 1개, 폼 보드 2개, 포셉 2개, 1 mL 21 gauge 주사기 2개, 50 mL falcon tube 2개, 원심분리 튜브 1개, cryo-vial 1개, 수술용 패드 4개, 핀 10개, 멸균 와이프 디스펜서 및 손상성 폐기물 전용 용기가 포함됩니다. 필요한 소모품들이 준비된 수술 후 테이블이 표시되어 있습니다.준비물로는 분석 저울 1대, 4L 액체 질소 듀어병 1개, 입구가 넓고 얕은 듀어병, 부유식 마이크로튜브 랙, 외과용 가위 1쌍, 핀셋 2개, 크라이오바이알 5개 및 멸균 티슈 디스펜서가 포함됩니다. 안락사를 수행하기 위해, 먼저 마우스를 이소플루란 몇 방울을 적신 거즈 패드가 들어 있는 유리 용기에 넣고, 마우스가 의식을 잃을 때까지 뚜껑으로 덮어둡니다. 이 과정은 보통 약 1분 정도 소요됩니다. 그 후 마우스를 유리 용기에서 꺼내 발가락 꼬집기 테스트를 실시하여 마우스가 통증을 느끼지 않는 상태임을 확인합니다.발 꼬집기 테스트(foot pinch test)가 실패하면, 테스트를 성공적으로 수행할 수 있을 때까지 마우스를 유리병에 다시 넣고 뚜껑을 닫습니다. 마우스를 배가 위로 향하게 놓은 뒤 사지를 수술용 폼 보드에 고정시키고, 마우스의 복부를 70% ethanol로 적십니다. 포셉을 사용하여 요도구 근처의 털을 꼬집어 약간 위로 잡아당깁니다.요도구에서 시작하여 정중선을 따라 턱까지 복강을 절개합니다. 첫 절개 시작점 근처에서 털의 한쪽 면을 잡고 뒷발 방향으로 대각선 아래로 다시 절개합니다. 반대편에도 동일한 방식으로 반복합니다.최종 심장 천자를 수행하기 위해 심장의 위치를 확인합니다. 이를 위해 포셉으로 흉골을 잡고 횡격막을 절개합니다. 늑골 쪽으로 빠르게 위쪽을 절개하고 절개된 부분을 제거하여 박동하는 심장을 노출시킵니다.심장의 위치를 확인한 후,

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

다음 프로토콜은 가상 슬라이스 이미지에 대한 췌장 해부 과정을 설명하고, 전체 췌장에있는 모든 GFP - 태그 베타 세포의 후속 부량.

마우스의 췌장 베타 세포 질량의 원위치 부량에서

이 비디오는 생체 외 3D 배양에서 췌장 acinar 세포를 관 세포로 분화하는 기술을 설명합니다. 이는 췌장암의 조기 발병에 중요한 과정인 acinar-to-ductal metaplasia(ADM)를 조절하는 메커니즘을 이해하는 데 도움이 됩니다.

Acinar-to-ductal metaplasia induction: 3D ex vivo 배양에서 acinar cell to ductal cell differentiation을 연구하는 방법

랑게르한스의 고립 된 마우스 독도를 이용하여 체외 β-세포 기능을 시금 당뇨병의 병태 생리 및 치료의 연구에 중요한 구성 요소입니다. 많은 다운 스트림 응용 프로그램을 사용할 수 있지만,이 프로토콜은 특히 β-세포의 기능을 결정하는 중요한 매개 변수로 세포 내 순환 아데노신 monophosphate (캠프)의 측정에 대해 설명합니다.

마우스 췌장 섬의 분리 및 세포 내 cAMP를 결정하는 방법

우리는 여기에서 제2형 당뇨병의 마우스 모델, Leprdb에서 섬을 분리하기 위한 프로토콜과 2개의 광자 현미경을 사용하는 온전한 섬에서 인슐린 분비를 측정하기 위한 라이브 셀 분석의 세부 정보를 제시합니다.

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

여기서, 우리는 중간 엽 세포의 분리에 초점 배아 신생아 및 성인 마우스 조직에서 췌장 미세 세포의 분리 방법을 설명한다. 이 방법은 췌장 개발, 기능 및 종양 형성을 조절하는 외부 신호를 명료하게하기 위하여 세포 유전자 발현 및 단백질 분비를 프로파일 링 할 수있다.

분리 및 유동 세포 계측법에 의해 췌장 중간 엽 세포 분석

단일 셀 RNA 시퀀싱 뒤 미 발달, 신생아 및 산 후 췌 내 분 비 세포의 격리 하는 방법을 설명 합니다. 이 방법을 사용 하면 분석 췌 장 내 분 비 계보 개발의 셀이 transcriptomic 역학.

마우스 췌 장 내 분 비 세포의 단일 셀 Transcriptomic 분석

주 포상 세포 격리, 단백질 식 또는 활동 변조, 문화, 및 다운 스트림 응용 프로그램은 전에 다량 유용한 vivo 연구 포상-ductal metaplasia (ADM), 췌장암의 개발에는 초기 이벤트.

흉내 낸 고 3 차원 세포 배양에서 췌 장 Acinar-Ductal Metaplasia 조작

만성 췌장염 (CP)은 췌장의 염증과 섬유증을 특징으로하는 질병이며 종종 난치성 복통과 관련이 있습니다. 이 문서는 2,4,6 -trinitrobenzene 설포닉 산 (TNBS)로 담관 주입을 통해 CP의 마우스 모델을 생성하는 기술을 정제에 초점을 맞추고 있습니다.

담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

이 연구는 암소 생리학 및 아슬레 면역 세포 상호 작용의 연구에 살아있는 췌장 조직 조각의 응용 프로그램을 제시한다.

살아있는 췌장 조직 조각에서 아일렛 기능 및 아슬레 면역 세포 상호 작용을 관찰

췌장 메타 플라스틱 세포는 췌장 종양을 일으키는 악성 세포의 전구체입니다. 그러나 온전한 생존 가능한 췌장 세포를 분리하는 것은 어렵습니다. 여기에서는 췌장 조직 해리를 위한 효율적인 방법을 제시합니다. 그런 다음 세포를 단일 세포 RNA 염기서열분석(scRNA-seq) 또는 2차원 또는 3차원 공동 배양에 사용할 수 있습니다.

생존 가능한 단일 세포를 분리하기 위한 췌장 조직 해부

이 프로토콜은 전체 췌장에서 마우스 내피 세포를 분리하는 방법을 설명합니다.

마우스 췌장 내피 세포의 분리

학습하세요 마우스 췌장 해 부 기법을 조직학 분석 및 대사 프로파일링을 위해. 심장 천자를 통한 말기 혈액 채취 방법도 포함되어 있어 췌장 질환 연구에 필수적인 시각적 가이드를 제공합니다.

조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

더 많은 동영상 탐색