조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

이 비디오 논문의 주된 목적은 마우스 췌장 적출 과정에 대한 상세한 시각적 지침을 제공하는 것입니다. 이 지침은 인간 췌장 질환의 마우스 모델을 연구하며, 조직학적 분석이나 대사 프로파일링을 위해 적출을 통해 마우스 췌장을 채취해야 하는 연구자들에게 유용할 것입니다. 또한, 본 비디오 논문은 심장 천자법을 이용한 최종 혈액 채취 수행 방법에 대한 상세한 지침을 제공합니다.

필요한 소모품들이 준비된 수술대가 표시되어 있습니다. 여기에는 뚜껑이 있는 유리병 1개, 15 mL falcon tube 1개, 외과용 가위 1개, 70% ethanol 분무병 1개, 폼 보드 2개, 포셉 2개, 1 mL 21 gauge 주사기 2개, 50 mL falcon tube 2개, 원심분리 튜브 1개, cryo-vial 1개, 수술용 패드 4개, 핀 10개, 멸균 와이프 디스펜서 및 손상성 폐기물 전용 용기가 포함됩니다. 필요한 소모품들이 준비된 수술 후 테이블이 표시되어 있습니다.

준비물로는 분석 저울 1대, 4L 액체 질소 듀어병 1개, 입구가 넓고 얕은 듀어병, 부유식 마이크로튜브 랙, 외과용 가위 1쌍, 핀셋 2개, 크라이오바이알 5개 및 멸균 티슈 디스펜서가 포함됩니다. 안락사를 수행하기 위해, 먼저 마우스를 이소플루란 몇 방울을 적신 거즈 패드가 들어 있는 유리 용기에 넣고, 마우스가 의식을 잃을 때까지 뚜껑으로 덮어둡니다. 이 과정은 보통 약 1분 정도 소요됩니다. 그 후 마우스를 유리 용기에서 꺼내 발가락 꼬집기 테스트를 실시하여 마우스가 통증을 느끼지 않는 상태임을 확인합니다.

발 꼬집기 테스트(foot pinch test)가 실패하면, 테스트를 성공적으로 수행할 수 있을 때까지 마우스를 유리병에 다시 넣고 뚜껑을 닫습니다. 마우스를 배가 위로 향하게 놓은 뒤 사지를 수술용 폼 보드에 고정시키고, 마우스의 복부를 70% ethanol로 적십니다. 포셉을 사용하여 요도구 근처의 털을 꼬집어 약간 위로 잡아당깁니다.

요도구에서 시작하여 정중선을 따라 턱까지 복강을 절개합니다. 첫 절개 시작점 근처에서 털의 한쪽 면을 잡고 뒷발 방향으로 대각선 아래로 다시 절개합니다. 반대편에도 동일한 방식으로 반복합니다.

최종 심장 천자를 수행하기 위해 심장의 위치를 확인합니다. 이를 위해 포셉으로 흉골을 잡고 횡격막을 절개합니다. 늑골 쪽으로 빠르게 위쪽을 절개하고 절개된 부분을 제거하여 박동하는 심장을 노출시킵니다.

심장의 위치를 확인한 후, 심낭을 제거하고 주사기를 이용해 말기 심장 천자를 수행합니다. 최적의 혈액 수집을 위해, 바늘의 플런저를 사용하여 심장의 펌핑 작용을 모사하고 너무 빠르게 흡입하지 않도록 주의하십시오. 수집한 혈액을 원심 분리 튜브에 옮기고, 사용한 주사기는 손상성 폐기물 전용 용기에 버립니다.

심장 천자가 수행된 후, 심장과 연결된 부착물을 제거하여 안락사를 실시합니다. 마우스의 왼편에서 위를 찾습니다. 췌장은 위와 십이지장에 부착되어 있으며, 소장과 대장 전체를 따라 뻗어 있고 비장에 부착된, 확산된 밝은 색상의 조직 형태를 띱니다.

포셉을 사용하여 췌장을 위와 십이지장에서 조심스럽게 분리하기 시작합니다. 공장과 회장 부위부터 시작하여 마지막으로 맹장과 대장에 이르기까지 소장에서 췌장을 계속 분리합니다. 맹장에서 포셉의 위치를 조정한 후, 직장 방향으로 남은 결장 along을 따라 췌장의 분리를 계속합니다.

이 단계에서 위부터 직장 직전의 결장 부위까지의 구간을 절단하여 제거하는 것이 편리합니다. 췌장과 연결된 비장을 찾으십시오. 췌장을 마우스의 오른쪽 방향으로 밀어냅니다.

췌장과 흉강 사이의 나머지 연결 부위를 절단하여 췌장과 부착된 비장을 완전히 분리합니다. 췌장을 제거하고 펼쳐서 관찰합니다. 필요한 경우, 이 시점에서 다른 장기들도 제거할 수 있습니다.

적출 후, 샘플을 수술 후 처리 구역으로 옮깁니다. 각 장기의 무게를 측정한 다음 각각의 크라이오바이알(cryo-vial)에 넣습니다. 관찰된 이상 징후가 있다면 기록하십시오.

장기를 크라이오바이알(cryo-vials)에 넣은 후, 플로팅 마이크로튜브 랙에 배치하여 액체 질소가 담긴 듀어(Dewar) 용기에 넣습니다. 급속 냉동 후, 장기는 장기 보관을 위해 -80 °C에서 보관해야 합니다. 사용한 모든 해부 도구는 멸균 티슈를 사용하여 소독해야 합니다.

이소플루란에 적신 수술용 패드가 깔린 팔콘 튜브의 캡을 닫아야 합니다. 폼 보드 위의 수술용 패드는 새 패드로 교체해야 합니다. 수집하지 않은 마우스의 나머지 부위는 시설의 동물 폐기 정책에 따라 폐기해야 합니다.

다음 항목들은 적절하게 처리되어야 합니다. 이러한 항목들이 올바르게 보관되면 형광 현미경 검사, 헤마토실린 및 에오신 조직학, 면역조직화학, 질량 분석법, 핵자기공명 분광법 등을 포함하되 이에 국한되지 않는 수많은 실험을 수행할 수 있습니다. 췌장은 대사 활동과 인슐린 생성의 주요 기관이므로, 이 절차를 통해 생리학적 특성을 보존할 수 있습니다.

췌장을 분리함으로써 해당 샘플에 대한 향후 분석을 수행할 수 있습니다. 이 절차를 통해 동일한 개체 내의 다른 조직들과의 상호작용을 동일한 시간 범위 내에서 비교하고 연구하는 것이 가능합니다.